淀粉样物质染色试剂盒(Highman刚果红法)
病理科特殊染色培训测试题
病理科特殊染色培训测试题1.改良Gomori法是用于( )区别诊断, 辅助HE诊断。
（）A.网状纤维与胶原纤维(正确答案)B.网状纤维与弹力纤维C.弹力纤维与胶原纤维D.网状纤维与神经纤维2. Masson染色法用于鉴别( )的区别诊断, 辅助HE 诊断。
（）A.网状纤维与胶原纤维B.胶原纤维与肌纤维(正确答案)C.弹力纤维与肌纤维D.网状纤维与肌纤维3.硝酸银法用于显示幽门螺旋杆菌、梅毒螺旋体，菌体呈()，背景呈()。
（）A.棕黄色、棕黄色B.棕褐色，棕黄色C.棕黑色，棕黄色(正确答案)D.棕黑色，棕褐色4.淀粉样蛋白在HE染色中为红染同质化或云朵样结构，有时和()难以区别。
（）A.玻璃样变(正确答案)B.胶原C.干酪样坏死D.角化物5.甲苯胺蓝染色法显示肥大细胞颗粒呈()颜色（）A.蓝色B.黑色C.黄色D.紫红色(正确答案)6.显示切片内糖原常用的染色方法是（）A.爱尔森(AB)法B.地衣红法C.高碘酸-无色复红法(PAS)(正确答案)D.刚果红法7.Gless神经纤维染色时，神经纤维呈()颜色（）A.黑色(正确答案)B.红色C.蓝色D.紫色8.高碘酸-无色品红(PAS)法中，高碘酸的作用是（）A.水解B.漂白C.氧化(正确答案)D.媒染9.显示淀粉样变蛋白常用的染料是（）A.中性红B.碱性品红C.酸性品红D.紫红色(正确答案)10.显示三价铁盐最古典的方法是（）A. Lillic硫酸亚铁法B. Masson-Fontana 银染法C.Perls亚铁氰化钾法D.Schmorl三氯化铁铁氰化钾法(正确答案)11.真菌六胺银染色法染色结果（）A.肾小球囊基底膜，肾毛细血管球基底膜呈黑色(正确答案)B.霉菌、弹力纤维及一些网状纤维呈黑色(正确答案)c.胞核蓝色，胞浆红色(正确答案)D.胞核红色，胞浆蓝色12.根据试剂理化特性特染室应配置通风橱、冰箱、化学试剂防腐储存柜、干燥储存罐等设施妥善保存，做到“八防”，以避免试剂变质而导致染色不理想。
冰冻切片实验步骤
全部试验步骤1取颖组织于4%多聚甲醛固定24 小时230%蔗糖脱水48 小时以上3-250C 包埋〔冰冻切片机内〕4冰冻切片冰冻切片步骤冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片4~8μm，室温放置30 分钟后，入4℃丙酮固定10 分钟，PBS 洗，5 分钟×3 次。
用3%过氧化氢孵育5~10 分钟，以消退内源性过氧化物酶的活性。
PBS 冲洗，5 分钟×2 次。
下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤。
(见我发的前面的帖子)你确定你是冰冻切片吗！冰冻切片不能用热修复啊！！以下是我的步骤：1冰冻切片室温放置30 分钟后，入4℃丙酮固定10 分钟，PBS 洗，5 分钟×3。
用3％过氧化氢孵育5~10 分钟，PBS 洗，5 分钟×2。
25~10％正常山羊血清〔PBS 稀释〕封闭，室温孵育10 分钟。
倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2 小时或4℃过夜。
3PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
4滴加滴加其次代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育30 分钟。
PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
5滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30 分钟。
6PBS 冲洗，5 分钟×3 次。
7显色剂显色〔DAB〕。
8自来水充分冲洗，复染，封片。
冰冻切片免疫组化染色用的灭活内源性过氧化物酶，最好是用3%H2O2/甲醇溶液，室温20 分钟。
此配方不易产生脱片。
配制方法是在9ml 甲醇中加30%H2O2 1ml，混匀后使用，每次颖配制。
冰冻切片免疫组化染色步骤冰冻切片4~8mm，室温放置30 分钟后，入4℃丙酮固定10 分钟，PBS 洗，5 分钟×3。
用3％过氧化氢孵育5~10 分钟，消退内源性过氧化物酶的活性。
PBS 洗，5 分钟×2。
下接免疫组化染色操作步骤。
DAB 显色，显色时放置在白色纸上，观看显色程度以终止DAB 反响，最好把玻片置于显微镜上找到可能的阳性显色区域滴加DAB ，观看到阳性区和阴性区差异后终止，此时最 好有计时，以便于今后重复试验把握显色时间〔一般显色时间 2s-10min ，显色时间过长玻片两侧放置浸湿的卫生纸或棉球。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
特殊染色[宝典]
![特殊染色[宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/de035e0dfe00bed5b9f3f90f76c66137ee064fbe.png)
AAgNOR染色法:1、试剂配制：（1）AgNOR染色液：甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。
乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。
（2）AgNOR工作液取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。
2、步骤：（1）切片脱蜡至水（2）双蒸水洗2次（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次（5）脱水,透明,封固3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色，AgNOR呈棕黑色颗粒状。
B鞭毛染色法:１．试剂配制：甲液：丹宁酸５克氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克福尔马林（１５％）２．０毫升氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克蒸馏水１００毫升制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。
再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。
如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。
２．染色方法：（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。
（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。
（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。
将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。
染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。
（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
３．注意事项：（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。
（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。
（３）防止水及培养物沾有氯化物。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B 1.2 Mssson三色法图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 4.Weigert间苯二酚法二、胶原纤维染色法2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图) 红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法3.2 Gomori氏银氨液配制法图表G Gomori氏银氨液配制法Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表H 4.GOMORI醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表I 4.Weigert间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表J 6.1.磷钨酸苏木素法图表K 6.1.磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表M 8.1.AB-PAS染色结肠粘膜图表N 8.1.胃粘膜组织AB-PAS染色40×：2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表O 8.2.爱先蓝（PH2.5）染色液图表P 8.2.爱先蓝法图表Q 8.2.爱先蓝法—3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表R 9.1.Melanin pigment in cells of9.1. malignant melanoma, Fontana-Masson stain.2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
病理学技术—特殊染色最最全总结
结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B 1.2 Mssson三色法图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 4.Weigert间苯二酚法二、胶原纤维染色法2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法3.2 Gomori氏银氨液配制法图表G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表H 4.GOMORI醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表I 4.Weigert间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表J 6.1.磷钨酸苏木素法图表K 6.1.磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表M 8.1.AB-PAS染色结肠粘膜图表N 8.1.胃粘膜组织AB-PAS染色40×：2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表O 8.2.爱先蓝（PH2.5）染色液图表P 8.2.爱先蓝法图表Q 8.2.爱先蓝法—3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表R 9.1.Melanin pigment in cells of9.1. malignant melanoma, Fontana-Masson stain.2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
病理学技术士《专业知识》模拟试卷二
病理学技术士《专业知识》模拟试卷二[单选题]1.在免疫组织化学染色中，引起交叉反应的是（江南博哥）A.半抗原B.异种抗原C.超抗原D.共同抗原E.特异性抗原参考答案：D参考解析：共同抗原引起交叉反应。
[单选题]2.网状纤维染色中，10%中性甲醛的作用是A.氧化B.漂白C.媒染D.还原E.镀银参考答案：D参考解析：甲醛的作用是将银离子还原成金属银。
[单选题]3.临床常用的上皮源性肿瘤标记抗体，最常用于鳞癌诊断的是A.上皮膜抗原（EMA）B.细胞角蛋白（LowMW）C.细胞角蛋白7D.细胞角蛋白（Pan）E.细胞角蛋白（HighMW）参考答案：E[单选题]4.骨组织作免疫组化染色时，常用的脱钙剂是A.硝酸B.盐酸C.EDTAD.蚁酸E.硫酸参考答案：A参考解析：骨组织作免疫组化染色时，常用的脱钙剂是硝酸。
[单选题]5.以下哪项对于冰冻切片的描述是正确的A.所有病例均需进行冰冻诊断报告B.60分钟内完成C.提供最后病理诊断D.提供初步病理诊断E.原位杂交等结果参考答案：D参考解析：冰冻切片提供初步病理诊断。
[单选题]6.目前使用计算机不能储存的病理资料是A.病理特殊检测病例资料B.消化道肿瘤好发部位资料C.图文报告资料D.病理切片资料E.肉瘤的索引资料参考答案：D参考解析：病理切片资料不能用计算机存储。
[单选题]7.肝细胞癌的特异性标记抗体是什么A.CEAB.CKC.AFPD.VimentinE.Actin参考答案：C参考解析：肝细胞癌的特异性标志是AFP。
[单选题]8.下面不属于胞质染色剂的染料是A.橘黄GB.酸性品红C.伊红YD.水溶性苯胺蓝E.核固红参考答案：E参考解析：ABCD都是染细胞质的染料。
[单选题]9.可使G+菌着色的染料是A.碱性复红B.酸性复红C.结晶紫D.石碳酸复红E.亚甲蓝参考答案：C参考解析：结晶紫可使G+菌着蓝色或紫色。
[单选题]10.HE染色中脱蜡不彻底会出现的结果是A.核染过深B.核染色淡C.成地图样染色D.质不染色E.质染色深参考答案：C参考解析：脱蜡不彻底会导致组织着色不均。
特殊染色
高碘酸-无色品红法
蒸馏水 偏重亚硫酸钠 170ml 3.96g
活性炭 2.0g(第二天称) 碱性品红(用研钵磨细更佳)加入蒸馏水中溶 解后依次加入盐酸及偏亚硫酸钠，塞住瓶口(锥 形瓶、小口瓶比较好)摇动容器以充分混和(此时 颜色会有明显变化)放置过夜后加入活性炭摇动 数分钟静止1小时后过滤，呈无色或淡稻草黄色 为佳。（不用时冰箱4℃左右保存）
应用：
明确含铁血黄素的存在。如长期的肺郁 血、出血；陈旧性出血灶；肝硬化时慢性脾 郁血的含铁结节；硬化性血管瘤；动脉瘤性 骨囊肿；绒毛色素性滑膜炎等。
胆色素
三氯醋酸三氯化铁（Hall）法：
试剂配制： ㈠Fouchet 液： 甲液：三氯醋酸 25 克 蒸馏水 100 毫升， 乙液：三氯化铁 1克 蒸馏水 10 毫升 两者均宜少量新鲜配制，棕色瓶贮存。 临用时取甲液 30ml 乙液 3ml 等份混合。
Masson 法
•1 切片脱蜡至水.
•2 苏木素染核（可略）
•3 丽春红酸性品红5分钟
•4 快速水洗.蒸馏水洗
•5 1%磷钼酸滴染1-3分钟 •6 倾去余液直接滴加亮绿液5分钟 •7 快速水洗后烤箱烘干,透明封固 •结果：胶原纤维绿色 肌纤维红色
胶原纤维染色的应用 1. 区别胶原纤维与肌纤维。 2. 观察某些病变组织的纤维化及 程度等。
染色方法： 1 常规切片 、脱蜡至蒸馏水 2 0.5%高碘酸氧化5-10分钟 3 流水冲洗数分钟，蒸馏水洗一次 4 无色品红20分钟 5 水洗 5分钟后苏木素染核 6 常规脱水(或烤箱烘干)透明封固 结果：糖原或中性粘液或霉菌等 鲜红色，核蓝色。
注意事项
•1 配制过程中玻璃器皿要干净，试剂要纯。
病理技术专业知识
（一）单纯固定液甲醛：1．浓度：40%，气体2．渗透力强，固定均匀，组织收缩小，3．不能使白蛋白和核蛋白沉淀4．保存脂类，必须用冷冻切片。
是糖的保护剂5．可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾1.浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶2.穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，3.未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。
酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。
4.固定高尔基体和线粒体有良好效果。
5.酸性染料着色好，碱性染料着色差6.固定的组织需经流水冲洗12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。
苦味酸1.黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏2.穿透慢，组织收缩明显，无明显硬化。
3.能沉淀一切蛋白质4．对脂肪和类脂无固定作用。
5. 可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6. 固定时间不宜超过24h，7. 固定的组织应尽快放入70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。
升汞1. 浓度为5%-7%的水溶液，针状结晶2．穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3, 对蛋白质有固定作用，4. 对类脂和糖类无固定作用5. 临用时加冰醋酸醋酸1. 刺激性气味的无色液体，低于15℃为冰醋酸5%的醋酸PH为2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。
2. 穿透力强3 不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4 不能固定脂肪和内酯，不能保存糖5 .固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6, 缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸1.为三氧化铬的水溶液，浓度0.5%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2 穿透力弱，一般组织需固定12-24h，固定的组织有收缩，3 能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。
4 对脂肪无固定作用5 固定线粒体和高尔基复合体6. 宜避光保存，以防蛋白质溶解。
7. 必须彻底流水冲洗（≥24h）。
锇酸（四氧化锇）1.淡黄色结晶，剧毒，浓度1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2. 渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定时间，组织的脆性增加，对染色不利。
淀粉样物质染色液(Highman刚果红法)
淀粉样物质染色液(Highman 刚果红法)简介：淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。
淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。
在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝，大多随机排列。
用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。
目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。
后来经过Highman 改良，染色效果更好。
Leagene 淀粉样物质染色液(Highman 刚果红法)主要由刚果红染色液和苏木素染色液组成。
该试剂盒简单易行，染色液性能稳定，并且已经被广泛应用。
组成：自备材料：1、10%中性福尔马林固定液2、蒸馏水3、系列乙醇操作步骤(仅供参考)：1、常规固定，常采用10%的中性福尔马林，常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水；冰冻切片直接入蒸馏水。
如有必要，可以去除色素。
3、入Highman 刚果红染色液，浸染。
4、碱性乙醇分化，立即入水终止分化。
自来水冲洗。
6、入Leagene 苏木素染色液，染细胞核。
7、自来水稍微冲洗，更换蒸馏水清洗，使其分化、返蓝。
8、逐级常规乙醇脱水。
二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：编号 名称DG0022 3×50ml Storage 试剂(A): Highman 刚果红染色液 50ml RT 避光 试剂(B): 碱性乙醇分化液 50ml RT 密闭 试剂(C): Leagene 苏木素染色液 50mlRT 避光 使用说明书1份淀粉样物质、弹力纤维、嗜伊红颗粒红色细胞核蓝色注意事项：1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、碱性乙醇分化液应密闭保存，一旦开启尽快用完。
3、分化时间应该根据切片厚薄、组织类别和分化液的新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够。
直链淀粉含量检测试剂盒
直链淀粉含量检测试剂盒说明书(货号：NM-W-0214 微量法100T/96S)一、产品简介：直链淀粉是D-葡萄糖基通过α-(1,4)糖苷键以直链状结构连接而成的大分子物质。
直链淀粉的含量是影响食品感官品质和加工特性的一个重要因素，并且与淀粉的特性密切相关，其含量测定对食品营养价值评价、粮食的合理加工，淀粉的合理利用和农业育种等具有重要意义。
直链淀粉与碘能够形成蓝色络合物，通过测定605 nm 和435 nm 处吸光值的变化即可定量检测直链淀粉的含量。
二、试剂盒组分与配制：三、需自备的仪器和用品：酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵/匀浆器、天平、60目筛、可调式移液器、乙醚、蒸馏水。
四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 将样本烘干后充分研磨，准确称取0.01g样本至2mL的EP管中，加入1mL试剂一，充分匀浆，80℃水浴提取30min，冷却至室温，4000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀（尽量保留沉淀）。
℃ 向沉淀中加入1mL试剂二，混匀并振荡5min，4000g，25℃离心5min，弃上清，留沉淀（尽量保留沉淀）。
℃ 向上步沉淀中，加入1mL试剂三，混匀（使样本全部浸在液体中），封口，90℃水浴10min（密封以防止水分散失）。
℃ 冷却至室温，将EP管中全部液体转移至10mL EP管中（用1mL蒸馏水冲洗EP管，全部转至10mL EP管中，重复三次），再加蒸馏水准确定容至10mL，混匀，4000g，25℃离心5min,取上清液作为待测样本。
2、标准溶液的配制：把10mg/mL的标准品母液用试剂四稀释成2、1、0.5、0.25、0.125、3、预实验上机操作：℃ 酶标仪预热30min以上，调节双波长至605 nm 和435 nm。
℃ 操作表：4、正式实验：℃ 若预实验测定吸光值超出标准吸光值线性范围：高于最高值建议将待测样本用试剂四适当稀释后再进行测定，低于最低值建议适当增加样本质量W后再进行测定，并将改变后的D和W代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。
生物实验染色剂
生物实验染色剂华越洋生物过碘酸溶液(0.5%) 100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色过碘酸溶液(1%) 100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称高碘酸溶液，是一种氧化剂，常与Schiff试剂合用对糖原进行染色Schiff试剂50ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
Schiff试剂100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月又称雪夫试剂、希夫试剂，主要用于碳水化合物染色：如糖原,粘蛋白,糖蛋白,多糖,透明质酸。
又称无色品红染色液。
为无色液体，一般变黄或粉红应弃用。
糖原PAS染色液4×50ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液4×100ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜糖原染色中华越洋生物推荐采用该染色液，是最常用的经典糖原染色法,高碘酸和schiff试剂应低温保存。
染色结果为：PAS反应阳性物质(糖原或多糖)均呈红色或紫红色；细胞核呈蓝色。
糖原PAS染色液(细胞专用) 4×20ml碳水染色40% 4℃,避光,6个月经典的糖原染色法,不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,特别适用于细胞、极其薄的切片。
细胞的糖原染色中华越洋生物公司推荐采用该染色液，是经典糖原染色法,高碘酸和schiff 试剂应低温保存。
淀粉样物质染色
淀粉样物质染色一、定义：淀粉样物质是一种无细胞的同质性的嗜伊红性物质，因为在用碘染色时与淀粉的反应相似，固称为淀粉样物。
二、淀粉样物的化学成分：1. 90%淀粉样原纤维蛋白。
①、淀粉样轻链蛋白。
（由浆细胞分泌的免疫球蛋白）②、淀粉样相随蛋白。
（来源于血浆中的免疫球蛋白）2、10%为糖蛋白。
三、淀粉样物的性质超微结构的研究证明它是由具有固定物理性质的蛋白原纤维构成。
每个纤维约为7.5豪微米宽Glenner 等人研究发明，淀粉样物是由排列呈β折叠结构的轻链多肽所构成。
四、HE染色后的形态：用HE染色后，它被染为均匀一致的淡粉红色，与胶原纤维玻璃样变是基本一样，不易鉴别。
五、染色后的电镜观察：1、微丝状构成的原纤维，刚果红染色具有绿色双折光性，2、棒状体没有刚果红染色所具有的双折光性。
结论：两者的超微结构，物理特性及化学成分完全不同。
六、病变最常累及的器官：肝、脾、肾和肾上腺。
七、病变累及器官的大体特征：器官变大，坚实，切面呈灰白色半透明状，严重时组织呈蜡样结构。
八、淀粉样物的种类：1、原发性淀粉样物：见于肌肉，心脏，皮肤和舌头。
2、继发性淀粉样物：见于肝、脾、肾脏和肾上腺。
3、多发性骨髓瘤并发的淀粉样物与免疫系统有关。
4、肿瘤和肿瘤有关的淀粉样物：如骨髓瘤、甲状腺髓样瘤。
九、显示淀粉样物的方法：(一)、甲基紫法：1、切片脱蜡至水，2、1%甲基紫染色5min，3、自来水洗，4、1%醋酸水溶液分化，直至呈现粉红色或红色，胞核呈蓝色，5、自来水洗，摔去多余的水分，6、用Apathy氏或阿拉伯胶封固。
结果：淀粉样物为粉红色至玫瑰红色。
其余组织呈蓝色至紫色。
注意事项：1、这是一种异色反应的方法，所谓异色反应即使用一种颜色的染液，最后形成的结果却为另外一种颜色，故称为异色反应。
2、该法的切片不能用酒精脱水，因酒精可将着染的颜色全部褪掉，也不宜用甘油明胶封固。
3、所用的甲基紫，也可用结晶紫代替效果基本一样。
4、由于切片是带水封固，因此不能做长期保存，如要摄影，应从速进行为好。
淀粉总量检测试剂盒
Megazyme淀粉总量检测试剂盒产品编号：K-TSTA（100次）(淀粉葡糖苷酶/α-淀粉酶方法)AOAC法996.11 /AACC法76.13改进版1.简介淀粉测定方法分为酸水解法和酶分析法。
酸水解只能应用于纯淀粉样品。
酶分析方法在前处理步骤，淀粉凝胶化、液化和糊化，糊精水解成葡萄糖、葡萄糖测定步骤等方面存在不同。
AACC 76-11法采用淀粉在高压蒸汽灭菌锅中及含水的条件下凝胶化，并用淀粉葡糖苷酶将淀粉转化为葡萄糖，再测定葡萄糖含量。
采用AACC 76-11法会导致许多样品和材料中（包括高直链淀粉玉米淀粉和谷物制品）淀粉含量检测结果偏低。
目前，许多方法采用在淀粉凝胶化结束后立即加入耐热α-淀粉酶处理。
对于难以凝胶化的样品如高直链淀粉玉米淀粉，用氢氧化钠或DMSO处理。
在膳食纤维的测定方法中为确保淀粉完全溶解，Englyst和Cumming（1988）加入了淀粉脱支化酶，普鲁兰酶。
为了满足极端样品中总淀粉含量定量测定的需要，Megazyme公司研发出一种使用耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶的淀粉总量检测试剂盒。
该方法已被AOAC和AACC采用。
近来，我们将检测方法进行了改进，使耐热α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH 5.0)下进行孵育，这样简化了测定步骤，并将麦芽酮糖生成的可能性降到最低。
Megazyme淀粉总量试剂盒可测定大部分食品、饲料、植物和谷物制品（天然或加工过的）。
对于大部分样品（如小麦粉），样品中的淀粉在孵育中（大约100℃，并加入耐热α-淀粉酶）会完全溶解。
含有大量抗性淀粉的样品（如高直链玉米淀粉），需用2M KOH或热DMSO进行预溶解。
含有可溶性淀粉或麦芽糊精的样品，不需要用耐热α-淀粉酶处理。
2.产品性能●特异性：可用于测定α-葡聚糖（包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麦芽糊精）。
●灵敏度：最小吸光度差异为0.10吸光度单位。
这相当于当样品体积为1.00 mL时，D-葡萄糖的浓度为1.0mg/L或淀粉浓度为0.9 mg/L。
冰冻切片实验步骤
全部实验步骤1 取新鲜组织于4%多聚甲醛固定24小时2 30%蔗糖脱水48小时以上3 -250C包埋（冰冻切片机内）4冰冻切片冰冻切片步骤冰冻切片免疫组化染色步骤：冰冻切片4~8μm，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3次。
用3%过氧化氢孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。
PBS冲洗，5分钟×2次。
下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤。
(见我发的前面的帖子)你确定你是冰冻切片吗？？？冰冻切片不能用热修复啊！！！以下是我的步骤：1 冰冻切片室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。
用3％过氧化氢孵育5~10分钟，PBS洗，5分钟×2。
2 5~10％正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。
倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。
3 PBS冲洗，5分钟×3次。
4 滴加滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育30分钟。
PBS冲洗，5分钟×3次。
5 滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。
6 PBS冲洗，5分钟×3次。
7 显色剂显色（DAB）。
8 自来水充分冲洗，复染，封片。
冰冻切片免疫组化染色用的灭活内源性过氧化物酶，最好是用3%H2O2/甲醇溶液，室温20分钟。
此配方不易产生脱片。
配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O2 1ml，混匀后使用，每次新鲜配制。
冰冻切片免疫组化染色步骤冰冻切片4~8mm，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。
用3％过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
PBS洗，5分钟×2。
下接免疫组化染色操作步骤。
免疫组化染色步骤：（SP试剂盒为例)1 冰冻切片4~8um，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。
病理技师三基测试试题及答案
病理技师三基测试试题及答案1、(1分) 下列哪项不是活检的意义A、组织新鲜固定后能基本保持病变的原貌，有利于及时、准确地对疾病作出病理学诊断B、必要时还可在手术进行中做冷冻切片快速诊断，协助临床医生选择最佳手术治疗方案C、在疾病治疗过程中，定期活检可动态了解病变的发展和判断疗效D、发现和确诊某些新的疾病、传染病、地方病、流行病等，为卫生防疫部门采取防治措施提供依据E、可采用如免疫组化等研究方法对疾病进行更深入的研究答案：D2、在免疫组化染色中哪一项不是出现背景染色的原因: （）A、内源性过氧化物酶没有完全阻断B、脱蜡不够彻底C、正常动物血清使用不合理D、缓冲液中加入了吐温E、显色剂浓度过高答案：D3、与电镜样品制作无关的试剂是A、戊二醛B、环氧树脂C、石蜡D、锇酸E、丙酮答案：C4、细胞质包括:（）A、糖原B、脂类C、蛋白质D、基质、细胞器和包含物E、色素颗粒答案：D5、刚果红染色显示淀粉样物正确结果是: （）A、淀粉样物质呈红色，细胞核呈蓝色B、淀粉样物质呈蓝色，细胞核呈红色C、淀粉样物质呈粉色，细胞核呈黑色D、淀粉样物质呈红色，细胞核呈绿色E、淀粉样物质呈黑色，细胞核呈蓝色答案：A6、网状纤维用银氨浸染，甲醛还原呈: （）A、红色B、蓝色C、黑色D、绿色E、黄色答案：C7、下列解剖学方位术语正确的是A、小腿胫侧代表外侧B、前臂桡侧代表内侧C、小腿腓侧代表内侧D、距身体腹侧面近者为前侧答案：D8、胸腔、腹腔被覆上皮是: （）A、间皮B、移行上皮C、单层立方上皮D、单层柱状上皮E、内皮答案：A9、免疫的现代概念是:（）A、免于疾患B、机体抗感染过程C、机体识别与排除抗原性异物的功能D、消除和杀灭自身突变细胞E、机体清除自身的损伤或衰老细胞的一种功能答案：C10、(1分) 结核性脑膜炎病变最明显部位是A、脑桥B、脑底C、小脑D、基底节E、内囊答案：B11、如下病变中哪些是恶性肿瘤A、脂肪瘤B、软骨肉瘤C、纤维瘤D、神经纤维瘤答案：B12、石蜡包埋组织处理时，透明剂的作用是A、将组织内的固定剂置换出来B、可以置换乙醇溶解石蜡C、去除细胞内的沉淀物D、将组织内的水分置换出来E、去除组织内的钙盐答案：B13、(1分) 流行乙型脑炎的病变性质为A、浆液性炎B、变质性炎C、肉芽肿性炎D、渗出性炎E、化脓性炎答案：B14、肿瘤一词指的是: （）A、交界性肿瘤B、恶性肿瘤C、良、恶性肿瘤D、癌与肉瘤E、良性肿瘤答案：C15、(1分) 下列不属于APUD肿瘤的是*（内分泌细胞）A、嗜铬细胞瘤B、类癌C、肺小细胞癌D、甲状腺滤泡E、癌甲状腺髓样癌答案：D16、全身性营养不良时，最早发生萎缩的器官或组织是: （）A、脑B、脂肪组织C、心肌D、骨骼肌E、肝答案：B17、免疫组化常用的固定液哪项不正确? （）A、4%中性缓冲甲醛B、Bouin液C、2%戊二醛D、4%多聚甲醛E、PLP固定液答案：C18、(1分) 急进型高血压最常见的死因为A、脑出血B、肾衰竭C、心力衰竭D、高血压脑病E、脑软化答案：B19、OCT包埋剂对冰冻组织切片起何作用: （）A、支持硬化作用B、加强染色作用C、加强透明作用D、固定作用E、预防掉片作用答案：A20、(1分) 流行性脑脊膜炎的致病菌为A、乙型脑炎病毒B、脑膜炎双球菌C、葡萄球菌D、大肠杆菌E、结核杆菌答案：B21、免疫组化染色失败的原因不包含哪一种? （）A、抗体的浓度过高或过低B、不当的抗原修复C、组织中无抗原表达D、抗体失效E、试验操作不规范答案：C22、(1分) 淋巴结最常见的特殊感染为A、猫抓病B、结核性淋巴结炎C、淋巴结真菌感染D、传染性单核细胞增多症E、组织细胞坏死性淋巴结炎答案：B23、肿瘤的性质主要取决于:（）A、肿瘤的生长方式B、肿瘤的生长速度C、肿瘤的分化程度D、肿瘤对机体的影响E、肿瘤有无复发答案：C24、能同时显示中性黏液和酸性黏液物质的染色法是A、高铁二胺-阿辛蓝法B、阿辛蓝-过碘酸-无色品红法C、过碘酸-无色品红法-橙黄G法D、醛品红-阿辛蓝法E、阿辛蓝-丽春红法答案：B25、进行计算机图像定量测试的图像处理是指A、寻找稳定的图像输入条件获得最佳输入图像B、校正光密度C、定量测试分析D、消除噪声和图像分割，数字化处理答案：D26、免疫荧光染色法中，标记一种抗体只能检测一种抗原的方法是:（）A、补体法B、间接法C、直接法D、双层染色法E、再染色法答案：C27、DNA分子是由两条互补的脱氧核糖核酸链组成，两条链的碱基之间有: （）A、A-T， G-CB、A-C， T-GC、C-T， A-GD、任何两个碱基均可随意配对E、A-T， T-G答案：A28、在常规HE染色中细胞质的着色原理是A、细胞质着色与等电点无密切关系B、细胞质着色与pH无关C、pH调至蛋白质等电点时染色D、pH调至胞质等电点以下，带正电荷，可被带负电荷染料染色 B.E、pH调至大于蛋白质等电点，被带负电荷染料染色答案：D29、在病理挡案管理系统中，要实现全院的资源共享，必须使用:（）A、互联网B、广域网C、校园网D、局域网E、军队网答案：D30、(1分) 关于肾母细胞瘤说法错误的是A、多数为遗传性，散发性少见B、肿瘤起源于后肾胚基组织C、儿童肾脏最常见肿瘤D、多为单个实性肿物E、镜下见肾脏不同发育阶段的组织学结构答案：A31、网状纤维染色常用:（）A、硝酸银B、氯化金C、银氨浸染D、醋酸银E、硫酸铁铵答案：C32、苏木精成为苏木红要经过:（）A、氧化B、媒染C、分化D、蓝化E、促染答案：A33、尸体解剖组织采用福尔马林固定，固定液体积应为A、是标本体积的20倍B、是标本体积的2倍C、是标本体积的5倍以上D、与标本体积相同E、是标本体积的50倍答案：A34、(1分) 患者，男，12岁，左颈部淋巴结肿大半年，消炎治疗无效，活检见淋巴结结构破坏，以小裂细胞为主，诊断可能为A、霍奇金淋巴瘤B、淋巴结反应性增生C、白血病D、非霍奇金淋巴瘤E、淋巴结结核答案：D35、配制伊红染液时加入少量冰醋酸是作为A、媒染剂B、蓝化剂C、分化剂D、促染剂E、氧化剂答案：D36、真菌Schiff染色时常用的氧化剂是: （）A、高碘酸B、高锰酸钾C、醋酸D、磷钨酸E、冰醋酸答案：A37、SP法免疫组化第二抗体的标记物是A、生物素B、卵白素C、FITCD、HRPE、AP答案：A38、巴氏五级诊断法中巴氏Ⅱ级表示A、见异形细胞B、高度怀疑为恶性细胞C、怀疑为恶性细胞D、未见异形细胞E、肯定为恶性细胞答案：A39、(1分) 透壁性心肌梗死后合并心脏破裂好发部位是A、房间隔B、左室前壁C、左心房D、左心室下1/3处、室间隔和左室乳头肌E、右心室答案：D40、肾穿组织做电镜检查时，常用固定液是A、乙醇-福尔马林B、丙酮C、乙醇D、戊二醛E、甲醛答案：D41、气球样变属于: （）A、细胞肿胀B、浊肿C、颗粒变性D、水样变性E、脂肪变性答案：D42、查瘤细胞的痰标本要求: （）A、痰中有血B、清晨饭前用力咳肺深部的痰3-4口C、24小时痰D、饭后咯肺深部痰3~4口E、清晨第一口痰答案：B43、不属于脱落细胞学检查的标本是A、胸水标本B、腹水标本C、痰液标本D、胃镜活检E、宫颈涂片答案：D44、衡量显微镜性能的重要技术参数是A、球差B、分辨率C、色差D、畸变E、相散答案：B45、骨骼肌细胞明暗交替的横纹是由于: （）A、明带和暗带内的线粒体数量不同B、明带和暗带内的肌红蛋白含量不同C、各条肌原纤维的明暗横纹都相应排列在同一水平上D、明带和暗带内的糖原含量不同E、明带和暗带内的肌浆网含量不同答案：C46、缓冲溶液是指:（）A、具有抗酸成分的溶液B、含有弱酸成分的溶液C、具有缓冲作用的溶液D、含有弱碱成分的溶液E、具有抗碱成分的溶液答案：C47、组织石蜡制片过程中常用的脱水剂是A、乙酸B、丙酮C、乙醇D、甲醛E、甲醇答案：C48、在脱水剂中，哪一种对组织的收缩最严重: （）A、乙醇B、异丙醇C、松脂醇D、丙酮E、正丁醇答案：D49、病理解剖室的设计，下面不合适的是A、解剖室窗户略高一些，以便于自然光线的利用B、病理解剖室应至少设计两个门，其中一个宽一点以便尸体的抬运C、解剖台上方最好安装无影手术灯，避免带色光源照明影响对病变器官染色的观察D、解剖室窗户略低一些，以便于尸体的搬运和自然光线的利用答案：D50、胃溃疡最常发生于: （）A、胃前壁B、胃后壁C、胃大弯及胃底D、胃小弯近幽门处E、胃小弯近贲门处答案：D51、下列哪项是PBS缓冲液的配制: （）A、Na2HPO4B、Na2HPO4+ NaHCO3C、NaHCO3+ Na2HPO4D、NaH2PO4+ Na2HPO4E、NaH2PO4答案：D52、适用于物体表面和空气灭菌的方法是A、电离辐射灭菌法B、干热灭菌法C、超声波杀菌法D、紫外线灭菌法答案：D53、(1分) 下列属于低度恶性淋巴瘤的是A、弥漫大B细胞淋巴瘤B、急性淋巴母细胞淋巴瘤C、Burkitt淋巴瘤D、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤E、NK/T细胞淋巴瘤答案：D54、Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫(AB/PAS)染色法中，中性黏液物质的颜色是A、红色B、黄色C、绿色D、黑色E、蓝色答案：A55、在免疫应答过程中起核心作用的是:（）A、中性粒细胞B、单核细胞C、嗜酸性粒细胞E、嗜碱性粒细胞答案：D56、(1分) 关于早期食管癌说法错误的是A、可有淋巴结转移B、多为原位癌或黏膜内癌C、未侵犯肌层D、无明显症状E、病变局限答案：A57、(1分) 下列甲状腺癌恶性程度最高的是A、髓样癌B、滤泡癌C、乳头状癌D、未分化癌E、C细胞癌答案：D58、酶组化方法既要保存酶分布的形态结构，又要保留酶的活性，下面哪项与影响酶活性的因素无关? （）A、温度B、稳定剂C、酸碱度D、抑制剂E、激活剂答案：B59、下列哪个物质不是抗体的标记物: （）A、碱性磷酸酶.B、铁蛋白C、HRPD、白蛋白E、同位素答案：D60、(1分) 淀粉样变时淀粉样蛋白-黏多糖复合物沉淀的部位为A、细胞核或细胞浆B、细胞核D、细胞间质E、细胞浆和细胞核答案：D61、苦味酸是属于: （）A、醌亚胺染料B、偶氮染料C、硝基染料D、苯甲烷染料E、叮染料答案：C62、(1分) 疖是毛囊、皮脂腺及其周围组织的A、脓肿B、表面化脓C、积脓D、纤维素性炎E、浆液性炎答案：A63、下列哪项是恶性肿瘤细胞的形态特点: （）A、核大B、多核C、有核分裂D、出现病理性核分裂E、核仁大答案：D64、肾细胞脂肪变性所形成的细胞内空泡，其主要成分是: （）A、类脂B、脂蛋白C、脂褐素D、中性脂肪E、胆固醇答案：D65、甲醛久存会形成: （）A、甲醛钠B、苯甲酸C、三聚甲醛或多聚甲醛D、戊二醛E、醋酸答案：C66、穿刺细胞涂片常规染色后，薄的区域细胞肿胀，细胞核云雾状模糊不清: （）A、细胞坏死B、细胞原先就退变C、涂片固定不及时D、染色问题E、脱水不完全答案：A67、远程病理学传输的信息，最主要是A、病人的年龄和职业B、病人的临床情况C、病理切片的图像D、病理切片的诊断E、病人的手术方式答案：C68、下面哪一项不属于细胞器: （）A、核糖体B、内质网C、溶酶体D、包含物E、线粒体答案：D69、白细胞共同抗原(LCA)不能标记哪一种细胞: （）A、T细胞B、红细胞C、B细胞D、巨噬细胞E、组织细胞答案：B70、非恶性肿瘤的特征之一是: （）A、瘤细胞异型性小B、转移C、浸润D、瘤栓形成E、多极核分裂象答案：A71、鳞状上皮主要分布在皮肤，下列哪一项不属于鳞状上皮?（）A、口腔B、小肠C、肛门D、阴道E、食管答案：B72、免疫荧光细胞化学的封固剂是: （）A、光学树脂胶B、蒸馏水C、缓冲甘油D、生理盐水E、甘油答案：C73、一般大体标本多选用4%中性甲醛液固定，这种固定液渗透组织的能力? （）A、lmm／hB、2mm／hC、3mm／hD、4mm／hE、5mm／h答案：A74、高碘酸-Schiff法中，高碘酸的作用是A、氧化B、漂白C、媒染D、水解E、还原答案：A75、(1分) 患者，男性，42岁，吸烟史20年，常咳嗽，现以肺部感染入院，痰涂片发现脱落的气管上皮中有鳞状上皮，但细胞无明显异型性，此现象为A、气管黏膜上皮不典型增生B、痰中混有口腔上皮C、痰中混有食管上皮D、气管黏膜上皮鳞状上皮化生E、气管黏膜上皮间变答案：D76、Wiesel法染嗜铬细胞的结果是A、嗜铬细胞质黄绿色，细胞核蓝色，其他无色B、嗜铬细胞质红色，细胞核黄绿色，其他蓝色C、嗜铬细胞质蓝色，细胞核红色，其他黄绿色D、嗜铬细胞质黄绿色，细胞核红色，其他蓝色E、嗜铬细胞质红色，细胞核蓝色，其他无色答案：A77、(1分) 卫星现象是指哪种细胞围绕神经元形成的A、星形胶质细胞B、小胶质细胞C、巨噬细胞D、少突胶质细胞E、室管膜细胞答案：D78、免疫组化染色阳性细胞的特征描述哪项不正确? （）A、分布可分灶性和弥漫性B、三种类型定位:胞浆、胞核、胞膜C、有时免疫组化阳性反应强，可呈片状分布，颜色均匀一致D、切片边缘，坏死细胞区等可呈阳性染色，不能用于判断阳性E、背景清晰，单个明显的细胞呈强阳性，可判断为阳'性答案：C79、(1分) 关于创伤愈合的影响因素下列说法正确的是A、局部血液循环对愈合有重要影响B、感染不会影响伤口的愈合C、麻风引起的溃疡不易愈合与神经受累没有关系D、维生素中维生素E对愈合最重要E、伤口感染引起的愈合是一期愈合答案：A80、与坏死形态改变发生最密切相关的细胞器是: （）A、高尔基复合体B、内质网C、溶酶体D、线粒体E、核糖体答案：C81、(1分) 基底细胞癌的特点应除外A、癌细胞分化好，有大量角化珠形成B、对放射治疗很敏感C、常形成经久不愈的溃疡D、多见于老年人面部E、很少发生转移答案：A82、下列关于解剖学姿势的描述错误的是A、足尖朝前B、手掌朝向前方（拇指在外侧）C、上肢垂于躯干两侧D、标准姿势即为立正姿势答案：D83、配制伊红染液时加入少量冰醋酸是作为:（）A、媒染剂B、蓝化C、分化剂D、促染剂E、氧化剂答案：D84、条件致病菌是A、恢复期患者排泄的病原菌B、正常时存在于机体内而不引起疾病的细菌C、从外部侵入，但尚未引起疾病的病原菌D、正常时不存在于机体内的非致病菌答案：B85、关于椎骨的描述正确的是A、第1颈椎又称寰椎B、成人椎骨共有32块C、腰椎椎体横切面呈三角形D、椎体位于椎弓的后方答案：A86、下列各项中，哪一项与固定的作用无关: （）A、保持细胞与生活时的形态相似B、保持细胞内特殊的成分与生活状态C、便于区分不同组织成分D、便于借某些媒质置换组织内水分E、有利切片答案：D87、下列哪种抗体对识别恶性黑色素瘤淋巴结转移无帮助: （）A、CKB、HMB45C、LCAD、PCNAE、S-100答案：D88、甲级片质量的评定标准是:（）A、切片厚薄不均，有裂缝、划痕、折叠B、切片厚度适宜，有轻度裂缝、划痕C、以上都不是D、切片厚薄不均，无裂缝、划痕、折叠E、切片厚度适宜，有裂缝、划痕、折叠答案：C89、左心衰竭时首先发生淤血的器官是:（）A、肾B、肝C、肺D、脑E、脾答案：C90、脱氧核糖核酸的功能为A、携带遗传信息B、单独参与基因的表达和表达过程的调控C、决定细胞和个体的基因型D、参与蛋白质共同参与基因的表达和表达过程的调控E、存在于细胞质和线粒体内答案：A91、细菌缺少哪种成分仍可能生存A、核质B、细胞膜C、细胞质D、细胞壁答案：D92、显微镜滤色镜上标明的LBD代表的是A、吸热滤色镜B、彩色补偿滤色镜C、日光型彩色片滤色镜D、中灰滤色镜答案：C93、不符合理想的探针标记物的条件是A、重复性好B、标记探针的检测方法简便、节时C、准确可靠D、标记前、后的探针分子结构不相同E、安全无害答案：D94、下列哪种形态肿瘤恶性可能性最大: （）A、分叶状B、乳头状C、结节状D、蟹足状E、囊状答案：D95、尸体剖检时有关寄生虫学检查，下面的做法不妥当的是A、每例尸检均须进行寄生虫检查B、采集样本通常包括：心血、骨髓、肝、脾、肠内容物和肠壁组织等C、检测样本妥善封装，注明检查要求D、根据推测的可能性病原体，采集检查样本答案：A96、(1分) 胶质母细胞瘤最经典的发病部位是A、额叶B、顶叶C、颞叶D、枕叶E、额叶和顶叶答案：A97、下列哪种血细胞不是白细胞A、中性粒细胞B、单核细胞C、淋巴细胞D、血小板答案：D98、地依红染色液的pH值很重要，在多少之间效果较好: （）A、0.5～1B、3～5C、2～2.8D、1.2～1.6E、7.2～8答案：D99、软骨膜是属于下列哪种组织A、网状组织B、网状组织和致密结缔组织C、致密结缔组织D、疏松结缔组织答案：C100、透射电镜样品制作常选用的包埋剂是A、石蜡B、树胶C、火棉胶D、环氧树脂E、明胶101、(1分) 下列哪项是恶性肿瘤A、软骨母细胞瘤B、成熟性畸胎瘤C、骨母细胞瘤D、精原细胞瘤E、神经纤维瘤答案：D102、一氧化碳中毒死亡的尸斑呈A、桃红色B、紫色C、黄色D、灰褐色答案：A103、对组织的固定过程，下面的描述不正确的是A、需要做酶组织化学的组织固定应置于冰箱低温固定B、大多数组织固定可在室温，在低温固定时，固定时间应相应延长C、固定时应注意组织块的大小，组织块切取适当D、组织取下后尽快冲洗干净放入适当的固定液中答案：D104、(1分) 重度慢性乙型病毒性肝炎出现毛玻璃样改变的原因是A、细胞内玻璃样变B、线粒体肿胀C、粗面内质网内有大量HBsAgD、滑面内质网内有大量HBsAgE、细胞变性答案：D105、(1分) 急性肾盂肾炎最常见的致病菌为A、真菌B、大肠杆菌C、病毒D、金黄色葡萄球菌E、草绿色链球菌答案：B106、(1分) 肠结核最常见部位B、回盲部C、乙状结肠D、空肠E、回肠答案：B107、纤维素又称: （）A、纤维蛋白B、胶原蛋白C、胶原纤维D、网织纤维E、弹力纤维答案：A108、细胞器包括:（）A、细胞核B、细胞膜C、细胞浆D、线粒体E、细胞质答案：D109、一个抗体分子上有几个抗原结合的位点:（）A、一个B、二个C、三个D、四个E、五个答案：B110、(1分) 患者，女，36岁，2年来劳累后气促，X线提示前上纵隔类圆形影压迫气管，最可能诊断为A、淋巴瘤B、神经源性肿瘤C、肺癌D、胸骨后甲状腺肿E、心包积液答案：D111、有关体视显微镜的描述，下列不正确的是A、焦深大，便于观察被检物体的全层B、视场直径大C、双目镜筒中的左右两光束平行D、像是直立的，便于操作和描述答案：C112、哺乳动物实验最常用的注射麻醉药有:（）A、乙醚B、氯仿C、戊基巴比妥钠D、硫贲妥纳E、异戊巴比妥答案：C113、细胞培养中死活细胞鉴定染色是A、HE染色B、中性染色C、甲基绿染色D、台盼蓝染色E、银氨液答案：D。
神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果探讨
㊀㊀［摘要］㊀目的㊀探讨神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果，摸索实验操作的最佳条件㊂方法㊀选择２０２２年８月于首都医科大学宣武医院神经内科收治的１例淀粉样周围神经病患者，取腓肠神经的活检组织标本㊂制作６μｍ和８μｍ厚度的冰冻切片，Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红染液染色时间分别设置为５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ，在普通光㊁偏振光及荧光下观察冰冻切片刚果红染色结果㊂结果㊀当染色时间为１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ时，两种厚度切片均可观察到特异物质沉积，且随着切片厚度增加，颜色强度增加㊂６μｍ切片在染色５ｍｉｎ时效果不佳；８μｍ切片在染色１５ｍｉｎ时效果最好，光镜及荧光显微镜下观察到的染色结果更利于观察者进行诊断㊂结论㊀神经冰冻切片厚度为８μｍ㊁染色时间１５ｍｉｎ是合适的刚果红染色条件，在淀粉样周围神经病病理诊断中有较好的应用价值㊂㊀㊀［关键词］㊀刚果红染色；㊀神经冰冻切片；㊀淀粉样周围神经病；㊀病理诊断㊀㊀［中图分类号］㊀Ｒ４４６ ８㊀［文献标识码］㊀Ａ㊀［文章编号］㊀１６７４－３８０６（２０２３）０７－０６９０－０４㊀㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－３８０６．２０２３．０７．１０ＡｎｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｎｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｎｐａｔｈｏ⁃ｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ㊀ＤＵＯＪｉａｎ⁃ｙｉｎｇ，ＣＨＥＮｈａｉ，ＸＵＭｉｎ，ｅｔａｌ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＸｕａｎｗｕＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００５３，Ｃｈｉｎａ㊀㊀［Ａｂｓｔｒａｃｔ］㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｎｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｏｐｅｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＯｎｅｐａｔｉｅｎｔｗｉｔｈａｍｙｌｏｉｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙｗｈｏｗａｓａｄｍｉｔｔｅｄｔｏｔｈｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙｏｆＸｕａｎｗｕＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣａｐｉｔａｌＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎＡｕｇｕｓｔ２０２２ｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｔｏｔａｋｅｂｉｏｐｓｙｓｐｅｃｉｍｅｎｓｏｆｓｕｒａｌｎｅｒｖｅ．Ｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｌｉｃｅｓｗｉｔｈｔｈｉｃｋｎｅｓｓｅｓｏｆ６μｍａｎｄ８μｍｗｅｒｅｐｒｅｐａｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅｄｙｅｉｎｇｔｉｍｅｏｆＨｉｇｈｍａｎＣｏｎｇｏｒｅｄｄｙｅｗａｓｓｅｔｔｏ５ｍｉｎｕｔｅｓ，１０ｍｉｎｕｔｅｓ，１５ｍｉｎｕｔｅｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇｉｎｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｏｒｄｉｎａｒｙｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｂｉｒｅｆｒｉｎｇｅｎｔｐｏｌａｒｉｚｅｄｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓ⁃ｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｗｈｅｎｔｈｅｄｙｅｉｎｇｔｉｍｅｗａｓ１０ｍｉｎｕｔｅｓ，１５ｍｉｎｕｔｅｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔｈｅｄｅｐ⁃ｏｓｉｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｓｕｂｓｔａｎｃｅｓｃｏｕｌｄｂｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅｓｌｉｃｅｓｏｆｂｏｔｈｔｈｉｃｋｎｅｓｓｅｓ，ａｎｄｔｈｅｃｏｌｏｒｉｎｔｅｎｓｉｔｙｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｓｌｉｃｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓ．Ｗｈｅｎｔｈｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｔｈｅｓｅｃｔｉｏｎｗａｓ６μｍ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒ５ｍｉｎｕｔｅｓｗａｓｕｎｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｗｈｅｎｔｈｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆｔｈｅｓｅｃｔｉｏｎｗａｓ８μｍ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒ１５ｍｉｎｕｔｅｓｗａｓｔｈｅｂｅｓｔ．Ｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｗｅｒｅｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｔｈｅｏｂｓｅｒｖｅｒᶄｓｄｉａｇｎｏｓｉｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀Ｔｈｅｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｗｉｔｈａｔｈｉｃｋｎｅｓｓｏｆ８μｍａｎｄｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｔｉｍｅｆｏｒ１５ｍｉｎｕｔｅｓａｒｅｔｈｅａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒＣｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇ，ａｎｄｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｈａｓｇｏｏｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆａｍｙｌｏｉｄｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ．㊀㊀［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］㊀Ｃｏｎｇｏｒｅｄｓｔａｉｎｉｎｇ；㊀Ｆｒｏｚｅｎｓｅｃｔｉｏｎｓｏｆｎｅｒｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓ；㊀Ａｍｙｌｏｉｄｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ；㊀Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ㊀㊀淀粉样物质是由蛋白质变性所致，亦可称为淀粉样变㊂淀粉变性病是由于不同结构的异常蛋白在机体内不同组织和器官沉积所致［１⁃４］㊂淀粉样物质可沉淀在血管周围，累及周围神经，导致淀粉样变性周围神经病［５⁃７］㊂刚果红染色是对淀粉样物质沉积最经典且有效的病理染色方法［８⁃１１］㊂实验室常用石蜡切片进行刚果红染色［９］，不同试剂盒㊁染色流程㊁染色条件均会影响染色结果［１２⁃１４］㊂即使是使用同一试剂盒，对于不同组织的染色条件也有所差别［１５⁃１６］㊂笔者在临床实践中发现，应用刚果红染色试剂盒对石蜡及冰冻标本进行染色（染色时间５ｍｉｎ），冰冻肌肉标本可得到良好的染色结果，但冰冻神经标本往往观察不到理想的结果㊂鉴此，笔者通过对染色时间及切片厚度进行了反复测试，以期获得神经冰冻切片刚果红染色的最佳条件，为淀粉样周围神经病的快速病理诊断提供准确证据㊂１㊀材料与方法１ １㊀标本来源㊀选择２０２２年８月于首都医科大学宣武医院神经内科收治的１例淀粉样周围神经病患者，取得腓肠神经的活检组织标本，迅速进行液氮冷冻处理，以ＯＣＴ（ｏｐｔｉｍａｌｃｕｔｔｉｎｇｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｃｏｍｐｏｕｎｄ）包埋剂包埋，固定于软木片上，－８０ħ冰箱长期保存备检㊂排除标准：（１）活检标本未发现异常物质沉积；（２）活检石蜡标本切片刚果红染色偏振光下未见苹果绿色㊂本研究获医院医学伦理委员会批准㊂１ ２㊀刚果红染色方法１ ２ １㊀染色试剂㊀淀粉样物质染色液（Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红法，雷根生物，ＤＧ００２２），包括Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红染色液（Ａ液）㊁碱性乙醇分化液（Ｂ液）㊁Ｌｅａｇｅｎｅ苏木素染色液（Ｃ液）㊂１ ２ ２㊀标本制备㊀将神经组织标本进行冰冻切片（横切或纵切），切片后采用丙酮固定１５ｍｉｎ㊂１ ２ ３㊀实验分组㊀本研究主要观察刚果红染色时间及切片厚度对染色结果的影响㊂染色时间设置５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ四个亚组；切片厚度设置６μｍ㊁８μｍ两个亚组，共８组，每组横切和纵切各３张切片㊂１ ２ ４㊀染色过程㊀将固定后的冰冻切片以自来水冲洗１ｍｉｎ，根据分组放入Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红染色液（Ａ液）分别浸染５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ㊂随后将切片放入碱性乙醇分化液（Ｂ液）分化５ｓ，予自来水冲洗１ｍｉｎ终止分化㊂将切片放入Ｌｅａｇｅｎｅ苏木素染色液（Ｃ液），染核１ｍｉｎ，自来水冲洗５ｍｉｎ，放入蒸馏水分化２ｍｉｎ㊂逐级常规乙醇脱水，以二甲苯进行透明化处理，中性树胶封片㊂１ ２ ５㊀染色结果观察㊀使用ＬｅｉｃａＤＭ２５００光学显微镜对染色结果进行观察㊂以神经组织切片中出现砖红色无定型物质（一般为团块状），并且该物质在偏振光下呈现苹果绿色双折光，则判定为刚果红染色阳性㊂在普通光学显微镜下，淀粉样蛋白砖红色按照着色强度分为弱（略显砖红色）和强（显鲜艳砖红色）两个等级㊂在荧光显微镜下（激发光波长５４０ ５６５ｎｍ，发射光波长６０５ ６６０ｎｍ），淀粉样蛋白呈大红色荧光，按照荧光强弱分为弱（略显红色荧光）和强（显现十分鲜艳红色荧光）两个等级㊂１ ３㊀组织化学染色方法１ ３ １㊀标本制备㊀将神经组织标本进行冰冻切片，纵切或横切，厚度为６μｍ㊁８μｍ各３张切片㊂１ ３ ２㊀苏木精⁃伊红染色（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ⁃ｅｏｓｉｎ，ＨＥ）㊀切片晾干后进行ＨＥ染色：切片置入Ｈａｒｒｉｓ苏木精液２ｍｉｎ，自来水冲洗１０ｍｉｎ后置入１％伊红１ｍｉｎ；自来水快速冲洗１ｍｉｎ，逐级常规乙醇脱水，以二甲苯进行透明化处理，中性树胶封片㊂２㊀结果２ １㊀ＨＥ染色及刚果红染色结果㊀ＨＥ染色切片可观察到有淀粉样物质沉积物，呈不定形的粉红色团块状物质，偏振光下该物质团呈苹果绿色㊂石蜡切片㊁冰冻切片经ＨＥ染色和刚果红染色后在光镜下均能观察到粉红色物质沉积及砖红色物质㊂但冰冻切片整体对比度更强，特别是经刚果红染色时，冰冻切片能更好地将淀粉样物质沉积从背景颜色中区分出来㊂偏振光下石蜡切片及冰冻切片均能观察到苹果绿色㊂见图１㊂㊀ⓐ ⓓ为石蜡切片观察所见：ⓐ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ１００）；ⓑ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ２００）；ⓒ神经内膜见砖红色团块状物质，着色强（刚果红染色，ˑ１００）；ⓓ偏光镜下观察见苹果绿样沉积（刚果红染色，ˑ２００）㊂ⓔ ⓗ为冰冻切片观察所见：ⓔ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ１００）；ⓕ神经内膜见粉红色团块状物质，着色弱（ＨＥ染色，ˑ２００）；ⓖ神经内膜见砖红色团块状物质，着色强（刚果红染色，ˑ１００）；ⓗ偏光镜下观察见苹果绿样沉积（刚果红染色，ˑ２００）图１㊀石蜡切片和冰冻切片（纵切）光镜下观察所见２ ２㊀不同刚果红染色条件下光镜观察结果比较㊀染色时间为５ｍｉｎ时，６μｍ厚的冰冻切片在光镜下观察到微弱的砖红色物质，在偏振光下基本不能观察到绿色荧光物质，而８μｍ厚的冰冻切片也仅能观察到微弱的苹果绿色荧光物质㊂当染色时间为５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ和２０ｍｉｎ时，８μｍ厚的冰冻切片在光镜下观察到明显的砖红色物质，较６μｍ冰冻切片更为显著㊂而当染色时间为１０ｍｉｎ时，６μｍ冰冻切片在偏振光下仍难以观察到苹果绿色荧光物质㊂当染色时间为１５ｍｉｎ时，８μｍ厚的冰冻切片在光镜下观察到较明显的砖红色物质，而在此条件下，偏振光下能观察到的苹果绿色荧光最为显著㊂见图２㊂㊀ⓐ ⓗ为６μｍ冰冻切片镜下观察所见：ⓐ染色５ｍｉｎ，神经内膜下砖红色十分微弱，着色弱；ⓑ染色１０ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色弱；ⓒ染色１５ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色强；ⓓ染色２０ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色强；ⓔ染色５ｍｉｎ，偏振光下未见苹果绿色物质；ⓕ染色１０ｍｉｎ，偏振光下苹果绿色物质十分微弱；ⓖ染色１５ｍｉｎ，偏振光下可见明显苹果绿色；ⓗ染色２０ｍｉｎ，偏振光下可见苹果绿色物质㊂ⓘ为８μｍ冰冻切片镜下观察所见：ⓘ染色５ｍｉｎ，神经内膜下可见砖红色物质沉积，着色强；ⓙ染色１０ｍｉｎ，神经内膜下可见砖红色物质沉积，着色强；染色１５ｍｉｎ，神经内膜下可见砖红色物质沉积，着色强；染色２０ｍｉｎ，神经内膜下见砖红色物质沉积，着色强；染色５ｍｉｎ，偏振光下可见微弱苹果绿色；染色１０ｍｉｎ，偏振光下可见微弱苹果绿色；染色１５ｍｉｎ，偏振光下可见明显苹果绿色物质；染色２０ｍｉｎ，偏振光下可见微弱苹果绿色物质图２㊀不同刚果红染色条件下光镜观察所见（ˑ２００）２ ３㊀８μｍ切片在不同刚果红染色时间条件下荧光显微镜观察结果㊀当染色时间为５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ时，荧光显微镜下均能观察到明显的橙红色荧光，其中以染色时间为１５ｍｉｎ时荧光亮度最强㊂石蜡切片在荧光显微镜下呈现红色荧光，亮度弱㊂见图３㊂㊀ⓐ ⓓ为８μｍ冰冻切片观察所见：染色时间为５ｍｉｎ（ⓐ）㊁１０ｍｉｎ（ⓑ）㊁１５ｍｉｎ（ⓒ）㊁２０ｍｉｎ（ⓓ）时，荧光显微镜下观察到橙红色荧光，亮度强（刚果红染色，ˑ２００）㊂ⓔⓕ为石蜡切片观察所见：染色时间为１０ｍｉｎ，石蜡切片在荧光显微镜下呈红色荧光，亮度弱［刚果红染色，ˑ１００（ⓔ），ˑ２００（ⓕ）］图３㊀８μｍ切片不同刚果红染色时间条件下荧光显微镜观察所见３㊀讨论３ １㊀刚果红染色于１９２２年由Ｂｅｎｎｈｏｌｄ发明［１３］，可用于活体内淀粉样物质的鉴定并应用到组织切片中，后经Ｈｉｇｈｍａｎ㊁Ｆｒｅｕｄｅｎｔｈａｌ等学者进行改良㊂目前，本实验室应用的Ｈｉｇｈｍａｎ刚果红法，其染色液主要由刚果红染色液和苏木素染色液组成，染色操作简单易行，染色液性能稳定，染色效果良好，较其他刚果红染色方法有明显优势㊂３ ２㊀常规石蜡切片是制片技术中较为常用的方法，但操作步骤繁琐，所需时间较长，从取材凝固到制成标本需要消耗数日时间，而冰冻切片仅需耗时约７ｈ即可完成［１３］㊂本研究应用丙酮固定１５ｍｉｎ，可在１ｈ内得到刚果红染色及常规的ＨＥ染色结果㊂另外，本研究通过对神经石蜡切片和冰冻切片的刚果红染色在普通光㊁偏振光及荧光下的结果比较发现，冰冻切片染色结果对比度更高，更容易辨认，且荧光下染色物质亮度更强，有利于观察者对刚果红染色结果进行判定㊂因此，冰冻切片不但节省了从送检到诊断的时间，而且还提高了刚果红染色阳性判定的灵敏度，对神经系统疾病的临床诊断大有裨益㊂３ ３㊀有研究证实，切片厚度对淀粉样蛋白的刚果红染色结果有影响，随着切片厚度变薄，染色强度变弱，当薄切片ɤ３μｍ时容易出现假阴性［１７］㊂本次研究中为了防止冰冻切片制备时出现卷片㊁碎片等现象，选用６μｍ（冰冻切片免疫组化染色常用切片厚度）及８μｍ（冰冻切片组织化学染色常用切片厚度）作为染色切片厚度，观察在这两个厚度条件下刚果红染色时间对染色结果的影响㊂另外，由于神经组织较小，容易出现脱片现象㊂经笔者前期反复试验，可用丙酮固定１５ｍｉｎ替代４％甲醛㊁无水乙醇㊁Ｂｏｕｉｎ液固定［１８］㊂染色过程中复染细胞核的步骤为了避免过长时间冲水引起脱片，可选择苏木素复染１ｍｉｎ，相应的冲洗时间可由１０ｍｉｎ缩短到５ｍｉｎ㊂３ ４㊀淀粉样纤维能被刚果红染料染色，且该物质在偏振光下能呈现出特征性的苹果绿双折光，这是含有β⁃褶片结构蛋白质的特异表现，是诊断淀粉样变性病的重要依据［１，１９］㊂在本研究中，切片厚度相同时，刚果红染色着色强弱随着染色时间增加而增强；染色时间相同时，染色颜色随着切片厚度增加而增强㊂同样的厚度下，染色２０ｍｉｎ的特异性物质沉积砖红色过深，接近于紫红色，在偏振光及荧光下并没有呈现出更好的染色效果；在染色１５ｍｉｎ时，６μｍ及８μｍ切片染色在普通光㊁偏振光㊁荧光下的效果均较好㊂３ ５㊀在本研究中，当染色时间为５ｍｉｎ时，６μｍ切片刚果红染色所见砖红色十分微弱，偏振光下基本观察不到苹果绿色物质，说明切片厚度不足时偏振光观察效果不佳［２０］㊂而８μｍ切片在染色５ｍｉｎ时能观察到苹果绿双折光，说明８μｍ是较理想的切片厚度㊂当染色２０ｍｉｎ时，８μｍ切片砖红色过深，且在偏振光下也没有观察到更显著的苹果绿双折光㊂两种厚度切片在染色１５ｍｉｎ时均可观察到较强的苹果绿双折光，这可能与淀粉样物质在组织中的含量或是刚果红染料与淀粉样纤维的结合原理有关㊂３ ６㊀在荧光显微镜下观察刚果红染色能显著提高诊断的灵敏度［１，２０⁃２２］㊂本研究中，８μｍ厚度切片在染色５ｍｉｎ㊁１０ｍｉｎ㊁１５ｍｉｎ㊁２０ｍｉｎ时均能观察到十分明亮的红色荧光，且在染色时间为１５ｍｉｎ时所见荧光最为显著，呈橙红色荧光，显著提高了阳性染色的辨别力与诊断灵敏度㊂同时，本研究发现冰冻切片较石蜡切片在荧光下显色效果更优㊂综上所述，８μｍ冰冻切片刚果红染色在Ａ液中染色１５ｍｉｎ时效果最好，光镜下呈鲜艳砖红色，偏振光下苹果绿也较明显，荧光显微镜下橙红色荧光也最强㊂该方法不但简化了实验过程，缩短了实验时间，还提高了染色灵敏度，有助于淀粉样周围神经病的诊断㊂参考文献［１］中国系统性淀粉样变性协作组；国家肾脏疾病临床医学研究中心．系统性轻链型淀粉样变性诊断和治疗指南［Ｊ］．中华医学杂志，２０１６，９６（４４）：３５４０－３５４８．［２］雷㊀霖，邸㊀丽，朵建英，等．以肌肉损害为首发表现的淀粉样神经肌病一例［Ｊ］．中华神经科杂志，２０１７，５０（４）：３０４－３０５．［３］黄永塔，叶秋容，刘㊀霞，等．呼吸系统原发性淀粉样变９例临床病理分析［Ｊ］．中国临床新医学，２０２０，１３（６）：５６５－５６９．［４］杨㊀敏，庞建欣，李邻峰，等．皮肤淀粉样变中淀粉样蛋白４种染色法的比较［Ｊ］．中国皮肤性病学杂志，２０１０，２４（２）：１８０－１８２．［５］ＣｏｈｅｎＡＳ，ＣｏｎｎｏｒｓＬＨ．Ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆａｍｙ⁃ｌｏｉｄｏｓｉｓ［Ｊ］．ＪＰａｔｈｏｌ，１９８７，１５１（１）：１－１０．［６］ＢｒｅａｋｅｆｉｅｌｄＸＯ，ＣａｍｂｉＦ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＮｅｕｒｏｓｃｉ，１９８７，１０：５３５－５９４．［７］ＳｉｐｅＪＤ．Ａｍｙｌｏｉｄｏｓｉｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ，１９９２，６１：９４７－９７５．［８］谌贻璞．肾内科学［Ｍ］．２版．北京：人民卫生出版社，２０１５：１３１－１３５．［９］陈㊀楠．如何诊断淀粉样变肾病［Ｊ］．中华临床医师杂志（电子版），２００８，２（４）：４０２－４０５．［１０］刘志红，黄湘华．重视系统性淀粉样变性的诊断和治疗［Ｊ］．肾脏病与透析肾移植杂志，２０１２，２１（４）：３０１－３０３．［１１］李玉莲，袁宏伟，徐晓艳．刚果红染色在临床病理诊断中的应用价值［Ｊ］．山西医科大学学报，２０１４，４５（７）：６６１－６６２，６７０．［１２］董鸿瑞，王艳艳，杨㊀敏，等．不同刚果红染色及观察方法对肾脏淀粉样变病诊断的研究［Ｊ］．中国中西医结合肾病杂志，２０１６，１７（１１）：９５６－９５８，１０３５．［１３］涂贵兰．两种刚果红染色方法的比较［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０１５，３１（１１）：１３０９－１３１０．［１４］马国荣，胡艳萍，高㊀丽，等．三种刚果红染色的体会［Ｊ］．诊断病理学杂志，２０２０，２７（８）：６０２－６０３，６０５．［１５］涂贵兰，安㊀智．在不同组织中淀粉样物质５种染色法的比较［Ｊ］．临床与病理杂志，２０１５，３５（５）：７４０－７４５．［１６］徐㊀帆．活检组织淀粉样变性染色时不同分化时间对结果的影响及质量控制的意义［Ｊ］．检验医学与临床，２０１９，１６（１３）：１９０４－１９０６．［１７］肖广正．冰冻切片㊁快速石蜡切片在中枢神经系统肿瘤的诊断价值［Ｊ］．泰山医学院学报，２０１７，３８（８）：９３１－９３２．［１８］弓玉祥，陈平圣，倪海锋，等．冰冻切片刚果红染色方法在肾活检病理诊断中的应用［Ｊ］．中国组织化学与细胞化学杂志，２０２２，３１（３）：２８９－２９３．［１９］邹万忠．肾活检病例学［Ｍ］．３版．北京：北京大学医学出版社，２０１４：１８９－１９７．［２０］ＢａｎｃｒｏｆｔＪＤ，ＧａｍｂｌｅＭ．组织学技术的理论与实践［Ｍ］．周小鸽，刘㊀勇，译．６版．北京：北京大学医学出版社，２０１０：２２３－２４０．［２１］钱㊀军，赵秀芬，吴㊀琳，等．刚果红染色的两种观察方法在肾淀粉样变性病诊断的应用［Ｊ］．江苏医药，２０１９，４５（８）：８５９－８６１．［２２］ＭａｒｃｕｓＡ，ＳａｄｉｍｉｎＥ，ＲｉｃｈａｒｄｓｏｎＭ，ｅｔａｌ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓ⁃ｃｏｐｙｉｓｓｕｐｅｒｉｏｒｔｏｐｏｌａｒｉｚｅｄｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇａｍｙｌｏｉｄｄｅｐｏｓｉｔｓｉｎＣｏｎｇｏｒｅｄ⁃ｓｔａｉｎｅｄｔｒｅｐｈｉｎｅｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｂｉｏｐｓｙｓｐｅｃｉｍｅｎｓ［Ｊ］．ＡｍＪＣｌｉｎＰａｔｈｏｌ，２０１２，１３８（４）：５９０－５９３．［收稿日期㊀２０２３－０２－２２］［本文编辑㊀余㊀军㊀韦㊀颖］本文引用格式朵建英，陈㊀海，徐㊀敏，等．神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果探讨［Ｊ］．中国临床新医学，２０２３，１６（７）：６９０－６９３．。
刚果红染色法1
刚果红染色法：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。
方法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg／mI。
的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。
的NaCI溶液，15 min 后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。
方法二配制质量浓度为10 mg／mI。
的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。
培养基加入1 mI。
的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。
等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。
两种刚果红染色法的比较刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史，课本中给出了两种方法。
方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。
方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。
但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。
方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。
维素酶（CMC）活性检验方法1 原理纤维素酶在一定的温度和pH条件下，水解羧甲基纤维素钠释放出还原性糖（以葡萄糖计）。
在碱性、煮沸条件下，能与3，5二硝基水杨酸起显色反应，其颜色的深浅与还原糖的含量成正比。
在550nm下测定其吸光度，可以计算出还原糖的量，从而得出纤维素酶的活力。
2 活性单位1g固体酶粉（1 ml液体酶）在50℃±0.5℃ PH5.0条件下，每分钟水解底物产生1μg葡萄糖所需酶液的量定义为一个CMC酶活性单位。
3 仪器与设备3.1 分光光度计（应符合GB9721的有关规定）3.2 恒温水浴锅3.3 电热鼓风干燥箱3.4 分析天平（感量0.1mg）3.5 电冰箱3.6 酸度计（精度±0.01pH）3.7 定时钟或秒表4 试剂和溶液（若未特别说明均为分析纯：所用水为蒸馏水或去离子水）4.1 醋酸－醋酸钠缓冲液（PH=5.0）甲液：量去冰醋酸6ml，用水定容至1000ml，配成0.1M醋酸溶液。
糖原PAS染色液试剂盒使用方法
北京华越洋生物QQ：2374366200糖原PAS染色液试剂盒（过碘酸-雪夫染色液试剂盒）产品简介:糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在1946 年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质，以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。
过碘酸（又称高碘酸）是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-乙二醇基，使之变为二醛，醛与Schiff 试剂能结合成一种品红化合物，产生紫红色。
由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质，使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间，使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基，又不至于过氧化，这是很关键的步骤。
试剂盒组成：试剂（A）过碘酸溶液试剂（B）Schiff 试剂试剂（C）苏木素染色液试剂（D）酸性乙醇分化液⾃备材料：1、10%福尔马林固定液2、蒸馏水3、乙醇操作步骤（仅供参考）：1、常规固定，常采用10%的福尔马林，常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水；冰冻切片直接入蒸馏水。
3、自来水冲洗2～3min，再用蒸馏水浸洗2 次。
4、置于过碘酸溶液中，室温放置5～8min，一般不宜超过10min。
北京华越洋生物QQ：23743662005、自来水冲洗1 次，再用蒸馏水浸洗2 次。
6、样本放入Schiff 试剂，置于室温阴暗处，浸染10～20min。
7、自来水冲洗10min。
8、样本置于苏木素染色液中，染细胞核1～2min。
9、酸性乙醇分化液分化2～5s。
10、自来水冲洗10～15min 后，更换双蒸水清洗，使其返蓝。
11、逐级常规乙醇脱水。
二甲苯透明，中性树胶封固。
染⾊结果：备注：颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和Schiff 试剂中作用时间的长短。
阴性对照(可选)：1、对照切片可以用唾液，取唾液片（过滤后用）处理30～60min 后，与其他切片共同入过碘酸溶液。
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淀粉样物质染色试剂盒(Highman刚果红法)
产品简介：
淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官导致的疾病称为淀粉样变。
淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。
在电子显微镜下，淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的、不分支的细丝，大多随机排列。
用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲基紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。
目前研究发现传统的甲基紫染色法灵敏度低、特异性差。
经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。
后来经过Highman改良，染色效果更好。
Leagene淀粉样物质染色试剂盒(Highman刚果红法)主要由刚果红染色液和苏木素染色液组成。
该试剂盒简单易行，染色液性能稳定，并且已经被广泛应用。
产品组成：
主要成分：
试剂(A): 主要由刚果红、乙醇等组成。
试剂(B): 主要由稀碱、乙醇等组成。
试剂(C): 主要由苏木素、甘油等组成。
自备材料：
1、10%的福尔马林，亦可采购Leagene福尔马林试剂(10%)(DF0110)
2、蒸馏水或去离子水
3、系列乙醇
操作步骤（仅供参考）：
1、常规固定，常采用10%的福尔马林，常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水；冰冻切片直接入蒸馏水。
如有必要，可以去除色素。
3、入Highman刚果红染色液，浸染5～10min。
4、碱性乙醇分化液分化3～10s，立即入水终止分化。
5、自来水冲洗。
6、样本入Lillie-Mayer苏木素染色液中，染细胞核1～2min。
7、自来水稍微冲洗，更换双蒸水清洗，使其分化、返蓝。
8、逐级常规乙醇脱水。
9、二甲苯透明。
10、中性树胶封固。
染色结果：
淀粉样物质、弹力纤维、嗜伊红颗粒红色
细胞核蓝色
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、碱性乙醇分化液应密闭保存，一旦开启，尽快用完。
3、分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性乙醇分化液的新旧而定，另外分化后自
来水冲洗时间应该足够。
4、碱性乙醇分化液分化步骤很重要，应及时入水终止分化，防止分化过度。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
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