QIAGEN纯化新产品.
QIAGEN 中文版去内毒素大提试剂盒
纯化高转染级别的质粒DNA 【工作台流程】BENCH PROTOCOL准备工作：1.将RNase A 溶液加入P1缓冲液(Buffer P1)2.加40ml96－100％乙醇(ethanol)于试剂盒的去内毒素水中(endotoxin-fre water)3.可选：加 LyseBlue 试剂于 Buffer P14.检查 Buffer P2是否有SDS沉淀precipitation 有沉淀可在37摄氏度下暖化溶解5.Buffer P3 置于4摄氏度中预冷pre-chill6.细菌扩增培养补充：1.准备4-6个50ml新的或灭菌的离心管用于冷冻离心机下离心过夜菌液，2个用于接下来的菌块重悬和与buffer混合2.1个无内毒素的30ml聚丙烯（不推荐聚碳酸酯，因为不耐乙醇）管子（最好用圆底的离心管以利于高速离心）用于收集洗提的质粒DNA3.5个1.5ml的EP管用于收集抽提过程各步骤的产物用于实验后分析和质量控制4.准备1个冰浴盒用于步骤65.准备室温下的异丙醇10.5ml6.4摄氏度冰冻离心机和分光光度仪,琼脂糖凝胶电泳步骤：peocedureA.细菌培养、收获和裂解bacterial culture,harvest & lysis1.100ml高拷贝high-copy或250ml低拷贝low-copy过夜overnight LB培养菌液于冰冻离心机4摄氏度；6000×g；15min从新鲜的抗生素平板上挑取一个单菌落，2-5ml抗生素LB液体初始培养基30摄氏度孵化约8小时（振荡300rpm，注意孵化容器容积至少4倍于培养液）抗生素LB液体培养基稀释初始培养液到1:500-1000。
(高拷贝质粒100-200ul初始培养液加于100ml培养基；低拷贝质粒250-500ul初始培养液加于250ml培养基)37摄氏度300rpm振荡12-16小时。
(孵化容器容积至少4倍于培养液，培养至细菌密度约3-4×109/ml，即离心后菌块湿重约3g/L培养基)培养基配方：10g蛋白胨+5g酵母+10g氯化钠溶于800ml蒸馏水，用1 N NaOH 调pH值至7.0，用蒸馏水调整至1L。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
3. 评估方法 • 使用Nanodrop 2000测量OD值
图： 取2ul纯化的质粒DNA上样于1.0%琼脂糖凝胶电泳 分析结果。M: DL5000 DNA Marker. 结果表明，Magen的HiPure Plasmid Micro Kit与其它品 牌对应的产品效果相当，质粒条带完整，超螺旋质粒含量 高。
2. 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAquick Gel Extraction Kit , 28704 • Tiagen, 超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒,DP208 4. 电泳结果
• Omega, E.Z.N.A. Gel Extraction Kit, D2500-02
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAamp DNA Blood Mini Kit, D51104 • Tiagen, 血液基因组提取试剂盒(DP318) 4. 电泳结果
试剂盒回收DNA，然后电泳检测DNA回收效率。结果表明，
Magen的HiPure Gel Pure DNA Micro Kit在小片段和大片段上 有更高的回收率，其余片段则相差不大。
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure Gel Pure DNA Micro Kit(D2110)的优势：
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure PCR Pure DNA Micro Kit(D2120)的优势： 1. 高效去除引物二聚体。 2. 低洗脱体积，可低至7-10ul洗脱。 3. 长时间稳定的结合柱，无需平衡液处理 4. 更高的回收率
4.பைடு நூலகம்柱法血液DNA提取试剂盒大比对
德国QIAGEN 仪器汇总表-2011
仪器名称产地、型号用途功能参数价格(USD)破碎仪德国，型号：TisserlyserLT低通量样品破碎对种子，植物，组织等进行破碎，便于提取核酸1. 可以在2-5分钟内对1-12个样本（包括植物样本、动物样本、细菌和酵母样本）进行快速、有效的研磨2.使用封闭式的样品管，不易导致交叉污染3.操作灵活—每次可粉碎1-12个样本。
4.震荡速度和时间可调5.配套产品齐全—包括12孔适配板，可重复使用的不锈钢小球，震荡珠分配器等。
所有配件均为原装进口6．提供完整配套的试剂及整体解决方案0.9万破碎仪德国，型号：Tisserlyser II高通量样品破碎对种子，植物，组织等进行破碎，便于提取核酸1. 可以在2-5分钟内对2-192个样本（包括植物样本、动物样本、细菌和酵母样本）进行快速、有效的研磨2.使用封闭式的样品管，不易导致交叉污染3.操作灵活—每次可粉碎2-192个样本。
4.震荡速度和时间可调5.配套产品齐全—包括2x24孔,2x96孔适配板，可重复使用的不锈钢小球，震荡珠分配器等。
所有配件均为原装进口6．提供完整配套的试剂及整体解决方案1.6万多功能样品制备工作站德国，型号：QIAcube 针对多种样品进行核酸（DNA，RNA）、蛋白纯化；如总RNA、基因组DNA、病毒核酸、质粒，包括细胞、动植物组织、全血、食品、土壤、粪便、体液、痰液等1．样本量：1-12个样品，2．可直接用手工试剂盒在机器上进行纯化，无需购买自动化试剂盒。
3．采用膜纯化技术，灵敏度更高，核酸回收更完全4．全自动操作，可以由仪器完成从上样、裂解、纯化、收集产物的全过程，无需人工干预5．整合振荡、离心机、加热模块，各模块可单独运行6．触摸屏式操作，简单直观7.SFDA 认证4.2-4.5万德国，型号：QIAgility德国，型号：Rotor-Gene-Q plex+HRM焦磷酸测序-遗传分析系统德国，型号：PyroMark Q24应用：1、SNP功能的研究2、应用在甲基化研究耐药检测及病原微生物鉴定的鉴定、分焦磷酸测序的优势包括：■ 24个样本■可定量等位基因，即使是低频率等位基因■可检测未知的序列变异■快速获得直接且明确无疑的序列数据型、耐药性评估，并可对多种亚型或野生株及突变株、耐药株组成的复杂群体中的各个组分含量直接加以定量评估；本系统基于专利的Pyrosequencing技术，可应用于各种遗传多态性标记的分析检测，如SNP、突变、插入/缺失、甲基化、基因拷贝数等；等位频率分析及各种遗传疾病关联性的定量分析，以及临床检验方法的研发及实践应用；此外还可应用于病原微生物，（细菌、病毒、真菌——酵母及霉菌）PyroMark Q2410-11万焦磷酸测序-遗传分析系统德国，型号：PyroMark Q96应用：3、SNP功能的研究4、应用在甲基化研究耐药检测及病原微生物鉴定的鉴定、分焦磷酸测序的优势包括：■ 96个样本■可定量等位基因，即使是低频率等位基因■可检测未知的序列变异■快速获得直接且明确无疑的序列数据型、耐药性评估，并可对多种亚型或野生株及突变株、耐药株组成的复杂群体中的各个组分含量直接加以定量评估；本系统基于专利的Pyrosequencing技术，可应用于各种遗传多态性标记的分析检测，如SNP、突变、插入/缺失、甲基化、基因拷贝数等；等位频率分析及各种遗传疾病关联性的定量分析，以及临床检验方法的研发及实践应用；此外还可应用于病原微生物，（细菌、病毒、真菌——酵母及霉菌）PyroMark Q9616-18万注意：如果需要折算成人民币（不做免税）需要将美金乘8.2（含17%增值税和10%关税）。
QIAGEN最新试剂盒质粒大提操作步骤(翻译版)
QIAGEN EndoFree Plasmid Maxi KitCatalog numbers 12362 室温下15-25度存放2年。
在开始之前作如下准备1）按照说明把RNase A加到Buffer P1 中，混匀，放到2-8度储存。
选作：按照1:1000的比例把LyseBlue 加到Buffer P12）pre-chill Buffer P3 4°C存放。
3）检查Buffer P2 是否有SDS沉淀物，可以放到37℃短暂温热以便溶解分子沉淀物。
4）准备异丙醇。
5）用试剂盒提供的无内毒素的水中加入40ml的96-100%的酒精。
大量质粒提取过程在LB培养基中种植转化的E.coli菌。
使用100ml（高复制数的质粒）或者250ml（低复制数的质粒）过夜培养。
操作步骤如下1.收获LB培养过夜的细菌，在6000g，4℃条件下离心15min。
2.加入10ml Buffer P1（根据SBI要求加倍，用20ml）重悬细菌。
3. 加10ml Buffer P2（根据SBI要求加倍，用20ml），剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀，室温放置5min。
如果使用了LyseBlue试剂，溶液应该变成均匀蓝色。
4.在孵育期间，打开针口的密封盖.并把过滤器放到合适的架子上。
5.加入10ml冰浴的Buffer P3（根据SBI要求加倍，用20ml）到此溶菌产物中，剧烈晃动离心管4-6次使其混匀。
如果加入了LyseBlue试剂，混匀试剂直到没有颜色。
6.将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中，室温放置10min，不要插入活塞。
打开针口的密封盖，轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中。
7. 加2.5ml Buffer ER到过滤的溶菌液中，充分混匀10次后冰上孵育30min。
8.将QIAGEN-tip 500的柱子挂在另一离心管上，加入10ml Buffer QBT，让管中溶液通过重力滴下排空。
9.将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下。
QIAGEN中提DNA中文操作手册
质粒DNA中提方法（QIAfilter midi kit 25）适用于100 微克的高质粒或粘粒DNA，使用QIAfilter注射器样元件代替常规离心法以清除细菌裂解物。
低拷贝质粒，加入氯霉素放大后应视为高拷贝。
为质粒选择适当的培养体系。
在开始之前的注意事项■如果是低拷贝，最好增加裂解buffer的用量，以提高裂解效率，裂解缓冲卷，从而增加DNA 产量。
■可选：删除样品的步骤用符号表示☞为监测分析凝胶（见第34 页）的过程。
■加入buffer P3后，样品不再需要冰浴。
在开始之前做的东西■把提供的RNase A 添加到buffer P1 中。
一瓶RNase A (使用之前简要地离心）加入一瓶buffer P1 ，终浓度为100 ug/ml。
■检查buffer P2 是否由于低温存储产生SDS沉淀。
如有必要，37 ° C下使SDS溶解。
.■在4 °C预冷buffer P3。
■可选：使用前将提供的LyseBlue 试剂添加到buffer P1 混合。
每个buffer P1 瓶加入一小瓶LyseBlue （在使用之前简要离心），达到1: 1000 稀释。
LyseBlue 可以提供视觉识别从而防止常见处理错误，如细胞裂解导致效率低下和不完全沉淀的SDS、基因组DNA污染、细胞碎片等。
过程1.摇菌：新鲜划线的选择性平板（接种含有适当的选择性抗生素）挑一个单菌落放入2-5 ml LB 培养基中。
在37 ° C 摇菌约8 h （约300 rpm）。
使用4倍体系容积的试管或锥形瓶。
2.稀释选择性LB 培养基1/500 -1/1000。
若为高拷贝质粒，接种到25 毫升或● 100毫升的介质具有▲ 25—50 µ l 或● 100 – 200 µ l 起始培养液。
若为低拷贝质粒，接种▲ 50 — 100 毫升或● 250 毫升的介质具有▲ 100 – 200 µ l 或● 250-500 µ l 起始培养基。
QIAGEN-中文版去内毒素大提试剂盒
纯化高转染级别的质粒DNA 【工作台流程】BENCH PROTOCOL准备工作:1.将RNase A 溶液加入P1缓冲液(Buffer P1)2.加40ml96－100％乙醇(ethanol)于试剂盒的去内毒素水中(endotoxin-fre water)3.可选: 加 LyseBlue 试剂于 Buffer P14.检查 Buffer P2是否有SDS沉淀precipitation 有沉淀可在37摄氏度下暖化溶解5.Buffer P3 置于4摄氏度中预冷pre-chill6.细菌扩增培养1.补充:2.准备4-6个50ml新的或灭菌的离心管用于冷冻离心机下离心过夜菌液, 2个用于接下来的菌块重悬和与buffer混合3.1个无内毒素的30ml聚丙烯（不推荐聚碳酸酯, 因为不耐乙醇）管子（最好用圆底的离心管以利于高速离心）用于收集洗提的质粒DNA4.5个1.5ml的EP管用于收集抽提过程各步骤的产物用于实验后分析和质量控制5.准备1个冰浴盒用于步骤66.准备室温下的异丙醇10.5ml7.4摄氏度冰冻离心机和分光光度仪,琼脂糖凝胶电泳步骤: peocedureA.细菌培养、收获和裂解bacterial culture,harvest & lysis1.100ml高拷贝high-copy或250ml低拷贝low-copy过夜overnight LB培养菌液于冰冻离心机4摄氏度；6000×g；15min从新鲜的抗生素平板上挑取一个单菌落, 2-5ml抗生素LB液体初始培养基30摄氏度孵化约8小时（振荡300rpm, 注意孵化容器容积至少4倍于培养液）抗生素LB液体培养基稀释初始培养液到1:500-1000。
(高拷贝质粒100-200ul初始培养液加于100ml培养基；低拷贝质粒250-500ul初始培养液加于250ml培养基)37摄氏度300rpm振荡12-16小时。
(孵化容器容积至少4倍于培养液, 培养至细菌密度约3-4×109/ml, 即离心后菌块湿重约3g/L培养基)培养基配方：10g蛋白胨+5g酵母+10g氯化钠溶于800ml蒸馏水, 用1 N NaOH 调pH值至7.0, 用蒸馏水调整至1L。
生化进口品牌介绍
旋混合器的厂家，从设计到生产形成一套完整的流水线，其生产的Vortex-Genie 2 是所有涡旋混合器中应用最广范，用途最广，最耐用的品牌，已形成一种国际标准，成为该领域的国际知名品牌。
44 、SciGene 美国SciGene 公司主要致力于为基因芯片杂交实验提供自动化的样品前制备（标记，纯化），上样杂交和洗涤干燥仪器。
用自动化的仪器代替人工操作，减小了实验的批间批内差，极大的改善了实验的均一性。
并能减少背景干扰，为后期的芯片扫描提供良好的数据。
45 、SY-LAB 奥地利SY-LAB 公司是一家专业开发生产生物培养、冻存等产品的公司。
其旗下的ICECUBE 程式冷冻降温仪专为细胞冷冻操作设计，是一款细胞、组织、血液、骨髓、器官、胚胎等珍贵的生物样品超低温冷冻前处理的必备仪器。
46 、SYNGENE SYNGENE 是英国著名公司SYNOPTICS 公司的子公司，主要产品集中在凝胶图像的扫描成像和分析，包括凝胶成像、化学发光成像、化学发光与荧光成像以及2D 胶成像多种，设计精巧、操作简单、灵敏度高，并具备强大的功能分析软件，使其成为当今世界上最完善的成像分析系统之一47、SORENSON SORENSON 是生命科学领域塑料耗材革新的引领者，专业提供移液器和吸头等耗材。
其产品确保无RNA 酶、DNA 酶、无热源，广泛应用于分子生物学、基因测序，生塑料工艺的完美体现。
48 、SYNBIOSIS SYNBIOSIS 是SYNOPTICS 旗下的公司之一，是世界上知名的自动菌落计数仪生产商。
其全自动微生物分析仪具有自动的菌落计数和抑菌区测量功能，适合研究单位、医院、检验检疫机构和工业领域进行微生物菌落计数和含量分析、抗生素的抗菌性测试以及细菌的抗生素敏感性分析等工作。
QIAGEN操作说明
Qiagen基因组提取试剂盒中文操作说明QIAamp DNA Blood Mini Kit简介：QIAGEN公司出品的QIAamp DNA Blood Mini Kit适用于使用微型离心机或真空处理从全血、血浆、血清、血沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。
该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本，样品量可达200μl。
整套基因组的操作时间约为20–40分钟，一般可从200μl健康全血中获得4–12 μg DNA，洗脱体积可在50–200μl范围。
抽提原理：样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上，通过两次洗涤可以将PCR抑制剂，如：二价阳离子和蛋白完全去除，最后结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液进行洗脱收集。
开始前的注意事项：1. 所以的离心步骤需要在室温（15-25℃）进行2. 如果样品中含有的基因组当量少于10000，请添加载体DNA（carrier DNA）3. 200μl全血样品可以得到约3-12μgDNA开始前的准备工作：1. 将样品平衡到室温（15-25℃）2. 将水浴或是金属浴加热到56℃，以备第4步使用3. 将Buffer AE或蒸馏水平衡到室温，用于第11步的洗脱4. 确保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋白酶已经按照说明配置完毕5. 如果在Buffer AL中出现沉淀物，请在56℃孵育使其溶解操作步骤：1. 吸取20μl QIAGEN蛋白酶（或者蛋白酶K）至1.5ml离心管的底部。
2. 加入200μl待提取基因组的样品至离心管中。
可以加入不超过200μl的全血、血浆、血清、血沉棕黄层，或者溶于200μl PBS中不超过5*106的淋巴细胞。
如果样品体积不足200μl，请使用PBS补足。
前两步的顺序也可以调换，即将蛋白酶加入样品中，但此时需要注意充分混匀。
3. 加入200μl Buffer AL至样品中，涡旋振荡15s混匀。
质粒纯化程序
QIAGEN质粒纯化试剂盒程序：1、从生长良好的选择性培养基中挑取一个单个菌落，接种到一个含有适当抗生素的2~5mlLB培养基中培养。
37℃快速摇动培养（~300rpm）8小时。
用一个管或瓶装最少4次培养的量。
2、用LB选择培养基将培养物从1/500稀释到1/1000。
给高复制的质粒接种25ml或100ml 培养基。
给低复制的质粒接种100ml或500ml培养基。
37℃快速摇动培养（~300rpm）12~16小时。
用一个瓶或容器装最少4次培养的量。
培养物必须达到大约3~4×109/ml的细胞密度，3、在4℃6000×g离心15分钟收集细菌细胞。
在Sorvall GSA或GS3或Beckman JA-10离心机上6000×g相当于6000rpm离心。
倾去离心管中所有上清至培养基全部控干。
如果想停止实验并过些时间继续的话，将细胞冻存在-20℃中。
4、在4ml或10ml Buffer P1中重悬浮细菌细胞沉淀。
为了保证有效的消散应采用足够大的容器使能够充分混匀消散缓冲剂，要保证缓冲剂P1中加有Rnase A。
应当充分振荡混匀直至没有可见的细菌团块。
5、加入4ml或10ml Buffer P2，颠倒4-6次轻柔混匀，室温放置5分钟。
不要漩涡混匀，否则会导致DNA断链。
溶液将具有粘性。
混匀时间不要超过5分钟。
使用后应将含有Buffer P2的瓶子立刻盖紧以避免被空气中的二氧化碳酸化。
6、加入4ml或10ml 预冷Buffer P3，颠倒4-6次轻柔混匀，并且在冰上放置15-20分钟。
使用预冷的Buffer P3和放置在冰浴中可以增多沉淀量。
在加入Buffer P3以后，一种白色絮状物形成并且溶液粘性下降。
沉淀物中包含有染色体DNA、蛋白质、细胞碎片和SDS。
应将溶液充分混匀消除局部十二烷基硫酸钾沉淀。
7、在4℃≥20000×g离心30分钟。
快速吸取含有质粒DNA的上清部分。
国外生物技术公司的简介
一些国外生物技术公司的简介QIAGEN：德国著名的试剂公司，该公司的核酸分离纯化系列基于多项专利技术，纯度高，产量高，快速方便，品种齐全，为世界知名品牌。
其大多数产品以即用型试剂盒形式提供，随产品有非常详细的操作技术手册。
此外，还提供优质的传染系统，RT/PCR反应系统（包括高特异性的逆转录酶及热启动的Taq酶），蛋白及多肽表达、纯化、检测分析系统。
Ambion：该公司始终致力于开发RNA相关产品，在RNA的分离纯化、RACE、RT-PCR 方面有许多非常有特色的产品，并提供优质的Northern杂交体系，和高效的体外翻译体系。
如今，其产品在RNA研究领域已经成为研究人员的首选品牌。
Invitrogen：该公司成功地提供了PCR产物快速克隆试剂盒，及与之配套的系列产品，包括高效转染和转化试剂、高效感受态细胞、全面的原核及真核基因表达系统、酵母双杂交系统等多种特色产品。
大大便利了分子克隆的全过程操作。
其成功并购了Gibco/BRL，Novex，Research Genetics等知名公司，产品覆盖更为广泛。
Clontech：现已成为B.D.公司旗下分子生物学主力舰。
该公司的cDNA试剂盒、荧光蛋白报告基因系统、酵母双杂交系统、基因Array产品是独具特色的产品，其中一些试剂盒（GFP、Tet Off &On等）获得过多次大奖。
Clontech公司聚集了一大批优秀的科学家，在分子研究的各个领域开发出了许多设计思路独特，快捷便利的试剂产品，紧跟科学前沿。
Strategene：该公司的特色产品包括：预制基因文库、定制文库、文库构建产品、感受态细胞、高效转染试剂、点突变试剂盒、PCR仪及多种专利产品，在分子生物学研究的多个方面有不凡表现，受到全球实验室的好评，成为迅速崛起的佼佼者。
Novagen：该公司在蛋白表达和纯化工具的研究上成绩卓著，发展了相对应的表达载体和纯化方法，使得用户可以很方便地将蛋白表达、纯化、检测在有协调性的Novagen 技术系统内完成。
QIAGEN 核酸提取仪 ppt课件
2Байду номын сангаас21/3/26
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13
QIAGEN 核酸提取仪
BioRobot 3000可选功能
REAL,QQ,PCR,QPT,DTS,DyeEx Qiaamp DNA Blood 48 NTA Series:
Ni-NTA Superflow 96 Purification Ni-NTA Magnetic Beads Immunoassay Ni-NTA Magnetic Beads Interaction Assay Ni-NTA Magnetic Beads
2021/3/26
QIAGEN 核酸提取仪 ppt课件
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QIAGEN 核酸提取仪
2021/3/26
满足分子诊断所需核酸标准的、自动纯化操作过程
满意的得率和可信的结果
自动的样品跟踪和过程控制系统（条形码扫描）
可同时进行96样品，且有很好的可重复性
一次性枪头可安全处理有传染性的样品
配套的高质量试剂
简单易学的软件操作系统
2021/3/26
QIAGEN 核酸提取仪 ppt课件
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2021/3/26
QIAGEN 核酸提取仪 ppt课件
25
High capacity robotic arm system for storage and handling of microlplates
The BioRobot Twister II robotic arm allows integration of external instruments with BioRobot 8000 workstations and provides fast plate handling and transfer of labware for molecular biology applications. It can be integrated with a wide variety of instruments, including the BioRobot 8000 and BioRobot RapidPlate workstations,
QIAGEN-组织提取试剂盒
试剂盒成分
本实验使用量
QIAamp Spin Column 1个
Collection Tubes
2个
Buffer AL
200ul
Buffer AW1
500ul
Buffer AW2
500ul
Buffer AE
100ul
QIAGEN Protease
20ul
实验步骤
（一）准备样本 将冻存在-40 ℃的样本取出，在37
加入200ul的溶液AL，旋涡混合均匀
70 ℃孵育10min,加热灭活蛋白酶K
加入200ul的（96-100%）的乙醇，旋涡混合数秒
轻轻的将离心管内的混合物转移到 离心柱内（切勿接触到离心柱沿）， 盖上管盖，8000rpm离心1分钟
将离心柱置于一个干净的2ml 收集管内， 将含有过滤物的旧管丢弃
加入50ul 0.1M的Tris-Hcl/EDTA， 反复冻融（-40°C---90°C）3次
加入10ul 20ug/ml蛋白酶K， 在56°C水浴箱中孵育过夜
在放入100°C中灭活10min 放入-20°C冰箱中保存
实验步骤
准备样本 将皮肤组织标本从70%的酒精
中取出，放入1 ×TE中浸泡1小时， 取出后用消毒的剪刀，镊子将其剪 成肉泥状。
消化样本
将肉泥状的皮肤组织放入EP管中， 加入消化液ATL180ul和蛋白酶
K20ul,55 ℃消化大约72h，期间用旋
涡混合器振荡混合助溶。消化好的样 本成清亮透明。
加入200ul的溶液al旋涡混合均匀70孵育10min加热灭活蛋白酶k加入200ul的96100的乙醇旋涡混合数秒轻轻的将离心管内的混合物转移到离心柱内切勿接触到离心柱沿盖上管盖8000rpm离心1分钟将离心柱置于一个干净的2ml收集管内将含有过滤物的旧管丢弃加入500ul的溶液aw18000rpm离心1分钟将离心柱置于一个干净的2ml收集管内将含有过滤物的旧管丢弃加入500ul的溶液aw214000rpm离心3分钟将离心柱置于一个干净的2ml收集管内将含有过滤物的旧管丢弃洗脱基因组dna将离心柱置于一个干净的15ml的离心管内将含有过滤物的旧管丢弃加50ul的溶液ae室温孵育5分钟8000rpm离心1分钟检测
一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用与流程
一种磁珠法核酸纯化的结合液、试剂盒、方法及应用与流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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qiagen去核糖体rna试剂盒原理
在开始探讨qiagen去核糖体rna试剂盒原理之前，我们首先要了解什么是去核糖体RNA（Ribonucleic Acid，以下简称RNA）。
RNA是一种重要的生物分子，它在细胞中扮演着传递、转录和翻译基因信息的角色。
而qiagen去核糖体RNA试剂盒则是用于提取RNA的试剂盒产品，被广泛应用于科研领域和临床实验中。
我们要了解这款试剂盒的工作原理。
在细胞内，RNA存在于细胞核和细胞质中。
而对于去核糖体RNA，它主要存在于细胞质中，并且不包含核糖体蛋白质。
利用qiagen去核糖体RNA试剂盒进行提取时，首先需要破裂细胞膜，释放出细胞内的RNA。
试剂盒中的某些成分可以选择性地结合RNA，将其他细胞组分和DNA与RNA分离开来。
我们通过离心、洗涤等步骤，最终得到纯净的去核糖体RNA样品。
在这一过程中，qiagen去核糖体RNA试剂盒采用了许多先进的生物化学技术，比如离心、融合、酶切等，以实现对RNA的高效提取。
这些技术的应用是保证试剂盒在提取RNA过程中高效、稳定、准确的关键因素。
试剂盒设计合理、步骤清晰，也为RNA提取提供了便利和效率。
从应用的角度来看，qiagen去核糖体RNA试剂盒在科学研究中发挥着重要作用。
比如在转录组学研究中，科学家可以利用该试剂盒提取出目标RNA，进行后续的RNA测序和分析。
在疾病诊断和生物医学领域，提取RNA也是必不可少的一步。
而qiagen去核糖体RNA试剂盒的高效性和稳定性，为这些领域的研究工作提供了强有力的支持。
从个人的理解来看，我认为qiagen去核糖体RNA试剂盒的原理是直观的、清晰的。
它使得对RNA的提取变得简单而高效，减少了实验中的复杂步骤和潜在误差的可能性。
通过对细胞的破裂、RNA的结合和分离等步骤的精准控制，qiagen去核糖体RNA试剂盒为科研工作者提供了稳定的实验条件和可靠的实验结果。
总结回顾起来，qiagen去核糖体RNA试剂盒的原理和应用是非常重要且有价值的。
QIAGEN操作说明
QIAGEN操作说明QIAGEN操作说明章节1：引言1.1 文档目的本操作说明旨在提供关于使用QIAGEN产品及操作相关设备的详细指导，以确保用户能够正确且安全地操作。
1.2 读者对象本文档适用于所有需要使用QIAGEN产品及相关设备的用户，包括实验室技术人员和研究人员。
1.3 相关文件本文档的操作说明基于以下文件：- QIAGEN产品手册和技术资料- 相关设备的用户手册和技术资料章节2：产品概述2.1 QIAGEN产品种类和功能在本章节中详细介绍QIAGEN产品的种类，每种产品的功能以及适用范围。
2.2 产品规格和性能本节列出QIAGEN产品的规格参数和性能要求，以便用户了解如何正确选择和使用产品。
2.3 术语和缩略词本节对涉及的术语和缩略词进行解释和定义，以确保读者理解相关概念和术语的含义。
章节3：操作步骤本章节提供了详细的操作步骤和流程，帮助用户正确使用QIAGEN产品和相关设备。
每个操作步骤都应包括以下内容：- 所需材料和试剂- 操作步骤的详细说明- 注意事项和技巧提示章节4：故障排除和常见问题本章节提供了常见问题和故障排除的解决方法，以解决在使用QIAGEN产品和设备过程中可能遇到的问题。
章节5：实验安全注意事项本章节列出了使用QIAGEN产品和设备时应遵守的实验室安全注意事项和操作规范，以确保实验室人员的安全和实验结果的准确性。
章节6：附件本文档的附件中包括了以下内容：- 相关产品的技术手册和说明书- 设备的维护和保养指南- 其他相关辅助材料附件1、QIAGEN产品手册附件2、设备使用手册附件3、维护和保养指南法律名词及注释：- 法律名词1、解释：是指的意思。
- 法律名词2、解释：是指的意思。
QIAGEN--miScript PCR系统中文说明书(初次翻译,如有错误,敬请包涵)
miScript PCR 系统操作手册试剂盒成分：miScript Reverse Transcription KitmiScript Primer AssaysmiScript SYBR® Green PCR Kit10x miScript Primer Assay 和10x miScript Precursor Assay是干粉状的，需要稀释。
首先短暂离心小管，然后加入550μl TE，pH 8.0，最后在漩涡震荡仪上4-6次。
为了保持引物的活性，在冷冻条件下将稀释的引物分装成小管。
实验步骤：反转录反应1、在冰上融化RNA，室温下(15–25ºC)融化5x miScript RT Buffer 和RNasefree water 。
先轻弹每个小管使其充分混匀，然后短暂离心以收集管壁和管盖上的液体，最后放置在冰上。
2、在冰上配制reverse-transcription master mix。
配好后混合并放置在冰上。
如果miScript Reverse Transcriptase Mix是从-20°C 冰箱拿出来的话，那么在使用完毕后立刻放入冰箱。
如果要配制多次反应，先在一个大管中准备Mix，并且多配制10%。
3、将miScript Reverse Transcriptase Mix分装到每个小管中，然后加入RNA。
4、在37°C下孵育60分钟5、在95°C下孵育5分钟以灭活miScript Reverse TranscriptaseMix6、如果马上进行PCR，讲产物放置在冰上；如果不立刻做PCR，那么将反转录产物放置在-20°C实验步骤：Real-Time PCR检测miRNA或Noncoding RNA1、融化2x QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix，10x miScriptUniversal Primer, 10x miScript Primer Assay, template cDNA, 和RNase-free water。
QIAGEN-质粒提取操作
质粒提取操作步骤——QIAGEN(德国凯杰)质粒提取试剂盒一、细菌培养物的生长1. 从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到2-5mL含有适当抗生素的LB液体培养基中生长。
将液体培养基置于37℃，300rpm的摇床中振荡8小时。
2. 用LB培养基以1/500~1/1000的比例稀释含菌落的培养基。
若为了获得高拷贝质粒，用100-200ul含菌落液体培养基接种到100ml LB培养基中；若为了获得低拷贝质粒，用250~500ul含菌落培养基接种到250ml LB培养基中。
让其在37℃，300rpm的摇床中振荡12-16小时。
二、细菌的收获和裂解1. 在6000×g，4℃条件下离心15min，收获细菌。
2. 加入10ml Buffer P1重悬细菌。
3. 添加10ml Buffer P2，剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀，室温放置5min。
4. 加入10ml冰浴的Buffer P3到此溶菌产物中，晃动离心管4-6次使其混匀。
5. 将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中，室温放置10min，不要插入活塞。
6. 打开针口的密封盖，轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中。
7. 添加2.5ml Buffer ER到过滤的溶菌液中，充分混匀10次后冰上孵育30min。
三、质粒DNA的纯化1. 将QIAGEN-tip 500的柱子挂在另一离心管上，加入10ml Buffer QBT，让管中溶液慢慢滴下排空。
2. 将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下。
3. 用2×30ml Buffer QC洗QIAGEN-tip柱。
4. 再用15ml Buffer QN洗脱DNA，用离心管收集DNA洗脱液。
5. 加入10.5ml异丙醇到洗脱液中使DNA沉淀下来，混匀。
15000×g，4℃离心30min，离心后小心倒出上清液。
6. 洗DNA用5ml无内毒素-70%乙醇(添加40ml 96%-100%乙醇到试剂盒的无内毒素水中)，15000×g，4℃离心10min。
Qiagen全血基因组DNA提取标准步骤(51185)
全血基因组DNA提取
试剂盒名称：
QIAamp DNA Blood Midi Kit（100）
Qiagen全血基因组DNA提取试剂盒
试剂盒货号：
51185
前期准备：
1.5mL EP管、水浴锅、水平转子离心机、震荡器等设备耗材准备，试剂盒提供的蛋白酶溶解、AW1和AW2使用前加入相应体积的无水乙醇。
注：所需设备耗材由新华医院分子诊断实验室提供。
实验步骤：
1、往15mL离心管管底加入100微升Qiagen蛋白酶。
2、加入1mL全血。
注：全血体积不足1mL时，PBS补齐1mL。
3、加入1.2mL AL缓冲液，充分混匀，震荡器上斡旋震荡至少一分钟，使溶液成为均相溶液。
4、70℃水浴锅温育10分钟。
5、加入1mL无水乙醇，充分震荡。
6、转移液体至吸附柱中，3000rpm离心3分钟，拿出吸附柱，倾倒滤液，将吸附柱重新放回15mL离心管中。
7、小心加入AW1缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心
1分钟。
8、加入2mL AW2缓冲液至吸附柱中，盖上盖子，5000rpm离心15分钟。
9、将吸附柱转移至一新的15mL离心管中，弃去装有滤液的收集管。
10、加入200微升AE洗脱液，室温静置5分钟，5000rpm离心2分钟。
11、将获得的基因组DNA进行浓度及质量测定。
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10min96 反应， 18min4×96 反应 即用型
EtOH 沉淀 60min96 反应 多个沉淀步骤
Millipore 22min4×96 反应 Sephadex 干粉及单个板 需加水浸泡分离介质 水饱和耗时 板之间没经质量控制 信号强度低一些
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经过包括测序扫描的严格 质量控制，重复性好 高信号强度 毛细管测序尤其推荐
可变性大 毛细管测序读序较短
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II 快速方便——6min/PCR;18min/Gel;6min/Enzyme。 III较大长度范围内高回收率——80% 70bp-4kb片段 IV专为酶切反应纯化设计的ERC
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常规方法不方便，不安全？ 液氮罐及其配件昂贵？ 操作不熟？样品易融化，RNA降解。。。
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I 快速：18分钟内完成4×96测序反应的纯化 II 简便：适用于10-20ul反应体系， 无需预先水 饱和及乙醇沉淀 III 高效：纯化彻底， 保证高信号强度及长片段的读序
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QIAGEN 公 司 简 介
*管理和生产中心——德国 分公司：美、日、英、法、瑞士、加拿大、澳大利亚
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等后续工作提供可靠的原材料
II 无需液氮或干冰，方便安全地在室温下保存样本，低温可长 期保存。
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快速超纯质粒DNA抽提试剂盒
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