k562饲养层细胞的质量标准
K562细胞培养
K562细胞培养实验实验人员：刘嵘、郝茜、张寅峰、龙琪实验材料：K562细胞，无菌RPMI-1640培养基，无菌离心管，无菌吸管，无菌培养瓶，离心机，倒置显微镜，超净工作台，CO2培养箱。
培养基成分：培养液由90%不完全1640培养液[RPMI-1640液95毫升；0.1M丙酮酸钠1毫升；0.2M谷氨酰胺1毫升；1M HEPES 1毫升；7.5%NaHCO3 1毫升；青霉素、链霉素（各一万单位）1毫升]和10%灭活胎牛或新生牛血清。
细胞培养操作：一、细胞冻存与复苏：细胞冻存实验步骤1、将细胞悬液收集至离心管中。
2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。
3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。
4、将悬液分至冻存管中，每管1ml。
5、将冻存管口封严。
如用安郶瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。
冻存管外拴一金属重物和一细绳。
7、按下列顺序降温：室温→4o C(20分钟)→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（-30o C 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮细胞复苏实验步骤：1、取出贮存细胞，37o C水浴中快速融化。
2、把1-2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀。
3、以大约800rpm离心2到3分钟，弃去上清。
4、在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。
5、细胞铺板，细胞接种应该至少为3×105活细胞/ml。
二、细胞培养与传代：1、将细胞培养液转移到离心管中，离心800-1000rpm,5min。
2、去除上清。
3、加入1ml培养基到离心管内，用吹打使细胞悬浮。
4、将细胞悬液吸出，加入到已加入8ml培养基的新的已灭菌培养瓶中。
5、在倒置显微镜中观察瓶中细胞密度是否适中6、旋开半圈培养瓶口，放入CO2培养箱中培养7、观察并适时传代实验结果：b)细胞传代一次时间：其中，第四代（5.20上午-5.22晚上）细胞密度低，生长繁殖时间最长；第五六和第八代细胞生长繁殖一代耗时时间最短，且最终细胞密度也最大，以致培养基变黄。
饲养层细胞、成纤维细胞、滋养层细胞
中文名称：饲养层细胞大鼠胚胎干细胞在饲养层细胞上培养英文名称： feeder layer cell定义：在细胞培养中起分化抑制作用的单层贴壁细胞所属学科：细胞生物学（一级学科）；细胞培养与细胞工程（二级学科）所谓饲养层细胞就是指一些特定细胞（如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等已在体外培养的细胞），经有丝分裂阻断剂（常用丝裂霉素）处理后所得的细胞单层。
是细胞培养，尤其是胚胎干细胞培养常用的生长增殖促进剂和分化抑制剂。
成纤维细胞成纤维细胞是结缔组织中最常见的细胞，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。
根据细胞不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞（fibrocyte）功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小体着色深，核仁不明显，细胞质少。
此二型细胞可互相转化。
在结缔组织中，成纤维细胞还以其成熟状态—纤维细胞的形式存在，二者在一定条件下可以互相转变。
不同类型的结缔组织含成纤维细胞的数量不同。
通常，疏松结缔组织中成纤维细胞的数量比同样体积的致密结缔组织中所含成纤维细胞的数量要少，故分离培养成纤维细胞多以真皮等致密结缔组织为取材部位。
在国王学院研究人员一项针对小鼠的研究中，发现小鼠皮肤中的成纤维细胞至少有两种类型：一种是结缔组织上层的成纤维细胞，它们是皮肤毛囊形成所必须；另一种则是结缔组织下层中的成纤维细胞，这部分细胞负责制造大部分的皮肤胶原纤维，触发受损皮肤的修复。
通过皮肤表皮信号的刺激可增加成纤维细胞的数量，而成纤维细胞数量的增多有助于伤口愈合过程中毛囊的形成，进而降低皮肤愈合后落下疤痕的几率。
研究表明，皮肤的厚度和成分会随着年龄增加而改变，老年人的皮肤很容易受伤，且不易愈合，这很可能是因为上层皮肤成纤维细胞缺失所致，假设找到方法刺激这些细胞生长，就有可能恢复皮肤的弹性，同样还能刺激毛囊形成，减少疤痕。
CD16单抗联合细胞因子体外扩增的NK细胞对K562杀伤功能研究
CD16单抗联合细胞因子体外扩增的NK细胞对K562杀伤功能研究李雪莲;杨本艳姿;范兆心【摘要】目的:建立CD16单抗联合细胞因子IL2、IL15、IL18体外扩增NK细胞的方法,并用扩增后的细胞杀伤K562细胞,研究其杀伤功能,确定一种高效的NK细胞体外培养方案。
方法:抽取5例健康志愿者外周血,Ficoll分离单个核细胞,分组培养,分别为IL2+IL15组、IL2+IL15+IL18组、IL2+IL15+IL18+CD16单抗免疫包被组。
按这三种方案分组培养,分别在第6、9、12、15、18天和21天计算总细胞扩增倍数,流式细胞检测NK细胞的表型,利用各种方案扩增后的NK细胞作为效应细胞,与K562细胞按不同靶效比进行体外杀伤实验,分析各种方案培养的NK细胞对K562细胞的杀伤活性。
结果:IL2+IL15+IL18+CD16单抗免疫包被组的扩增倍数和阳性率均高于IL2+IL15组、IL2+IL15+IL18组,P<0.05;而IL2+IL15组、IL2+IL15+IL18组之间在扩增倍数和阳性率上均无显著差异(P>0.05)。
杀伤实验显示,在不同效靶比情况下IL2+IL15+IL18+CD16单抗免疫包被组均比其他两组有更强的杀伤活性。
而且随着效靶比的增加,NK细胞的杀伤更强。
结论:CD16单抗联合IL2、IL15、IL18、可明显促进NK的扩增能力,并提高体外扩增后对K562细胞的杀伤活性。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2017(000)004【总页数】5页(P30-33)【关键词】CD16单抗;NK细胞;IL2;IL15;IL18;K562;杀伤效率【作者】李雪莲;杨本艳姿;范兆心【作者单位】四川大学生物治疗国家重点实验室;四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心;四川大学生物治疗国家重点实验室;四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心;四川大学生物治疗国家重点实验室;四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心【正文语种】中文【中图分类】R730.51自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）是机体抗病毒感染和抗肿瘤免疫应答的重要淋巴细胞，其来源还不十分清楚，一般认为来源于骨髓，其发育成熟依赖于骨髓微环境，占外周血淋巴细胞总数的5%～20%，具有广谱抗肿瘤作用，其不依赖于抗原刺激作用，即可非特异地直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，主要参与细胞免疫[1]。
K562及K562A02细胞株遗传学研究的开题报告
K562及K562A02细胞株遗传学研究的开题报告I. 研究背景及意义K562细胞株是人类慢性骨髓性白血病细胞株，常用于白血病的研究。
K562A02细胞株是从K562株经过逐渐加大诱导剂稳定细胞株的筛选、原代细胞的体外扩大等步骤所得的细胞株。
这两个细胞株具有很高的相似性，但K562A02相比K562具有更多的干细胞特征。
本研究旨在探讨K562及K562A02细胞株的遗传学特征，为深入了解白血病细胞的分化和肿瘤发生机制提供理论依据和实验数据。
同时，通过对这两个细胞株的比较，可以揭示细胞株在诱导剂过程中所发生的遗传学变化，为制定更优化的诱导治疗方案提供参考。
II. 研究内容及方法本研究拟采用以下方法和技术进行：1. 细胞培养选取K562及K562A02细胞株进行培养，细胞培养技术可参考相关文献和实验室经验。
2. 细胞生长特征观察通过显微镜观察细胞形态、增殖情况，对比分析K562及K562A02细胞株生长特征。
3. 测序分析采用RNA测序和基因组测序技术对K562及K562A02细胞株进行测序，分析细胞株的转录水平、基因变异和表达差异等遗传学特征，挖掘其与白血病分化和转化相关的分子机制。
4. qPCR定量PCR选取测序分析中差异表达的基因进行定量PCR验证，并进一步分析其生物学功能及与白血病发生发展的关系。
III. 预期结果及意义通过对K562及K562A02细胞株的遗传学分析，我们期望能够揭示其在白血病发生发展中所扮演的角色，为研究白血病的分子机制提供新思路和实验数据。
同时，本研究将揭示不同诱导剂处理下K562及K562A02细胞株的遗传学差异，有助于制定更加个性化的治疗方案，提高白血病患者的治愈率和生存率。
耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察
ｗａ ｓ ｓ ｔ ｅ ａ ｄ ｙ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｕ ｂ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｍｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ １
《 中 国 医 学 创 新》 第１ １ 卷第１ ６ Ｊ ￣ ］ （ 总 第２ ９ ８ 期） ２ ０ １ ４ 年６ 月 论
著 Ｌ ｕ ５ ６ ２ 细胞株 的建立及 生物学 特性 考察
张琼① 王莉莉② 杨利红①
【 摘要 】 目的：建立 １ 株耐 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 的Ｋ ５ ６ ２ 细胞，并对其生物学特性进行研究分析 ，探讨耐药机理。方
法 ：通 过 递 增 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 药 物 浓 度 的 方 法 ，成 功 建 立 １ 株耐 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 人 白 血病 细 胞 株 Ｋ ５ ６ ２ ／ Ｒ，并 采 用 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ— ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 、免 疫组 化 、基 因测 序 等生 物 学 手段 对 其进 行 耐 药 机理 进 行 分 析 。结 果 ： Ｋ ５ ６ ２ ／ Ｒ细 胞 株 在 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 浓 度高 达 １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ水平 ， 仍 能稳 定生 长 ， 繁殖 旺盛 。Ｋ ５ ６ ２ ／ Ｒ细胞 株耐 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ 程 度 较亲代 Ｋ ５ ６ ２细胞 多 达 ２ ３ ５ 倍， 该 耐 药 细胞 株 对 Ｈ Ｈ Ｔ、 Ｖ Ｃ Ｒ、Ｄ Ｎ Ｒ具 有 不 同程 度 的 交叉 耐 药 性 ，与 亲代 Ｋ ５ ６ ２细胞 比较 差 异 有 统计 学意 义 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ｏ与亲 代敏 感株 Ｋ ５ ６ ２细胞 相 比 ， 其Ｂ Ｃ Ｒ — Ａ Ｂ Ｌ基 因表 达上 调 ， Ｂ Ｃ Ｒ — Ａ Ｂ Ｌ 蛋 白及 其 激酶 过度 表达 。 结论 ：
苦参碱对K562细胞培养液中PG2含量的影响
１ 材 料 与 方 法
内保存 备 用 ； １次 反应 ： Ｐ 标 准 品 用 Ｐ Ｓ作 ④ 将 ＧＥ Ｂ
制 白血病 Ｋ５ ２细胞 的增 殖并 诱导其 分化 ［ 。分 析苦 ６ １ ］
参 碱处 理 Ｋ５ ２细 胞后 ， 内与 胞外 信号 分子 量 与活 ６ 胞 性 的改变 ， 有利 于深入研 究其作 用机 理 。 列腺素 Ｅ 前 ２ （ ｒ ｓａ ｌｎ ｉ Ｅ ， ＧＥ ） 机 体 花生 四烯 酸 代谢 的 ｐ ｏ ｔｇａ ｄｎ ２Ｐ ２是 主要活性 产物之一 。 在调 节血 流 、 细胞增殖 、 组织 保护 与修复， 以及 在 消化 、 吸与 泌 尿生 殖 系统 的功 能 调 呼 节 中起着 重要 作 用 。本 研 究 初 步 分 析 了苦 参碱 对 ］ Ｋ５ ２细胞 培养液 中 Ｐ ６ ＧＥ。 含量 的影 响 。
摘 要 目的 ： 究苦参 碱 诱 导 Ｋ５ ２细胞 分 化的 胞 外信 号 。方 法 ： 用酶联 免 疫 法 ， 态检 测 苦 参 研 ６ 运 动 碱 作 用 于 Ｋ５ ２细 胞 后 ， 养 液 中 Ｐ Ｅ ６ 培 Ｇ 含 量 的 变化 。结 果 ： 养 液 中 Ｐ ｚ 量在 苦 参 碱 作 用 于 培 ＧＥ 含 Ｋ５ ２细 胞 ２天后 有 增 高 ， 与 苦参 碱 浓 度 有 关 。结 论 ： 苦 参 碱 诱 导 Ｋ５ ２细胞 分 化 的过 程 中， ６ 并 在 ６
人慢性髓系白血病细胞;K562贴壁培养
人慢性髓系白血病细胞；K562贴壁培养细胞名称：人慢性髓系白血病细胞；K562形态特性：淋巴母细胞样生长特性：悬浮生长培养条件：RPMI1640(w/o Hepes)+10%FBS传代方法：维持细胞浓度在1×105~2×106cells/ml；2~3天换液1次冻存条件：基础培养基+8%DMSO+20%FBS特征特性：该细胞是由Lozzio从一名53岁的慢性髓细胞性白血病急变期的女性患者的胸水中分离建立的。
该细胞曾被认为来源于粒系，处于高度未分化阶段；Anderson等人作了细胞膜特性的研究后，认为该细胞是红白血病细胞系。
该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标，故而被广泛应用于这方面的研究。
K562的原始细胞是一种具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞，能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。
该细胞表达CD7（25％）。
细胞处理方法：1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超净台中操作。
2.将细胞转移至50mL的无菌离心管中，1000rpm离心5-10min，用完全培养基重悬细胞，适宜的密度分瓶培养。
注意：我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。
特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）1.收到细胞后请尽快更换为含10%FBS的新鲜培养基。
2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。
3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。
饲养层细胞名词解释
饲养层细胞名词解释
饲养层细胞是指用于生物实验或生产中的一种细胞培养方式。
在饲养层细胞中，细胞被放置在培养皿等容器中，通过提供适宜的培养基和条件，使细胞自然生长、繁殖和分化。
饲养层细胞可以分为单层和多层两种形式，单层细胞通常用于细胞学和分子生物学研究，多层细胞则常用于细胞工程、生物制药等领域。
在饲养层细胞的培养中，需要注意控制细胞密度、营养物质供应、培养条件等因素，以维持细胞生长和稳定。
常用的饲养层细胞包括HEK293、CHO、Vero等。
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人白血病细胞K562增殖的作用
人白血病细胞K562增殖的作用白血病是造血系统的恶性肿瘤，其特征是骨髓、淋巴结等造血系统中一种或多种血细胞成分发生恶性增殖，并浸润体内各脏器组织，导致正常造血组织细胞受抑制，产生各种症状。
目前，对于此类疾病的治疗主要采取传统的化疗手段，标准的化疗方案仅能使40%~60%患者获得暂时缓解，中位生存期一般不超过3a。
大剂量化疗联合造血干细胞移植可使缓解率明显提升，但除了极少数患者以外，其余大多数仍难免会复发，其显著的不良反应使得患者的生活质量和治疗信心受到严重影响。
因此，寻找高效低毒的治疗药物，显得尤为重要。
我们以K562细胞作为研究对象，探讨力达霉素（LDM）抗白血病的可能机制。
1材料K562细胞（本室保存）；LDM（由中国医学科学院医药生物技术研究所甄永苏院士惠赠）；RPM-1640（美国Gibco公司）；胎牛血清（美国Biological公司）；MTT（噻唑蓝）法检测细胞增殖及细胞毒性试剂盒（南京凯基）；苔盼蓝；兔抗人肿瘤坏死因子（TNF-α）抗体（美国Affinity公司）；Betaactin（β肌动蛋白）抗体（美国Affinity公司）2方法2.1细胞培养K562细胞株从液氮中复苏后，用含10%胎牛血清的RPM-1640培养液在37℃，5%CO2恒温培养箱中培养，所有实验均采用对数生长期细胞。
2.2细胞增殖的检测在96孔板加入细胞100μl/孔（约1×104），置37℃，5%CO2细胞培养箱中培养24h后，加入不同浓度力达霉素（LDM），再于恒温培养箱孵育48h，加入50μlMTT，37℃孵育4h，使MTT还原为甲臜，1000g离心，吸出上清，每孔加入150μl二甲亚砜（DMSO）使甲臜溶解，平板摇床摇匀，于490nm波长处检测每孔的吸光度（A）值，计算细胞成活率。
2.3细胞的计数离心收集K562细胞，制备单细胞悬液并作适当稀释，细胞悬浮液与台盼蓝溶液以9∶1混合混匀，在3min内分别计数活细胞和死细胞，计算活细胞率。
饲养层细胞 制备
饲养层细胞制备方法
1. 以质粒DNA载体进行抗生素料理，经插入DNA后细胞进行热冻胜任，克隆团体细胞，查询在正式形态上切实贴近要求品系。
2. 杂交技术制备核氏体脱抗原细胞，接触外源抗生素可诱导加速核氏体脱抗原。
3. 细胞放线素去除，以提高生长稳定性。
4. 利用低渗透能力的BSA把细胞逐渐梯度迁移到较高的渗透能力的培养液中，依据相对可渗性以层层联营的方式涨饲养料。
5. 用MOI估定细胞对活性材料的灵敏度，并用高MOI（infectious dose）内减好培养条件，从而形成高质量的饲养层细胞。
细胞培养-培养基类型
常用培养基及基本特性1、RPMI-1640 MediumRPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。
主要用于悬浮细胞培养。
其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。
2、Minimum Essential Medium（MEM）也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。
成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。
MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。
3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。
适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。
4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。
低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。
5、DMEM/F12DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。
F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。
该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。
为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。
6、McCoy’s 5AMcCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。
K562和K562_AO2细胞HLAI类分_省略_CA_B的表达及其对NK细胞杀
文章编号(A rticle I D):1009-2137(2007)02-0288-04论著K562和K562/AO2细胞HLA I 类分子与M I CA /B 的表达及其对NK 细胞杀伤活性的影响梅家转,牛新清,郭坤元,周健,魏红梅南方医科大学珠江医院血液科,广州510282摘要 本研究探讨K 562亲本细胞株及多药耐药细胞株K 562/AO2细胞表面HLA I 类分子和MH C I 类链相关分子(M ICA /B)的表达及其对NK 细胞杀伤活性的影响。
用流式细胞仪检测K 562和K 562/AO 2细胞株HLA I 类分子和M ICA /B 的表达情况;LDH 释放法测定3例健康人NK 细胞在不同效靶比时对K 562和K 562/AO2细胞的杀伤活性;效靶比10 1时,用抗HLA I 类分子单克隆抗体(W 6/32)和抗M I CA /B 单克隆抗体(BAM O 1)分别封闭MHC Ⅰ类分子和M ICA /B ,观察NK 细胞杀伤K 562及K 562/AO 2细胞活性的变化。
结果表明:K562和K562/AO 2细胞均不表达HLA I 类分子,K 562细胞的M ICA /B 表达较K562/AO 2明显增高(P <0.01)。
效靶比5 1、10 1、20 1、30 1时NK 细胞杀伤K 562和K 562/AO 2细胞的活性分别为(29.32 0.12)%、(45.33 0.78)%、(58.37 0 87)%、(72.37 0.96)和(12.47 0.91)%、(24.36 1.11)%、(33.29 1.03)%、(53.87 1.27)%,各效靶比时NK 细胞对K 562细胞的杀伤活性较K 562/AO2细胞明显增强(P =0.000);效靶比10 1时W 6/32不抑制NK 细胞杀伤K 562和K 562/AO 2细胞的活性,BAMO 1能明显抑制NK 细胞杀伤K 562和K 562/AO 2细胞的活性。
K562细胞实验室培养污染的防控
［ ］ 李云兰 ， ３ 李青 山， 赵大 龙， 二 氯二 茂钛原料 药 的稳定性 研 等．
究． 山西 医 科 大 学学 报 ，００，１ ５ ：４ ２ ０ ３ （ ）３ ．
［ ］ 李云兰 ， ４ 宁美 英， 李青 山． 相高效液相 色谱法测定有 机金属 正 抗癌原料药二氯二茂钛的含量 ． 色谱 ，０ ７２ （ ）２ ２ ２ ０ ，５ ２ ：８ ．
以 Ｍｅ ｗ ｌＣ ｌ ｇ ， ｌ ｉ Ｊ ｌ ３ ０ ３， ｈ ｎ ｄ ａ ｏｌ ｅ ｉ Ｃ ｔ ｉ ｎ １ ２ １ Ｃ ｉ ａ ｅ ｎ ｙ， ｉ
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊｃｖ Ｔ ｕｙ ｈ ５２ ｅ ｂｒｏ ｌｒ ａｏｔｈ ｎ ｍｎｔｎ Ｓｈ ｓ ． Ａ ｓａｔ ｒ ｂｅ ｉ ｏ ｔ ｅ ６ ｌｌ ｏ ｔｙ ｕｕ ｕ ｔ ｃ ｔ ｉ ｉ ’ ｔ ｏ ｅ ｔｅ ｓ ｄ ｔ Ｋ ｃ ｌａ ａ ｒ ｃ ｔｅ ｂ ｅ ｏ ａ ａｏ ｅ ｂ ｒ
【 关键词】 Ｋ ６ ５ ２细胞 ； 实验室培养 ； 污染的防控
Ｐｒ ｖ ｎｔｎ ｃ ｎｔｍ ｉ ｔｏ ｎ ｌ ｂｏ ａ ｏ ｙ ｃ ｔ ｅ ｏ ５６ ｅｌ Ｌ Ｕ ｅ ｅ ｉｇ ｏ ａ ｎａ ｉ ｎ ｉ ａ ｒ ｔ ｒ ｕｌｕｒ ｆｋ ２ ｃ ｌ ［ Ｈｅ，Ｌ Ｕ Ｉ 一 ，ＴＩ Ｍ ＡＮ ｕ—ｉ Ｙ ｘ ｎ，ｅ １ ｔａ．
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耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察
耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察目的：建立1株耐STI571的K562细胞，并对其生物学特性进行研究分析，探讨耐药机理。
方法：通过递增STI571药物浓度的方法，成功建立1株耐STI571人白血病细胞株K562/R，并采用RT-PCR、Western-blot、免疫组化、基因测序等生物学手段对其进行耐药机理进行分析。
结果：K562/R细胞株在STI571浓度高达1 μmol/L水平，仍能稳定生长，繁殖旺盛。
K562/R细胞株耐STI57程度较亲代K562细胞多达235倍，该耐药细胞株对HHT﹑VCR﹑DNR具有不同程度的交叉耐药性，与亲代K562细胞比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
与亲代敏感株K562细胞相比，其BCR-ABL基因表达上调，BCR-ABL蛋白及其激酶过度表达。
结论：成功建立耐STI571人白血病细胞株K562/R，并对其生物学特性的研究，为STI571耐药机制的进一步深入研究和抗耐药抑制剂的筛选提供了有效的平台。
白血病（leukemia），俗称的血癌，是由多种病因诱发的一类造血干细胞克隆性恶性疾病，国内的发病率约为10万分之2.76，为儿童和35岁以下成人死亡的主要病因[1-2]。
慢性髓性白血病（CML）是一种起源于造血干细胞的恶性增生性疾病，临床上分期有慢性期、加速期和急变期[3]。
该疾病，主要是由于BCR-ABL基因的变异致使BCR-ABL融合蛋白的异常表达，进而使得细胞分裂的方式不再受正常控制，促使白细胞的异常增殖进而导致该疾病的发生[4-5]。
CML在国内占各类白血病的15%～20%，占各种慢性病的95%，病程一般持续4年左右，随着疾病进展对治疗的逐渐不敏感，因此该疾病对我国人口健康造成了很大的危害[6]。
STI571，商品名为格列卫（Glivec或Gleevec）为近年来开发的基因靶向治疗药物，根据CML的分子发病机制，以BCR-ABL蛋白激酶的ATP结合位点结构为基础，通过计算机辅助设计，人工合成了ABL激酶的ATP结合位点竞争性抑制剂，是针对CML特异的分子异常进行的一种靶向分子药物。
k562细胞免疫荧光步骤
k562细胞免疫荧光步骤以K562细胞免疫荧光步骤为标题，本文将介绍K562细胞免疫荧光实验的步骤和操作流程。
一、实验前准备1. 培养K562细胞：将K562细胞培养在含有适当浓度的培养基中，通常使用RPMI 1640培养基。
2. 细胞传代：当细胞密度达到80%～90%时，用无菌移液器将细胞转移至新的培养瓶中，使细胞密度稀释至合适的水平。
3. 细胞计数：用细胞计数板或自动细胞计数仪计数细胞数目，以确定接种细胞的数量。
二、实验操作步骤1. 处理细胞：将K562细胞分装到离心管中，离心约5分钟（1000转/分钟），倒掉上清液。
2. 细胞固定：向离心管中加入4%的无菌甲醛，使细胞固定，室温下静置10分钟。
3. 洗涤：用无菌PBS洗涤固定的细胞，重复此步骤至少3次，以去除甲醛。
4. 细胞透膜：将细胞转移至离心管中，加入0.5% Triton X-100溶液，室温下静置30分钟，使细胞透膜。
5. 阻断：将10%的牛血清白蛋白（BSA）加入到离心管中，室温下静置1小时，以阻断非特异性结合位点。
6. 一抗孵育：加入适量的一抗溶液（如抗体CD34），室温下孵育1小时，使一抗与目标抗原结合。
7. 洗涤：用无菌PBS洗涤离心管中的细胞，重复此步骤至少3次，以去除未结合的一抗。
8. 二抗孵育：加入适量的荧光标记的二抗溶液，室温下孵育1小时，使二抗与一抗结合。
9. 洗涤：用无菌PBS洗涤离心管中的细胞，重复此步骤至少3次，以去除未结合的二抗。
10. 染色：加入适量的染色剂（如DAPI），室温下孵育10分钟。
11. 洗涤：用无菌PBS洗涤离心管中的细胞，重复此步骤至少3次，以去除未结合的染色剂。
12. 封片：将洗涤后的细胞转移至载玻片上，并用适当的封片剂密封玻片。
13. 观察：将封好的载玻片放置在荧光显微镜下观察和拍照。
三、实验结果分析通过荧光显微镜观察细胞，可以得到荧光图像。
根据荧光的强度、位置和分布情况，可以判断目标抗原在K562细胞中的表达情况。
人K562细胞系染色体标本制备及核型初步分析
• 或者细胞系增殖至旺盛期，此时加入秋水仙素抑 制细胞分裂，使其停止在中期以获得足够的分裂 期细胞。
实验过程
• 细胞培养、收集、低渗、固定、制片、染 色后镜下观察进行核型分析。
以外周血为例，实验流程如上
终止培养前2-4小时，加入秋水仙素
④标本固定不充分：如固定液不新鲜，或甲醇、冰醋酸的质 量不佳，则染色体模糊，或残留胞浆痕迹，使背景不清；
⑤玻片去污不彻底，冷冻不够，使细胞悬液不能均匀附着以 致细胞大量丢失，或染色体分散不佳。
思考题
• 核型制备的常见材料有哪些？ • 哪些人需要核型检查报告？ • PHA，秋水仙素，低渗液，固定液的作用？ • 是否可通过核型初步判断个体性别？
↓
收集培养物至离心管，离心（配平，1200 rpm, 6min）
↓
实 验
用吸管弃上清，加8ml 0.075mol/L KCl，吹打混匀
↓ 37℃，低渗20min
步
↓
骤
加1ml 固定液预固定，小心吹打，混匀 ↓
1200 rpm离心6-8min（注意配平）
↓
弃上清，加8ml固定液，室温固定20-30min
人K562细胞系染色体标本制备 及核型初步分析
医学遗传教研室 2016.11
实验目的
• 熟悉人类有核细胞（k562）染色体标本的 制备方法。
• 熟悉染色体核分裂相的初步分析。
实验原理
• 染色体:见于细胞有丝分裂过程中,通常利用有核细 胞（如外周血、细胞系、羊水、绒毛）制备染色 体标本，显微镜下观察。
外周血核分裂ห้องสมุดไป่ตู้ 46，XX
【标本质量不佳的原因】
微囊化K562细胞生长周期及代谢特性的研究
微囊化K562细胞生长周期及代谢特性的研究马娟;綦文涛;王秀丽;王为;郭昕;马小军【期刊名称】《生物工程学报》【年(卷),期】2005(21)6【摘要】以K562细胞为模型,分别进行微囊化和游离培养,运用流式细胞术考察两种培养体系下细胞周期和生长代谢变化;建立数学模型,模拟了两种培养体系下细胞的生长活性和代谢特性.实验发现:微囊化培养过程中的K562细胞处于DNA合成期(S期)的百分含量显著高于游离培养,并且细胞保持较高的增殖活性.模型计算表明,所建模型动力学参数能够很好地描述微囊化和游离两种培养体系下细胞的代谢情况;对细胞活性的理论计算表明,微囊化的细胞具有较高的增殖和代谢活性,同时细胞能够较长时间保持此活性;模型参数表明,两种培养体系下,葡萄糖对细胞生长的影响无显著差别(kFree A≈kAPA A),乳酸对游离培养细胞的生长具有明显抑制作用,但对微囊化培养细胞抑制作用较小(kFree L＞≈kAPA L).【总页数】6页(P923-928)【作者】马娟;綦文涛;王秀丽;王为;郭昕;马小军【作者单位】中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,大连,116023;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,大连,116023;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,大连,116023;中国科学院研究生院,北京,100039;中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,大连,116023;中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,大连,116023;中国科学院大连化学物理研究所生物医学材料工程组,大连,116023【正文语种】中文【中图分类】Q813【相关文献】1.人干扰素对HL60,K562细胞生长及细胞周期的影响 [J], 王杨;姜玉珍2.白血病骨髓间充质干细胞对K562细胞生长和周期的影响 [J], 魏朝辉;陈涛;李艳红;乔剑侠;陈乃耀;贾颖;徐学新;杨文成;张文军3.肉苁蓉多糖与松果菊苷对K562生长抑制及细胞周期影响的比较性研究 [J], 张涛;许文胜;任可;崔丽霞;于桂霞4.谷氨酰胺对微囊化重组CHO细胞生长代谢及内皮抑素表达的影响 [J], 周晶;张英;王为;马隽宇;张华安;郭昕;马小军5.微囊化细胞培养过程的物质传递机理和细胞生长特性 [J], 綦文涛;刘袖洞;包德才;解玉冰;马小军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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k562饲养层细胞的质量标准
K562饲养层细胞的质量标准通常包括以下几个方面：
1.细胞形态：饲养层细胞应该呈扁平状，细胞核应该位于细胞中央，细胞质应该清晰可见。
2.细胞密度：饲养层细胞的密度应该适中，过高或过低都会影响细胞的生长和繁殖。
3.细胞活性：饲养层细胞应该具有良好的生长和繁殖能力，能够支持其他细胞的生长和繁殖。
4.细胞纯度：饲养层细胞应该具有较高的纯度，不应该含有其他种类的细胞或微生物。
5.细胞稳定性：饲养层细胞应该具有良好的稳定性，能够长期保存并保持其特性和功能。
6.细胞来源：饲养层细胞应该来自可靠的供应商，并经过严格的质量控制和验证。
以上是K562饲养层细胞的一些常见质量标准，具体要求可能会因供应商和应用领域的不同而有所差异。