经口急性毒性试验

经口急性毒性试验
※<(一)目的>
化学毒物经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。

奉实
习的目的是学习急性毒性试验的实验设计原则，学会经口灌胃技术、
随机分组方法，掌握主要的LD50计算方法和急性毒性分级标准。

※<(二)原理>
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法，依据LD50计算的
设计原则将动物分成数个染毒组。

一次或24h内多次给予受试物后，了
解动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可
能的死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂
量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。

※<(三)内容>
1．健康小鼠或大鼠的选择，性别的辨认。

2．称重、编号和随机分组方法。

3．受试化学物溶液的配制。

4．小鼠和大鼠经口灌胃操作技术．
5．毒性体征的观察、LD50计算和毒性分级
※<(四)材料和试剂>
1.实验动物健康成年小鼠或大鼠若干只。

2.器材灌胃针(大鼠、小鼠适用)、注射器(0.25，1.2，5m1)、吸管(0. 1，0.2，0.5，1，2，10ml)、容量瓶(10，25，50ml)、烧杯(10，25，50ml)、滴管、电子天平(感应量1／10000g)、动物体重秤、外科剪刀、镊子。

3.试剂受试物(由指导教师自定)，苦味醒酒精饱和液，o．5％品红溶
液或其他染色剂．
※<(五)操作步骤>
1．健康动物的选择。

2．性别辨认。

3.动物称重、编号和分组；
(1)称重；称量大、小鼠体重的秤，其感应量需在0.1g以下，并经过校正。

称量时注意轻抓轻放动物，避免激惹，等动物安静后记录体重读数，以g表示。

(2)编号：以染色法编号。

用苦味醒酒精饱和液为染料。

以黄色为个位
数号码，红色为十位数号码。

一股以头部为1号，按顺时针依次右前肢
为2号，右腰为2号，右后肢为4号，尾根部为5号，右后肢为s号，左腰
为7号，左前肢为8号，后背为9号，10号为在头部染红色标记，11号在
右前肢染红色和黄色标记各一，依次类推。

(3)随机分组。

4．剂量设置由指导教师根据受试物类别，选择LD50计算方法设计剂
量组。

5．受试物的配制
(1)量取受试物：固体化学物采用称量法，液体化学物可用称量法或吸
量法
1)称量法：将受试物放入已知重量的容器内称重。

加溶剂溶解或稀释，倾入刻度容器（如容量瓶)内，混匀，再加溶剂至刻度。

算出浓度(rog
／mi)备用。

2)吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入容量瓶中，用溶剂加至
刻度。

计算公式为：
X＝A*V/d*1000
式中；x：应吸取受试物的容积(mD；
A：设计要求的受试物浓度(mg／ml：
V：容量瓶容积(m1)；
d；受试化学物比重。

(2)受试物的稀释
1)等浓度稀释法：将受试化学物配成一种浓度，此时各剂量组的实验
动物将给予不同体积的受试物。

例如受试物配成1000mg／lOml的溶液，五个剂量组的剂量分别为100、200、400、800、1600mg／kg，则各剂
量组动物将依次给予1.0mi／kg、2．Omi／kg直至最高剂量组的16mi／kg。

2)等容量稀释法：按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度
的受试物溶液，各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化
学物。

如上例的情况，将受试物别配成l00mg／10ml、200mg／l0ml、4
00mg／10ml、800mg／10ml、1600mg／10ml 5个浓度，溶液，各剂量组
动物给予受试物的体积均为l0ml／kg。

6、灌胃操作小鼠、大鼠及豚鼠灌冒法：采用专用小鼠和大鼠灌胃针，也可自制。

将头的16号注射针(适用于小鼠)或20~24号腰穿针(适用于
大鼠、豚鼠)(注意事先可用锡在针尖周围焊一圆头，使其不易损伤动
物的消化遭)安装在适当容积的注射器上，吸所需的受试物溶液，左手
抓住动物双耳后至背部的皮肤(小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧)，将动物固定成垂直体位，腹部面
向操作。

注意使动物的上消化道固定成一直线。

右手持注射器，将针
头由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。

若遇阻力，
可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。

如遇动物
挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食，甚
至误入气管，导致动物立即死亡。

一般进针深度小鼠2.5～4cm，大鼠或豚鼠4～6cm。

为了验明是否已正
确地插入胃部，可轻轻回抽注射器，如无气泡抽出，表明已插入胃中；如有大量气泡，则提示误插气管，应抽出重插。

随后将受试物溶液注入。

灌胃容量小鼠通常为o．2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠l～5ml。

7．中毒体征和动物死亡情况观察染毒后注意观察毒性体征和死亡情况。

高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。

观察
和记录中毒体征及出现的时间、死亡数量和时间及死亡前的特征。

根
据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官．
LD50计算：根据受试物的种类由指导教师事先确定采用何种方法(改进
寇氏法、霍恩法等)进行计算，并在试验前设计剂量分组和每组动物数。

选择适宜的方法求出LD50及95％的可信限范围．如毒性反应存在性别
差异，应分别求出不同性别动物的LD50值。

※<（六）结果评定>
根据实验动物中毒体征、死亡时间和特征、LD50，按受试物种类急性
毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒性大小及毒性特征。