石蜡切片及其HE染色(2014.7.29)
石蜡切片和HE染色详细步骤
石蜡切片和HE染色详细步骤石蜡切片和HE染色方法与步骤1(取材颈椎脱臼法处死小鼠，打开腹腔，剪取肝组织(或其他组织)。
切取的组织块不宜太大，以利于固定剂穿透，通常以5mm×5mm×2mm或10 mm×10 mm×2 mm为宜。
取下所需要的肝组织，切成一小块2,3mm厚。
注意事项:(1)取材动作要迅速，不宜作太久的拖延以免组织细胞的成分、结构等发生变化。
(2)切片材料应根据需要观察的部位进行选择，尽可能不要损伤所需要的部分。
2(固定将切好的肝组织用生理盐水组织洗一下，立即投入中性福尔马林固定液中固定，固定30,50min。
注意事项:(1)一般固定液，都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化，失去固定作用。
(2)有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早，固定时就没有作用了。
(3)固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的20~30倍，有些水分多的材料，中间应更换1-2次新液。
(4)材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，并随同材料在溶液中投入相应的标签，以免相互混淆。
标签上注明固定液、材料来源、日期等。
标签上的文字，应用黑色铅笔或绘图黑墨水书写。
3. 脱水50%酒精?70%酒精?80%酒精?95%酒精?100%酒精?100%酒精。
每级0.5h。
注意事项:(1)脱水必须在有盖的玻璃品中进行，防止吸收空气中的水分。
(2)在更换高一级的脱水剂时，最好不要移动材料以免损坏，可用吸管吸出器皿中的脱水剂，再用吸水吸尽器皿内剩余液，然后于皿中加入高一级脱水剂。
(3)在低浓度酒精中，每级停留不宜太长，否则易使组织变软，助长材料的解体。
(4)在高浓度或纯酒精中，每级停留的时间也不宜太长，否则会使组织变脆，影响切片。
(5)如需过夜，应停留在70%酒精中。
(6)脱水必须彻底，否则不易透明，甚至使透明剂内出现白色混浊现象4. 透明1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) ?纯二甲苯(1.5h) ?纯二甲苯(1.5h)。
石蜡切片HE染色
石蜡切片HE染色1.脱蜡：二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3中各浸泡10分钟。
梯度酒精复水（100％100％，100％，95％，80％，70％）各5分钟。
2.清洗：用PBS洗1次，3分钟。
3.苏木素染色：取苏木素染液用去离子水按1：4稀释，然后染色约5 min（具体时间根据染色的组织而定，一般看到核有较深的蓝紫色就可以了）。
用自来水终止染色。
4.分化：染色后的切片在0.1%盐酸酒精分化3~5 s（具体时间根据染色的情况而定，分化的目的主要是让胞质与核的染色能够区分开，苏木素染色过了的话也可以通过分化后重新染色，这时处理时间需要长一些，如果分化过头即片子着色不深的时候可以再用苏木素染色)。
5.返蓝：分化后的片子置于自来水中，流水返蓝10～30min（具体时间根据染色情况而定，苏木素在碱性溶液中呈蓝色，别人做的时候都是先用弱碱性溶液返蓝后再用自来水冲洗，用时较短，我们是直接用自来水返蓝，由于自来水呈弱碱性，可以达到返蓝效果）。
6.伊红染色：伊红染液用95%酒精按1：1配制成工作液（伊红的贮备液瓶子上有注明），染色30s~1min（时间根据染色情况调整，建议是染深一点好，因为所用的染色伊红为水溶性，弱醇溶性的，在后面的脱水透明的时候非常容易掉色），染色后用去离子水洗1～3s（放在去离子水缸中立即拿去脱水透明）。
7.脱水透明：通风橱里梯度酒精（95％，100％，100％）脱水各30s，二甲苯1，二甲苯2，二甲苯3透明各3分钟。
（说明：这是我做的时候的步骤，因为按照一般的脱水透明的步骤，最后伊红的着色一般都没有了，原因我前面也说了是由于伊红为水溶性弱醇溶性的，但是按着这样的步骤比较容易污染95%酒精，后来看了相关的资料我的想法是伊红染色后先用95%酒精洗一下，再去通风橱从95%酒精梯度脱水，这样不会污染。
）8.封片：中性树胶封片（一般两滴就够了，从二甲苯中拿出时建议尽量不要让二甲苯干，这样中性树胶能够很快分散开，不会形成气泡）。
组织胚胎学研究方法和技术—石蜡切片与HE染色
是最常用的经典技术
02 石蜡切片术基本步骤
取材和固定 脱水和包埋 切片和染色 封片ห้องสมุดไป่ตู้
03 HE 染色
最常用的染色方法是苏木精和伊红染色法，简称HE 染色法
原理： 苏木精（Hematoxylin）-- 伊红（Eosin）
碱性染料
酸性染料
嗜碱性
将嗜碱性物质 （本身酸性）
构具有被碱性染料着色的性质称嗜碱性。
光镜技术— 石蜡切片术和HE染色
目录
CONTENT
01 光镜技术概述
02 石蜡切片术
03 HE染色
01 光镜技术概述
应用一般光学显微镜(简称光镜)观察是组织学研究的最基本方法 放大倍数可达1500，分辨率约为0.2μm 光镜下能被分辨的微细结构称光镜结构（LM） 组织学研究需要制备能使光线透过、微细
染成蓝色
中性
细胞核中的染色质、 细胞质中的核糖体
将嗜酸性物质 （本身碱性） 染成红色
嗜酸性
细胞质、膜性结构（线粒体、溶 酶体、滑面内质网）、细胞间质
脑垂体，H&E, x400
特殊染色法
镀银染色法
醛复红染色法
活体染色法
小结
1. 组织学最常见的研究方法是采用光镜观察。 2. 石蜡切片术是光镜观察时标本制备最常用的经典技术。 3. 组织切片常用的染色法是苏木精—伊红染色法，称HE染色。 4. 凡组织结构具有被酸性染料着色的性质称嗜酸性，凡组织结
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告英文回答：Introduction:Paraffin sectioning and H&E staining are essential techniques in histopathology for examining tissue samples under a microscope. Paraffin sectioning involves embedding tissues in paraffin wax, cutting thin sections, and mounting them on glass slides. H&E staining is a common staining method that uses hematoxylin and eosin to differentiate cell components.Materials and Methods:Tissue samples。
Paraffin wax。
Microtome。
Glass slides。
Hematoxylin。
Eosin。
Ethanol。
Xylene。
Procedure:Paraffin Sectioning:1. Fix the tissue samples in formalin and process them through a series of graded ethanol solutions.2. Embed the tissues in paraffin wax and allow them to solidify.3. Use a microtome to cut thin sections (5-10 microns)from the paraffin block.4. Mount the sections on glass slides and allow them to dry.H&E Staining:1. Deparaffinize the sections by passing them through xylene and ethanol solutions.2. Stain the sections with hematoxylin and rinse with water.3. Differentiate the hematoxylin staining with hydrochloric acid and rinse with water.4. Counterstain the sections with eosin and rinse with water.5. Dehydrate the sections by passing them through graded ethanol solutions and clear them in xylene.6. Mount the sections with a coverslip and examine them under a microscope.Interpretation of Results:Hematoxylin stains the nuclei blue, while eosin stains the cytoplasm pink.The stained sections allow for the examination of tissue morphology, identification of cell types, and detection of pathological changes.Conclusion:Paraffin sectioning and H&E staining are fundamental techniques in histopathology that provide valuable information for the diagnosis and study of diseases.中文回答：石蜡切片制作和HE染色实验报告。
《病理检验技术》课件——石蜡切片的HE染色
5～10分钟 5～10分钟 3～5分钟 3～5分钟 3～5分钟 3～5分钟 1～2分钟 1～2分钟 5～8分钟 2～3秒
石蜡切片的HE染色
11.1%的盐酸乙醇 12.流水冲洗 13.0.5%的伊红水溶液 14.蒸馏水稍洗 15.80%的乙醇 16.95%的乙醇 17.无水乙醇(Ⅰ) 18.无水乙醇(Ⅱ) 19.无水乙醇(Ⅲ) 20.二甲苯(Ⅰ) 21.二甲苯(Ⅱ) 22.中性树胶封片
石蜡切片的HE染色
苏木精
一种天然染料，本身不能染色，氧化后变成苏 木红才成为真正的染料，苏木对细胞核的亲和 力需媒染剂的帮助，此时细胞核呈红色，只有 在碱性环境中，苏木才变成蓝色。
伊红Y
人工合成染料，它可能是通过渗透或弥散作用完 成染色的，故与组织结合不牢固，它对细胞质着 色。
染色原理
石蜡切片的HE染色
2.二甲苯脱蜡后按常规 是用无水乙醇洗去二甲 苯。
4.1%盐酸乙醇分 化液分化时间要 根据分化液的新 旧适当调整。
3.苏木精染液要配好，其好 坏决定染色的优劣。要定期 过滤，避免氧化膜及沉淀等 污染切片。
石蜡切片的HE染色
5.盐酸-乙醇分化后用流水冲洗时间要足够， 目的是把酸彻底冲洗干净，使组织返蓝，也 避免切片残留酸液使切片易褪色。
因此，把第16步的无水乙醇改 为苯酚二甲苯(1:3)混合液进行 脱水，可省去第17步的无水乙 醇，脱水时间3～5分钟，可彻 底脱去切片水分
石蜡切片的HE染色
8.苯酚别名石炭酸，为白色针状结晶，配制苯酚 二甲苯前需要将苯酚放入56℃温箱内或水浴加热 溶解。苯酚如被氧化变成红色，不能使用。
9.使用一些二甲苯代替品如松节油代替二甲苯脱 蜡和透明，可避免二甲苯的毒性，但脱蜡和透明 效果会比二甲苯差，需要增加脱蜡和透明时间。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告自查报告。
实验名称，石蜡切片制作和HE染色实验。
实验日期，2022年10月15日。
实验地点，XX大学生命科学实验室。
实验目的，通过制作石蜡切片和HE染色，观察组织结构和细胞形态，掌握组织学技术操作和细胞染色方法。
实验步骤：
1. 取得组织样本，进行固定、脱水和浸蜡处理。
2. 制作石蜡切片，使用切片机将蜡块切成薄片。
3. 进行HE染色，依次浸入hematoxylin染液和eosin染液。
4. 将染色后的切片进行洗涤和脱水处理。
5. 最后进行封片，观察切片下显微镜。
实验结果：
通过实验操作，成功制作了石蜡切片并进行了HE染色。
在显微镜下观察到了细胞核染色为蓝色，细胞质染色为粉红色，细胞结构清晰可见。
实验总结：
通过本次实验，我掌握了石蜡切片制作和HE染色的基本操作技能，了解了组织结构和细胞形态的观察方法。
在实验过程中，我注意到了一些细节操作上的不足之处，例如在切片过程中需要更加细心，避免切片厚度不均匀。
在染色过程中需要控制好染色时间，避免染色不均匀。
在今后的实验中，我将更加注意这些细节，提高实验操作的技术水平。
实验人员签名，__________ 日期，__________。
动物组织的石蜡切片制作及HE染色
• 返蓝作用 苏木素在酸性环境下成红色，在碱性环境下成蓝色。因 此分化后，细胞核成红色，用弱碱性水，可是细胞核成蓝色，增强 对比。
• 细胞浆染色 伊红为酸性染料，带负电荷，与胞浆中的带正电荷的蛋 白结合，使胞浆成红色。
实验流程：
1.取材
2. 固定、脱水、透明
3. 浸蜡
4. 包埋
5. 切片
6. 展片
石蜡切片法广泛应用于医学、农学、动植物学等学科。是教学、 科研中的常用实验技术。
实验原理：
苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色，简称HE染色， 是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛。苏木精是从 洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧 化后生成苏木素，同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能 够使细胞核染色。在H.E.染色的组织切片中，细胞核呈蓝色，细胞浆 呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。
动物组织的石蜡切片制作 及H.E.染色
实验目的：
1. 掌握动物材料的石蜡切片制作方法。 2. 学习H.E.染色方法。
实验原理：
石蜡切片法，是以石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是形 态学观察最基本、最经典的技术之一。
一般来说，凡是可以经受石蜡法中各试剂处理的材料都可以用石 蜡法制片。石蜡切片一般要经过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包 埋、切片、展片、粘片、复水、染色、封藏等过程。
鼠肝组织-脱蜡前 40×
鼠肝组织-脱蜡后 40×
鼠肝组织-苏木素染色 400×
鼠肝组织-伊红B染色 1000×
实验结果
学生实验结果
注意事项：
• 使用试剂时注意戴好口罩、手套，必要时使用通风橱。 • 包埋过程尽量连贯、快速。 • 操作切片机时，务必注意安全，防止刀片伤手。 • 展片过程中确保组织蜡片始终正面朝上。 • 粘附载玻片只在正面涂有粘片剂，样品要粘在正面。 • 吸水后观察样品应紧贴在玻片上，方可避免在后续的处理中样品丢
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告英文回答：Introduction。
Paraffin sectioning and HE staining are fundamental techniques used in histology to prepare tissue samples for microscopic examination. Paraffin sectioning involves embedding the tissue in paraffin wax, which allows for thin sections to be cut using a microtome. HE staining, also known as hematoxylin and eosin staining, is a common staining method used to differentiate between differentcell types and structures in the tissue. Together, these techniques provide a detailed view of the tissue's morphology and architecture.Materials and Methods。
Paraffin Sectioning。
1. Fix the tissue in formalin for 24 hours.2. Dehydrate the tissue by passing it through a seriesof graded alcohols (70%, 95%, 100%).3. Clear the tissue by passing it through xylene.4. Embed the tissue in paraffin wax.5. Cut thin sections (5-10 µm) using a microtome.HE Staining。
实验时间石蜡切片及染色过程
实验时间石蜡切片及染色过程
石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。
苏木素与伊红对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的染色方法。
这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。
经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
实验步骤及注意事项
一、石蜡切片
1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm 为宜. 取材时间越快越好.
2. 固定: 组织取下后应立即放入 10%福尔马林(相当于 4%甲醛)固定.
注意：
(1) 固定液量应为组织块体积的 40 倍.
(2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等
有关. 一般为 3—24h.
(3) 固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长.
(4) 固定容器应大些.
3. 漂洗: 流水冲洗 2—10h.。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色一、目的要求：简要介绍石蜡切片的制作和苏木精、伊红染色法（简称H.E染色法），借以了解石蜡切片制作的基本原理和一般方法。
二、实验原理：易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性和嗜酸性;而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。
在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。
而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。
如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。
所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。
脱氧核糖核酸(DNA)两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。
经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。
再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。
故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。
三、实验用具：单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、染色缸、树胶瓶、毛笔、熔蜡箱（或恒温箱）、展片台（或烫板）、烤片盒、切片托盘。
石蜡切片的制作及HE染色课件
取材的大小和厚度也会影响后续 的切片制作，一般而言，组织块 的大小应为2-3cm³，厚度在24mm之间。
固定
固定是为了防止组织自溶和腐败，保 持组织细胞的形态和结构。常用的固 定剂有甲醛、乙醇、丙酮等。
固定时需要将组织放入适当的固定液 中，固定时间一般为1-24小时，具体 时间根据组织类型和大小而定。
04
石蜡切片制作及HE染色的质量控制
切片厚度控制
切片厚度
石蜡切片的厚度应控制在2-5微米之间， 过薄或过厚都会影响染色效果和显微镜 观察。
VS
切片均匀度
确保切片厚薄均匀，无裂痕或气泡，以提 高染色和观察的准确性。
染色浓度与时间控制
染色浓度
根据组织类型和染色需求，选择合适的染色浓度，以达到最佳染色效果。
01
02
03
04
防止脱片
在染色过程中要保持切片的湿 润，避免脱片。
控制染色时间
染色时间不宜过长或过短，应 根据实际情况进行调整，以达
到最佳染色效果。
注意染液浓度
染液的浓度要适中，过浓或过 淡都会影响染色效果。
避免污染
在染色过程中要保持染缸的清 洁，避免污染影响染色效果。
03
石蜡切片HE染色结果分析
浸蜡
浸蜡是为了将石蜡渗透到组织中，使组织变得硬固，以便 切片。常用的石蜡有固体石蜡和液体石蜡。
浸蜡时需要将组织放入适当的石蜡中，时间一般为1-2小 时，具体时间根据组织类型和大小而定。
包埋
包埋是将组织用石蜡包裹起来，以便 切片。包埋时需要将组织放入包埋盒 中，并确保组织平整、无气泡。
包埋盒需要用标签标记清楚，以便后 续的切片和观察。
染色时间
染色时间的长短也会影响染色效果，时间过短会使染色不明显，时间过长则可能导致染 色过度。
石蜡切片和HE染色
石蜡切片和HE染色石蜡切片& HE染色组织石蜡切片（常规）1、取材：8*6*2mm2、固定：PFA固定过夜（12-24h）3、梯度脱水：50%酒精1h,75%酒精1h(可长期保存)，85%酒精1h，95%酒精1h，100%酒精30min两次。
4、透明：100%酒精+二甲苯（1：1）30-45min，二甲苯ⅰ30min，二甲苯ⅱ30min,观察到透明为止。
5、浸蜡:二甲苯+石蜡（1：1）1h，石蜡ⅰ1h，石蜡ⅱ1h(过夜)。
6、包埋：将组织取出并放入盒内调整好位置，将组织完全平放于盒中，用针头将组织上浸蜡时残留的蜡剔除，使它可以完全被包埋，最后将蜡块于室温慢慢冷却后放入4℃冰箱中保存备用。
7、切片：用刀片将包有组织的蜡块进行修切，切成5-4μm厚的连续薄片，仔细观察薄片中央的组织，取较为完整的组织薄片。
8、展片与烤片：将蜡片黏贴在载玻片上，放于展片机中42℃展片1-2分钟。
最终后放入60℃烤片机中烤片1-2h.9、脱蜡与复水：将切片依次经过二甲苯，两次，各20min。
无水酒精（5min）95%酒精（5min）80%酒精（3min）70%酒精（3min）蒸馏水（5min）。
HE染色1、组织切片脱蜡至蒸馏水2、苏木素染色5min,自来水冲洗3、0.5%盐酸乙醇（0.5ml HCl + 100ml 70%乙醇）分化30s （提插数下）4、自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min5、置伊红液2min6、常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）1min→95％乙醇（Ⅱ）5min→100％乙醇（I）5min→100％乙醇（Ⅱ）5min→二甲苯乙醇（1：1）5min→二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→二甲苯（Ⅲ）5min→中性树脂封固HE染色注意事项：1. 染色时调节pH值很重要。
如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。
因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告
实验目的，通过石蜡切片制作和HE染色实验，观察组织结构和
细胞形态，学习并掌握组织学技术操作方法。
实验原理，石蜡切片制作是将组织标本固定、脱水、透明化、
浸渍石蜡、包埋、切片、贴片、脱蜡、染色、脱水、透明化、封片
的过程。
HE染色是一种常用的组织学染色方法，用于观察组织结构
和细胞形态的染色技术。
实验步骤：
1. 组织标本固定，取得组织标本后，进行快速固定。
2. 脱水，将固定后的组织标本置于不同浓度的乙醇中逐步脱水。
3. 透明化，将脱水后的组织标本置于透明剂中进行透明化处理。
4. 浸渍石蜡，将透明化后的组织标本浸渍熔化的石蜡中。
5. 包埋，将浸渍石蜡后的组织标本置于包埋模具中，倒入石蜡
进行包埋。
6. 切片，用切片机将包埋后的标本切成薄片。
7. 贴片，将切好的薄片贴在载玻片上。
8. 脱蜡，将贴片后的载玻片置于脱蜡剂中进行脱蜡处理。
9. 染色，将脱蜡后的载玻片进行HE染色处理。
10. 脱水，将染色后的载玻片进行脱水处理。
11. 透明化，将脱水后的载玻片进行透明化处理。
12. 封片，将透明化后的载玻片盖上盖玻片封好。
实验结果，通过实验操作，成功制作了石蜡切片并进行了HE染色。
观察下来，组织结构清晰，细胞形态明显，染色效果良好。
实验结论，通过本次实验，我学习并掌握了石蜡切片制作和HE 染色的操作方法，对组织学技术有了更深入的了解。
同时，我也意
识到实验操作中的细节和步骤对结果的影响，需要在以后的实验中更加细心和认真。
石蜡切片HE染色步骤 简约版
石蜡切片xx精－伊红（HE）染色方法
（1）选择切片：
组织尽量完整，无分裂；
（2）脱蜡：65℃烤片1h，使用二甲苯进行脱蜡，二甲苯Ⅰ-20min（二甲苯先加热到65℃，然后水浴）→二甲苯Ⅱ-15min（常温）；
（3）水化：
采用乙醇梯度水化，乙醇二甲苯-2min→无水乙醇Ⅰ-2min→无水乙醇Ⅱ-
2min→95%-2min→90%-2min→80%-2min→70%-2min→60%-2min；
（4）RO/UP水冲洗一遍（约10s）；
（5）xx精染色：
水化后的切片放入苏木精染液中浸15min，染细胞核。
RO/UP水冲洗
1min；
（6）1％盐酸乙醇分化10 s;弱碱性水溶液（5%氨水溶液）返蓝10s
（7）自来水冲洗10分钟；
（8）梯度乙醇脱水：60%-70%-80%-90%，各2min
（9）伊红染色：
充分水化后的切片直接入伊红染色液中，染细胞质1min；
（10）梯度乙醇脱水：95%→100%Ⅰ→100%Ⅱ→乙醇二甲苯—二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ，各2min；
（11）中性树胶封片，65℃烤片至树胶凝固（3h以上）。
1/ 1。
石蜡切片和HE染色详细步骤
石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品：根据样品的性质和形状，选择适当的采样工具和采样
容器，将样品采集到容品中并制冷处理，以防止样品发生腐败。
2、石蜡制备：在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡，并将其放
入容器中，然后加入酒精等助剂加热溶解，当石蜡完全溶解熔融后，用桶
或温度控制的水浴加热，随着温度的升高，搅拌均匀，使石蜡液完全熔化，熔化后即可用于制作石蜡切片。
3、制备切片：将样品置于熔融石蜡中，用切片机将样品切成指定的
厚度，以便用于染色；将薄片分类清洗，用干净的棉棒涂上几滴石蜡，使
其连接牢固，然后放在凉爽的干燥地方。
二、HE染色
1、润湿：将样品片放入石蜡解决液，轻轻摩擦，使其充分润湿。
2、酒精消切：将石蜡解决液滴入被润湿的样品片，轻轻摇晃，完成
样品的酒精消切。
3、甲醛处理：将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中，经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌，使样品片可以完全吸收醛，促使样品受醛处理，使样品
片充分脱脂，加快染色效果和特殊部位的显示。
4、HE染色：将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。
H-E整块染色切片法与石蜡切片H-E染色法比较-4页word资料
H-E整块染色切片法与石蜡切片H-E染色法比较当前,可以把医学的研究方法归纳为形态、生理和生化三种基本方法,以及三者之间的边缘学科(如组织化学、免疫组织化学等)。
就目前的水平来说,虽然分子生物学、免疫学、遗传工程学、生物化学等科研方法有了飞跃发展。
但是,形态学的研究仍然是一个最基本的重要方法。
因此,组织学制片技术已相当广泛地应用于众多的学科领域。
组织学是研究机体微细结构及相关功能的学科。
组织学的发展是与组织学技术分不开的。
组织学技术种类繁多,但石蜡切片、H-E染色法仍是经典而常用的技术。
无论在教学与科研工作中,机体微细结构的观察,都要借助光学显微镜来观察切片。
所以,此技术是医学及生物学领域的主要研究手段。
在组织学技术操作中,有关石蜡切片、H-E染色法介绍较多,但H-E整块染色切片法少有报道。
作者多年来均坚持上述两种方法制作教学切片。
一、H-E整块染色切片法与石蜡切片H-E染色法的技术流程(一)H-E整块染色法取材→固定→脱色→媒染→苏木精染色→分色→还原→流水冲洗→蒸馏水换洗→伊红染色→常规脱水→透明→石蜡包埋、切片→贴片及烤片→封固。
(二)石蜡切片H-E染色法取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封固。
二、H-E整块染色切片法的优点(一)制出的教学切片成功率高无论取自动物或人的组织器官,由于组成成分及结构特点不同,用石蜡切片后的H-E染色,如皮肤、坐骨神经,较难掌握脱水、透明及浸蜡时间,难切成连片,失败机会较多,特别是初学者。
但用H-E整块染色法制片,则大多能获得满意的连续蜡片。
(二)一个成功的H-E整块染色法,能切较多的统一规格的教学切片如H-E染色的组织块,样片镜检后可立即了解切片质量的优劣?如符合教学要求,立即将蜡块一次性全部切成蜡片、贴片。
一个猴的脑垂体可获得350―400张教学切片;如用传统的石蜡切片、H-E染色法,在样片染色镜检合格后,蜡块重新上切片机,再修组织块,浪费材料较多。
石蜡切片制作和HE染色实验报告
石蜡切片制作和HE染色实验报告英文回答：Firstly, I collected the tissue sample and fixed it in 10% formalin. Then, I dehydrated the tissue through a series of graded alcohols, cleared it in xylene, and embedded it in paraffin wax. Next, I cut thin sections of the paraffin-embedded tissue using a microtome. Subsequently, I stained the sections with hematoxylin and eosin (HE) and mounted them on glass slides. Finally, I examined the stained slides under a light microscope to evaluate the tissue morphology.For example, I collected a biopsy specimen from a patient with suspected lung cancer. I fixed the specimen in 10% formalin, which cross-linked the proteins in the tissue and preserved its structure. I dehydrated the tissue through a series of graded alcohols, which removed the water from the tissue. I cleared it in xylene, which removed the alcohol from the tissue. I embedded the tissuein paraffin wax, which supported the tissue during sectioning. I cut thin sections of the paraffin-embedded tissue using a microtome, which is a precision instrument that cuts very thin slices of tissue. I stained the sections with hematoxylin and eosin (HE), which are two dyes that stain different components of the tissue. I mounted the stained sections on glass slides, which allowed me to examine them under a light microscope. I examined the stained slides under a light microscope to evaluate the tissue morphology, which revealed the presence of malignant cells, confirming the diagnosis of lung cancer.中文回答：首先，我收集了组织样本并将其固定在 10% 甲醛中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
二、HE染色
1、脱蜡：二甲苯I（5分钟）、二甲苯II（5分钟）。【注：烘烤后的切片放至恢复室温后才可脱蜡，一般1~2小时即可。-20℃保存的切片也应恢复至室温后脱蜡，约15~30分钟即可。】
2、复水：100%乙醇（2分钟）、95%乙醇（1分钟）、80%乙醇（1分钟）、75%乙醇（1分钟）、蒸馏水（2分钟）。
5、摊片、烤片：将睾丸石蜡组织块切成5微米厚的薄片。摊片前先铺于30%乙醇溶液中片刻后取出，铺于37℃的水浴锅中，待蜡片将要完全展开前用已挂胶处理的玻片平整捞起。之后应立即放入60~65℃的烤箱中烤片，约1~2小时即可见石蜡成滴变干。烘烤后的玻片恢复至室温后放入-20℃冰箱中保存。【注：应密切控制水中展片时间，避免时间过长造成组织分散。】
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
3、苏木素染液染色20~30秒，自来水冲洗。
4、分化液分化60~90秒，依苏木素染色深浅而定，自来水冲洗。
5、观察颜色深浅按需返蓝，即浸泡于1%氨水中片刻，时间依颜色深浅而定。
6、伊红染液染色1分钟。自来水冲洗。
7、常规脱水，透明，封片：95%乙醇I（1分钟）、95%乙醇II（1分钟）、100%乙醇I（1分钟）、100%乙醇II（1分钟）、二甲苯I（1分钟）、二甲苯II（1分钟）、中性树胶封固。镜下观察。
2、透明：酒精-二甲苯（1：1）浸泡（15分钟）、二甲苯I（5分钟）、二甲苯II（5分钟）。【注：最后一步时间可作适当调整，待组织变为透明黄色物体时立即取出】
3、浸蜡：A缸（25分钟）、B缸（20分钟）、C缸（25分钟）。【注：A、B和C三缸中石蜡熔点为56~58摄氏度】。
4、包埋：组织用C缸中的石蜡包埋。浇蜡过程中须确保石蜡处于液态，且应一次浇注成型。【注：包埋后的石蜡块置于通风处36~48小时后放于-20摄氏度冰箱中保存。切片时可取出用碎冰装盛。切片过程中若发现蜡块软化，可将蜡块切面冰敷片刻后继续切片。】
石蜡切片及其HE染色步骤（2014.7.29）
——以睾丸固定组织为例
一、石蜡切片
1、脱水：70%乙醇浸泡（过夜）、80%乙醇浸泡（1小时）、90%乙醇浸泡（1小时）、95%乙醇I浸泡（40分钟）、95%乙醇II浸泡（40分钟）、100%乙醇I浸泡（40分钟）、100%乙醇II浸泡（40分钟）。