滤膜过滤法

濾膜過濾法

原理:利用0.45±0.02u,直徑為47mm的無菌濾紙在抽氣幫浦真空抽氣上運作,

在將它放在培養液的飽和吸收墊上培養22至24小時,由於大腸菌類無法濾過因而置留在濾膜上,所以可看出菌落。

實驗設備與材料：

所需用具：塑膠培養皿(直徑50mm)6個、無菌濾膜6張、安全吸球、量筒、燒杯數個、錐形瓶、鑷子，取藥杓、秤藥紙，吸收墊，定量玻璃吸管，隔熱板。

所需儀器：過濾抽氣裝置，恆溫培養箱、微量天平、電磁加熱攪拌器。

實驗步驟:

水樣來源---汙水處理廠

1.我們使用的培養基為M-endo agar.

2.二段水以1000mL加入51g M-endo agar.和95%酒精20mL 現在只要需30mL

的二段水所以用下面公式算出所需要的量

M-endo agar 51/1000 = X/30，X=1.53g

95%酒精 20/1000=Y/30，Y=0.6mL

3.然後調備完的東西放入量瓶將磁石放進去，然後放於電磁加熱攪拌器加熱，

它的外圍要用隔熱板圍住，怕後來會發生意外造成人元的損傷，還要隨時注意加熱的狀況，如果沸騰的話就要馬上關掉磁石攪拌器了。

4.等培養基稍微冷卻之後，把它平均的倒入６個4~5mL的空小培養皿，下來等

待凝固後就可以做下一個實驗了。

5.再來之後用六個小燒杯來做十倍稀釋，要先把取回來的水樣樣本取11mL，加

入有100mL的二段水的小燒杯，混合均勻後，再取11mL，加入另一個100mL 二段水的小燒杯，做10-2稀釋，往下繼續做，做到10-5稀釋，所以會有6個濃度各別100mL，分別是原液、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍。

6.稀釋完之後，把小燒杯跟製作好的培養皿和所需要的工具拿到一樓的實驗室

做過濾的動作，由學長親自操作一遍一開始先把0.45μm的濾膜放在真空抽氣幫浦上面，然後用二段水潤洗過一遍，之後要從低濃度稀釋的容易先到，

所以先把10-5濃度的水樣倒入過濾，之後再用二段水將周圍處潤洗過一次確

保都有全部下去，怕有殘留現場的溶液產生，過濾完之後，要使用鑷子小心將濾膜平鋪放入凝固的培養基中，並且用標籤加以標示清楚，往下繼續做，越做越後面時間會花的越來越久，因為濃度的關係，最後一個是將原液過濾，通常原液過濾的時間是最久。

7.最後把做好的培養皿倒放置放入35±１℃的培養箱內培養一天，隔天再去看

結果如何。

實驗的結果:

參考公式：

所選取之大腸桿菌群菌數落＊100 大腸桿菌密度(CFU/100ml)＝────────────────

所有選曲之過濾水樣之體積(ml)

問題:

1.比較同一種樣品以濾膜法,多管發酵法兩種實驗法法所記錄整理出來的數據,

並參照法規所訂之標準,樣品是否超過標準及受到大腸桿菌之污染?請進行合理的解釋和推論。

雖然取的地點不一樣,但稀釋到1000倍都還是有菌,有被大腸桿菌污染! ２.試述濾膜法與多管發酵法之間之異同及優缺點。

多管發酵法的

優點：只須少量的水樣即可進行實驗。

缺點:(1)以統計方法推導,所以在實際菌數上可能有些偏差。

(2)時間較長。

濾膜法的

優點(課本79頁):

(1)短時間內就可獲得結果。

(2)所用水量較多，增加分析時的靈敏度，同時較具有代表性。

(3)培養基製備簡單。

(4)水樣不需特別處理。

(5)數據較精確，再現性高，用已知體積的水樣直接計數。

(6)經費較節省。

缺點(課本79頁):

(1)水樣中的濁度太高或非大腸菌微生物數量過多時，不宜用濾膜法檢驗。

(2)水樣中若存有毒性物質，會被吸附或濃縮於濾膜上，抑制微生物的生長，造

成實驗結果偏低。

(3)容易受環境汙染，使數據失去準確度。

３．試述多管發酵與濾膜法中所使用的ＬＳＴ培養皿，Ｍ－ＥＮＤＯ培養基之特性，並說明其主要用途為何？

(課本76頁)ＬＳＴ培養基中含有膽鹽作為表面張力抑制劑，可抑制大腸菌類以外菌類生長

(課本79頁) Ｍ－ＥＮＤＯ培養液在培養過程中大腸菌類會分解乳糖，產生氣和荃類，而荃類會與Ｍ－ＥＮＤＯ培養基中的鹼性洋紅染料結合，在光線反射下，呈現綠色金屬光澤菌落。非大腸菌類則否。

４．實驗結果如何決定待測水樣中是否有大腸菌類？

在使用Ｅ－ＥＮＤＯ培養液中，洋紅染料結合，在光線反射下，呈現綠色金屬光澤菌落。非大腸菌類則否。

心得:

池政奇:

這次實驗比其他的實驗都快了很多，因為不用用到高壓滅菌和依些複雜的動作，所以，水漾上取用汙水處理廠的水，所以實驗做得很好，很明顯的有大腸桿菌的菌落產生，真空幫浦也是一樣第一次用，不過經過學長教完後還是會使用了，在用原水樣的時候過濾超久的，還以為出了什麼問題了，結果是因為過濾的雜質較多所以要等比較久。

謝勝德

這次做的實驗是濾膜過濾法，實驗真的很簡單也很快，因為培養基是要自己做的所以時間又縮短了，而且這次取的的水樣是汙水處理廠的，所以準確度非常高，接下來用到的真空抽氣幫浦，也是以前沒到的，一開始有學長示範，不然真不知道要如何使用，要夾濾膜真的要很小心，不然會破掉，濾膜越做越後面感覺過好慢，才突然發現因為是濃度很高所以會過濾的比較慢，所以代表這次會做得很成功，這次真的很快也很容易就做完了，沒出甚麼差錯。

吳承祐:

這次結果個人覺得還不錯實驗還滿簡單的,加上取自污水處理廠的水和因為稀釋的倍數有到一定的值,最後要用到真空抽氣幫浦,要小心不要讓濾紙破掉,做這次實驗時間上的掌控也還不錯!

參與度:

謝勝德 100%

池政奇 100%

吳承佑 100%