小鼠糖耐量测定
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糖耐量测定
在第8次免疫后即10.3号，测定给药组和对照组小鼠的葡萄糖耐量情况。每组取6只小鼠，每只小鼠的血糖值在本组平均血糖值附近。小鼠禁食不禁水16h后，每只小鼠腹腔注射剂量为2g/Kg的葡萄糖溶液。葡萄糖溶液的浓度为400mg/mL，体重20g的小鼠注射剂量为0.1mL。注射葡萄糖后0min，15min，30min，60min，120min采用尾静脉取血的方式测定小鼠的血糖值。并在注射完葡萄糖后15min时取血，测定血清胰岛素水平。
血清胰岛素水平检测
血清胰岛素水平的测定采用ELISA方法。样本为糖耐量实验中腹腔注射葡萄糖15min时的各组小鼠血清。具体的实验步骤按照试剂盒说明书进行，大致的操作流程如下：1、每孔加入50μL标准品，或者5倍稀释的血清。2、每孔加入100μL 酶标二抗，保鲜膜缠绕后37℃孵育60min。3、Wash solution满孔洗板4次。4、每孔加入50μL底物A 和50μL底物B，轻轻混匀，37℃避光孵育15min。
5、每孔加入50μL终止液（2mol/L H2SO4）（颜色由蓝变黄）
6、15min内在450nm 波长处测定OD值。
7、通过标准曲线计算样品insulin水平。