辣椒质膜水通道蛋白CaPIP1基因全长cDNA的分离及序列分析
滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析
滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析作者：杨林毅陈潞陈泽历来源：《湖北农业科学》2020年第13期摘要：滇重楼（Paris polyphylla var. yunnanensis）是多年生草本植物，其药用部位为地下根茎，是一种重要的中药材。
为明确侵染滇重楼的病毒病原，对采自云南省曲靖市的滇重楼进行透射电镜观察、DAS-ELISA和RT-PCR技术检测。
在透射电镜下观察到杆状病毒粒子，大小为（200～300） nm×（20～36） nm。
对采集到的7份病样进行DAS-ELISA检测，结果表明，其中5份病样呈阳性。
通过RT-PCR技术扩增、克隆获得1个全长为6 357 bp的曲靖分离物PMMoV-QJ的全基因组序列。
将PMMoV-QJ的全基因组序列与国内外已经报道的10个PMMoV分离物进行同源性分析比对，其同源性为99.42%～99.81%。
基于全基因序列的系统发育分析表明，PMMoV-QJ与韩国分离物亲缘关系密切。
本研究明确了该分离物的亲缘关系，从分子水平鉴定该分离物，为后续滇重楼病毒病的预防提供理论依据。
关键词：滇重楼（Paris polyphylla var. yunnanensis）;辣椒轻斑驳病毒（PMMoV）;鉴定;序列分析Abstract： Paris polyphylla var. yunnanensis is a perennial herb， and its medicinal part is underground rhizomes. It is an important chinese medicinal material. In order to clarify the viral pathogens infecting the Paris polyphylla， the transmission electron microscopy， DAS-ELISA and RT-PCR techniques were performed on the Paris polyphylla collected from Qujing， Yunnan province. Baculovirus particles were observed under transmission electron microscopy and were （200～300）nm ×（20～36）nm in size. The results of DAS-ELISA on 7 samples collected showed that 5 of them were positive. A whole genome sequence of a 6 357 bp Qujing isolate （PMMoV-QJ， accession number MK784568） was cloned by RT-PCR amplification. The homologous sequence of PMMoV-QJ were analyzed by homology with 10 PMMoV isolates reported at home and abroad， and the homology was between 99.42% and 99.81%. Phylogenetic analysis based on the whole gene sequence showed that PMMoV-QJ was closely related to Korean isolates.This study clarifies the genetic relationship of the isolate， and identifies the isolate from the molecular level， which provides a theoretical basis for the prevention of the subsequent viral disease.Key words： Paris polyphylla var. yunnanensis; pepper mild mottle virus（PMMoV）; identification; sequence analysis滇重樓（Paris polyphylla var.yunnanensis）又称独角莲，属延龄草科重楼属（Paris）多年生草本植物，其药用部位为地下根状茎，分布于亚欧大陆温带和热带地区，在中国主要集中在西南地区，其中以云南省滇中、滇东和滇东北、滇西和滇西北为主[1]。
辣椒抗疫病基因初步定位
Journal of Northeast Agricultural University东北农业大学学报第52卷第3期52(3):20~252021年3月March 2021辣椒抗疫病基因初步定位张曦，王秀雪，邹春蕾*（辽宁省农业科学院蔬菜研究所，沈阳110161）摘要：辣椒疫病是威胁辣椒生产主要病害，改良品种抗性是解决这一问题最有效途径。
选用对辣椒疫霉菌3号生理小种免疫的高代自交系ZCM334为父本抗源，构建F 1、BC 1F 1、F 2群体分析辣椒抗疫病遗传规律性。
结果表明，在感病对照全部发病时，ZCM334对辣椒疫霉菌3号生理小种抗性由一对显性主效基因控制；利用SLAF-BSA 技术对BC 1F 1抗、感极端分离群体混池测序，将辣椒抗疫病基因定位在辣椒第5号染色体5.1Mb 范围内，候选区域内共有26个候选基因，为下一步目标基因精细定位奠定基础。
关键词：辣椒；疫病；SLAF-BSA ；初步定位中图分类号：S641.3；Q781文献标志码：A文章编号：1005-9369（2021）03-0020-06张曦,王秀雪,邹春蕾.辣椒抗疫病基因初步定位[J].东北农业大学学报,2021,52(3):20-25.DOI ：10.19720/ki.issn.1005-9369.2021.03.003.Zhang Xi,Wang Xiuxue,Zou Chunlei.Preliminary mapping of phytophthora blight resistance genes in pepper[J].Journal of Northeast Agricultural University,2021,52(3):20-25.(in Chinese with English abstract)DOI ：10.19720/ki.issn.1005-9369.2021.03.003.Preliminary mapping of phytophthora blight resistance genes inpepper/ZHANG Xi,WANG Xiuxue,ZOU Chunlei(Vegetable Research Institute,LiaoningAcademy of Agricultural Sciences,Shenyang 110161,China)Abstract:Phytophthora blight is the main disease threatening the production of pepper.Improving the resistance of varieties is the most effective method to solve this problem.The high generation inbred line ZCM334,which was immune to Phytophthora capsici No.3physiological species,was used as the paternal parent resistance source.The F 1,BC 1F 1and F 2populations were constructed to analyze the genetic characteristics of pepper resistance to phytophthora blight.The results showed that the resistance of ZCM334to phytophthora blight was controlled by a pair of dominant gene,when all the susceptible controls diseased.SLAF-BSA technique was used to sequencing the resistant and susceptible populations of BC 1F 1.The phytophthora resistance gene was located in the range of 5.1Mb on chromosome 5of pepper.There were 26candidate genes in the candidate region,and it laid the foundation for the further fine mapping of target genesKey words:pepper;phytophthora blight;SLAF-BSA;preliminary mapping 基金项目：辽宁省青年科技创新人才培养专项资金项目（311024）；辽宁省自然科学基金计划重点项目（20170540506）；辽宁省农业重大专项（2019JHI/10200003）作者简介：张曦（1984-），女，助理研究员，博士，研究方向为辣椒抗病育种。
辣椒全基因组WRKY 转录因子的分析
园艺学报，2015，42 (11)：2183–2196.Acta Horticulturae Sinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0436；http：//www. ahs. ac. cn 2183辣椒全基因组WRKY转录因子的分析刁卫平，王述彬*，刘金兵，潘宝贵，郭广君，戈伟（江苏省农业科学院蔬菜研究所，江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室，南京 210014）摘 要：基于已公布的辣椒全基因组数据，利用生物信息学方法对辣椒WRKY转录因子家族进行全面鉴定和系统命名，并在此基础上对基因分类、染色体定位、系统进化关系和结构域序列保守性进行了研究。
结果表明：辣椒CaWRKY家族包含71个基因，根据WRKY结构域的数量及锌指结构的特征可将其分为GroupⅠ、GroupⅡ和GroupⅢ等3大类，GroupⅡ又可分为Ⅱ（a）、Ⅱ（b）、Ⅱ（c）、Ⅱ（d）和Ⅱ（e）等5个亚类。
辣椒12条染色体上均有WRKY转录因子分布，其中第1号染色体上分布最多，共有10个，第4号染色体上分布最少，仅有2个。
辣椒每类/亚类WRKY几乎含有相同的保守基序。
辣椒WRKY编码的蛋白在132 ~ 869个氨基酸范围内，平均氨基酸数量为373个。
关键词：辣椒；WRKY；转录因子；生物信息学中图分类号：S 641.3 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）11-2183-14 Genome-wide Analysis of the WRKY Transcription Factor Family in PepperDIAO Wei-ping，WANG Shu-bin*，LIU Jin-bing，PAN Bao-gui，GUO Guang-jun，and GE Wei （Institute of Vegetable Crops，Jiangsu Academy of Agricultural Sciences，Jiangsu Key Laboratory for Horticultural Crop Genetic Improvement，Nanjing 210014，China）Abstract：In the present study，based on the recently released pepper whole-genome sequences，CaWRKY gene family identification，gene classification，chromosome location，sequence alignment and conserved structure domains of CaWRKY proteins were predicted and analyzed with bioinformatics methods. The results showed that 71 CaWRKY genes were identified which were classified into three main groups（Ⅰ，Ⅱand Ⅲ），with the second group further divided five subgroups[Ⅱ（a），Ⅱ（b），Ⅱ（c），Ⅱ（d）and Ⅱ（e）]. A total of 70 CaWRKY genes were mapped to 12 chromosomes，whereas only CaWRKY70 was not mapped to any particular chromosome. Genome mapping analysis revealed that pepper WRKY genes were enriched on several chromosomes（1，2，3 and 7），especially on chromosome 1 which encompasses the largest number of 10 CaWRKY genes，while chromosome 4 only contained 2 CaWRKY genes. The pepper WRKYs from each group or subgroup were shown to share similar motif compositions，and CaWRKY proteins contained 132–869 amino acids and 373 in average. Our results will provide a platform for functional identification and molecular breeding tudy of WRKY genes in pepper.Key words：pepper；WRKY；transcription factor；bioinformatic收稿日期：2015–08–03；修回日期：2015–11–09基金项目：国家高技术研究发展计划（‘863’计划）项目（2012AA100103）；江苏省自然科学基金项目（2014 BK1380）；国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（CARS-25）；江苏省农业科技自主创新资金体系类项目[CX（12）1004]* 通信作者Author for correspondence（E-mail：wangsbpep@）Diao Wei-ping，Wang Shu-bin，Liu Jin-bing，Pan Bao-gui，Guo Guang-jun，Ge Wei.Genome-wide analysis of the WRKY transcription factor family in pepper. 2184Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (11)：2183–2196.转录因子（transcription factor）是指能够结合在基因上游特异核苷酸序列上的蛋白质，以特定的强度在特定的时间与空间调控基因的转录。
辣椒几丁质酶类基因家族的全基因组鉴定和表达特征分析
热带作物学报2021, 42(11): 3101 3110 Chinese Journal of Tropical Crops收稿日期 2020-12-15；修回日期 2021-04-09基金项目 福建省自然科学基金项目（No. 2017J01431）；福建农林大学校级创新训练项目（No. 202010389154）。
作者简介 刘卓毅（1995—），男，硕士，研究方向：花卉与景观园艺。
*通信作者（Corresponding author ）：吕美玲（LYU Meiling ），E-mail ：**************.cn 。
辣椒几丁质酶类基因家族的全基因组鉴定和表达特征分析刘卓毅，于文菲，蔡文丽，刘子珊，张 雨，袁 媛，伍炳华，吕美玲*福建农林大学园艺学院花卉与景观园艺实验室，福建福州 350002摘 要：几丁质酶（chitinase, EC 3.2.1.14）是一种降解几丁质的糖苷酶，在植物应对非生物和生物胁迫中起重要作用。
本研究对辣椒几丁质酶类（Capsicum annuum chitinase-like, CaCTL ）基因家族成员进行了全基因组注释、进化分析和基因表达模式分析。
从最新的辣椒基因组数据库中鉴定出31个CaCTL 成员。
根据系统发育进化树将这些成员分为GH18和GH19亚家族，并进一步分为5个亚类（Ⅰ~Ⅴ类）。
保守基序分析结果表明，每个亚类中的成员存在功能相关性。
对辣椒、矮牵牛以及番茄的CTL 基因家族成员同源性分析表明，在矮牵牛和番茄中分别有7个和11个辣椒CaCTL 的同源基因。
通过qRT-PCR 分析发现，在正常环境生长的辣椒植株中，64.2%的GH18亚家族的CaCTL 成员表达水平很低，有64.7%的GH19亚家族成员在不同组织中存在差异表达。
顺式作用元件分析表明，CaCTL 成员启动子区域存在许多激素反应以及生物和非生物应激相关元件。
当植物遭受不同的非生物胁迫时，qRT-PCR 结果显示，多数CaCTL 成员表达上调。
【CN110373487A】一种与辣椒辣味性状相关的InDel标记及其应用【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910336087.2(22)申请日 2019.04.24(71)申请人 华南农业大学地址 510642 广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人 朱张生 雷建军 孙彬妹 陈国菊 陈长明 曹必好 (74)专利代理机构 广州粤高专利商标代理有限公司 44102代理人 林丽明(51)Int.Cl.C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称一种与辣椒辣味性状相关的InDel标记及其应用(57)摘要本发明公开了一种与辣椒辣味性状相关的InDel标记及其应用，公开了与辣椒果实辣味性状相关的插入/缺失片段，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示，所述片段序列位于调控辣椒素生物合成关键MYB转录因子Cap1基因上游；同时基于此，开发了一种InDel分子标记，通过检测Cap1基因上游SEQ ID NO:1序列存在与否，可以对辣椒素类物质含量高低进行良好的分型。
本发明对于辣椒辣味的遗传改良，提高育种效率，节约育种成本具有非常重要的指导意义。
权利要求书1页 说明书5页序列表2页 附图3页CN 110373487 A 2019.10.25C N 110373487A权 利 要 求 书1/1页CN 110373487 A1.一种与辣椒果实辣味性状相关的插入/缺失片段，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.权利要求1所述的插入/缺失片段在筛选辣椒素含量高低性状或在制备筛选辣椒素含量高低性状的试剂盒中的应用。
3.一种用于筛选辣椒素含量高低性状的InDel分子标记，其特征在于，包括上游引物和下游引物，其序列依次如SEQ ID NO.3～4所示。
4.一种筛选/预测辣椒或其子代的辣椒素类物质含量高低的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.提取待测辣椒的基因组DNA；S2.检测步骤S1所述基因组中是否存在SEQ ID NO.1所示的插入/缺失片段；S3.结果判定：若基因组中存在SEQ ID NO.1所示的插入/缺失片段，则表示待测辣椒中辣椒素类物质含量高；若不在，则表示辣椒素类物质含量较低。
辣椒土传病原菌三重PCR检测体系的建立与应用
·3453·收稿日期：2022-02-22基金项目：江西省蔬菜产业技术体系项目（JXARS-06）；江西省现代农业科研协同创新专项（JXXTCX201901-03）通讯作者：马辉刚（1965-），https ：///0000-0002-1501-3037，研究员，主要从事蔬菜病害防控研究工作，E-mail ：mahg1997@ 第一作者：邹芬（1993-），https ：//.0000-0001-5852-7807，主要从事蔬菜病害防控研究工作，E-mail ：*****************辣椒土传病原菌三重PCR 检测体系的建立与应用邹芬，何烈干，李湘民，黄瑞荣，马辉刚*（江西省农业科学院植物保护研究所，江西南昌330200）摘要：【目的】建立简便、快速、准确同时检测辣椒疫霉（Phytophthora capsici ）、白绢病菌（Sclerotium rolfsii ）和青枯病菌（Ralstonia solanacearum ）的多重PCR 检测体系，为辣椒多种土传病害同时早期诊断提供技术支撑。
【方法】以3种辣椒土传病害病原菌辣椒疫霉、白绢病菌和青枯病菌为研究对象，参考相关文献筛选出3种病原菌的3对特异性引物PCA1F/PCA1R 、SCR-F/SCR-R 和RalfliC-F/RalfliC-R ，以引物浓度、退火温度、循环次数及延伸时间为变异因子，探索最佳反应体系，建立三重PCR 检测方法，并基于田间实际发病样品对方法进行验证。
【结果】优化的三重PCR 反应体系25.0μL ：3对引物PCA1F/PCA1R 、SCR-F/SCR-R 和RalfliC-F/RalfliC-R 浓度分别为0.24、0.24和0.28μmol/L ，DNA 模板各10ng ，2×Multiplex PCR Mix 12.5μL ，ddH 2O 补足至25.0μL 。
最佳扩增程序：94℃预变性1min ；94℃30s ，55.8℃30s ，72℃45s ，进行35个循环；72℃延伸10min 。
辣椒种质资源_PMMoV_抗性基因检测与抗性鉴定
热带作物学报2024, 45(4): 682 690Chinese Journal of Tropical Crops辣椒种质资源PMMoV抗性基因检测与抗性鉴定陈建分1,2，曹振木1，秦于玲1，申龙斌1，刘维侠1，朱丹1，吴怡婷1，刘子记1*，王旭2*1. 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，海南海口 571101；2. 海南大学园艺学院，海南海口 570208摘要：辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus, PMMoV）是世界范围内最严重的病原体之一，目前已报道的PMMoV包括P0、P1、P1,2、P1,2,3、P1,2,3,4五种致病型。
辣椒轻斑驳病毒寄主范围广、致病力强，严重影响辣椒的产量和品质，开展抗病育种是防治该病毒最为经济有效的手段。
本课题组前期研究已明确了感染海南儋州辣椒种质资源圃的PMMoV为P1,2 致病型，为了筛选抗PMMoV的辣椒种质资源，以110份种质为材料，利用已报道的与L3连锁的分子标记对辣椒种质进行检测。
结果表明：在110份材料中共检测到46份辣椒种质含有与L3连锁的分子标记。
采用苗期人工接种鉴定方法，对含有抗性分子标记的46份辣椒种质接种PMMoV P1,2致病型进行抗性鉴定。
接种5 d后调查局部症状，接种20 d后调查系统症状，计算病情指数。
结果表明：不同的辣椒种质在抗病性上存在显著差异，各种质的病情指数在8.86~60.00之间，对PMMoV P1,2致病型表现高抗（HR）的种质为CF19-34m和19FB6-1；表现抗病（R）的种质为CCJ93-1；表现中抗（MR）的种质包括17YB32、17SCa28m、15SM39-2、14SM555×14SM1、14SM567-2、14SM526-1、14SM565-1、14SM502-1、14SM519-1、14SM504m、14SM503m、14SM519-3、14SM518-2、14SM519-2、CCJ52-1等34份；表现感病（S）的种质包括14SM514m、CCJ22-1、CCJ113-2、CCJ135-1、CCJ157-1、L537-1m、L545、CCJ87-2、CCJ133-1，获得的高抗、抗病、中抗种质占总鉴定材料的80.43%。
辣椒生长素抑制蛋白基因CaARP1的克隆及其对青枯菌侵染的响应
刘艳艳，丁 颖，刘兴华，等．辣椒生长素抑制蛋白基因ＣａＡＲＰ１的克隆及其对青枯菌侵染的响应［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（２１）：１３－１９．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．２１．００３辣椒生长素抑制蛋白基因ＣａＡＲＰ１的克隆及其对青枯菌侵染的响应刘艳艳，丁 颖，刘兴华，郑佳秋（江苏沿海地区农业科学研究所，江苏盐城２２４０００） 摘要：生长素响应基因编码生长素抑制蛋白（ＡＲＰ），是非常重要的下调基因，能够抑制生长素（ＩＡＡ）信号的转导，在植物的生长、发育、抗病、抗逆以及种子休眠等过程中发挥重要作用。
为解析辣椒ＡＲＰ１基因的序列特征和功能，以辣椒品种ＣＭ３３４为试材，克隆获得辣椒ＡＲＰ１基因ｃＤＮＡ全长序列，命名为ＣａＡＲＰ１，ＧｅｎＢａｎｋ登录号为ＡＡＲ８３８８８．１。
序列分析结果表明，辣椒ＣａＡＲＰ１基因的ｃＤＮＡ全长２２８ｂｐ，没有非翻译区，包含１个２２８ｂｐ的开放阅读框架，编码７５个氨基酸。
ＣａＡＲＰ１基因含有２个外显子和１个内含子，全长３８５ｂｐ。
ＣａＡＲＰ１蛋白的分子量为８．２９８ｋｕ，理论等电点为９ ９９，没有跨膜结构，不存在信号肽，为亲水性不稳定蛋白，二元结构元件多为无规则卷曲。
ＣａＡＲＰ１蛋白与同属茄科植物的马铃薯、番茄、黄果茄、烟草生长素抑制蛋白的同源性较高，序列一致性分别为９５．００％、９６．６７％、９３．２４％、９１ ８９％。
实时荧光定量ＰＣＲ分析结果表明，ＣａＡＲＰ１基因在青枯菌侵染１～７ｄ期间均呈现极显著下调的趋势，推测该基因可能在辣椒应答青枯病侵染中发挥重要作用。
关键词：辣椒；ＣａＡＲＰ１基因；基因克隆；序列分析；表达分析 中图分类号：Ｓ６４１．３０１；Ｓ４３６．４１８．１＋９ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２３）２１－００１３－０６收稿日期：２０２３－０８－１８基金项目：江苏省农业科技自主创新资金［编号：ＣＸ（２１）３０３１］；江苏省农业重大新品种创制专项（编号：ＰＺＣＺ２０１７１５）。
辣椒CMB1_基因克隆与表达分析
收稿日期：2023-09-27基金项目：国家自然科学基金（32360744）；云南省生物种业与精深加工重大专项（202202AE090031)作者简介：张明先（2000-），女，在读硕士生，研究方向为蔬菜种质创新及利用，E-mail：*******************通信作者：吕俊恒（1989-），男，博士，副教授，研究方向为蔬菜种质创新及利用，E-mail：******************.cn广东农业科学2023，50（11）：50-58Guangdong Agricultural SciencesDOI:10.16768/j.issn.1004-874X.2023.11.005张明先，张芮豪，李平平，吴睿，周慧丹，邓明华，吕俊恒. 辣椒CMB1基因克隆与表达分析［J］. 广东农业科学，2023，50（11）：50-58.辣椒CMB1基因克隆与表达分析张明先1，张芮豪1,2，李平平1，吴 睿1，周慧丹1，邓明华1，吕俊恒1（1.云南农业大学园林园艺学院/云南省蔬菜生物学重点实验室，云南 昆明 650201；2.云南省农业科学院园艺作物研究所,云南 昆明 650205）摘 要：【目的】CMB1基因在植物的花序结构和果实成熟调控中发挥重要作用，但有关辣椒CMB1基因的功能和调控机制鲜有报道，因此研究辣椒中调控类胡萝卜素合成相关的转录因子及CMB1基因在辣椒中的作用，为辣椒选育提供参考。
【方法】以皱皮红、皱皮黄两种辣椒果实为试验材料，利用同源序列法克隆CMB1的编码序列并对其进行生物学信息分析，通过实时荧光定量PCR 技术分析CMB1在红色与黄色辣椒果实中不同发育时期（绿熟期、转色期、完熟期）的表达模式。
【结果】皱皮红与皱皮黄辣椒的CMB1基因ORF 长度均为732 bp，可编码243个氨基酸残基。
序列比对发现，皱皮红CMB1碱基序列的第11个位点发生突变，G 突变为T，导致氨基酸序列由G（甘氨酸）突变为V（缬氨酸）。
辣椒小G蛋白CaRab11基因全长cDNA的分离及序列分析
辣椒小G蛋白CaRab11基因全长cDNA的分离及序列分析赖燕;林金辉;陈成聪;官德义;牟少亮;邱爱连;何水林【期刊名称】《江西农业大学学报》【年(卷),期】2012(034)005【摘要】通过分析克隆获得的辣椒Rab11全长cDNA及其编码的氨基酸序列结构特征,为进一步研究辣椒Rab11功能奠定基础.通过对辣椒均一化cDNA文库的筛选分离获得了一个与葡萄Rab11小G蛋白VvRabAlf高度同源的全长cDNA,命名为CaRab11.序列分析结果表明:该cDNA包含有1164 bp的完整开放阅读框,编码217个氨基酸.该蛋白含有Rab GTP酶超家族保守的RabSF模体；Rab亚家族蛋白所特有的五个氨基酸序列RabF模体(RabF1-RabF5)；参与GTP/Mg++结合及GTP水解的G结构域(G1-G5:GDSGVGKS,T,DTAGQE,GNKADL及ETSAL)；两个构象变构域(Switch Ⅰ和SwitchⅡ)及与异戊二烯化相关的CCX序列.氨基酸同源性及进化分析同样表明CaRab11为辣椒小G蛋白Rab11家族新成员.【总页数】5页(P1021-1025)【作者】赖燕;林金辉;陈成聪;官德义;牟少亮;邱爱连;何水林【作者单位】福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福建农林大学作物科学学院,福建福州350002;福建农林大学作物科学学院,福建福州350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福建农林大学生命科学学院,福建福州350002;福建农林大学作物科学学院,福建福州350002【正文语种】中文【中图分类】S641.3;Q78【相关文献】1.辣椒质膜水通道蛋白CaPIP1基因全长cDNA的分离及序列分析 [J], 官德义;林金辉;陈成聪;牟少亮;何水林2.苦瓜McAGD8和小G蛋白McRABD2c基因全长cDNA的分离及序列分析 [J], 冯冬林;许端详;高山3.辣椒小G蛋白CaRab8基因全长cDNA的分离及表达特征的初步分析 [J], 赖燕;肖翔;林菁;虞露;陈桂信;官德义;何水林4.巴西橡胶树6个小G蛋白基因cDNA的克隆与序列分析 [J], 石峰;秦云霞;唐朝荣5.小麦小G蛋白Tarab5B基因全长cDNA克隆及表达特性的初步分析 [J], 陈秀珍;周荣华;贾继增因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
萝卜水通道蛋白基因RsAQP1b的表达模式及功能分析
萝卜水通道蛋白基因RsAQP1b的表达模式及功能分析周志国;冯雪【摘要】以萝卜品种白玉春为材料,利用同源克隆的方法获得萝卜水通道蛋白基因RsAQP1b的编码序列全长,在萝卜苗期干旱胁迫下分析RsAQP1b基因及蛋白的表达模式;在烟草中表达该基因,研究干旱胁迫下烟草中MDA含量及保护酶的活性变化.结果表明:萝卜水通道蛋白基因RsAQP1b的编码序列全长861 bp,编码286个氨基酸.制备了RsAQP1b多克隆抗体,效价在1:512000以上.Real time PCR与Western blot检测表明,干旱胁迫导致RsAQP16基因与蛋白的表达水平整体下降.PEG6000干旱处理下的转基因与野生型烟草MDA含量都增加,但是转基因烟草的增加幅度小;随着干旱程度加重,转mAQP1b基因烟草中SOD含量呈上升趋势,CAT含量呈先上升后下降趋势,POD含量呈上升趋势,酶活性均高于相应野生型对照.%Taking the radish cultivar ‘Baiyuchun’ as material,this paper gained coded sequence of aquaporin gene RsAQP1b by homology-based cloning method;and analyzed the expression pattern of RsAQP1b gene and protein under drought stress during radish seedling period,and studied the expression of this gene in tobacco,changes in MDA content and activity of protective enzyme under drought stress.The results indicated that CDS of RsAQP1b was 861 bp,encoding a protein of 286 amino acids.Polyclonal antibody of RsAQP1b was prepared and its titer was over 1 ∶ 512 000.Real time PCR and western blot detection showed that the expression level of RsAQP1b gene and protein was down-regulated by drought stress.Under PEG6000 drought stress treatment,the MDA content in transgenic and wild type (WT) tobacco was allincreased,but the increasing rage of transgenic tobacco was small.The content of SOD in transgenic RsAQP1b tobacco showed an increasing tendency,while the CAT content showed a tendency of first rising then declining.The POD content showed an increasing tendency.The enzymatic activity was all exceeded that of the relevant CK of wide type.【期刊名称】《中国蔬菜》【年(卷),期】2017(000)005【总页数】7页(P33-39)【关键词】萝卜;水通道蛋白;表达模式;过表达【作者】周志国;冯雪【作者单位】廊坊师范学院生命科学学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院生命科学学院,河北廊坊065000【正文语种】中文萝卜（Raphanus sativusL.）是我国重要的根菜类蔬菜作物。
甘草水通道蛋白PIP1基因正义和反义表达载体的构建_王芳
第23卷第6期内蒙古民族大学学报(自然科学版)V o.l23N o.6 2008年11月Journa l o f Inner M ongoli a U niversity for N ati ona lities N ov.2008甘草水通道蛋白PIP1基因正义和反义表达载体的构建*王芳,董乐,黄周英(泉州师范学院化学与生命科学学院,福建泉州362000)1摘要22根据已报道的Gu P IP1基因序列设计特异引物,克隆甘草水通道蛋白Gu P I P1基因cDNA序列,将该片段正向、反向分别插入植物表达载体p M B W330的Ca M V35S启动子和O CS终止子之间,构建了正义、反义表达载体.通过双酶切、PCR和DNA测序鉴定后,分别导入农杆菌E HA105中.1关键词2甘草;水通道蛋白;Gu P IP1;表达载体1中图分类号2Q781文献标识码2A1文章编号21671-0185(2008)06-0642-05Construction of Expressi on Vector of Sense and AntisenseGuPIP1G ene i n Chi nese L icorice(G l ycyrrhi za uralensis F.)WANG Fang,DONG Le,HUANG Zhou-y i n g(Depart m ent of Che m ica l&B i o l ogy Science,Quanz hou Nor m al Un i versity,Quanz hou362000,Chi na)Abstract:Specific pri m er w as desi g ned according to t h e reported c DNA sequence o f the GuP I P1,and the c DNA sequence o f GuPI P1w as obtained.GuP I P1sense and antisense sequence w as theninserted be t w een the C a MV35S pr o m o ter and COS ter m i n ator i n to the expression vector p MB W330respectively.The expressi o n vector w as checked t h en w it h t w o enzym es cutti n g,PCR ana lysis andsequencing.Then reco mb i n ation vector w as transfor m ed i n to Ag r obacteriu m t u m e faciens E HA105respectively.Key w ords:Chinese L icorice(G lycy rrhiza uralensis F.);A quapori n;GuPIP1;expression vector水通道蛋白(aquapor i n,AQP)是细胞膜上选择性高效转运水分子的特异蛋白孔道.植物基因组测序揭示,植物水通道蛋白是一个超家族:拟南芥中有38个水通道蛋白基因编码的35种水通道蛋白同源物,玉米和水稻中分别有35和33个水通道蛋白基因11,22.蛋白数据库显示,大量水通道蛋白同源物广泛存在于单子叶和双子叶、C3和C4代谢植物中,氨基酸序列的同源性分析表明,它们可能是水通道蛋白152.迄今为止,水通道蛋白基因已相继在拟南芥、烟草、玉米、豌豆、水稻等多种植物中得到克隆.Johanson等122根据氨基酸序列同源性和亚细胞定位将其划分为4个家族,即:质膜内在蛋白(P l as m a m e m brane i ntr i nsic pro te i ns P IP s)142、液泡膜内在蛋白(T onoplast m e mb rane i ntri nsic prote i ns T I P s)152、类N odu lin26(NOD26)膜内在蛋白(NOD26-li ke intr i nsi c prote i ns N IP s)162和小分子碱性膜内在蛋白(s ma ll basic intrinsi c prote i ns SIPs)112.植物水通道蛋白在植物种子萌发、细胞伸长、气孔运动、受精等过程中调节水分的快速跨膜运输172.植物水通道蛋白中有些呈组成型表达,而大多数是受环境因子如干旱、盐害、激素和光质等诱导表达的,即植物水通道蛋白的表达是受调控的.有研究表明,植物主要通过调控细胞质膜水通道蛋白的表达消除水分供应中的波动182.*收稿日期:2008-09-22基金项目:福建省科技厅青年科技人才创新项目(No.2006F3113);福建省自然科学基金高校专项项目(No.2008J04011);福建省教育厅科技计划项目(No.2007J A07151);泉州市科技局技术研究与开发项目(No.2007N6);泉州师范学院大学生基金资助项目(No.2008D A008和2008DA009).作者简介:王芳(1969-),女,辽宁瓦房店人,副教授,博士,主要从事植物分子生物学研究.第6期王芳等:甘草水通道蛋白P I P1基因正义和反义表达载体的构建W ang 等192以real-ti m e PCR 研究表明,甘草(G lycyrrhiza uralensis F .)质膜水通道蛋白基因Gu P I P1的表达受干旱、A B A 和N aC l 的胁迫而上调.采用该基因用于正义超表达、反义或RNA 干扰等表达抑制来研究其功能的基因工程未见报道.本文构建了Gu P I P1的正义超表达、反义干扰植物双元表达载体,并转入农杆菌E HA 105.这为利用转基因技术进一步阐明甘草质膜水通道蛋白基因GuPIP1在逆境胁迫下的调控功能奠定基础.1 材料与方法1.1 实验材料 甘草(Glycy rrhize uralensis F .)种子购自内蒙古赤峰市农科院.TR IZOL ,first-strand cDNA amp lificati on k it,RT -PCR K it 和测序载体pCR2.1TOPO TA 购自Inv itrogen 公司.DNA G el Ex traction M i n K it 购自Q iag en 公司.限制性内切酶和T aq DNA 聚合酶购自T a K aR a 公司.其他试剂购自厦门泰京公司.大肠杆菌DH 5A 和农杆菌EHA105为本实验室保存.p M B W 330载体由东北师范大学遗传与细胞研究所王兴智教授惠赠.1.2 实验方法1.2.1 甘草中总RNA 的提取 甘草种子消毒后,于40e 水中浸泡12h ,然后于25e 恒温培养箱中暗催芽3d .胚根长至0.5c m 时,移到光照培养箱中培养于H oag land 营养液[5mm ol/L Ca(NO 3)2,5mm o l/L KNO 3,2mmo l/L M gS O 4,0.025mm o l/L FeS O 4-EDTA ]中,光/暗为16h/8h ,光照强度为100L m ol #m -2#s -1,昼夜温度为24e /22e ,相对湿度为70%.培养期间无任何水分胁迫.培养7d 后取根.用TR I ZOL 法提取甘草根中总RNA .图1 p M B W 330载体图谱F i gure 1 M ap of p M B W 330vector 1.2.2 引物设计与合成 根据王芳等克隆的甘草质膜水通道蛋白基因GuP IP 1(G enBank accessi on N o .AY 781788)的cDNA 全长编码区序列(870bp)设计二对特异引物,一对用于正义表达载体的构建:引物1:5c -CCGCTCGAGATGGAAGGGAAGGAA CAAG -3c (引入X ho Ñ切点)和引物2:5c -GCT CTAGACTTCGACTTGAAGGGAATG-3c (引入X ba Ñ切点);一对用于反义表达载体的构建:引物3:5c-G CTCTAGAATGGAAGGGAAGGAA CAAG -3c (引入X ba Ñ切点)和引物4:5c -CCGCT CGAGCTTCGACTTGAAGGGAATG -3c (引入X ho Ñ切点),酶切位点只在p M B W 330载体(载体图谱见图1)的多克隆位点中存在,而在所要用于构建的片段中不存在.引物由上海生物工程公司合成.1.2.3 c DNA 第一链的合成、琼脂糖凝胶中DNA 片段的回收 1参照试剂盒说明.1.2.4 质粒提取、电泳、酶切、连接及大肠杆菌转化 参照文献192.1.2.5 重组子的鉴定和测序 采用限制性内切酶酶切和PCR 的方法鉴定重组子,确认正确后送交上海生物工程公司测序.1.2.6 农杆菌的转化 农杆菌的转化采用冻融法1102.2 结果与讨论2.1 甘草水通道蛋白Gu P IP1cDNA 全长编码区序列的克隆 取甘草根总RNA (图2)逆转录合成cDNA.以此cDNA 为模板,用所设计的引物1/引物2和引物3/引物4分别进行PCR 扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳各获得1个特异片段(图3),回收后分别克隆到pCR2.1TOPO 载体上,命名为pCR 2.1P IPs 和pCR 2.1P IPa.X ba Ñ和Xho Ñ分别酶切鉴定p CR2.1P IP s 和pCR 2.1P IPa TA 克隆的正确性(图4),筛选的阳性克隆送上海生物工程公司测序以进一步鉴定,结果均与G enBank 登录的序列完全一致.2.2 植物正义和反义表达载体的构建及重组子的鉴定 用限制性内切酶X ba Ñ和X ho Ñ分别酶切pCR 2.1P IP s 、pCR 2.1P IP a 和p M B W 330后,经琼脂糖凝胶电泳并用试剂盒分别回收相应DNA 片段(图5A 和B).pCR2.1PIP s 和p CR 2.1P IPa 回收的片段分别与p M B W 330回收的相应片段用T 4DNA 连接酶连接,转化大肠杆菌DH 5A ,Xba Ñ和X ho Ñ酶切初步筛选阳性克隆.结果表明,插入正义片段的质粒1-4和质粒5为阳性克隆,插入反义片段的质粒7-10为阳性克隆(图6),质粒2和质粒9再用不同的酶进行酶切也验证其为阳性克隆(图7-8),分别命名为p M B W P I P s 和p M B W PIP a,筛选的阳性克隆送上海生物工程公司测序以进一步鉴定,结果与设计完全一致.说明植物双元表达载体均构建成功.643内 蒙 古 民 族 大 学 学 报2008年图2 甘草根总RNA 电泳图Figu re 2 G el e lec trophore sis ofG.uralen sis geno m ic total RNA1-2均为甘草根总RNA 图3 甘草根GuPIP 1cDNA PCR 产物F i gu re 3 Agarose ge l electrophotesis analysis of PCR product of GuPIP 1cDNA M:K -H i nd Ó+U X 174-H ae ÓM arker ;1:正义片段PCR 产物;2:反义片段PCR产物图4 pCR2.1P IP 载体质粒酶切鉴定Figure 4 Agarose gel e lectrophotesis analysisof reco m b i nan t exp ressi on vec torpCR 2.1PIP by restriction d igesti onM:K -H ind Ó+U X 174-H ae ÓM arker ;1-4:p CR 2.1P IPs 载体质粒X ba Ñ和X ho Ñ双酶切鉴定;5-7:pCR 2.1P I P a载体质粒X ba Ñ和Xho Ñ双酶切鉴定 图5 载体质粒酶切回收电泳F i gure 5 Agarose ge l electropho tesis ana l ysis of reco mb i nant expression vector by restr iction digestion to gel extrac ti on M:K -H i nd Ó+U X 174-H ae ÓM arker ; 1:p CR2.1P IP s 载体质粒经X ba Ñ和X ho Ñ双酶切; 2:p CR2.1P IP a 载体质粒经X ba Ñ和X ho Ñ双酶切; 3:p M B W 330载体质粒经X ba Ñ和X ho Ñ双酶切图6 p M B W P IP s 和p M B W P IP a 载体质粒酶切鉴定Figure 6 A garose gel e lec trophote sis anal ysis ofreco m b i nan t exp ressi on vec tor p M B W PI P s andp M B W P I Pa by restr iction d i gesti onM:K -H ind Ó+U X 174-H ae ÓM arker ;1-5:p M B W P IPs 载体质粒经Xba Ñ和Xho Ñ双酶切;6-10:p M B W P I P a 载体质粒经X ba Ñ和X ho Ñ双酶切 图7 p M B W P IPs 载体质粒2经不同酶酶切鉴定Figure 7 Agarose gel electrophotesis analysis of reco mb i nant expression vector p MB W PI Ps 2by restricti on d i gesti on M:K -H i nd Ó+U X174-H ae ÓM arker ;1:p CR2.1P I P s 经EcoR Ñ单酶切(GuPIP 1c DNA 370bp 存在EcoR Ñ位点);2:p M B W PIPs 经X ba Ñ和EcoR Ñ双酶切;3:p M B W P I P s 经Xba Ñ和Eco R Ñ双酶切;4:pp M B W 330经Xba Ñ单酶切;:p MB W PIP s 经X ba Ñ单酶切;6:p M B W 330经Xba Ñ和Xho Ñ双酶切;7:p M B W P IPs 经Xba Ñ和Xho Ñ双酶切;8-9:p M B W P I P s 的PC R 鉴定644第6期王芳等:甘草水通道蛋白P I P1基因正义和反义表达载体的构建图8 p M B W P IP a 载体质粒9经不同酶酶切鉴定F i gure 8 Agarose ge l electrophotesis analysis of reco mb inan t expressi on vector p M B W P I Pa 9by re striction d igestion M:K -H i nd Ó+U X 174-H ae ÓM arker ;1:p CR2.1P IP a 经EcoR Ñ单酶切(Gu P I P 1cDNA 370bp 存在E coR Ñ位点);2:p M B W P I P a 经X ba Ñ和EcoR Ñ双酶切;3:p M B W P IPa 经X ba Ñ和E coR Ñ双酶切;4:p M B W 330经X ba Ñ单酶切;5:p M B W P IPa 经X ba Ñ单酶切;6:p M B W 330经Xba Ñ和X ho Ñ双酶切;7:p M B W P IPs 经Xba Ñ和X ho Ñ双酶切;8-9:p M B W P IPa 的PCR 鉴定2.3 外源基因整合检测用冻融法将构建的双元表达载体转化农杆菌EHA 105.质粒导入E HA 105后,用引物扩增质粒,可分别扩增出大小为870kp 左右条带(图9),表明双元质粒载体已导入根癌农杆菌EHA 105中.图9 双元表达载体转化农杆菌EHA 105质粒的PCR 鉴定Figure 9 Iden tif i cation of EHA 105w ith B inary Expression V ec tor by PCR m ethodM.K -H i nd Ó+U X 174-H ae ÓM arker ;1-5:正义双元表达载体转化农杆菌EHA105质粒;6-10:反义双元表达载体转化农杆菌E HA 105质粒3 讨论自从九十年代初发现红细胞膜上的水通道蛋白AQP1以来1112,有关水通道蛋白结构与功能的研究取得了迅速的、系列性的进展.水通道蛋白介导细胞与介质之间快速的被动的水分运输.植物水通道蛋白的发现,使植物生理在观念上得以进步,有力地推动了对植物水分运输与保持的研究.水通道蛋白基因在植物体内广泛存在,具有丰富的多样性1122.这一多样性不仅表现在种间的广泛性分布,而且体现在种内器官和组织上的差异与种类的繁多,以及亚细胞定位上的不同.水通道蛋白的表达也具有发育阶段的特异性.植物水通道蛋白丰富的多样性暗示了其包括通道选择性在内的更广泛的功能1132.这些水通道蛋白共同精细地调节着植物体内的水分运输与平衡,即水通道蛋白在植物体内是级联调控的.为探索水通道蛋白的调控机制及其在植物体内的生理功能,一些新的实验方法和实验设备不断出现.正义基因技术通过增加植物体内外源水通道蛋白的数量来探索水通道蛋白在植物体内的生理功能.反义基因技术则会反义转录基因的mRNA ,与植物内源水通道蛋白mRNA 的同源序列互补,形成双链或三链mRNA ,引起双链特异性RN ase 降解,从而减少了内源水通道蛋白成熟蛋白的合成数量,从反面研究水通道蛋白在植物体内的生理功能.W ang 等1122已克隆了甘草质膜水通道蛋白基因GuPIP 1.采用该基因用于正义超表达、反义或RNA 干扰等表达抑制来研究其功能的基因工程未见报道.本研究以Ca MV 35S 为启动子,以OCS 为终止子,分别构建了GuPIP 1基因的正义、反义表达载体,为研究Gu P I P 1基因在植物体内的生理功能奠定了基础.参 考 文 献112Chau m on t F,Barrieu F,W o jc i k E,Chrispee lsM J ,Jung R.A quapor i ns constit ute a large and high l y divergent prote i nfa m ily i n ma ize 1J 2.P l ant P hys i o,l 2001,125(3):1206-1215.122Johanson U,K ar lssonM,Johansson I ,et a.l T he co m plete set of genes encodingm ajor i n trins i c prote i ns i n A rabidopsis pro -v ides a framewo rk fo r a ne w nom enc l a t ure f o r m ajor i ntri nsic prote i ns i n p lants 1J 2.P lant Physi o ,l 2001,126(4):1358645内蒙古民族大学学报2008年646-1369.132H i guch iT,Suga S,T such i ya T,e t a.l M o lecular c l oni ng,w aterchanne l activ it y and tissue specific expression of t w o iso-for m s o frad is h vacuo lar aquapo ri n1J2.P l ant C ell Physi o,l1998,39(9):905-913.142K a mm er l oherW,F i scher U,P i echo ttka G P,et a.l W ater channels i n t he plant p l as m a m e m brane cloned by i m munoselec-ti on from an expressi on syste m1J2.P l ant J,1994,6(2):187-199.152K a rlsson M,Johansson I,Bush M,et a.l A n abundant T IP expressed i n ma t ure high l y vacuo lated ce lls1J2.P l ant J, 2000,21(1):83-90.162W eaver C D,Cro m b i e B,Stacey G,et a.l C alc i u m-dependent phospho ry lati on o f symb i o so m e m e m brane pro te i ns fro m n-i trogen-fi x i ng soybean nodu l es1J2.P lant Physi o,l1991,95(1):222-227.172Chrispee lsM J,M o rill on R,M aure lC,e t a.l A quapor i ns i n plants:struct ure,f uncti on,regu lati on,and ro les i n plant w a-ter re l a tions1J2.A quapo ri ns,2001,(51):277-334.182T;rnro t h-Ho rsefield S,W ang Y,H edfa l k K,et a.l Struct ura lm echanis m of p l ant aquapo ri n ga ting1J2.N ature,2006, 439(7077):688-694.192W ang F,Jiang Y,Feng X C,et a.l M o l ecular cloni ng of a G l ycyrrhiza ura lensis F.aquapor i n GuPIP1tha t is up-regula-ted i n response to drought,sa lt and ABA stress1J2.Chem R es Ch iU n i v,2007,23(1):52-57.1102Sambrook J,F r itsch E F,M an i atis T.M o lecu l ar cloni ng:a laboratory m anua,l3nd1M2.Co l d Spri ng H arbor:Co l d Spring H arbor L aboratory P ress,2002.1112P reston G M,A gre P.Isolation of the cDNA f o r erythrocyte i ntegra lm embrane prote i n o f28kil odaltons:member o f an anc ient channe l fam il y1J2.P roc N atlA cad Sc iU S A,1991,(88):11110-11114.1122M o i ra S,K ar i na A,M ar i o P,et a.l T onoplast vesicles o f Be ta vu l gar is storage roo t show functiona l aquapo ri ns regulated by pro t ons1J2.B io l Cel,l2005,(97):837-846.1132SantoniV,V i nh J,P flieger D,et a.l A pro teo m i c st udy reveals nove l i nsights into t he di v ers it y o f aquapor i n for m s expressedi n t he plas ma m e m brane o f plan t roo ts[J].B ioche m J,2003,(373):289-296.1责任编辑徐寿军2。
一株拮抗辣椒疫霉的假单胞菌的分离与鉴定
46卷 4期2006年8月4日微生物学报Acta Microbio logica Sinica 46(4):516~5214August 2006基金项目:上海市科技兴农重点攻关项目(3_3_1)*通讯作者。
Tel:86_21_34204854;Fax:86_21_34204051;E_mail:xuehzhang@sj 作者简介:何延静(1982-),女,河南南阳人,硕士研究生,主要从事微生物系统分类学研究。
E_mail:yanjinghe106@ 其他作者:蒋海霞收稿日期:2005_10_08;接受日期:2006_02_07;修回日期:2005_12_21一株拮抗辣椒疫霉的假单胞菌的分离与鉴定何延静,刘海明,胡洪波,许煜泉,张雪洪*(上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢教育部重点实验室 上海 200240)摘 要:从甜椒根际土壤中分离到一株对辣椒疫霉(Phytop hthora capsici )具有强拮抗作用的假单胞属(Pseudomonas spp.)菌株GP72,研究其拮抗性表明,对多种植物病原真菌均有很强的抑制作用。
对该菌株进行形态特征、生理生化、Biolog GN 、(G+C)mol%含量测定及16S rDNA 序列分析,鉴定为绿针假单胞菌(Pseu domonas chlorora p his )。
特征为单细胞,极生单个鞭毛,不能利用聚B -羟基丁酸盐,能够较强地利用Biolog 系统95种碳源中的45种作为底物生长,较弱利用其中的6种底物,与绿针假单胞菌(Pseudomonas chlorora phis )的相似性达到98%,相似指数为0172。
用热解链方法测得基因组DNA 的(G+C)mol %含量为6511mol%。
以16S rDNA 序列为基础构建了包括13株邻近种属细菌在内的系统发育树,其中与模式致金色假单胞菌的同源性最近。
关键词:绿针假单胞菌;GP72;鉴定;Biolog GN;16S rDNA中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:0001-6209(2006)04-0516-06伴随着现代农业的飞速发展,大面积作物病虫害的防治越来越依赖于化学杀虫剂的应用,但随之而来的环境污染和病虫害抗药性的产生使得人们对现代农业的可持续性发展提出了新的要求。
细胞生物学实验报告辣椒
细胞生物学实验报告辣椒1.1 有机溶剂萃取法根据辣椒色素的理化性质,工业上多采取以下方法进行提取:将茄科植物辣椒的成熟干燥果实之果皮粉碎后,用乙醇、丙酮、异丙醇或正己烷等抽提。
考虑到天然红辣椒中含有辣椒红、辣椒素、辣椒油脂等成分,其中辣椒素即辣椒碱有辣味,高温下产生刺激性蒸气,因此在辣椒色素的精制过程中必须将其去除。
从结构上看辣椒素含有酰胺键,分子中含有一个羟基,是一个极性化合物,其晶体呈现为单斜棱柱体或矩形,熔点61℃,溶于稀乙醇、己醚、丙酮、乙酸乙酯等溶剂及碱性水溶液中。
考虑到辣椒红混合物和辣椒素在不同溶剂中溶解度不同,可以利用两者的溶解度差异进行脱辣处理。
贺文智等[5]基于此原理采用正己烷萃取法,利用辣椒红色素易于溶于正己烷而辣椒素较难溶于正己烷的性质将两者进行分离,操作步骤如下:称取经去蒂、去籽、粉碎处理后的红辣椒粉末,以丙酮为萃取剂进行常压萃取操作,提取液在温度为90℃、真空度为0.09MPa的条件下进行减压蒸馏浓缩,同时回收丙酮。
用丙酮提取辣椒红的过程实质上是液固之间通过相际接触表面进行的传质过程,传质速率的快慢决定着传质设备的尺寸及操作时间。
该方法为了提高传质速率,采用索氏提取器对粉末状的干红辣椒进行提取。
称取一定量的经浓缩的辣椒红粗产品用一定量的正己烷进行萃取脱辣,试验结果见表1。
色价定义为单位质量原料的提取物的吸光度。
该方法操作简单,色素回收率较大,产品得率高,但产品色价较小。
由于色价值与辣度呈负相关性,说明该方法脱辣不够彻底,对于以辣椒红为主要产品且对辣椒素含量要求不是十分苛刻的情况,可以采用此方法。
张宗恩等以丙酮为溶剂提取制备辣椒油树脂,油树脂得率高、色价大、辣素含量低,便于分离。
采用pH值大于10.37的丙酮(50%)溶液进行5次以上脱辣萃取可得到口尝无辣味的红色素。
该方法工艺简单、操作方便,所得色素的各项质量指标均符合FAO/WHO标准。
1.2 柱层析法据报道,辣椒中的辣椒素即使稀释1:100000仍能感觉到辣味,这在很大程度上限制了辣椒色素的应用。
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水分是 植物 生长 发育和农 作 物产量 的主要 限制 因子 之一 。植 物 水通 道 蛋 白 （ｑａｏｉ，Ａ Ｐ 可通 ａｕｐｒ ｎ Ｑ ）
过提高质膜 的渗透性介导水分子或 中性小分子在生物膜之间的快 速运输过程…。水通道蛋 白是 Ｍ Ｐ Ｉ
（ ａｏ ｔｎｉ ｐｏ ｉ） ｍ ｊｒｎｒ ｓ ｒｔ ｎ 家族 的重要成 员之 一 ， 植物 中水通 道蛋 白可 分为 四个 主要 的亚族 ： ｉｉ ｃ ｅ 在 定位 于液 泡 膜 的液泡膜 内在 蛋 白 （ｏｏｌｓ ｉｒ ｓ ｒｔｎ ，Ｉｓ ， 位 在 质 膜 的 质膜 内在 蛋 白（ ｌｓ ｅ ｒｎ ｔｎｐａｔｎ ｉ ｉ ｐｏｅ ｓＴＰ ）定 ｔｎ ｃ ｉ ｐａｍａｍ ｍｂａｅ ｉｔｎｉ ｐｏｅ ｓＰＰ ） 类 Ｎ Ｄ一 ６ＭＩ 白（ Ｏ ２ ｎｒ ｓ ｒｔｎ ，Ｉｓ ， Ｏ ２ Ｐ蛋 ｉ ｃ ｉ Ｎ Ｄ一 ６一ｌ ｅＭＩｓ ＮＰ ） 小 分 子碱 性 膜 内在 蛋 白 ｉ Ｐ ， Ｉｓ 及 ｋ （ｍ ｌｂｓ ｔｎｉ ｐｏｅ ｓＳＰ） 。在 结构 上 ， 通道 蛋 白具有 ＭＩ 白家 族 成 员典 型 的 由三 个 胞 ｓ ａ ａｉ ｉｒ ｓ ｒｔｎ ，Ｉｓ ｊ ｌ ｃ ｎｉ ｃ ｉ 水 Ｐ蛋 外环 和两个 胞 内环 相 连 的 ６个 跨 膜 区及 两个 保 守 的天 冬 酰 氨 一 脯 氨 酸 一 丙 氨 酸 （ ｓ Ａ ｎ—Ｐｏ—Ａａ ｒ ｌ，
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辣 椒 质 膜 水通 道 蛋 白 Ｃ Ｐ Ｐ ａ Ｉ １基 因全长 ｃ Ｎ 的 分 离 及 序 列 分 析 Ｄ Ａ
官德义 林 金辉 陈成聪 牟少亮 何水林 ， ， ， ，
（． １福建农林大学 作物科学学院 ， 福建 福州 ３０ ０ ；２ 福建农林大学 生命科学学 院， ５０２ ． 福建 福州 ３ ００ ） ５ ０ ２
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氨基酸 ， 具有 ６个跨膜区 ， Ｎ Ａ模序 以及 植物质膜 水通 道蛋 白高度保 守的序列 。氨基酸 同源性及进化分析 ２个 Ｐ 同样表明 Ｃ ＰＰ 为辣椒水通道蛋 白家族新成员 。 ａ ＩＩ 关键词 ： 椒 ； 辣 水通道蛋 白； 因克 隆； 基 序列 分析
中 图分 类号 ：７ ；６ １３ Ｑ ８ ￥４ ． 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ０— ２ ６ ２ １ ）４—０７ — ５ １０ ２ ８ （ ０２ ０ ６ １ ０
ｍｉｏａ ｉ ｓｑ ｅｃ ｅｕ ｅ ｙ Ｃ Ｐ Ｐ Ｄ Ａ ｓｏ ｅ ｉ ｉ ｌｒｙ ｔ ＮＡ Ｐ ｒｔ ｎ ｆ ｍ ｔｂｃｏ ｎ ｃ ｅｕ ｎ ｅ ｄｄ ｃ ｄ ｂ ａ Ｉ １ ｃ Ｎ ｈ ｗ ｄ ｈｇ ｓ ａ ｔ ｏ ｔ Ｑ １ ｐｏｅ ｒ ｏ ａｃ ． ｄ ｈ ｍｉ ｉ ｉ ｏ
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