幽门螺杆菌尿素通道蛋白ureI基因真核表达载体的构建及表达

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第３８卷第２期
ＶｏＩ８Ｎｏ．ｌ３２
・源自文库
南华大学学报・医学版
ＪｕｎｌｆｎｖｒｔｏｏｔＣｉａ（ｄｃｌｄｔｎｏｒａｏｉｓｙｆｕｈｈｎＭｅｉｉｏ）ＵｅｉＳａＥｉ
２１００年３月
Ｍａ．０ｌｒ２Ｏ
ＡｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｏｓｕｔｈｅｏｉａｔｌｍｄｃｎａｉｇｔｅｕｅｅｅｏｅｃｂｃｒｙｏｉｐ／ｓｃ：ｊｃｉｏｃｎｔｃｅｒｃｍｂｎｐａｉｏｔｉｎｒＩｎｆｌｏａｔｌｒｆｙｏｒｖｒｔｎｓｎｈｇＨｉｅｐＨ — ｒ）ａｄｔｄｔｃｉｘｒｓｉｎｉＬｅｓａｄｔｌｕｄｔｎｆｒｕｔｒｔｄｉｇｔｅＨ／ｒＤＡｖｃｉｅ／，ｎｅｅｔｔｅｐｅｓＨｅａｃｌ。ｎａａｆｎａｏｒｅｓｙｎｗｏ／Ｎａｃ．ｏｓｏｎｌｏｙｏｉｏｆｕｕｈｎＭｅｏｓＴｅｕｅｇｎｆｌｔ＇ｒＳ１ｗｓａｐｉｅｙｐｌｒｓｈａｔｎ（Ｃ．ｈＣｒｄｃＷ￥ｓｂｔｄｈｒ］ｅｅｏｔＯｏｉＳａｍｌｄｂｏｍｅｅｃｍｎｒｃｏＰＲ）ＴｅＰＲｐｏｕｔ３ｕ－ｈ，ｌｉｆｙａｅｉｃｎｄｉｔａｐｏｒｔｓｅｏｃＮ３１ｌｅｏｐｒｐｉｅｉｆＤＡ．（＋）ｅｋｒｏｃｅｐｅｓｎｖｃｏｙｒｓｃｉｎｙｉｅｔｎａｄｌｋｎ — ｏｎａｔｐｕａｙｔｘｒｓｉｅｔｒｔｔｎｅｚｍｅｄｇｓｏｎｎｉｇｒｉｏｂｅｒｏｉｉｉｅ
基础研究・
幽门螺杆菌尿素通道蛋白ｕｅ基因真核ｒＩ表达载体的构建及表达
李杰，于文，张艳，靖吉芳
（南华大学病原生物学研究所，南衡阳４１０）湖２０１
摘要：目的构建幽门螺杆菌（ｐ／ｒＨｙｏ）尿素通道蛋白编码基因（ｒＩ／ｕｅ）的真核表达重组载体，并在ＨＬｅａ
细胞中表达，核酸疫苗的研制奠定基础。方法以ＨＷ／／Ｓ株基因组为模板，Ｃ扩增ｕｅ为ｏＳ１ｒＰＲｒＩ目的基因片段，向插入真核表达载体ｐＤＡ．（＋）定ｃＮ３１多克隆酶切位点中，建重组载体ｐＤＡ．（＋）ｕｅ；过酶切、Ｃ构ｅＮ３１／ｒＩ通ＰＲ
中图分类号：３８２Ｒ７．文献标识码：Ａ文章编号：６２— ４４２１）２— １５—０１７７４（００００５４
ＣｏｓｒｔｏｎｄＥｘｅｓｏｆＥｕｒｏｉｐｒｓｉｎｃｏｆｎｔｕｃｉｎａｐｒｓｉｎｏｋａｙｔｃＥｘｅｓｏＶｅｔｒｏ
ａｔｎ．ｈｏｉｖｅｏｉａｔｓｉｅｔｅｙｒｓｒｃｉｎｅｄｎｃｅｅｄｇｓｉｎ，Ｐｍｐｉｃｔｎａｄｓｑｅｃｎ．ｃｉｓＴｅｐｓｔｅｒｃｍｂｎｎｄｎｉｄｂｔｔｎｏｕｌａｉｅｔｏｉｗａｉｆｅｉｏｓｏＣＲａｌａｉｎｅｕｎｉｇｉｆｏＴｅｒｃｍｂｎｎｌｍｉｓｔａｓｅｔｄｉｔＬｅｌｗｉｉｏｏ．ｅｔｒｌｔｓａｐｉｄｔｅｅｔｔｅｅｐｅｓｏｈｅｏｉａｔｐａｄｗａｒｎｆｃｅｎｏＨｅａｃｌｓｔＬｐｓｍｅＷｓｎｂｏｐｌｏｄｔｃｈｘｒｓｉｎｓｈｅｗａｅ
ＵｒａＣａｎｌｒｔｉｎｕｅ）ｆｏＨｅｉｏａｔｒＰｌｒｅｈｎｅＰｏｅｎＧｅｅ（ｒＩｒｍｌｂｃｅｙｏｉｃ
ＬｉＹＵＷｅＩｅ，ｎ，ＺＪＨＡＮＧＹｎ。ｅｌａｔａ
（ｎｔｕｅｏａｏｅｉｏｙｎｅｉＳｕｈｎ，ｎｙｎＨｎｎ４１０，ｈｎ）ＩｉｔｆＰｔｇｎＢｏｇ，ＵｉｍｔｏｏｔＣｉａＨｅｇａｇ，ｕａ２０１Ｃｉａｓｔｈｌｖｙｆｈ
及测序鉴定，筛选阳性重组载体；质体法转染重组质粒入Ｈｅａ脂Ｌ细胞，ｓｒｌｔＷｅｔｎｂｏ检测其在ＨＬｅｅａ细胞中的表达。结果以ＨｐｏｉＳ株基因组ＤＡ为模板扩增出特异的ｕｅ基因片段，ｌｆｒＳ１ＮｒＩ大小约５５ｂ；８ｐ双酶切及测序鉴定证明成功构建了／ｌｒ真核表达重组载体ｐＤＡ．（＋）ｕｅ；ｗｏ／ｃＮ３１／ｒＩ该重组质粒能够在ＨＬｅａ细胞中表达目的蛋白。结论成功构建了真核重组载体ｐＤＡ．（／ｒｌ并能在ＨＬｃＮ３１＋）ｕｅ，ｅａ细胞中表达。关键词：幽门螺杆茵；尿素通道蛋白；表达