微载体培养PK-15细胞试验条件的优化
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文章 编 号 ： ０ ７５ ３ （ ０ ０ ０ —０ ０ ０ １ ０ —０ ８ ２ １ ） ８０ ２ — ４
目前 ， 国病毒 性 疫 苗 的生 产 多 采 用 扃 瓶 和 滚 我 瓶 等静置 培养技 术 进 行 细胞 培 养 和 病 毒 复制 ， 动 劳
强度 高 ， 占地面 积 大 ， 而且 生 产 不 稳 定 ， 难 进 行质 很 量控 制 。Ｖａ ｚｌ ［ ｎＷｅｅ Ａ Ｌ 于 １ ６ ９ ７年首 先应用 微载
微 载体 浓度５ｍｇ ｍＬ ／ 在低 糖 ＤＭＥ 培 养基 中培养 方式 效果 最为理 想 。优化 的培养 工艺适 用于 Ｐ －５细胞 Ｍ Ｋ１
的生产 。
关键 词 ： 载体 培养 ； Ｋ一５细胞 ； 养条件 微 Ｐ １ 培
中 图分 类 号 ： １． Ｉ Ｑ８ ３ ｉ 文献标识码 ： Ａ
（ ． 海 市 农业 科学 院畜 牧 兽 医研 究 所 ， 海 １上 上 ２ １ ０ ；． 海佳 牧生 物 制 品有 限公 司 ， 海 ２ １０ ） ０ １６ ２ 上 上 ０ １ ６
摘 要 ： 了优 化 Ｐ １ 为 Ｋ一５细 胞 在 微 载 体 上 的 生 长 条 件 ， 微 栽 体 浓 度 ５ ｍｇ ｍＬ、 糖 ＤＭＥ ＋ 在 ／ 低 Ｍ
ａ ｓ ｕ ｔ ｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｉ ｅ ｔ ｉｔ ｄ ｂ ｈ ｆｅ ｔ ｅｏ ｌ． Ｂ ｔｉｓａ ｐ ｉ ｔ ｒ ｓ ｒ ｅ ｙ ｔ ｅ ｅ ｆ ｃ ｉ ｆ ｃ ｏ ｓ ｃ ｖ ＧＴＨ ｅ ｈ ｄ ａ ｄ ｔ ｅｒ ｇ ｎ ｓｆ ｒｔ ｅ ｓ ｐ ｒ ｖ ｌ ｔｏ ｍ ｔ ｏ ｎ ｈ ｅ ｅ ｔ ｏ ｈ ｕ ｅ ｏ ｕ ａ ｉ ｎ
大等优 点 ， 已广泛应 用 于狂犬 病 、 脊髓 灰 质炎 等疫 苗
的生 产［ 对 ８ ２ ； 。 Ｏ种 以上 的贴 壁 细胞 成 功进 行 了大 规模 扩增 ， ２ ３细胞 、 如 ９ 成肌 细 胞 、 ＨＯ 细胞 、 ｅｏ Ｃ Ｖ ｒ
细胞［ 、 ｒ 细胞［ 和 Ｓ 细胞［ 等 。 由于细胞 培 Ｍａｃ ］ Ｔ 。 ］ 养环境 和微 载体培养 系统 的操作 条件 影 响不 同细 胞 生长代谢 和 生理状 况 ， 笔者 通过 研究 细胞 接种 密 度 、 微 载 体 浓度 和 不 同培 养 基 种 类 与 Ｐ １ 细 胞 生 长 Ｋ－ ５
Ｗ ＡＮＧ ｈ— ｉ ＣＨＥＮ ｉｇ ｂ 。 ＤＯＮＧ ｎ 。 Ｈ ＡＮＧ ｏ ｔ ｇ ， Ｕ Ｎ ｉ— ｕ ｎ Ｚ ｉ ｎ， ｑ Ｊｎ — ｏ ， Ｈｏ ｇ ，Ｚ Ｇｕ —ｉ 。 Ｓ ｑ Ｊｎ ｑ ａ
（ ． ｌｅ ｆ Ｖｅｅ ｉａ ｙ Ｍ ｅ ｃｎ Ｘ ｉｊａ ｇＡｇｒｃ ｌｕ ａ ｉｅ ｓｔ Ｕｒ ｍｑ ， ｎ ｉ ｇ， ３ ０ ２． ｈｉａｌ １ Ｃｏ ｌｇｅｏ ｔｒｎ ｒ ｄｉｉｅ， ｎ ｉｎ ｉｕ ｔｒ ｌＵｎｖ ｒ ｉｙ。 ｕ ｉ Ｘｉｊａｎ ８ ０ ５ Ｃ ｎ
体 浓度 对细胞 生长 的影 响 ； ３ｍｇ ｍＬ微 载 体 浓度 条 件 下 、 种 密度 ２ ×１ ｃｌ ／ 在 ／ 接 ５ ０ ｅｌ ｍＬ， 察 ＭＥ 高糖 ｓ 观 Ｍ、
ＤＭＥ 和低 糖 Ｄ Ｍ 培养基 对 细胞 生 长的影 响 。 结果表 明 ， Ｍ ＭＥ 以微 载 体接 种 细 胞 密度 ４ ５ ０ ｅｌ ｍｇ ． ×１ ｃ ｌ ／ 、 ｓ
２ ｎｔｔｔ ｆＡｎｍａ ｃｅ ｃ ， ｎ ｉ ｎ ．Ｉ ｓ ｕｅ ｉ ｏ ｉ ｌ ｉｎ ｅ Ｘｉｊａ ｇＡｃ ｄ ｍｙ ｏ Ｓ ａ ｅ ｆＡｎ ｍ ｌＳ ｉ ｃ ， ｒ ｍ ｉ ｘｉｊａ ｇ， ３ ０ ０ Ｃ ｉａ ｉ ａ ｃｅ ｅ Ｕ ｕ ｑ ， ｎ ｉｎ ８ ０ ０ ， ｈ ｎ ） ｎ
作 者 简 介 ： 锡 忠 （９ ６ ） 男 ， 海人 ， 医师 ， 士 ， 何 １６一 ， 上 兽 硕 主要 从 事 兽 用疫 苗 研 究 。 ＊通 讯 作 者
Ｅｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ａ ｄ Ｂｉ ａ ｔｖ ｔ ｅ ｓ ｒ ｍ ｅ ｆＥｑｕ ｎ ｔ ｉａ ｙ ＧＴＨ ｔ ａ ｔｏ ｎ ｏ ｃ ｉ ｉｙ Ｍ ａ ｕ ｅ ｎｔｏ ｉ ｅ Ｐｉｕ ｔ ｒ
体 系统 培养 贴壁 依 赖性 细胞 ， 后 这 一 技术 得 到 了 此
迅速 发展 。微 载 体 系统 由于 具 有 高 比表 面积 、 细胞
产量高 、 培养环 境便 于检 测和控 制 、 生产 规模 易 于放
收 稿 日期 ： ０ ９１ — １ ２ ０ －２ ３ 资金 项 目 ： 海 市科 委 科 技 发 展 基 金 项 目（ ４ ９ ９ ０ 上 ０３１３）
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｔｈｅ ｅ ｉ ｍ ｂ ｙｏ ｔ ａ ｆ ｒｃ ｎ ｇｒ ａ ｌ ｒ ｎｓｅ ａ ｅ ｔｙ ｉ ｒ ａ ｅｔ ｕｍｂ ｒｏｆｏｆｓ ｉ ｏ ｅ ｉｅｍａ ｅ ｉ ｄｉ ｄｕ ｅ ｆ ｐｒｎｇ ｆ ｒ ｄ ｓｒ ｒ ｎ ｖｉ —
动 物 医学进展 。０ ０ ３ （ ） ２ —３ ２ １ ， １８ ：０２
Ｐｒ ｇ ｅ ｓｉ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
微 载体 培 养 Ｐ １ Ｋ一５细胞 试 验 条 件 的优 化
何 锡 ， 忠 李春 华 倪 。 蒋风 英 邹 勇Ｈ ， 建平 ， ，
１ ０ｍＬ Ｌ ＮＢ ０ ／ Ｓ培 养 液条件 下 ， 察 ４ ５ ０ ｅｌ ／ 观 ． ×１ ｅｌ ｍＬ和 ８ ７ ０ ｃｌ ／ ｓ ． ×１ ｅｌ ｍＬ的 细胞接 种 密度对 细胞 生长的 ｓ
影 响； 在低 糖 Ｄ ＭＥ Ｍ＋１ ０ｍＬ Ｌ Ｎ Ｓ培养 液 、 种 密度 ５ ｅｌ ｍｇ条件 下 ， 察 ３ ５ １ ／ ０ ／ Ｂ 接 １ ｃｌ ／ ｘ ０ ｓ 观 、 、 ０ｍｇ ｍＬ微 载
目前 ， 国病毒 性 疫 苗 的生 产 多 采 用 扃 瓶 和 滚 我 瓶 等静置 培养技 术 进 行 细胞 培 养 和 病 毒 复制 ， 动 劳
强度 高 ， 占地面 积 大 ， 而且 生 产 不 稳 定 ， 难 进 行质 很 量控 制 。Ｖａ ｚｌ ［ ｎＷｅｅ Ａ Ｌ 于 １ ６ ９ ７年首 先应用 微载
微 载体 浓度５ｍｇ ｍＬ ／ 在低 糖 ＤＭＥ 培 养基 中培养 方式 效果 最为理 想 。优化 的培养 工艺适 用于 Ｐ －５细胞 Ｍ Ｋ１
的生产 。
关键 词 ： 载体 培养 ； Ｋ一５细胞 ； 养条件 微 Ｐ １ 培
中 图分 类 号 ： １． Ｉ Ｑ８ ３ ｉ 文献标识码 ： Ａ
（ ． 海 市 农业 科学 院畜 牧 兽 医研 究 所 ， 海 １上 上 ２ １ ０ ；． 海佳 牧生 物 制 品有 限公 司 ， 海 ２ １０ ） ０ １６ ２ 上 上 ０ １ ６
摘 要 ： 了优 化 Ｐ １ 为 Ｋ一５细 胞 在 微 载 体 上 的 生 长 条 件 ， 微 栽 体 浓 度 ５ ｍｇ ｍＬ、 糖 ＤＭＥ ＋ 在 ／ 低 Ｍ
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大等优 点 ， 已广泛应 用 于狂犬 病 、 脊髓 灰 质炎 等疫 苗
的生 产［ 对 ８ ２ ； 。 Ｏ种 以上 的贴 壁 细胞 成 功进 行 了大 规模 扩增 ， ２ ３细胞 、 如 ９ 成肌 细 胞 、 ＨＯ 细胞 、 ｅｏ Ｃ Ｖ ｒ
细胞［ 、 ｒ 细胞［ 和 Ｓ 细胞［ 等 。 由于细胞 培 Ｍａｃ ］ Ｔ 。 ］ 养环境 和微 载体培养 系统 的操作 条件 影 响不 同细 胞 生长代谢 和 生理状 况 ， 笔者 通过 研究 细胞 接种 密 度 、 微 载 体 浓度 和 不 同培 养 基 种 类 与 Ｐ １ 细 胞 生 长 Ｋ－ ５
Ｗ ＡＮＧ ｈ— ｉ ＣＨＥＮ ｉｇ ｂ 。 ＤＯＮＧ ｎ 。 Ｈ ＡＮＧ ｏ ｔ ｇ ， Ｕ Ｎ ｉ— ｕ ｎ Ｚ ｉ ｎ， ｑ Ｊｎ — ｏ ， Ｈｏ ｇ ，Ｚ Ｇｕ —ｉ 。 Ｓ ｑ Ｊｎ ｑ ａ
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体 浓度 对细胞 生长 的影 响 ； ３ｍｇ ｍＬ微 载 体 浓度 条 件 下 、 种 密度 ２ ×１ ｃｌ ／ 在 ／ 接 ５ ０ ｅｌ ｍＬ， 察 ＭＥ 高糖 ｓ 观 Ｍ、
ＤＭＥ 和低 糖 Ｄ Ｍ 培养基 对 细胞 生 长的影 响 。 结果表 明 ， Ｍ ＭＥ 以微 载 体接 种 细 胞 密度 ４ ５ ０ ｅｌ ｍｇ ． ×１ ｃ ｌ ／ 、 ｓ
２ ｎｔｔｔ ｆＡｎｍａ ｃｅ ｃ ， ｎ ｉ ｎ ．Ｉ ｓ ｕｅ ｉ ｏ ｉ ｌ ｉｎ ｅ Ｘｉｊａ ｇＡｃ ｄ ｍｙ ｏ Ｓ ａ ｅ ｆＡｎ ｍ ｌＳ ｉ ｃ ， ｒ ｍ ｉ ｘｉｊａ ｇ， ３ ０ ０ Ｃ ｉａ ｉ ａ ｃｅ ｅ Ｕ ｕ ｑ ， ｎ ｉｎ ８ ０ ０ ， ｈ ｎ ） ｎ
作 者 简 介 ： 锡 忠 （９ ６ ） 男 ， 海人 ， 医师 ， 士 ， 何 １６一 ， 上 兽 硕 主要 从 事 兽 用疫 苗 研 究 。 ＊通 讯 作 者
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体 系统 培养 贴壁 依 赖性 细胞 ， 后 这 一 技术 得 到 了 此
迅速 发展 。微 载 体 系统 由于 具 有 高 比表 面积 、 细胞
产量高 、 培养环 境便 于检 测和控 制 、 生产 规模 易 于放
收 稿 日期 ： ０ ９１ — １ ２ ０ －２ ３ 资金 项 目 ： 海 市科 委 科 技 发 展 基 金 项 目（ ４ ９ ９ ０ 上 ０３１３）
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动 物 医学进展 。０ ０ ３ （ ） ２ —３ ２ １ ， １８ ：０２
Ｐｒ ｇ ｅ ｓｉ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
微 载体 培 养 Ｐ １ Ｋ一５细胞 试 验 条 件 的优 化
何 锡 ， 忠 李春 华 倪 。 蒋风 英 邹 勇Ｈ ， 建平 ， ，
１ ０ｍＬ Ｌ ＮＢ ０ ／ Ｓ培 养 液条件 下 ， 察 ４ ５ ０ ｅｌ ／ 观 ． ×１ ｅｌ ｍＬ和 ８ ７ ０ ｃｌ ／ ｓ ． ×１ ｅｌ ｍＬ的 细胞接 种 密度对 细胞 生长的 ｓ
影 响； 在低 糖 Ｄ ＭＥ Ｍ＋１ ０ｍＬ Ｌ Ｎ Ｓ培养 液 、 种 密度 ５ ｅｌ ｍｇ条件 下 ， 察 ３ ５ １ ／ ０ ／ Ｂ 接 １ ｃｌ ／ ｘ ０ ｓ 观 、 、 ０ｍｇ ｍＬ微 载