第八章 动物早期胚胎操作

1.供体和受体的选择
供体应具有相当高的育种价值 供体生殖机能应处于较高的状态：产后60天以上，无生
殖系统疾病，体质强健
受体应容易购买，繁殖性能好，对地方适应性强，体型中 上等，非优良品种
受体健康状况良好，已进入发情季节 供受体发情时间应接近或一致
2. 供体超数排卵处理
超数排卵（superovulation） ：
作者的熟练程度。
胚胎移植产出的犊牛
一次移入三枚胚全部成活
受体母羊与所生羔羊
五、 胚胎移植的意义
发挥优良母畜的繁殖潜力—借腹怀胎 促进家畜改良的速度 —快速繁殖 代替种畜的引进，保存品种资源 胚胎生物技术的基础—试管动物、转基因
动物、克隆动物等
第二节 胚胎分割技术
概念 胚胎分割的方法 影响胚胎分割效果的因素
两组细胞间聚合：在空透明带中将两类细胞用PHA聚
合，琼脂包埋培养
2. 注入法
细胞（卵裂球、ICM、ES等）显微注入囊胚腔中，与 ICM合并，最后发育得到的个体即嵌合胚。
有 色 鼠 与 白 色 鼠 胚 胎 融 合
三、嵌合体的标记与分析
1. 遗传标记
毛色 同工酶—磷酸葡萄糖异构酶
其他方法 2. 人工标记
第十二章 动物早期胚胎操作
胚胎移植技术 胚胎分割技术 胚胎嵌合技术 细胞核移植技术
第一节 胚胎移植技术
胚胎移植的概念 胚胎移植的生理基础 胚胎移植的原则 胚胎移植的技术程序 胚胎移植的意义
一、胚胎移植的概念
借助一定的器械，从一头优良雌性动物的输卵 管或子宫内取出早期胚胎，移植到另一头处于相 同生理阶段的雌性动物的相应部位，使之继续发 育成为新个体。 供体：提供胚胎的个体，一般为良种。 受体：接受胚胎的个体，提供胚胎孕育时间和空间。
就是利用某些激素制剂，人为地控制并调整母畜的 发情周期，使其在预定的时期内集中发情的方法。
同期发情在畜牧生产中的意义：
A.便于集中或定时对一群母畜进行输精，使母畜的妊娠、 分娩和幼畜的培育相对集中。 B.利于家畜胚胎移植的应用
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
同期发情的机理及方法
机理：借助外源激素对卵巢的作用，使被处理的母畜
卵巢按预定的要求发生变化，并使其功能处于一个共 同的基础之上，达到同期发情的目的。
初生体重低 遗传一致性：同一胚胎切割后获得的后代，理
论上遗传性状应该完全一致，但事实并不这样。
同卵多胎的局限性：至今最好的结果是由一
枚牛胚胎获得3个牛犊。
第三节 胚胎嵌合技术
嵌合体的概念 嵌合体的制作方法 嵌合体的标记与分析 嵌合率的影响因素 嵌合体的应用前景
一、概念
8.供体和受体的术后观察及处理
供体和受体的抗炎处理 健康状况检查 返情状况检查 妊娠检查及妊娠确定
9.影响胚胎移植成功率的因素
胚胎因素:胚胎的质量，胚胎的发育阶段，胚
胎在体外停留的时间等。
母体因素：供受体发情的同期化程度、受体的
孕酮水平、移植部位等。
其他因素：移植方法、移植器官污染程度及操
A. “弹簧法”：向待处理母牛群同时施用孕激素，抑制 卵泡的发育和发情，经过一定时期同时停药，随之引起 同期发情。 B. “割草法”：利用前列腺素或其类似物（PGF2α），使 黄体溶解，中断黄体期，降低了孕激素水平，从而提前 进入卵泡期，使发情提前到来。
5.供体早期胚胎的收集
胚胎冲洗液的配制： 手术法收集胚胎
输卵管冲胚：顺向冲胚、逆向冲胚 子宫角冲胚
非手术法收集胚胎
二路法 三路法
6.供体胚胎的分级检查
形态学检查
根据透明带、胚胎细胞、发育阶段及细 胞在透明带中的比例确定胚胎级别。
细胞荧光法 测定代谢活性法
7. 胚胎移植
小鼠输卵管胚胎移植 小鼠子宫胚胎移植 大动物非手术法胚胎移植
一、概念
采用机械方法用特制的显微刀片或玻璃 微针将早期胚胎分割成为2等份、4等份或8 等份，从而获得同卵双生、四生或八生的一 项技术。
胚 胎 分 割 过 程
同 卵 双 生
三、影响胚胎分割效果的因素
分割胚胎发育的阶段 胚胎分割的次数 操作液 动物种类 分割胚的移植
四、胚胎分割存在的问题
胚胎的发育期限：必须处于周期黄体期内 胚胎的质量：胚胎必须是正常的，并在处理过程中不
受不良因素的影响
四、胚胎移植的技术程序
供体和受体的选择 供体超数排卵处理 供体母畜的发情鉴定及配种 受体同期发情处理 供体早期胚胎的收集 胚胎的检查、保存与培养 胚胎的移植 供体和受体的术后观察
二、胚胎移植的生理基础
每个发情周期生殖器官都有一个孕向发育 早期胚胎处于游离状态，胚胎发育到一定阶段
会与子宫发生生理联系 胚胎发育不存在免疫问题 胚胎的遗传性不受受体的影响
三、 胚胎移植的基本原则
胚胎移植前后所处的环境的同一性 供体和受体在分类学上的相同属性 动物生理上的一致性：受体和供体在发情时间上 的同期性 动物解剖位置上的一致性：空间环境的一致性
绿色荧光蛋白基因 Β半乳糖苷酶基因
四、嵌合率的影响因素
供体细胞 供体细胞发育的全能性、核型的正常与
否及遗传背景对种系嵌合率有较大影响。 受体胚胎
一般来说，导入的受体胚胎越早，其形 成嵌合体的嵌合程度越高，但嵌合体的获得 率低。
应用生殖激素处理，使单胎或双胎动物有更多卵泡 发育并排出卵巢的过程。
超数排卵的意义：
采用超数排卵可大大增加每次的排卵数量
动物常用超排激素：
PMSG、垂体促性腺激素（FSH、LH）、PGF2α、 GnRH、hCG等
供体超排处理
3.发情观察和配种
4. 受体同期发情处理
同期发情（同步发情）：
嵌合体：同一个体中同时存在不同基因型的细
胞或组织，这种个体称为嵌合体。
胚胎嵌合：把两个或多个不同基因型的早期胚
胎（细胞）聚集在一起形成复合胚胎，进而发育 为不同程度嵌合个体的过程。
二、胚胎嵌合体的制作方法
1. 聚合法
胚－胚聚合：去透明带后，PHA作用下CO2培养箱中
聚合，去PHA，继续培养
卵裂球（细胞）－胚聚合法：