辛酸硫酸铵法提纯鸡抗新城疫病毒(NDV)IgG效果观察
鸡新城疫抗体(NDV-Ab)说明书
鸡新城疫抗体（NDV-Ab）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫抗体（NDV-Ab）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）水平。
用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体（NDV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的新城疫抗体（NDV-Ab）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
免疫学实验
免疫学检验备考版辛酸/硫酸铵法提纯IgG在酸性条件下( pH4.5)，血清或腹水中非IgG的蛋白成份(包括白蛋白，部分Ig)，能被辛酸等短链脂肪酸沉淀，上清中剩余的蛋白主要为IgG，再用硫酸铵沉淀上清，即可获得纯度较高的IgG。
辛酸/硫酸铵法比硫酸铵法能够获得更高纯度的IgG。
50%溶血试验（CH50）测定补体实验绵羊红细胞（SRBC），与相应抗体（溶血素）结合后，可激活待检血清中的补体而导致SRBC 溶血。
其溶血程度与血清中补体的含量和功能有关。
由于补体含量与溶血程度之间呈正相关，但不是直线关系，而呈S曲线关系，故通常取反应曲线中间部位即50％溶血（CH50）为判定终点。
由于抗原抗体复合物激活的是补体的经典途径，C1～9任何一种成分缺陷都可使CH50降低，所以此实验反映了总补体的活性。
补体结合试验的基本原理抗原抗体复合物可以结合补体，这是补体结合试验的依据。
绵羊红细胞和其相应抗体（溶血素）的复合物结合补体后出现溶血现象。
因此，绵羊红细胞和溶血素被作为补体结合试验中判断待测系统中有无抗原抗体反应的复合物系统。
如待测系统产生抗原抗体复合物，则可结合一定量补体，此时加入溶血系统则不出现溶血。
如待测系统中只有抗原或抗体，不能结合补体，加入溶血系统则与游离补体结合而发生溶血，这就是补体结合试验的基本原理。
补体结合试验中有5种成分参与反应，分属于3个系统：①反应系统，即已知的抗原（或抗体）与待测的抗体（或抗原）；②补体系统；③指示系统，即SRBC与相应溶血素，试验时常将其预先结合在一起，形成致敏红细胞。
反应系统与指示系统争夺补体系统，先加入反应系统给其以优先结合补体的机会。
如果反应系统中存在待测的抗体（或抗原），则抗原抗体发生反应后可结合补体；再加入指示系统时，由于反应液中已没有游离的补体而不出现溶血，是为补体结合试验阳性。
如果反应系统中不存在的待检的抗体（或抗原），则在液体中仍有游离的补体存在，当加入指示系统时会出现溶血，是为补体结合试验阴性。
辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体
辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体(一) 原理蛋白质在溶液中的溶解度取决于蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度, 以及蛋白质分子带有的电荷。
如改变这两个因素,蛋白质就容易沉淀折出。
引起蛋白质沉淀的主要方法有(1) 盐析, 即加入大量中性盐破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出, 沉淀不同蛋白质所需盐浓度及pH 值不同;(2) 生物碱以及某些酸类, 在pH 值小于等电点时可以与蛋白质形成不溶的盐使其沉淀;(3) 重金属离子如隶、铅、铜、银等, 在pH 值大于等电点时可以与蛋白质结合成不溶的盐使其沉淀;(4) 有机溶剂如酒精、甲醇、丙酮等, 对水的亲和力很大, 能破坏蛋白质水化膜, 在等电点时使蛋白质沉淀。
辛酸(caprylic acid) 在偏酸条件下能与血清或腹水中除IgG外的其他蛋白质结合并将其沉淀下来,IgG 则溶于上清液中, 再用硫酸镀盐析, 即可达到纯化IgG 的目的。
辛酸-硫酸铵法是目前实验室中较常用的纯化单克隆抗体的方法, 利用该方法纯化单克隆抗体, 回收率和纯度都可达80% 以上。
(二) 试剂和器材1. 试剂(1) 小鼠腹水。
(2) 硫酸铵或饱和硫酸铵溶液。
称(NH4)2S04(AR)400~425 克, 以50 ℃~80 ℃蒸馆水500ml溶解, 搅拌2O min, 趁热过滤。
冷却后以浓氨水(15M NH40H) 调pH 值至7.4 。
配制好的饱和硫酸铵, 瓶底应有结晶析出。
(3)0.06M pH 4.8 醋酸盐缓冲液。
贮存液: A 液,0.06M NaAc: 无水NaAc0.49218g 加蒸馆水至100mlB 液,0.06M HAc: 冰醋酸0.344ml 加蒸馆水至100ml应用液: 取上述 A 液59ml 与B 液41ml 昆合, 用5M NaOH 调pH 值至4.80.(4)0.lM pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS). 取Na2HP04 · 12H2028.94g,KH2P04 2.61g, 加蒸馆水至100Om1(5) 含137mM NaCl 2.6mM KCl 0.2mM EDTA 的pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS): 取Na2HP04 12H20 28.94g KH2P04 2.61g NaC1 8.Og 、KCl 0.2g EDTA 0.06g, 加蒸馆水至100Oml2. 器材普通冰箱、低温离心机、电磁搅拌器, 紫外分光光度计、天平; 透析袋、塑料夹、精密pH 试纸; 烧杯、量桶、吸管、滴管、小瓶等。
不同方法提取高致病性禽流感及新城疫病毒RNA效果的比较分析
福建畜牧兽医第36卷第6期2014年定的误差。
对福安水牛首次进行生理生化测定的结果，虽然不是很全面，但也具有一定的代表性，可供参考。
参考文献：[1]白海涛.玉树耗牛12项血液生理生化指标的测定[J].青海畜牧兽医杂志,2009,39(1):8-11.[2]杨炳壮,梁贤威,文秋燕,等.杂交水牛不同生长阶段主要血液生理生化值指标的测定[J].中国草食动物,2005,25(4): 23-25.[3]威廉·C·雷布汉（美）.奶牛疾病学[M].北京:中国农业大学出版社,1994.[4]南京农业大学.家畜生理学[M].北京:中国农业出版社,2000:14-19.[5]骆洪俊,李德富,宋小白,等.广西本地水牛、尼里牛、么拉牛及三元杂种生理常值的测定[J].广西畜牧兽医,1986(2): 31-32.[6]李德富.西林母水牛27项血液生理生化指标的测定[C].广西:第五届亚洲水牛大会论文集,2006:175-177.不同方法提取高致病性禽流感及新城疫病毒RNA效果的比较分析吴蔚詹文辉李鹤应清香廖媛王邦彦福建省南平市动物疫病预防控制中心353000摘要高致病性禽流感以及新城疫对禽养殖户危害巨大，应用荧光RT-PCR方法对高致病性禽流感、新城疫病毒进行检测在病原学检测中占据优势。
而荧光RT-PCR检测的核心是核酸物质的提取。
本文将离心柱内硅基质膜提取法（柱膜法）与磁珠法作比较，探讨更适合基层兽医实验室的核酸提取方式。
关键词柱膜法磁珠法提取比较文献标识码：A文章编号：1003-4331（2014）06-0007-02Comparison of different RNA isolation methods for Highly pathogenic avian influenza and Newcastle diseaseWu Wei Zhan Wenhui Li He Ying Qingxiang Liao Yuan Wang Bangyan（Nanping Center for Animal Disease Control and Prevention,Fujian353000）Abstract Highly pathogenic avian influenza and Newcastle disease do the great harm to poultry farmers,FQ-PCR have an advantage in detecting method of etiology and Nucleic acid extraction is the key.This article compares Centrifugal column extraction with mag-netic bead method in order to find a better way in Basic veterinary laboratory.Key words Centrifugal column extraction magnetic bead method Extraction Comparison高致病性禽流感（以禽流感H5、H7为代表）及新城疫对禽养殖户危害巨大，均属于我国规定的一类动物疫病。
免疫球蛋白G_IgG_三种提取方法比较_刘生杰
１．８ 经济性比较 分别计算 ３ 种方法所用药品价钱的总和，除以所
用血清的量，来比较其经济性效益，所得结果越小，其 经济效益越好。
·４０·
管号 ＢＳＡ／μｌ ＰＢＳ／μｌ 考马斯亮蓝溶液 ／ｍｌ 总量 ／ｍｌ ＢＳＡ 浓度 ／（ｍｇ．ｍｌ－１） ＢＳＡ 吸光度值
总量 ／ｍｌ
血清 １：６４
５０
１００
２．８５
３．００
辛酸沉淀上清 １：５
５０
１００
２．８５
３．００
硫酸氨沉淀 ＰＢＳ 稀释液 １：２０
５０
１００
２．８５
３．００
辛酸 － 硫酸氨沉淀 ＰＢＳ 稀释液 １：１０
５０
１００２．８５３．００１．７ 粗提时效性比较 分别统计 ３ 种方法每一步骤所需时间，最后计算
１３０
１２０
１１０
１００
９０
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
２．８５
３．００
３．００
３．００
３．００
３．００
３．００
３．００
０
０．００３３３４
０．００６６６７
０．０１
０．０１３３３４
畜牧兽医科学
中国农学通报 第 ２３ 卷 第 １１ 期 ２００７ 年 １１ 月 ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｓｂ．ｏｒｇ．ｃｎ
· ３９ ·
值巨大。但有效利用 ＩｇＧ 的关键是缺乏快速高效的提 取技术，由于血清蛋白种类多，目前还没有技术能实现一 步 提 取 纯 化 ，须 多 种 方 法 结 合 方 能 奏 效 ［１］，但 粗 提 的 效果却制约着纯化的得率和纯度。从血液中提取免疫 球蛋白，常用的方法有盐析法（如多聚磷酸钠絮凝法， 硫酸氨盐析法）、有机溶剂沉淀法（如冷乙醇分离法、 辛酸沉淀法）、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法、纤维 素层析法、凝胶层析法、超滤法等，许多学者对提取免 疫球蛋白作过一些深入的研究［２］，但对抗体纯化的综 合方法比较的较多，而限制纯化纯度和得率的瓶颈阶 段— ——粗提阶段则比较研究较少，尤其是以大量提取 免疫球蛋白为目的的比较研究较少，笔者比较了辛酸 沉淀法、硫酸铵分步盐析法和辛酸 － 硫酸铵盐析法 ３ 种常用提取 ＩｇＧ 方法的效果，以期为猪血清免疫球蛋 白的快速、经济、大量提取和综合利用提供参考。 １ 材料与方法 １．１ 材料
辛酸硫酸铵法提取IgG
辛酸硫酸铵法提取IgG
（1）动物血清用3倍体积的乙酸乙酸钠缓冲液稀释，0.1mol/LNaHO调PH至4.5.
（2）4℃搅拌并缓慢加入辛酸（每升血清稀释液加入25ml辛酸）加完后继续搅拌30min，后静置2小时然后12000r/min 离心30min，取上清并且测量体积。
按1/10体积加入10×PBS，并用5mol/L的NaHO调至7.4.
（3）上清置于4℃冷遇10min，在4℃条件下按277g/L缓慢加入硫酸铵粉末（终浓度达到45%饱和度）边加边搅拌，加完后继续搅拌30min，后静置1.5小时。
（4）10000r/min离心20min弃上清，收集沉淀。
（5）沉淀用原血清体积的1/10的PBS溶解，装入透析袋放入100倍体积的透析液中，透析过夜。
（6）透析后的抗体溶液在50—55度水浴20min, 12000r/min离心20min取上清液放置-20℃保存。
既能抗病毒又能提高IgY抗体的鸡用药物配方及其制备方法[发明专利]
![既能抗病毒又能提高IgY抗体的鸡用药物配方及其制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d670831b4693daef5ff73dc7.png)
专利名称：既能抗病毒又能提高IgY抗体的鸡用药物配方及其制备方法
专利类型：发明专利
发明人：王风申
申请号：CN201610710699.X
申请日：20160823
公开号：CN106310251A
公开日：
20170111
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种既能抗病毒又能提高IgY抗体的鸡用药物配方及其制备方法，该鸡用药物配方中包括30～80重量份的氟苯尼考、100～300重量份的蛋黄粉、500～1000重量份的淀粉。
本发明以氟苯尼考、蛋黄粉和淀粉为原料，制备得到的鸡用药物配方不但可以杀灭和抑制病毒繁殖，还可以直接产生和提高机体IgY抗体滴度，且没有任何毒副作用，且药效直接迅速，针对性强。
申请人：河北中贝佳美生物科技有限公司
地址：050000 河北省石家庄市赞皇县五马山工业园1号公路北
国籍：CN
代理机构：北京联瑞联丰知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：郑自群
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新城疫病毒纯化方法的比较研究
新城疫病毒纯化方法的比较研究余祖华;丁轲;朱巧艳【摘要】为了比较研究红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对新城疫病毒的纯化效果,将含有NDV的鸡胚尿囊液分别用上述3种方法处理,并测定血凝(HA)效价.结果表明,红细胞吸附释放法中采用50%的醛化红细胞纯化病毒效果最佳;PEG-6000沉淀法中,用9%的PEG-6000加1%NaCl处理病毒后再沉淀2～4 h效果最佳;采用超速离心法纯化的病毒主要分布在40%和50%蔗糖区带之间.3种方法比较,以超速离心法效果最好,红细胞吸附释放法和PEG-6000沉淀法纯化效果差异不大.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2010(000)009【总页数】4页(P135-138)【关键词】新城疫病毒;纯化;红细胞吸附释放法;PEG 沉淀法;超速离心法【作者】余祖华;丁轲;朱巧艳【作者单位】河南科技大学,动物科技学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,动物科技学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,动物科技学院,河南,洛阳,471003【正文语种】中文【中图分类】S852.65新城疫(Newcastle disease,ND)又名亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒(NDV)引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病[1,2]。
新城疫病毒属于副粘病毒科、副粘病毒属,病毒表面有纤突,具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)活性,能凝集多种禽类和哺乳类动物的红细胞[3,4]。
鸡胚培养是实验室中培养新城疫病毒的方法之一,但是从鸡胚尿囊液中收集到的病毒液常有鸡胚蛋白混杂,纯度较低的问题,所以对鸡胚病毒液的浓缩纯化是开展NDV的生物学特性、免疫学特性及分子生物学研究的前提和基础。
因此,本研究采用红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对NDV进行纯化,然后分别测定纯化后的病毒血凝效价并对测定结果进行比较,获得了该病毒的的最佳纯化方法,为该病毒的功能研究及其应用提供了基础资料。
鸭IgG的提取
鸭IgG的提取
杨宗照;张书霞;杨奎
【期刊名称】《杭州农业与科技》
【年(卷),期】2000(000)003
【摘要】用辛酸—硫酸铵法提取鸭 IgG,同时把该法与传统的提取方法
Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>法和（NH<sub>4</sub>）
<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>进行了比较,结果表明,该法提取的鸭 IgG 纯度高,可用于免疫标记技术,比色谱层析快速简单,而且价廉。
本文也把几种提取鸡卵黄抗体的方法试用于提取鸭卵黄抗体,结果显示辛酸—硫酸铵法效果最好。
通过比较,找到适合鸭 IgG 的提取方法,为进一步研究其性质奠定基础。
【总页数】3页(P76-78)
【作者】杨宗照;张书霞;杨奎
【作者单位】杭州市兽医卫生防疫站;南京农业大学
【正文语种】中文
【中图分类】S852.4
【相关文献】
1.鸭IgG的研究进展及Fc段的遗传进化分析 [J], 马德明;解观增;杨志隆;蒋磊;常维山
2.抗鸡IgG、抗鸭IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的稳定性研究 [J], 张春红;伍惠卿
3.利用SPA提取鼠IgG制备兔抗鼠IgG血清的尝试 [J], 王钦富
4.鸭IgG提取方法的比较试验 [J], 杨宗照;华荣虹;张书霞;杨奎
5.皮下注射鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中IgA、IgM和IgG的发生规律 [J], 齐雪峰;程安春;汪铭书;杨晓燕;贾仁勇;陈孝跃
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鸡SIgA的纯化鉴定及免疫小鼠效果的观察
鸡SIgA的纯化鉴定及免疫小鼠效果的观察王文强;龙塔;黄小东;岳峰;贾文科;王选年【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2009(000)010【摘要】为了探索鸡分泌型免疫球蛋白A(SIgA)分离、纯化及鉴定方法,以新鲜的鸡胆汁为材料,采用硫酸铵盐析法从鸡胆汁中粗提纯鸡SIgA,应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定和纯化SIgA重链,用纯化的鸡SIgA重链蛋白免疫Balb/C小鼠.结果表明,SIgA重链分子量为67～70kD,轻链为26～28kD.免疫Balb/C小鼠抗血清针对SIgA重链的间接ELISA效价可达1∶16 000.为进一步研究SIgA生物学特性、单克隆抗体制备和黏膜免疫状况检测提供了技术支持.【总页数】4页(P135-138)【作者】王文强;龙塔;黄小东;岳峰;贾文科;王选年【作者单位】河南科技大学,动物科技学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,动物科技学院,河南,洛阳,471003;河南科技大学,动物科技学院,河南,洛阳,471003;河南科技学院,动物科学学院,河南,新乡,453003;河南科技学院,动物科学学院,河南,新乡,453003;河南科技学院,动物科学学院,河南,新乡,453003;新乡学院,生命科学与技术系,河南,新乡,453003【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.Luman-N-端融合蛋白的表达、纯化及小鼠免疫效果评价 [J], 郭挺伟;靳亚平;张鸯;翁伟平2.鸡新城疫-传染性法氏囊病二联灭活疫苗对SPF鸡和商品肉鸡的免疫效果观察[J], 詹先强3.鸡传染性鼻炎和鸡新城疫二联灭能苗近期免疫效果的观察 [J], 张培君;陈小玲4.不同纯化浓缩方法制备的新城疫疫苗\r对SPF鸡免疫效果的研究 [J], 陈静怡5.朝那静原鸡不同世代鸡新城疫和禽流感灭活疫苗免疫效果观察 [J], 姜肖军;郭亚男;陈秀红;司朵朵;刘凡;何生虎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
IgG的分离与提纯-硫酸铵沉淀法.doc
IgG的分离与提纯-硫酸铵沉淀法以抗原免疫动物来制备的抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。
但是同抗原特异性结合的抗体则主要是血清中的免疫球蛋白组分。
通常用于制备酶标抗体或荧光抗体的免疫球蛋白必须高度纯化并具有特异性，不应含有非抗体的血清蛋白。
因此，为了浓缩和提高抗体的效价，或为制备免疫球蛋白特异性抗体时，通常也需要分离和纯化免疫球蛋白。
γ球蛋白（IgG）是血清免疫球蛋白的主要成分，约占全部免疫球蛋白的75％，因此，抗体的分离纯化主要是分离纯化IgG。
纯化IgG小量几十ml的话，用protein A或protein G就可以，疏水柱等也可以纯化；大量的话，上百ml，可以使用streamline protein A。
之前根据载量估计一下需要的柱子体积。
实验室中常用硫酸铵沉淀后过DEAE 纤维素柱，比较简便可获较纯的抗体。
下面以此方法为例介绍IgG的分离与提纯。
材料与试剂配制1. 动物血清2. 硫酸铵饱和溶液硫酸铵800g~850gH2O 1 000ml加热至绝大部分溶质溶解为止，趁热过滤，置室温过夜，然后以28％NH4OH调pH至7.0（不调pH值也可以）。
注：硫酸铵以质量优者为佳，因次品中含有少量重金属对蛋白质巯基有影响。
如次品必须除去重金属，可在溶液中通入H2S，静置过夜后滤过，加热蒸发H2S即可。
3. 0.01Mol/L pH7.4PB液A液：0.10Mol/L NaH2PO4液NaH2PO4·2H2O 15.60g加H2O至 1 000.mlB液：0.10Mol/L Na2HPO4液Na2HPO4·12H2O 35.80g加H2O至 1 000ml取A液19ml，B液81ml加水至1 000ml即可。
4. 1％BaCl2溶液5. 纳氏液HgI 115.00gKI 80.00g加H2O至500.00ml溶化后过滤，然后再加20％NaOH500.00ml，混合即可。
辛酸_硫酸铵联合沉淀法在单克隆抗体纯化中的应用_陈丹
５ 结束语 脂质筏结构被人们认识以来， 其确切的生理功能仍然
ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｅｎｒｉｃｈｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｕｂｄｏｍａｉｎｓ ｄｕｒｉｎｇ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｔｏ ｔｈｅ ａｐｉｃａｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ， １９９２， ６８（ ３） ： ５３３－ ５４４． ［７］ ＢＲＯＷＮ Ｄ Ａ， ＬＯＮＤＯＮ Ｅ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ
［９］ ＤＡＮＩＥＬＳＥＮ Ｅ Ｍ．Ｌｉｐｉｄ ｒａｆｔｓ ｉｎ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｂｒｕｓｈ ｂｏｒｄｅｒｓ： ａｔｙｐｉｃａｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｍｉｃｒｏｄｏｍａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， ２００３， １６１７（ １－ ２） ： １－ ９．
［１３］ 杨 福 愉 ．生 物 膜 结 构 研 究 的 一 些 进 展［Ｊ］．生 物 化 学 与 生 物 物 理 进
有待大量研究， 特别是对质膜微囊和脂筏介导的内吞途径
ａｎｄ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ－ ｒｉｃｈ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｒａｆｔｓ ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ， ２０００， ２７５（ ２３） ：
的分子细节了解， 而脂筏与微生物相互作用为这方面的研 究提供了一个非常好的实验模型。通过对病原微生物如何
１７２２１－ １７２２４． ［８］ ＳＩＬＶＩＵＳ Ｊ Ｒ．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｒａｆｔ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ： ｌｅｓｓｏｎｓ
ｆｒｏｍ ｌｉｐｉｄ ｍｏｄｅｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ， ２００３， １６１０（ ２） ：
利用脂筏介导其内吞及内吞入胞后在胞内的转运的研究，
对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较
对鸡卵黄免疫球蛋白两种提取方法的比较皮晋魁;张焕容【摘要】本文比较了水稀释-饱和硫酸铵沉淀法（法一）和水稀释-冰乙醇分级沉淀法（法二）分离提纯鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）的产率、纯度及抗体效价。
结果表明：两种方法提取的IgY纯度均较高,法一纯化的IgY的产率及蛋白活性相对更好。
%Two methods for extracting IgY：water diluted-saturated ammonium sulfate precipitation method（method 1）and water diluted-iced ethanol centrifugation precipitation（method 2）,which were compared about IgY extraction rate,purity and antibody titer.The result showed that IgY extracted by both methods had high purity and method 1 was relatively better than method 2 in extraction rate and protein activity of IgY.【期刊名称】《四川畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)010【总页数】3页(P26-28)【关键词】卵黄免疫球蛋白;纯化;产率;纯度;活性【作者】皮晋魁;张焕容【作者单位】西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041;西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】S852.46本试验采用水稀释法初提IgY，然后分别用硫酸铵沉淀法和冰乙醇分级沉淀法进一步提取IgY，检测IgY提取量、纯度以及活性效价，为选择较好的鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）提取方法提供依据。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 新鲜鸡蛋购自成都农业科技职业学院实训中心。
应用辛酸硫酸胺法提取小鼠腹水和血清中的IgG抗体
应用辛酸硫酸胺法提取小鼠腹水和血清中的IgG抗体
白丽;钱金;王晶
【期刊名称】《大理学院学报（医学版）》
【年(卷),期】2000(009)004
【摘要】目的:从小鼠腹水和血清中纯化IgG抗体.方法:首先用辛酸沉淀小鼠腹水和血清中的非免疫球蛋白,然后用固体硫酸胺提取抗人T和B细胞白血病单克隆抗体(IgG1和Ig2b)和多克隆IgG抗体.结果:经SDS-PAGE和活细胞免疫荧光法鉴定,获得了纯度高、活性好的抗体,腹水中单抗的回收率达80%以上.结论:本方法是一种简单、价廉且有效的纯化小鼠腹水和血清IgG抗体的方法.
【总页数】2页(P3-4)
【作者】白丽;钱金;王晶
【作者单位】大理医学院微生物学及免疫学教研室云南大理 671000;大理医学院微生物学及免疫学教研室云南大理 671000;大理医学院微生物学及免疫学教研室云南大理 671000
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
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5.辛酸-硫酸铵法在纯化血清旋毛虫特异性IgG抗体中的应用 [J], 刘俊琴;申丽洁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
雏鸡抗新城疫病毒母源抗体半衰期的测定
雏鸡抗新城疫病毒母源抗体半衰期的测定
王锡乐;刘艳华;贾玉萍;崔治中
【期刊名称】《山东畜牧兽医》
【年(卷),期】2003(000)001
【摘要】某鸡场海兰褐蛋用雄性雏鸡,在出壳后不进行任何疫苗免疫,在不同日龄分别采集血清,测定其对新城疫病毒(NDV)HI抗体水平,以此来确定对NDV的母源抗体的衰减规律及半衰期.结果表明,雏鸡在1～4日龄期间,其母源抗体HI滴度维持在26以上,但在7、12、20日龄时,分别降至24.54、22.83、20.17,28日龄则完全消失.根据这些数据推算,蛋用雏鸡血清中对NDV的母源抗体的HI滴度的半衰期为2.19 d左右.
【总页数】2页(P12-13)
【作者】王锡乐;刘艳华;贾玉萍;崔治中
【作者单位】山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018
【正文语种】中文
【中图分类】S85
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明利;宋敏训;王莉莉
3.蛋用型和肉用型雏鸡抗新城疫病毒母源抗体半衰期测定 [J], 王锡乐;刘艳华;王建新;崔治中
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辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G
辛酸—硫酸铵沉淀法提取免疫球蛋白G一、实验目的：1、了解蛋白质纯化的基本技术；2、学习辛酸—硫酸铵法纯化抗体的方法。
二、实验原理：根据免疫球蛋白的性质利用生物化学各种纯化方法进行抗体的纯化，主要有常规生物化学和特异性亲和层析两类方法。
本实验采用辛酸—硫酸铵沉淀法从动物血清中纯化抗体，纯度和回收率较高，且抗体活性不被破坏；同时此方法操作简便、周期短、成本低、不需要复杂的仪器设备，不仅使用于小量抗体的纯化，也适合大批量抗体的制备。
三、实验材料试剂和器材：1、实验材料：兔血清。
2、试剂：乙酸-乙酸钠缓冲液、10×磷酸盐-NaCl缓冲液、透析液、5 mol/LNaOH、0.1mol/L NaOH。
3、器材：电磁搅拌器、离心机、透析袋。
四、操作方法：1、动物血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释，0.1mol/L NaOH调整血清稀释液pH至4.5。
2、室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加辛酸（加入量为1L血清稀释液加25ml），滴加完后继续搅拌30min。
3、离心（10000转/分，20分钟）,收集上清液，弃去沉淀，上清液用滤纸过滤除去悬浮物，量体积。
4、按照10%体积加入10×磷酸盐-NaCl缓冲液，用5 mol/LNaOH调pH至7.4。
5、上清液4℃预冷10min，测量溶液总体积，在4℃按277g/L缓慢加入硫酸铵粉末（终浓度达到45%饱和度），边加边搅拌，加完后继续搅拌30min。
6、离心（5000转/分，15分钟）,弃去上清液，收集沉淀。
7、沉淀用少量透析液溶解（一般为原血清体积的1/10），透析并更换两次透析液。
8、透析后的抗体溶液在50～55℃水浴中加热20min，离心（5000转/分，20分钟）,上清液于-20℃保存。
辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体
辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体辛酸-硫酸铵法纯化单克隆抗体(一) 原理蛋白质在溶液中的溶解度取决于蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度 , 以及蛋白质分子带有的电荷。
如改变这两个因素 ,蛋白质就容易沉淀折出。
引起蛋白质沉淀的主要方法有(1) 盐析 , 即加入大量中性盐破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出 , 沉淀不同蛋白质所需盐浓度及 pH 值不同 ;(2) 生物碱以及某些酸类 , 在 pH 值小于等电点时可以与蛋白质形成不溶的盐使其沉淀 ;(3) 重金属离子如隶、铅、铜、银等 , 在 pH 值大于等电点时可以与蛋白质结合成不溶的盐使其沉淀 ;(4) 有机溶剂如酒精、甲醇、丙酮等 , 对水的亲和力很大 , 能破坏蛋白质水化膜 , 在等电点时使蛋白质沉淀。
辛酸 (caprylic acid) 在偏酸条件下能与血清或腹水中除IgG外的其他蛋白质结合并将其沉淀下来 ,IgG 则溶于上清液中 , 再用硫酸镀盐析 , 即可达到纯化 IgG 的目的。
辛酸 -硫酸铵法是目前实验室中较常用的纯化单克隆抗体的方法 , 利用该方法纯化单克隆抗体 , 回收率和纯度都可达 80% 以上。
(二) 试剂和器材1. 试剂(1) 小鼠腹水。
(2) 硫酸铵或饱和硫酸铵溶液。
称 (NH4)2S04(AR)400~425 克 , 以 50 ℃~80 ℃蒸馆水 500ml溶解 , 搅拌 2O min, 趁热过滤。
冷却后以浓氨水 (15M NH40H) 调 pH 值至 7.4 。
配制好的饱和硫酸铵, 瓶底应有结晶析出。
(3)0.06M pH 4.8 醋酸盐缓冲液。
贮存液 : A 液 ,0.06M NaAc: 无水 NaAc0.49218g 加蒸馆水至 100mlB 液 ,0.06M HAc: 冰醋酸 0.344ml 加蒸馆水至 100ml应用液 : 取上述 A 液 59ml 与 B 液 41ml 昆合 , 用 5M NaOH 调 pH 值至 4.80.(4)0.lM pH 7.4 磷酸盐缓冲液 (PBS). 取 Na2HP04 ·12H20 28.94g,KH2P04 2.61g, 加蒸馆水至 100Om1(5) 含 137mM NaCl 2.6mM KCl 0.2mM EDTA 的 pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS): 取 Na2HP04 12H20 28.94g KH2P04 2.61g NaC1 8.Og 、 KCl 0.2g EDTA 0.06g, 加蒸馆水至 100Oml2. 器材普通冰箱、低温离心机、电磁搅拌器 , 紫外分光光度计、天平 ; 透析袋、塑料夹、精密 pH 试纸 ; 烧杯、量桶、吸管、滴管、小瓶等。
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Ｏ 瑚） 样 品稀释倍数。 Ｄ ×
关键词 ： 鸡新城 疫病毒 ； Ｇ Ｓ Ｓ Ｐ Ｇ ； ； 白浓度 ； Ｉ ； — Ａ Ｅ 纯度 蛋 ｇ Ｄ 效价
中图分类号 ：８８３ 文献标识码 ： 文章编号 ： ０ —８８ （ｏ ８ ｏ ． ０ ６— ２ ￥ ５ ．１ Ａ １ １ ５ １２ ｏ ） ４ ０ ８ ０ ０
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Ｉ ｇ Ｇ广泛应用于生命科学 的许多领域 ， 特别是用于 医学和兽医学上的诊断和治疗。Ｉ ｇ Ｇ主要来源于动物血
ｒｎ １００ｇ ａ ， ０ 离心３ ｉ； ｉ ０ ０ｒｎ取上清 ， １１ 体积 １ Ｐ Ｓ ａ 加 ／０ ０ Ｂ， Ｘ 调ｐ Ｈ至７４ ．。按每毫升混合液加入硫酸铵液 ０２７ｇ４ ．７ ， ℃搅拌 ３ ｉ， ０ 离心 １ ｉ。取沉淀溶于少量 ０ ０ｒｎ５ ０ｇ ａ ０ ５ｒｎ ａ ． ０５ｍ ｌＬ氯化钠溶液 ， ０ ｏ ／ 置相 同溶液透析 ４ ， ６ｈ ８ｈ 每 更 换透析液。 １４ 抗体效价的测定 ． 采用血凝抑制试验 检 测抗体 纯化前 、 后的效价 ， 样品均设 ３ 个重复。 １５ 血清及 Ｇ的蛋白浓度测定 ． 采用紫外分光光度 计法 ， ｕ Ｊ用 Ｖ一 ２０ ００型紫外分光光度计测定蛋 白质的 浓度 ， 公式 为 Ｉ ｍ ／ Ｌ ｇ Ｇ（ ｇ ｍ ）＝（ ．５ＸＯ ２ —０ ７ １ ４ Ｄ８ ０ ．４Ｘ
ｐｏ ｉ ；ｈ ｕｉ ｆ ｒ ｅ ｅ ｒ ｕｉｃｔｎＷ ．０２ｍ ｍ ， ｎ ｆ ｒ ｕｆ ａｏ ａ ．３ ｓ ｍ ｉ Ｖ ｄｔ ｔｎ ｔ ｒｅｎ ｔ ｐ ｒｙｏ ｐｏ ｉ ｂｆ ｐ ｒｉ ｉ ａ ４ ６４ ｓＥ ａｄａ ｅ ｒｉ ｔ ｎＷ ５９ ３ｍ ｔ ｅ ｔ ｔｎ ｏ ｅ ｆａｏ ｓ ５ ／ ｔ ｐ ｉｃ ｉ ｓ ／ Ｌｗｔ Ｕ 非抗体蛋白和脂类物质 ， 为消
除实验研究中的一些非特异性干扰 ， 特别是在治疗时 ， 应 避免由杂蛋 白引起机体的变态反应 ， 必须对其纯化。血
清中 Ｉ ｇ Ｇ的提取和纯化方法很多 ， 但是各有其优点与不 足。单一辛酸法和硫酸铵法操作简单但提取的 Ｉ ｇ Ｇ纯度 不高 ， 方法比较繁琐 ， 而且费时。柱层析可获得高纯 的抗 体， 但成本很高 ， 且回收率低 。本试验应用辛酸硫酸铵法
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（ 山西农业大学 ， 山西 太谷 ０ ００ ） ３８ １
摘 要： 用辛酸硫酸铵法对鸡血清中的抗新城疫病毒 Ｉ ｇ Ｇ进行了提取和纯化。提纯后的抗体纯度较高， 但仍有杂蛋 白 存
在； 紫外法测得 纯化前血清的蛋 白浓度为 ４ ．０２ｍ ／ Ｅ， ５ ６４ ｓｍ 纯化后 为 ５９ ３ｍ Ｌ 纯化前、 Ⅲ 的效价分别为 ２ １、～。 ．３ ｍ ； 后 ＿ ２ 。
维普资讯
江西农业学报
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辛酸 硫 酸铵 法提 纯鸡 抗新 城疫 病 毒 （ Ｄ ＩＧ 效 果 观察 Ｎ Ｖ）ｇ
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