新城疫病毒的分离鉴定
新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定
Ｉｏａｉｎ ａ ｄ Ｉ ｅ ｔ ｉ ｔ ｎ ｏ ｓ ｌｔ ｎ ｄ ｎ ｉｃ ｉ ｆ珈 曲 Ｖｉｕｅ ｔＮ ｗｃ ｓ ｅＤ ｓａ ｅ Ｖｒ ｓｉ ｈ ｎ ｏ ｇ Ｐ ｏ ｉ ｃ ｏ ｆａ ｏ ｒ ｌ ｅ ａ ｔ ｉ ｓ ｉｕ Ｓ ａ ｄ ｎ ｒ ｖｎ ｅ ｎ ｌ ｅ ｎ
ｔ ｌｅ ｒｉ ｄ ａｚ
ｓ ｒ ｅａ 出ｅ ｅｅｓ ｌ ｋｌｃ ｉｋ ｎｅ ￣ｏ ．ｈ ｓ ｏａｍ ｅｅ ｍ ｎｄ ｔ ｂ ｅ ｓｅｄｓａｅｖｒ ａｅ ｎ５ ％ ａｅａｔｓｒ ， ｖｗ ｒ ｔｌ ｂｅｔ ｉ ｈｃｅ ｍｂ ｓ Ｔ ｅｅｉ ｌｔ ｗ ｒ ｃ ￣ｎ ｅ ｅ１ ｗ ａｄ ｌｅｓ ｉ ｓｂｓ ｄｏ ０ ｉ ｆ ｌ ｉａ ｏ ｌ ｓ ． ｏ ％ ｕ
Ｋｅ ｏ ｄ ：ｈ ＇ ａｆ ｉ ａ ｅｖ ａ ； Ｈｉ ｖｒｌｎ ｔ ｉ； Ｉ ｌ ｉｎａｄ ｉｅａｆ ａ ｏ ｙ ｗ ｒｓ ｅ， ｓ ｅｄｓ ｓ ｉ ｓ ， ｌ ， ， ｅ ｅ ｒ ｉ ｅｔ ｒ ｎ ｕ ｓａ ｓ ａ ｏ ｎ ｔｉｃ ｔ ｎ ｏｔ ｄ ｉ ｉ ．
自 １９ ９ ７年 冬 季 来 在 全 国部 分省 市 的鸡 群 中 流行 一种 以呼 吸道 、 化道 牯 膜 出血 为 典型 症 状 的 消
株 ）淄博 （ 株） 、 ７号 等地的发病鸡 群 的肝脏 、 脏及肺 脾
脏 其 中 ， 滨州 （ 号株 ） Ｂ照株（ １ 和 ３号株 ） 的病料 采 自大批 发 病死 亡 的 成年 鸡 群 ， 淄博 株 （ 株 ） 自 ７号 采
Ａｂ ａ ：７ｉ ｌｔｓｏ ｒｓｓｗ ｒ ｌｅ ｒｆ ７ｃ ｉｋ ｎｆ ｅｓｗｉ ￣ｇ ｅｂｄ￣ ａ ｄｍ ｒ ｌｙｅ ｔ ｉｕ ｉ ａｅ． ｈｓ ０ａ ａｅ ｓｒｄ ｓ ａｅ ｆ ｔｅ ｅｅｉ 越 ｄｆ ｉ ｈｃ ｅ ｏｋ 出 ｔ ｈｒ ｒｉ ｏ ｔ 舯 ｏｔ ｌ ｉ ｎ ｉ ｎ ｏｔ ｉ ｏａ ｏｓｄｓ ｓ Ｔ ｅｅｉ ｌｂ 工 ａｔ ｇ ｅ ｓ
新城疫病毒广东基因Ⅶ型分离株的分离鉴定及F基因克隆与序列分析
１ ． ２ ． １ Ｆ基 因 引物 设 计 与合 成 根 据 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ中 的鸡 源 ＮＤ Ｖ Ｆ基 因核 苷酸 序 列 ， 设 计 特 异性 引物 ，
刘佳佳 ，严专强 ，刘 迪 ，李欣莲 ，覃健萍 ， 谢 青梅 ，毕英佐 ，薛春 宜 ， 陈 峰¨
（ １ ． 华南农业大学动物科学学院 ， 广东广州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ； ２ ． 广 东 温 氏食 品 集 团 股 份有 限公 司 ， 广东云浮 ５ ２ ７ ４ ３ ９ ； ３ ． 中 山 大 学 生 命科 学 学 院 ， 广东广州 ５ １ ０ ０ ０ ６）
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料
世界公认 的两大最 重要 的禽 类传 染 病 之一［ １ ］ 。其 病
原 ＮＤ Ｖ属 Ｒ ＮＡ 病毒 中的单股 负链 病 毒 目， 副黏 病 毒科 ， 禽腮 腺炎病 毒属 ， 又名 禽副 黏病 毒 Ｉ型 （ Ａｖ ｉ ａ ｎ
ｐ ａ ｒ ａ ｍｙ ｘ ｏ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ １ ， ＡＰＭ Ｖ一 １ ） Ｅ 引。
Ｍａ ｒ ｋ ｅ ｒ ＤＬ ２ ０ ０ ０宝生物 工程 （ 大连 ） 有 限公 司 。
１ ． ２ 方 法
近年 来 ， 新 城疫 在我 国部分 省市 鸡 群频 频暴 发 ， 给 养禽业 造 成 了严 重 的经 济 损 失 。ＮＤ Ｖ 基 因 型众 多， 病毒毒 力不 断增 强 ， 造 成该 病 防控 难度 较 大 。本
ｍＬ ／ Ｌ鸡红 细胞 和灭 菌生理 盐 水 由本 实 验 室按 照 常
Ｎ ＤＶ包 括 ６个 基 因 片段 ， 编 码 至 少 ７个 蛋 白。
Ｆ蛋 白是 主要 的宿 主保 护性 抗 原 ， 可诱 导 机 体 产 生 中和抗 体 ， Ｆ蛋 白裂 解 位 点 的 差 异 与病 毒 的毒 力 直 接相 关 ， 根 据 Ｆ基 因序列 分析 ， 所有 强毒株 裂解 位点
一株新城疫病毒的分离鉴定及其F基因的克隆与序列分析
特 性 和 致 病 性 进 行 了 分 析 ， 并 对 Ｆ 因进 行 了研 究 ， 旨从 基 分 子 水 平 阐 明 各 毒 株 问 的 异 同 ，为 该 病 的 防 控 及 分 子 流 行 病 学研 究奠 定 基 础 。
参 考文献
９１，１ 样 品呈 假 阳 性 ； 其 余 样 品 均 为 阳 性 。 ，Ｏｌ号
２１ ０ １年第 ４期 （ 总第 １ １期） ７
试验研 究
一
株新城疫病毒 的分离鉴定及其Ｆ 因的克隆与序列分析 基
苏文 政 ① ② 牛 钟 相 ① 张 琳 ② 朱 荣 生② 韩 红②
泰安 ２ １ １ ② 山东省 农 业科 学院 畜牧兽 医研 究所 ７ ０８ 济南 ）
（ 山东农业 大学动 物科技 学院 ①
据 。根 据 上述 方 法 计 算 可 以得 到 １ 号 样 品 为 阴 性 ； ２
免疫力外 ，猪场 中 的技 术人 员还应 定期做一 些血清 学检 测 ，随 时 了解猪 体 内的各种抗 体含量 ，这对 以后制定 一
项 适 合 本 猪 场 的 免 疫 程 序 会 有 很 大 的 帮助 。
中图分类号 ：￥ ５ ． ８ ２６ ９ ５
新 城 疫Ｄ） 由 新 城 疫 病 毒 ｌ ｅ 是
（ ｅ ｃ ｓｅＤ ｓａｅＶｒｓ Ｎ ｗ ａｔ ｉ ｓ ｉ ，ＮＤ ￣ 起 的 禽 类 一 种 急性 、 败 ｌ ｅ ｕ Ｖ） ｆ 血 性 传 染 病 ，世 界动 物 卫 生 组 织 （ Ｉ） 其 列 为 对 畜 禽 危 ＯＥ将 害 最 大 的 Ａ类 传 染 病 之 一 【，其 病 原—－ Ｖ属 于 副 粘 病 毒 “ ＮＤ 科禽 腮腺炎 病毒属 ，为有 囊膜的 负链Ｒ ＮＡ病 毒 口。ＮＤＶ 】 基 因 组 为 单 股 不 分 节Ｒ Ａ，编 码 ６ 结 构 蛋 白 ，其 中融 合 Ｎ 种
一株鸽新城疫病毒的分离鉴定
粒抽提试剂盒 、Ｄ Ａ Ｎ 凝胶 纯化试剂盒ＩＴ Ｐ Ｇ、Ｘ ｇｌ Ｎ — ａ、Ｒ Ａ酶 抑 ２ ３ 病毒毒力测定 结果 ． 制剂 、Ｅｏ Ｎ ａ ｅ Ｄ ２０ 、 ｃＲＩ 和Ｄ ＡＭ ｒ ｒ Ｌ ００ 氨苄青霉素和Ｄ Ｐ 均购 ２ ３ １ Ｍ Ｔ ４ 结 果 取 １ 一一１ － 释度分 离 、纯化 的病 ｋ ＥＣ ． ． Ｄ ＇ 定 ￣ ０ ０９ 稀 白上海生工生物工程技术服务有限公司。 １ ２ 方 法 ． １２１ 病毒分 离、噬斑纯化 参照文１ ４ ．． ￣１ Ｊ 方法进行 。 １２２ 血清学鉴定 用 Ｂ一 数微量法测定尿囊液 Ｈ 效价 ， ．． 半 Ａ
用Ｎ Ｖ、Ｈ 、Ｈ 、Ｅ Ｓ ７ 标准 阳性血清进行ＨＩ 。 Ｄ ５ ９ Ｄ 一６ 试验
毒 ，每个稀释度 接种５ ０ 龄Ｓ Ｆ 只１ 只 Ｐ 鸡胚 ，０ ｌ ，照蛋３ ．ｍ／ １ 只 次／
ｄ ，间隔８ｈ ，共观察７ｄ ，记 录鸡 胚死亡时间 ，结果详见表 １ 。 结果 表明 ，引起鸡胚死亡 的最高稀释 度（ Ｄ 在 ｌ ～，计 算得 ＭＬ ） ０
Ｍ Ｔ １９６ 。 Ｄ 为 ２ ．ｈ
２ ３ ２ ＩＰ 测定结果 ． ． Ｃ Ｉ
取１ 日龄雏鸡 １ 只 ，各脑 内注射 １ 。 Ｏ ０。 稀
１２ ３ 病毒毒 力测定 ． Ｄ 和ＩＰ测定 ： 照 《 ．． Ｍ Ｔ ＣＩ 参 中华人 民共 释度 的纯 化尿囊液００ ｌ ． ｍ 。另取２ 以同样方法 注射稀释病毒 ５ 只 和国出入境检验检疫行业 标准 》（ ／１１２０ ２ 规定 的标 准 用 的生理盐水 各００ ｌ Ｓ Ｔ １０ ２０） Ｎ ．５ｍ 。接 种后 ，每天在相应接 种 的时间观 方法进行 。 察 ，记录雏 鸡 的情 况 ，分 正常 （ 动灵 活 ，行动无 共济失 调 活 １ ２ ４ 引物设计 、合 成 和基 因测序 根 据Ｇｅ Ｂ ｎ 上 已发 现象 ）、发 病 （ 括麻痹 、卧地不起 ，但 不包括 只表现迟 钝 ． ． ｎ ａｋ 包 表 的Ｎ Ｖ Ｆ Ｄ 基闪全基 闪序 列 ，利用ｐｉ ｅ ５ 软件 自行设计 了 ｒ ｒ． ｍ ０ 的鸡 ） 和死亡 。观察８ｄ（ 结果见表２），计算正常 、发病 、死 引 物 ，由上 海生 工 生物 工 程技 术 服务 有 限公 司合 成 ，序 列 鸡 的总数 ，根据 不同的权值 （ 常为０ 正 、发病 为 １ ，死 为 ２ ），累计 总分数 ， 计算得ＩＰ为０ ８。 Ｃ Ｉ ． ７ ２
肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａ Ｎｅ ａ ｔ ｓ ａ ｅ Ｖｉ ｓ ｉｏａ ｅ ｎ ｍｅ Ｎ ８ ｗａ ｏｌ ｃｅ ｏ ｐ ｇ ｏ ｎ Ｓ ａ ｄ ｎ ．Ｆ ｇ ｎ ｆｔ ｅ ｓｒ ｃ ： ｗｃ ｓ ｅ Ｄｉ ｓ ｒ ｓ ｌｔ ａ ｄ Ｊ ０ ｓ ｃ ｌ ｔ ｄ ｆ ｍ ｉｅ ｎ ｉ ｈ ｎ ｏ ｇ ｅ ｅ ｏ ｈ ｌ ｅ ｕ ｅ ｒ ｉｏａｅ ｗａ ｌ ｎ ｄ ａ ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｄ ｔ ｔ ｄ ｔ ｌ ｃ ｌｒ ｃ ａ ａ ｔｒ ａ ｏ ｎ ｅｅ ｉ ｒ ａ ｉｔ ｎ Ｊ ８ ｐ ｒ ｅ ｙ ｓ ｌ ｔ ｓｃ ｏ ｅ ｎ ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ ｓｕ ｙ ｉ ｍｏ ｅ ｕａ ｈ ｃｅ ｉ ｔ ｎ ａ ｄ ｈ ｒｄ ｔ ｙ ｖ ｒ ｉ ． Ｎ０ ｕ ｆ ｄ ｂ ｓ ｒ ｚｉ ａ ａｏ ｉ ｉ
离较 远 。
关键词： ； 城疫病毒； 鸽 新 Ｆ基 因 ； 子 特性 分
中图 分类 号 ： ８ ８３ ￥ ５ ．９ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ４ ５ ４（ ０ ０） — ０ ０ ０ １ ０ —１ ２ ２ １ ０１ ０ ２ — ５
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ，ｄｅ ｔｆｃ ｔｏ ａ ｄ ｏ ｅ ｕ ａ ｈ ｒ ｃ ｅ ｉ ａ ｉ ｎ ｆ ｒＦ ｅ ｆａ Ｎｅ ａｓ ｓ ｌ ｔｏ ｉ ｎ ｉ ａ ｉ ｎ ｎ ｍ ｌｃ ｌ ｒ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｚ ｔｏ ｏ ｇ ｎｅ ｏ ｗｃ － ｉ ｔｅ Ｄｉｅ ｓ ｒ ｓ ｉｏ ａ ｅ ｆ ｏ ｐｉ ｅ ｎ ｎ Ｓｈ ｎ ｎ ｉ ｓ ａ ｅ Ｖｉｕ ｓ ｌ ｔ ｄ ｒ ｍ ｇ ｏ ｉ ａ ｄｏ ｇ
一株新城疫病毒的分离和鉴定
１ ． ９ 特 异 性 试 验
取 湖 南 省 永 州 市 某 发 病 鸡 场 送 检 的 组 织 病 料 加 入 约 ５倍
公式 Ｉ Ｃ Ｐ Ｉ ＝ ８ ｄ累 计 发 病 数 ｘ ｌ ＋ ８ ｄ累计 死 亡 数 ｘ ２ ／ ８ ｄ ｘ 试验鸡数 ． 计算该毒株 的 Ｉ Ｃ Ｐ Ｉ 。 １ ． ８ 病毒含量一 鸡胚 半数 致 死 量 （ Ｅ Ｌ Ｄ ） 的 测 定 取 含毒鸡胚 尿囊液 用灭菌 生理盐水 １ ０倍 系 列 稀 释 ．取
传 ３代 分 离到 该 毒 株 ，命 名 为 ＮＤＶ Ｙ Ｚ 株 ，对 病 毒 进行 一 系
列 的 鉴 定 ，结 果 证 明该 毒 株 为 新城 疫 强毒 株 。
关键 词 ：新 城 疫 病 毒 ；分 离 ；鉴 定
取 含 毒 鸡 胚 尿囊 液用 灭 菌 生理 盐 水 １ ０倍 系列 稀 释 （ １ ０ 。 ～ 鸡 新城 疫毒 （ Ｎ ｅ ｗ ｃ ａ ｓ ｌ ｔ ｅ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，Ｎ Ｄ） 是 由鸡 新 城 疫 病 毒 （ Ｎ ｅ ｗ ｃ ａ ｓ ｔ ｌ ｅ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｎ Ｄ） 引 起 ，是 危 害 养 禽 业 最 重
疫 病 防治
湖 南省 宁远 县 畜牧 水产局 ４ ２ ５ ６ ０ ０ ）
Ｉ ． ５ ＲＴ—Ｐ ＣＲ 鉴 定
摘 要 ：临 床 送检 的 鸡 场 发 病 鸡 病 料 ．根 据 临 床 症 状 和 实 验 室 ＲＴ－ Ｐ ＣＲ 检 测 为 新 城 疫病 毒 感 染 ．用 １ ０ 日龄 Ｓ Ｐ Ｆ鸡 胚 连 续
白鹭源新城疫病毒的分离与鉴定
基 金 项 目 ： 西特 聘 专 家专 项 经 费（ ０ １ ００ ； 家百 千 万人 才 工程 入 选 专项 资金 （４ ２ ０ ０ ） 桂 科 攻 １２ ０ ７４ 同 广 ２１Ｂ ２） 国 ９ ５０ ６ ３ 和 １ ３ ０—共 资 助 作者简介 ： 陈安 莉 （９ ４ ） ， 西 玉林 人 ， 士 研 究 生 ， 要 从 事禽 病 防 治 与病 原 分 子 生 物 学研 究 。 ＊通 讯 作 者 １８ 一 女 广 硕 主
１２６ Ｒ —Ｃ ． ． Ｔ Ｐ Ｒ检 测 取 第 ３代 Ｓ Ｆ鸡 胚 尿 囊 液 Ｐ
行 病毒 ＲＮ 抽 提 ， 反 转 录成 ｃ ＮＡ， 别 用 能 扩 Ａ 然 Ｄ 分 增 出所 有 １ ６种 Ｈ 亚 型 的 Ａ 型 禽流 感 通 用 引物 ［ 、 ５ ］ 新 城疫 强毒 和弱 毒 通 用 引物 、 城 疫 强 毒 特 异 性 引 新
１０ ２
动 物 医学 进 展
２１ ０ ２年
第３ ３卷
第 ７ （ 第 ２９ ） 期 总 ２期
胞凝 集试 验 ， 现 凝 集 者 判 为 阳 Ｄｏ ｅｃ Ｉ ５。
病料 进 行研 磨 ， 再将 研 磨 液过 滤 除菌 后接 种 Ｓ Ｆ鸡 Ｐ 胚， 增殖病 毒 ， 然后用 新城 疫病 毒 阳性 血清 和 多种 禽 流感 Ｈ 亚 型 阳性 血 清分别进 行 ＨＩ 测 。 检
国兽 医药 品监 督所 ；Ｐ Ｓ Ｆ鸡胚 购 自北京 梅 里亚 公 司 ； ＴＲ ｚｌ ＳＲｅｇ ｎ 购 自 Ｉｖｔ ｇ ｎ公 司 ； Ｉｏ ａ ｅ ｔ Ｌ ｎ ｉｏ ｅ ｒ ＡＭＶ 反 转 录 酶 、 ｉｏ ｕ ｌ ｓ ｎ ｉｉ ｒ ｄ Ｒ ｂ ｎ ｃｅ ｅＩ ｈｂｔ 、 ＮＴＰ购 自 Ｔａ — ａ ｏ Ｋａ
为 １ ０ ／ ． Ｏ １ｍＬ。
一例新城疫的实验室诊治报告
汇报人： 日期:
目 录
• 病例介绍 • 实验室检测 • 诊断结果 • 治疗方案 • 预防措施 • 结论与建议
01
病例介绍
病例来源
01
患者：雄性，2岁6个月，体重约20公斤。
02 发病时间：2022年11月10日
03 发病地点：某养殖场
病例症状
初期症状
发热，精神萎靡，食欲减退
环境样本
采集鸡舍、饲料和水源等环境样本。
样本处理
血液样本
将血液样本离心分离血清，用于抗体 检测和病毒分离。
拭子样本
将拭子样本放入病毒保存液中，进行 病毒分离和鉴定。
检测方法
抗体检测
采用ELISA或HI等方法检测血清中 的新城疫抗体，以评估鸡群的免 疫水平。
病毒分离
将拭子样本接种到鸡胚或细胞培养 ，观察病毒的增殖和病变情况。
检测了病鸡血清中的新城疫抗体，发现抗体水平低或阴性。
免疫状态
根据血清中抗体水平，评估鸡群的免疫状态，发现部分鸡只未免疫或免疫不足。
分子生物学结果
基因序列分析
对新城疫病毒的基因序列进行分析，发 现病毒与国内其他新城疫病毒株的基因 序列存在差异。
VS
耐药性分析
检测了病毒对常用抗病毒药物的耐药性， 发现病毒对某些药物表现出耐药性。
病毒分离与鉴定
从病鸡体内分离出新城疫病毒，并进行基因测序 和抗原性分析，确认病毒的毒株和来源。
传染源和传播途径
调查发现，病毒可能通过空气、飞沫、接触等途 径传播，但具体传染源还需进一步调查。
建议的后续研究方向和临床应用价值
深入研究病毒的变异情况
01
进一步研究病毒的基因组变异情况，以及与不同毒株之间的差
新城疫病毒的分离与分子生物学分析
新城疫病毒的分离与分子生物学分析新城疫病毒是一种高致死性的病毒，可引发严重的肺炎和急性呼吸道综合征。
自2002年首次在广东出现以来，已经在全球范围内导致了大量感染病例和死亡事件。
在这篇文章中，我们将讨论如何通过分离和分子生物学分析来研究和控制该病毒的传播。
分离新城疫病毒的方法主要包括病人呼吸道标本、血液和尿液等样本的采集和处理。
采集样本的过程必须要遵循一定的操作规范，以确保样本的纯度和完整性。
一旦获得样本后，需要进行初步的分离和纯化，通常采用细胞培养和血清学检测等方法。
细胞培养可以帮助检测新城疫病毒的生长和增殖情况。
以Vero细胞（一种绿猴肾细胞）为例，将样本接种在细胞上，若出现细胞变形、聚集等现象，则说明可能存在病毒污染。
除了细胞培养，还可以通过血清学检测来初步诊断新城疫病毒感染。
检测方法包括免疫荧光抗体（IFA）、酶联免疫吸附测定（ELISA）等。
然而，这些方法只能用于初步筛查，无法确诊新城疫病毒感染。
因此，需要进一步进行分子生物学分析，以明确是否存在新城疫病毒的感染。
分子生物学分析包括核酸检测、基因测序和病毒进化等方面。
其中核酸检测是最常用的方法，包括聚合酶链反应（PCR）、实时荧光PCR、基因芯片等。
这些方法依靠特异性引物或探针在样本中扩增病毒RNA或DNA并定量检测，可以快速、准确地确定新城疫病毒的感染情况。
基因测序是了解病毒的遗传特征和进化过程的重要手段。
通过对新城疫病毒的基因序列进行测定和分析，可以了解其基因型及变异特征。
此外，还可以通过比对不同病毒的基因序列，研究新城疫病毒的进化和传播规律。
例如，近年来新城疫病毒在中国境内的基因型已有较大的变异，有些甚至与在南亚和东南亚地区发现的菲律宾地鼠疫病毒比较相似，进一步增加了疫情的复杂性和危害性。
总之，通过分离和分子生物学分析，可以深入研究新城疫病毒的生物学特征、进化和传播规律，进而为预防和控制该病毒的传播提供重要的科学依据。
郑州地区新城疫病毒的分离与鉴定
Ｎ Ｖ致 病性 越 强 ． 强毒 力的 Ｉ Ｐ 接 近 ３ ０ 而 弱毒 型毒力 的 Ｉ Ｐ 为 ０ Ｄ 最 ＣＩ ．， ＣＩ 。
３ 讨 论
本 研 究通 过 Ｈ １ Ｉ等 一 系 列 试 验 ， 郑 州 市 ４个 县 Ａ／ Ｉ － 从 （ ）５个 养 禽 场 ６ 市 １ ５份 疑 似 新 城 疫 病 料 中 分 离 和 鉴 定 出 １ ０ 株 ＮＤ Ｖ。根 据 目前 ＮＤ 毒 力 判 定 标 准 ， ｌ Ｖ 对 ０株 分 离 毒 株 ＭＤ ＩＰ 和 Ｉ Ｐ 检 测 结 果 表 明 ， Ｔ、Ｃ Ｉ Ｖ Ｉ ２个 分 离 株 （ Ｙ 、 Ｍ３ Ｘ ２Ｚ ） ＭＤ Ｔ为 强 毒 株 ， 其 余 毒 株 为 中 等 毒 力 毒 株 。通 过 这 些 数 而 据表 明 ， 州 地 区 现 在 的 新 城 疫 流 行 情 况 主要 以 中 等 毒力 毒 郑 株 为 主 ， 一 结 果 与 发 病 的 临 床 表 现 比较 符 合 。 这 近 年 来 发 现 ， Ｉ 体 效 价 的 高 低 往 往 不 能 完 全 代 表 鸡 Ｈ 抗 的免 疫 状 况 ， 的鸡 Ｈ 抗 体 效 价 很 高 ， 不 能 保 护 强 毒 的攻 有 Ｉ 但 击， 而有 的鸡 ＨＩ 体 效 价 很 低 或 检 测 不 到 ， 能 抵 抗 ＮＤ 抗 但 Ｖ 的感 染 。 本 研究 同 时 对 发 病 鸡 群 新 城 疫 抗 体 水 平 进 行 了检 测 ， 果 显 示 ， Ｉ 体 效 价 在 ２ ～２ 之 间 的病 鸡 群 均 可 以分 结 Ｈ 抗 离 出 Ｎ Ｖ。鸡 群 在 新 城 疫 较 高 抗 体 水 平 下 仍 有 新 城 疫 发 Ｄ 生 ， 明 新 城 疫 免 疫 可 能 存 在 不 合 理 现 象 ， 者 鸡 群 中 流行 表 或 的 Ｎ Ｖ 侵 袭 力 可 能 发 生 了变 化 【 。 Ｄ ５ Ｊ ＮＤ 的发 生 和 流 行 除 与 饲 养 管 理 不 当 、 苗 质 量 、 同毒 疫 不 株 混合 感 染 和免 疫 程 序 不 当等 因 素 有 关 外 ， 城疫 病 毒 发生 新 部 分抗 原 变 异 可 能 是 一 个 很 重 要 的 原 因 。这 种 现 象 给 防治 ＮＤ带 来 很 大 的 困 难 ， 仅 要 防 治 和 扑 灭 已经 存 在 和 流 行 的 不 强毒株 ， 更要 监 控 弱 毒 株 ， 防 弱 毒 株 转 变 为 强 毒 株 。 我 国 预 对 Ｎ 的 预 防 和 控 制 主要 依 据 疫 苗 免 疫 。 由 于 Ｎ 基 因 型较 Ｄ Ｄ 多 ， 苗 免 疫 并 不 能 保 证 免 疫 效 果 ， 且 在 较 大 的 免 疫 压 力 疫 并 下 ， Ｖ 可 能会 发 生 新 的 变 异 。 梁 荣 等 【 对 我 国 西 北 地 区 ＮＤ ６ 的 Ｎ Ｖ 进 行 分 析 时 发 现 ， ａｏａ 苗 对 某 些 病 毒 具 有 免 疫 Ｄ ＬＳｔ疫 保 护 功 能 ， 对 其 他 一 些 病 毒 保 护 却 很 弱 。近 年 来 ， 中 国 而 从 和 台 湾地 区分 离 的毒 株 分 析 ， Ｉ 因 型 毒 株 成 为 我 国 的 主 ＶＩ 基
新城疫病毒的分离鉴定
青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目：新城疫病毒的分离家鉴定姓名：王梅州学院：动物科技学院班级：马业科学1201班学号： 20121658 任课教师：温建新二0一四年四月十五日新城疫病毒的分离鉴定马业科学1201 王梅州任课教师温建新摘要：病毒的分离鉴定在兽医研究中长用于禽源病毒的分类、培养、生物学特性鉴定、疫苗制备和药物筛选等工作。
是防疫、确诊病毒类疾病的重要手段。
关键词：新城疫病毒接种鸡胚引言：鸡胚的优点是，来源充足价格低廉，操作简单，无需特殊设备和条件，乙肝病毒谱较广，对接种病毒不产生抗体等。
新城疫是禽类的一种急性、高度接触性传染病，由一种侵害呼吸道、肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒引起。
NDV属于副黏病毒科的腮腺炎病毒属成员，有囊膜，表面有纤突，内含血凝素神经氨酸酶和融合蛋白。
NDV有血凝特性，能凝集禽类、两栖动物、爬行动物等多种动物的红细胞以及人的O型红细胞。
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引言.................................................. 错误！未定义书签。
1 材料 (1)1.1 鸡胚 (1)1.2 病毒 (1)1.3 实验试剂 (1)1.4 实验器材 (1)2 实验方法 (1)2.1鸡胚的选择和孵育 (1)2.2 鸡胚接种前的准备 (1)2.2.1照蛋 (1)2.2.2 消毒 (1)2.3 鸡胚接种 (1)2.4 接种后的观察 (1)2.5 微量α法血凝抑制试验 (2)3 结果观察 (2)4 结论 (3)参考文献 (3)1 材料1.1鸡胚9-11日龄SPF或非免疫ND疫苗种鸡所产的白壳鸡蛋1.2 病毒待捡病毒液1.3 实验药剂NDV阳性血清、1％鸡红细胞悬液、生理盐水1.4 实验器材微量移液器及吸头、石蜡、照蛋器、打孔器、注射器、孵化箱、蛋架、镊子、酒精灯、96孔“V”形微量反应板2 实验方法2.1 鸡胚的选择和孵育选取9-11日龄的正常鸡胚2.2 鸡胚接种前的准备2.2.1 照蛋用照蛋器照蛋，根据鸡胚的纹理用铅笔标出气室位置及气室打孔部位，并在气室底边胚胎附近无大血管除标出接种部位。
山东地区新城疫病毒分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析
ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ Ｆ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｓ ｈ ａ ｒ ｅ ｄ ａ ｖ ｅ ｌ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ｍ ｏ ｔ ｉ ｆ Ｒ Ｒ Ｑ Ｋ Ｒ Ｆ… ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｃ ｌ ｅ ａ ｖ ａ ｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｅ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｗ ｅ ｒ ｅ
ｃ ｏ ｉ ｎ ｃ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｗｉ ｔ ｈ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｉ ｎ ｄ ｅ ｘ ． Ｐｈ ｙ ｌ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ Ｓ Ｄ０１ ・ Ｓ Ｄ０ ４ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｖ ｉ ｒ ｕｓ ｅ ｓ ｄ ｅ ｉｖ ｒ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｃ ｈ ｉ ｃ ｋ ｅ ｎ
摘要： ２ ０ １ １年 从 山 东 不 同地 区 的 发 病 鸡 体 内分 离 到 ４株 新 城 疫 病 毒 ， 分别命名 为 Ｓ Ｄ Ｉ～Ｓ Ｄ ４ 。４株 毒 株 经 病 毒 蚀 斑 克 隆 纯 化 后 动 物 回归 试 验 可 产 生 典 型 的 Ｎ Ｄ Ｖ病 变 ； 为 了 解 其 遗 传 起 源 和 分 子 特 性 对 其 融 合 蛋 白（ Ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ， Ｆ ） 进 行 序
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
２ ０１ １ ． Ｔｈ ｅ ｆ ｏ ｕ ｒ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｐ ｕ ｉｆ ｒ ｉｅ ｄ ｂ ｙ ｐ ｌ ａ ｑ ｕ ｅ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｃ ａ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍ ｔ ｙ ｐ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｙ ｔ ｏ ｐ ａ ｔ ｈ ｉ ｃ ． Ｔ ｈｅ Ｆ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｑ ｕｅ ｎ ｃ ｅ ｄ ｔ ｏ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｉ ｔ ｓ ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｃ ｈａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｉｚ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｈｅ ｒ ｅ ｄ ｉ ｔ ａ ｒ ｙ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ． Ｔｈ ｅ ｄ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｅ —
一株鸽源新城疫病毒的分离鉴定
制 试验 （ ） ＨＩ及基 因测序等 对其 进行 鉴 定 。 结果 表 明 ， 分 离株 具 有 血 凝 活性 ， 可 与 新城 疫 病 毒 标 准 阳性 此 且 血 清发 生特 异 性抑 制反 应 ； 用针 对 新城 疫 病毒 的 Ｆ基 因及 Ｐ基 因特异 性 鉴 定 引物 对该 分 离株 进 行 Ｐ Ｒ 扩 Ｃ 增， 可扩 增 出特异性 目的 片段 ； 序及 Ｂ ＡＳ 分析 表 明 ， 与 美 国新 城 疫 病 毒 分 离株 Ｐ ｇ ｏ ／ （ ） ９ 测 Ｌ Ｔ 其 ｉｅ ｎ ＵＳ ＴＸ ／ ８
行无 菌处 理 后 ， 种 １ 接 ０日龄 Ｓ Ｆ鸡 胚 尿囊 腔 ， 胚 Ｐ 每
ＡＰ ＭＶ一 ） １ 可引起 以下痢 和神 经症 状 为 主 的急性 、 败 血 性 、 度接 触性 传染 病 ， 当前养 鸽 业 的 主要疫 病 高 是
之 一ｌ ］ １ 。该病 １ ８ 。 ９ ５年 传 人 中 国香 港 ， 年 进 入 国 同
新 城 疫 病毒 （ ｗｃｓｌ ｄｓ ａｅｖｒｓ ＮＤＶ） Ｎｅ ａｔ ｉ ｓ ｉ ， ｅ ｅ ｕ 旧 称 禽 副 黏 病 毒 １型 （ ｉ ａａ ｘ ｖｒｓｔ ｐ ， Ａｖａ ｐ ｒｍｙ ｏ ｉ ｙ ｅ １ ｎ ｕ
１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 病毒 的分 离鉴 定 将 采集 的鸽 口腔 拭 子 进 ． ．
ｌ 材 料 与 方 法
１ 材 料
１ １ １ 样 本 和 Ｓ Ｆ鸡 胚 鸽 口腔 拭 子样 本 采 自广 ． ． Ｐ
１ ２ ２ ２ 基 因 克 隆 和 测 序 按 照 文 献 １ ３ 法 对 ．．． － 方 ６
１ ２ １获 得 的 尿 囊 液进 行 Ｒ － Ｃ ．． Ｔ Ｐ Ｒ扩 增 ， 异 性 扩 特
疫病 毒 、 产蛋 下降 综合 征病 毒 、 流 感 病毒 的标 准 阳 禽 性血 清进 行血 凝 抑 制 （ ） 验 ， 体 操 作程 序 按 照 ＨＩ试 具
新城疫病毒HQ株的分离鉴定及NP基因的克隆、表达的开题报告
新城疫病毒HQ株的分离鉴定及NP基因的克隆、表达的开
题报告
一、研究背景
新城疫病毒是一种由新城疫病毒属的单股负义RNA 病毒引起的显著的家禽疾病。
新城疫病毒主要通过家禽之间的接触、物品污染等途径传播。
该病毒广泛流行于世界
各地，对禽类生产业造成巨大经济损失。
因此，进行新城疫病毒的研究具有重要的理
论价值和实际意义。
二、研究内容
本研究的主要内容包括以下方面：
1. 分离鉴定新城疫病毒HQ株
首先需要采集到该病毒的样本，如禽类排泄物或病禽的体液样本，进行病原学检测和鉴定。
然后通过细胞培养和病毒筛选等技术手段对其进行HQ株的筛选和分离鉴定。
2. 克隆新城疫病毒的 NP 基因
将分离鉴定得到的 HQ 株的 RNA 提取出来，通过 RT-PCR 技术从中扩增出 NP
基因片段。
3. 表达新城疫病毒的 NP 基因
将扩增得到的 NP 基因片段插入到表达载体中，转化到表达宿主中，通过诱导表达获得大量纯化 NP 蛋白。
三、研究意义
本研究通过分离鉴定 HQ 株和克隆 NP 基因等操作，可以为深入了解新城疫病毒的分子生物学特性提供基础性的资料。
同时，该研究可以为疫苗和检测试剂的研发提
供重要的实验材料和技术支持。
一株典型新城疫病毒的分离鉴定
１材料
鸡胚 弃 去 ，将 ２ｈ以后 死亡 的鸡 胚或 ９ ４ ６小 时未 死 鸡胚 置 ４ 冰箱 ， 收集 尿 囊 液 ， 分装 ， 存 于 一 ０ 保 ２
１１病 料 与毒株 ． 病料 ：河北 省邢 台南 和地 区某 发病 种鸡 场 ， 采 集死 亡鸡 只 的脑 、 、 卵管 、 等 组织 。分 离鉴 定 脾 输 肺
关键 词 ： 城 疫 ； 离鉴 定 ； 新 分 防控
新 城疫 （ ｅ ｃ ｓｅＤｓａｅ Ｎ ） Ｎ ｗ ａｔ ｉ ｓ ， Ｄ 也称 亚 洲鸡 瘟或 ｌ ｅ 伪鸡瘟 ，是 由新 城疫病 毒 （ ｅ ｃ ｓｅＤ ｓａｅ ｉ ｓ Ｎ ｗ ａｔ ｉ ｓ ｒ ， ｌ ｅ Ｖ ｕ Ｎ Ｖ ￣ｌ 的禽类 急性 、 Ｄ）起 高度 接触 性传 染病 。主要 特 征是 呼 吸 困难 、 痢 、 经紊 乱 、 膜 和 浆 膜 出血 。 下 神 粘
阳性血 清能 够 抑制 病 毒尿 囊 液 的血 凝 性 ，而 标 准
Ｅ Ｓ７ Ｄ 一 ６阳性血 清 、 流感 Ｈ 禽 ５和 Ｈ ９型 阳性 血 清 不 能抑 制 病 毒 液血 凝 性 ，则 可 以 判 断病 毒 尿 囊 液 为
ＮＤ Ｖ
１２实验 动物 与鸡 胚 ． １日龄公 雏 鸡 ， 自邯 郸 华 裕 种鸡 场 ， 离 饲 购 隔
城疫病 毒 。 ３３动物 回 归试 验 ．
取 １ ０只 ３ ０日龄 左右 的雏 鸡 ，将 分 离 毒经 滴 鼻 、 眼途 径攻 毒 ，． Ｌ 只 ， 设接 种 生理 盐水 对 点 ０１ ／ 另 ｍ 照组。 攻毒 后连续 观察 两周 ， 录发病情 况 ， 采集 记 并 发 病鸡 只病料 ， 进行 病毒分 离 。
两株新疆新城疫强毒株的分离与鉴定
９ ％、０ 。 ０ ８％
关键词 ： 城疫强毒 ； 离； 新 分 鉴定； 疆 新
中图分类号 ： ８２６ ９５ 文献标识码 ： 文章编 号： ０ ５９ ４ ２ １ ）６４ —４ ￥ ５ ．５ ． Ａ １０ —４ Ｘ（０ ２ ０ ・３０
Ｉｏａｉｎａ ｄＩｅ ｔ ｃ ｔ ｎｏ ｗ ｔａｎ ｆ ｒ ｌｎ ｗｃｓ ｅ ｓａｅ ｉｕ ｎｉｎ ｓｌｔ ｎ ｎｉ ａｉ ｆ ｏＳｒ ｉｓ ｕｅ ｔ ｏ ｄ ｆ ｏ ｉ Ｔ ｏ Ｖｉ Ｎｅ ａｔ ｅｓ ｒ ｓｎＸｉｊａ ｇ ｌ Ｄｉ Ｖ ｉ
ｔ ｅ ｔ ｔ ｉ ｓｃ ｕ ｄ ｃ ｕ ｅ ｔ ｐ ｃ ｌ ａ ｈ ｌ ｇ ｃ ｌ ｈ ｎ ｅ ｏ ｗｃ ｓｌ ｉｅ ｓ ｎ ｃ ｉｋ ｎ ｅ ｂ ｙ ｓａ ｄ ｎ ｎ ｉ ｈ ｗｏ ｓｒ ｎ ｏ ｌ ａ ｓ ｙ ｉ ａ ｔ ｏ ｏ ｉ ａ ａ ｇ ｆＮｅ ａ ｔｅ ｄ ｓ ａ ｅ ｏ ｈ ｃ ｅ ｍ ｒ ｏ ｎ ｏ —ｍｍｕ ｉ ｅ ｈ ｃ ｅ ｓ Ｔ ｅ ａ ｐ ｃ ｎ ｚ ｄ ｃ ｉｋ ｎ ． ｈ
Ａｂ ｔａｔ Ｔ ｓｕ ａ ｌｓ ｅｅ ｏｌｃ ｄｆ ｍ ｈｃｅ ｓ ｕｐ ｃｅ ｆ ｗｃｓｅｄｓａｅｉ ａｃ ｉ ｅ ｒ ｆ ｒｍｑ ｉ Ｘｉ ｉｎ ， ｓｒｃ： ｗｏｔ ｓｅｓｍｐｅ ｒ ｌ ｔ ｏ ｃｉｋｎ ｓｅｔｄｏ ｉ ｗ ｃ ｅｅ ｒ ｓ Ｎｅ ａｔ ｉ ｓ ｈｃ ｎｆ ｍ ｏ ｕ ｉｎ ｎ ａｇ ｌ ｅ ｎ ｋ ａ Ｕ ｊ
大雁新城疫病毒的分离鉴定
【 关键 词 】 大雁 ； 城 疫 病毒 ； 离鉴 定 ； 理 变化 新 分 病 【 中图分 类号 １ ８２６ 【 Ｓ ５ ．５ 文献 标 识码 】 Ａ 【 章编 号 】 ６２— ２ ７ （０ １０ 文 １７ ０ ８２ １）５— ０ ０ ０ ７— ０ ３
ｅｃ） ｔｏ ｔｈ ｃｄ ｎ ｅｏ ｓ ｍｐｏ ． ｙｖｒｓｉ ｌｔ ｎ ｅｅ ｔ ｎｍｉｒ ｓｏ ｙｍｏ ｐ ｏｏ ｙ ｓｒ ｌｇｃ ｌ ｎ ａｈ ｇ ｎｃｔ ｔ．ｗｉ ｕ ｅｉ ｉｅ ｃ ｆ ｙ ｔｍｓ Ｂ ｉ ｏａｉ ， ｌｃｒ ｃｏ ｃ ｐ ｒｈ ｌｇ ，ｅｏｏ ｉａ ｄｐ ｔｏ ｅ ｉｉ ｈ ｔ ｎ ｕ ｓ ｏ ｏ ａ ｙ
Ｃｏｌｇ ｆ ｉｎＵｎｖ ｒｉ ， ａ ｇ ｈ ｎ Ｊｌ １ ０ ６ ） ｌ ｅｏ ｌ ｉｅ ｓ ｙ Ｃｈ ｎ ｃ ｕ ｉｎ ０ ２ ｅ Ｊｉ ｔ ｉ ３
［ ｂ ｔ ｃ Ｗ ｉ ｉ ｓ ｆ ｒｅ ｌ ｉｇ ａ ｈ ｕ ｈｉｉ ｍｏ ｅ ｏ Ａ ｓ ａ ｔ ｌ ｂｒ ｅ— ｖｎ ， ｌ ｏ ｇ ｒ ｃ ｍｍｏ ｒ ＤＶ ｏ ｒ ｍ ａ ｔ ｏ ｙｐ ｓ ｉｅ ｃ ｕ ｅｄｓａ ｅ ｕ— ｒ ］ ｄ ｄ ｏｆ ｉ ｔ ｔｓ ｎｆ ｏ Ｎ ｒ ｅｕ ｎｉ ｄ — ｏ ｉｖ ， ａ ｓ ｉ ｓ ｔ ｓ ｂ ｔ ｅ ｏ
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鸡新城疫的现场检疫和实验室检验
鸡新城疫又称为“伪鸡瘟”“亚洲鸡瘟”，其病原体为副黏病毒，其主要临诊特征为神经紊乱、呼吸困难、腹泻、黏膜或浆膜出血。
现场检疫包括流行病学调查、活体检疫、肉尸检疫。
鸡新城疫检疫的常见检验方法有病毒分离鉴定、血凝抑制试验。
前者用于新城疫的诊断；后者用于新城疫的免疫抗体测定和免疫监测。
1现场检疫（1）流行病学。
鸡对本病易感性最高，各种品种、年龄的鸡均有易感性，幼雏和中雏的易感性比成年鸡更高。
近年来国内已有鹌鹑、鸽及观赏鸟发病的报道。
本病的主要传染源是病鸡以及流行间歇期的带毒鸟类，经呼吸道和消化道向外大量排出病毒而传播。
本病一年四季均可发生，但以冬春两季较多。
免疫鸡群也可能发生新城疫，出现非典型症状，但雏鸡和成年鸡的发病率和病死率不高。
（2）活体检疫。
①最急性型：发病突然，无显著症状而快速死亡。
②急性型和慢性型：病鸡表现为明显的咳嗽，流涕，呼吸困难，张口呼吸，并发出“咯咯”的叫声。
口中有黏液，常见摇头和吞咽动作，企图将黏液甩出。
嗉囊有液态黏稠物，倒提即从口内流出。
粪便常呈黄绿或黄白色，偶见带血的粪便。
病程稍长的病鸡出现脚、翅麻痹、歪头扭颈、站立不稳等神经症状。
③非典型新城疫：主要发生于免疫鸡群，由于免疫水平偏低或免疫力不整齐，幼鸡和育成鸡出现轻微的呼吸道症状。
成年鸡产蛋量下降，持续性的零星死亡。
（3）肉尸检疫。
主要病变是淋巴系统肿胀、出血或坏死，全身黏膜和/或浆膜有出血点、出血斑。
典型病变：①腺胃黏膜乳头及其周围出血、溃疡或坏死，肌胃角质层下也常见有出血点或出血带；②盲肠、扁桃体肿大、出血或坏死。
肠黏膜有大小不等的出血点以及纤维素性渗出物。
病程较长者有的形成假膜，假膜脱落后即成“枣核状”溃疡。
气管黏膜增生，并有渗出物。
若鸡群已进行了免疫处理，则发生新城疫时仅见黏膜呈卡他性炎症，直肠黏膜和盲肠扁桃体出血，病变相对较轻，其他病变不典型。
2实验室检验（1）病毒分离鉴定。
①样品采集及处理：取病死禽的脑或心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气囊等组织，用生理盐水研成1 5乳液，加入青霉素（至终浓度为100IU·mL-1）、链霉素（使终浓度为1000μg·mL-1）。
2株新城疫病毒的分离与鉴定
2株新城疫病毒的分离与鉴定【摘要】盐都、建湖两养殖户鸡群大批死亡，有呼吸道症状，拉稀。
剖检喉、气管内有大量黏液，盲肠扁桃体出血，腺胃乳头出血，脂肪肝，脾脏肿大，卵子明显变性，胰脏出血，疑似新城疫病例。
采集病鸡的肝，肠道等病变组织。
经处理后接种10日龄非免疫鸡胚，致死鸡胚。
取鸡胚尿囊液，做HA 试验，两样品均有血凝性，再用抗H5亚型禽流感病毒阳性血清、抗H9亚型禽流感病毒阳性血清和抗新城疫病毒阳性血清进行HI试验，结果显示仅抗新城疫病毒阳性血清对两样品有血凝抑制作用，说明分离到的病毒均为新城疫病毒。
通过MDT实验发现两地鸡群感染的新城疫病毒均为强毒株。
【关键词】鸡；新城疫病毒；分离；鉴定；血凝试验；血凝抑制试验综述新城疫（ND），也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病，常呈败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经症状，黏膜和浆膜出血，腺胃黏膜出血具有诊断意义[1]。
感染鸡的呼吸道、循环系统、胃肠道紊乱及神经症状都很明显，蛋鸡可有突发性产蛋下降、产薄壳蛋或鸡蛋白蛋。
临床表现取决于宿主的年龄及其免疫状态、感染毒株的毒力及嗜性；一般潜伏期为5天[2]。
世界范围内曾经发生过4次大规模的流行。
首次大爆发源于东南亚和英国，从1926年到1960年，经过30多年的时间，从印泥和英国传遍了全世界。
第二次大流行始于20世纪60年代，从中东迅速传播到世界大部分国家，此次流行传播速度较快，原因是养禽业已经拓展为国际贸易，空中运输禽类及珍禽类是此次流行的重要传媒。
第三次流行始于1974年前后，疫源地尚无定论，但由于疫苗的推广使用，使得引起疫病流行的病毒更加复杂[3]。
第四次流行始于20世纪70年代晚期，源于中东，传染源是鸽副黏病毒I型，1981年传至欧洲，然后迅速传遍世界，并流传至今[4]。
特别是20世纪90年代后，该病在欧洲、亚洲许多国家发生，对养禽业造成了巨大的损失。
特别值得关注的是鹅的NDV感染，在1997年以前，几乎没有鹅感染NDV 发病的报导，即使人工攻毒，水禽的发病率和致死率也较低。
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青岛农业大学
兽医微生物学课程论文
题目：新城疫病毒的分离家鉴定
姓名：王梅州
学院：动物科技学院
班级：马业科学1201班
学号： 20121658 任课教师：温建新
二0一四年四月十五日
新城疫病毒的分离鉴定
马业科学1201 王梅州
任课教师温建新
摘要：病毒的分离鉴定在兽医研究中长用于禽源病毒的分类、培养、生物学特性鉴定、疫苗制备和药物筛选等工作。
是防疫、确诊病毒类疾病的重要手段。
关键词：新城疫病毒接种鸡胚
引言：鸡胚的优点是，来源充足价格低廉，操作简单，无需特殊设备和条件，乙肝病毒谱较广，对接种病毒不产生抗体等。
新城疫是禽类的一种急性、高度接触性传染病，由一种侵害呼吸道、肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒引起。
NDV属于副黏病毒科的腮腺炎病毒属成员，有囊膜，表面有纤突，内含血凝素神经氨酸酶和融合蛋白。
NDV有血凝特性，能凝集禽类、两栖动物、爬行动物等多种动物的红细胞以及人的O型红细胞。
目录
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引言.................................................. 错误！未定义书签。
1 材料 (1)
1.1 鸡胚 (1)
1.2 病毒 (1)
1.3 实验试剂 (1)
1.4 实验器材 (1)
2 实验方法 (1)
2.1鸡胚的选择和孵育 (1)
2.2 鸡胚接种前的准备 (1)
2.2.1照蛋 (1)
2.2.2 消毒 (1)
2.3 鸡胚接种 (1)
2.4 接种后的观察 (1)
2.5 微量α法血凝抑制试验 (2)
3 结果观察 (2)
4 结论 (3)
参考文献 (3)
1 材料
1.1鸡胚
9-11日龄SPF或非免疫ND疫苗种鸡所产的白壳鸡蛋
1.2 病毒
待捡病毒液
1.3 实验药剂
NDV阳性血清、1％鸡红细胞悬液、生理盐水
1.4 实验器材
微量移液器及吸头、石蜡、照蛋器、打孔器、注射器、孵化箱、蛋架、镊子、酒精灯、96孔“V”形微量反应板
2 实验方法
2.1 鸡胚的选择和孵育
选取9-11日龄的正常鸡胚
2.2 鸡胚接种前的准备
2.2.1 照蛋
用照蛋器照蛋，根据鸡胚的纹理用铅笔标出气室位置及气室打孔部位，并在气室底边胚胎附近无大血管除标出接种部位。
2.2.2消毒
先后用碘酒和75％的酒精棉球消毒准备接种部位的蛋壳表面。
2.3 鸡胚接种
选用9-11日龄发育良好的鸡胚，其气室向上置于蛋架上，在所标记接种部位用经火焰的钢锥钻一个小孔，注意要恰好使蛋壳打通而又不伤及壳膜。
再在非气室部位的蛋壳上无血管的标记处用经火焰的钢锥钻一个小孔，以打开蛋壳而又不伤及壳膜为宜，然后用1ml 注射器抽取接种物，与蛋壳成30°角斜刺入小孔3-5mm，注入接种物。
一般接种量为
0.1-0.2ml。
注射后用融化的石蜡或消毒胶布封闭注射小孔。
气室朝上置于37℃温箱中孵育。
2.4 接种后的检查
接种后每天检查3-4次。
接种后24h内死亡的鸡胚多数是由于鸡胚受损或污染细菌引起的，一般弃去。
但有些病原微生物（如高致病力禽流感病毒）也可能会在短时间内引起
鸡胚死亡，只是应对可疑尿囊液做进一步鉴定。
2.5 微量α法血凝抑制试验
取洁净的96孔V形微量滴定板用微量移液器从滴1孔至第12孔各加生理盐水50µL。
用微量移液器吸取尿囊液50µL，加入第1孔并吸吹3-5次，使其与生理盐水充分混匀后依次倍比稀释至第11孔，弃去50µL，第12孔不加病毒液作为对照，做相同的2排。
后用液器向第一排的1-12孔各加50µL的生理盐水。
第二排没空各加一定稀释度的新城疫阳性血清50µL，后在第一排和第二排每孔各加１％的鸡红细胞悬液50µL，将滴定板放在微量震荡混匀器上（或用手工旋转）混匀，于20-30℃或室温静置15-20min，待对照孔完全沉淀后判定并记录结果。
结果判定：血凝实验结果以++++（#）、+++、++、+和—表示。
++++（#）：红细胞均匀平铺与V型孔底。
+++：红细胞平铺孔底，但孔中心稍有红细胞聚集。
++：孔周围有凝集，孔中央有红细胞聚集。
+：孔中央有红细胞聚集形成小团，但边缘不光滑，四周有小凝块。
—：孔中央有红细胞聚集，边缘光滑。
血凝实验第一排和α法血凝抑制试验（第2排）两排孔的血凝价相差2个滴度以上判为阳性，即判定待检病毒为新城疫病毒；如两排孔的血凝价相等或差异小于2个滴度者为非特异性凝集，或为其他病毒引起，应判为阴性。
3 结果观察
将反应板倾斜成45℃角，沉于管底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。
能将4单位病毒物质凝集红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清
的红细
胞凝集
抑制效
价，用
被检血
清的稀
释倍数
或以2为底的对数(log2)表示。
如上例，该血清的红细胞凝集抑制效价为1：64或HI效价为
6(log2)。
第十一孔仅含稀释液和红细胞为不凝集对照孔，第十二孔含稀释液，病毒液和红细胞为凝集对照孔。
3.2
3.3
3.4
3.5
4结论
待捡病毒液为鸡的新城疫病毒。
参考文献：
[1]李一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。
[2]陆承平，兽医微生物学第四版。
[3]兽医微生物学(原书第2版）。