滤纸片干血斑HIV-1DNA检测技术在婴儿HIV早期诊断中的应用

预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播干预服务技术

乙肝病毒感染血清学标志物（两对半）包括表面抗原（HBsAg）、表面抗体（抗–HBs）、e抗原（HBeAg）、e抗体（抗–HBe）和核心抗体（抗–HBc）。
附件3
预防艾滋病母婴传播干预服务技术要点一、孕产妇抗病毒治疗方案
（一）推荐方案。
1. 孕期或临产发现感染、尚未接受抗病毒治疗的孕产妇，应即刻给予抗病毒治疗。治疗方案推荐选择以下两种方案中的任意一种，也可根据实际情况进行调整。
一、工作目标
具体目标。至2020年底，实现以下目标： 1. 孕产妇艾滋病、梅毒和乙肝检测率达95%以上，孕期检测率达90%以上，提高孕早期检测比例。 2. 艾滋病感染孕产妇抗艾滋病毒用药率达90%以上，所生婴儿抗艾滋病毒用药率达90%以上。 3. 梅毒感染孕产妇梅毒治疗率达90%以上，所生儿童预防性治疗率达90%以上。 4.乙肝感染孕产妇所生新生儿乙肝免疫球蛋白注射率达 95%以上。 5. 艾滋病母婴传播率下降至5%以下。 6. 先天梅毒报告发病率下降至15/10万活产以下。
提供后续干预服务
检测后咨询、指导常规孕产期保健
孕期未接受 HIV抗体检测的临产产妇
主动提供相关检测信息，采集血样本
同时用两种不同的快速检测试剂进行 HIV抗体筛查试验
两种均无反应
两种均有反应或一有反应一无反应
报告 “HIV抗体阴性 ”
检测后咨询，知情选择干预措施
分娩过程中应严密观察并积极处理产程，尽量避免可能增加母婴传播危险的损伤性操作，包括会阴侧切、人工破膜、使用胎头吸引器或产钳、宫内胎儿头皮监测等。新生儿出生后应及时使用流动的温水进行清洗，用洗耳球清理鼻腔及口腔粘膜，缩短新生儿接触母亲血液、羊水及分泌物的时间。清理过程操作手法应轻柔，避免损伤皮肤和黏膜。

滤纸片干血斑技术

2014年3月20日 2
概述

国家艾滋病参比实验室（NARL）从2004年开始，应用滤纸片干血斑检测HIV-1抗体、DNA、基因分型与病毒载量测定等方面的研究。
2014年3月20日
3
HIV感染产妇所生婴幼儿HIV抗体检测策略及流程

适用范围
●HIV感染产妇所生婴幼儿； ●已满18个月的儿童，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现
201V检测中的应用

婴幼儿早期诊断新发感染的检测
病毒载量检测
耐药性分析能力验证（PT）
22
2014年3月20日
Thang you!
2014年3月20日 23
2014年3月20日 20
DBS在HIV检测中的应用

HIV-1基因序列测定和亚型分析：
• 研究采集了20例静脉吸毒HIV-1感染者的EDTA
抗凝静脉全血2ml， 50μl制备干血斑样本。
• 结果发现，干血斑样本与全血样本DNA PCR产
物亚型分析一致，氨基酸序列比对同义和非同义替换比例、位置和类型基本一致。
报告 “婴儿 HIV感染早期诊断检测结果阳性”
阳性反应
尽快再次采集血样本，送检
阴性反应
诊断儿童 HIV感染， 2014 年介 3月20 日提供转服务，随访并监测病情
按照未感染儿童处 8 童理，继续提供儿保健及随访服务
概述

目前国际上最常用：Whatman903滤纸干血斑采集卡。该卡是Whatman(沃特曼)公司特制的棉花制片。由美国疾控中心批批检合格后上市，被WHO等国际组织公认为采集血样的最佳载体。 FTA（干血点采样）

新生儿代谢病筛查滤纸干血斑标本采集技术和传递常规

新生儿代谢病筛查滤纸干血斑标本采集技术和传递常规梅州市新生儿疾病筛查中心一、滤纸干血斑标本滤纸干血斑标本（dried blood spots （DBS）on filter paper）是将采集的新生儿血样滴在筛查专用滤纸上而制成的圆形均匀斑状血样，一般用于新生儿疾病筛查实验检测。

新生儿干血斑标本采集是新生儿疾病筛查整个过程中最首要、并且是十分关键的环节，滤纸血斑标本质量直接影响实验室检测结果，由于标本质量问题导致的假阴性可引起筛查漏诊，或假阳性过高也给新生儿及其监护人造成不必要的复查和精神负担。

新生儿查筛滤纸干血斑标本一般由产科医院婴儿室的医务人员负责，采血人员必须经过专项技术培训后上岗，严格按照采血常规和管理规范进行采血，保证质量。

二、采血时间新生儿干血斑标本的采集时间一般依据筛查指标的体内变化规律而决定。

我国目前新生儿疾病筛查项目为先天性甲状腺功能低下（CH）和苯丙酮尿症（PKU）；广东省增加G6PD缺乏症，三个项目的筛查指标分别为促甲状腺素（TSH）水平，苯丙氨酸（Phe）浓度和G6PD活性。

胎儿体内Phe通过自身肝细胞和母体肝细胞Phe羟化酶的作用而正常代谢，保持血Phe浓度于正常水平，故PKU胎儿体内Phe浓度亦能保持正常水平。

PKU 患儿出生后经过哺乳摄入蛋白质，由于新生儿肝细胞Phe羟化酶缺陷而Phe不能正常代谢，血Phe浓度将逐渐升高。

新生儿出生后由于寒冷刺激及环境的改变，体内TSH呈生理性反应性增高，一般于48小时后回落至与机体病理生理状况一致的真值（true value）水平。

G6PD活性一般不受生后日龄等因素的影响。

由此可见，新生儿干血斑标本应于新生儿充分哺乳和出生48小时后采集，最佳采血时间为出生72小时（或生后3天），喂奶8次以上。

在某些情况下，新生儿可能不能按时采到血样，如①新生儿生后出院过早；②新生儿因特殊病情需转院诊治；③新生儿因出生体重过低、病重、输血或血浆等未符合采血条件者。

干血斑HIV-1核酸定性检测的可靠性研究

D O I:10.13419/ki.aids.2021.05.02•论著•干血斑HIV-1核酸定性检测的可靠性研究姚佳明\陈文先2,潘晓红、郭志宏\丁晓贝\范钦、夏燕\张佳峰1(1.浙江省疾病预防控制中心艾滋病与性病预防控制所，杭州310051; 2.义乌市疾病预防控制中心微生物检验科，浙江义乌322000)摘要：目的探索干血斑(D B S)核酸定性检测用于H I V-1感染诊断的可靠性方法同步采集参加自愿咨询检测人员的D B S样本和配套血清样本各230份，D B S样本用于H I V-1核酸定性检测，血清样本进行常规抗体检测，分析比较两种方法的检测结果。

结果D B S初次核酸定性结果与血清初次抗体检测结果一致率为98.70%，/^PPa值为0.93,经复核及随访复检后两种方法最终判断结果完全一致，一致率为100%。

其中2例抗体不确定样本其核酸定性检测为阳性，随访后W B条带进展，确证为H I V-1抗体阳性;有1例抗体阴性样本其首次核酸定性检测为阳性，双份复核为阴性：结论D B S核酸定性结果与常规血液抗体检测的感染诊断结果一致性好，且流程简便、准确性高，但需考虑不确定范围。

关键词：艾滋病病毒；干血斑；核酸检测；抗体检测中图分类号：R 512.91;R 373.9 文献标志码：A文章编号：1672-5662(2021 )05-0446-04Reliability of the result for HIV-1 qualitative nucleic acid test based on dried blood spots YAO Jiaming', CHENWenxian:,PAN Xiaohong', GUO Zhihong1, DING Xiaobei', FAN Qin1, XIA Yan', ZHANG Jiafeng'. (1. Department o fHIV/AIDS & STD Control and Prevention, Zhejiang Provincial Center for Disease Control and Prevention, Hangzhou310051, China;2. Microbiological laboratory, Yiwu Municipal Center for Disease Control and Prevention, Yiwu 322000)C o r r e s p o n d i n g a u t h e r:Z H A N G Jiafeng, Email: **************.cnSupported b y Mega-Projects o f National Science Research for the 13th Five-Year Plan (2017Z X10201101)Abstract: Objective T o investigate the reliability o f H I V-1qualitative nucleic acid test using dried b l o o d spots(D B S)to diagnose H I V-1infection. Methods D B S s a m p l e s a n d paired s e r u m s a m p l e s w e r e collected synchronouslyf r o m230voluntary attendees seeking counselling a n d testing. Th e D B S s a m p l e s w e r e use d for the H I V-1qualitativenucleic acid test, a n d the s e r u m sa m p l e s w e r e used for routine antibody detection. T h e results o f the t w o m e t h o d s w e r eanalyzed a n d c o m p a r e d.Results T h e concordant rate o f first test results b e t w e e n H I V-1qualitative nucleic acid testusing dried blo o d spots a n d paired s e r u m antibody test w a s98.70%,a n d the Kappa value w a s0.93. After c h e c k a n dfollow-up reexamination, the t w o m ethods' final j u d g m e n t results w e r e entirely consistent, with a constant rate o f 100%.T w o s a m p l e s with indeterminate W e s t e r n blotting (W B) results w e r e initially tested positive in H I V-1qualitative nucleicacid assay. T h e s e t w o s a m p l e s w e r e confi r m e d to be H I V-1antibody positive after follow-up, with W B b a n d i n g patternsprogressed. W i t h s e r u m antibody negative, another s a m p l e w a s initially tested positive in H I V-1qualitative nucleic acidassay but f o u n d negative in the t w o parallel samples' reexamination. Conclusion T h e H I V-1qualitative nucleic acid testusing D B S is consistent with those o f routine blood antibody tests to diagnose H I V-1infection. I t is characterized b ysimple Process a n d high accuracy, but the uncertainty range should b e taken into account.Keywords: H I V; Dried blood spots; Nucleic acid test; A n t i b o d y test干血斑（Dried Blood Spots，DBS)技术最初建立应用于新生儿代谢紊乱筛查1，国内研究学者开展 DBS在HIV-1抗体筛查2、基因型耐药检测1等方面的评价研究，近年来又探索应用D I3S抗体检测方法的优化4于2019年7月1日实施的新版《艾滋病和收稿日期：2020-07-27;修回日期：2020-09-1()基金项目：国家“十三五”科技重大专项(2017Z X10201101)第一作者简介:姚佳明（1995—），男，浙江省杭州市人，从事艾滋病检测工作通信作者.•张佳峰，副主任技师，Email 丨***********.cn 艾滋病病毒感染诊断(WS293-2019)》[5]中指出：成人、青少年及18月龄以上儿童在HIV抗体筛查试验有反应前提下，若核酸定性试验阳性或核酸定量试验>5 000拷贝/mL即可诊断。

全国艾滋病检测技术规范(2019年修订版)

4.4.2.5 运送样品必须有记录。
4
4.5.1样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培训的工作人员打开，打开包裹时应穿戴防护衣、戴口罩和防护眼镜，在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。
4.2.1.8 样品采集后处理、保存、运输的时限和条件，因不同的检测项目而异，应参见不同检测项目要求。
4.2.1.9 采血完成后的穿刺针头必须丢弃于放置尖锐危险品容器内，妥善处理，防止发生职业暴露。
4.2.2滤纸干血斑
4.2.2.1 根据需要，可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，用于检测。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑。
4.2.2.5 血斑充分干燥后，将其放入密封袋中，每张干血斑单独保存，避免血斑之间的相互污染，同时放入干燥剂及湿度指示卡，密封包装，保存备用。
4.2.3尿液和口腔黏膜渗出液
4.2.3.1尿液：推荐使用专用采尿管，保持尿液稳定。尿液样品可采集随机尿，女性经期应取中段尿。
4.2.3.2口腔黏膜渗出液：使用试剂盒提供的容器收集样品。存放时间和是否冻存以试剂盒说明书为准。口腔黏膜渗出液应采集口腔渗出液,不是唾液。
4.4.2.1 第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。
4.4.2.2 第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。
二○ 年月
前言
艾滋病在我国流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。

滤纸片干血斑在HIV-1 BED-CEIA新发感染检测方法中的应用

ａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｄｅｖＨＩＶｌＢＥＤ．ＣＥＩＡｔｅｓｔ．Ｅｌｕａｎｔｏｆｄｒｉｅｄｂｌｏｏｄｓｐｏｔｗｅｒｅｔｅｓｔｅｄａｔｔｈｅｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
定性较好，６次检测质控品吸光度值（ＯＤ值）与标化吸光度（ＯＤｎ值）的变异系数（ｃ）＜１５％；国际考核盘干血斑样８份，
其不同放置时间５次检测判定为新发感染结果一致，即可重复性好；洗脱液放置１３ｈ、１７ｈ、２０ｈ、２４ｈ、３２ｈ后检测，标化
・实验研究・
滤纸片干血斑在ＨＩＶ一１ＢＥＤ— ＣＥＩＡ新发感染检测方法中的应用
张艺，王凤英，金涛，董永慧，倪明健
新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心性病／艾滋病防治中心．乌鲁木齐８３０００２摘要：目的评价滤纸片干血斑在ＨＩＶ－１ＢＥＤ— ＣＥＩＡ新发感染检测中洗脱液放置时间对结果判定的影响。方法检测稳
关键词：艾滋病病毒；干血斑；稳定性；可重复性
中图分类号：Ｒ５１２．９１文献标识码：Ａ文章编号：１０００．３７１１（２０１４）０３．０００６ — ０２
ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＥＤ— ＣＥＩＡａｓｓａｙｗｉｔｈｄｒｉｅｄｂｌｏｏｄｓｐｏｔｓｐｅｃｉｍｅｎｓｉｎｄｅｔｅｃｔｉｏｎｆｏｒｎｅｗｉｎｆｅｃｔｉｏｎ

新生儿代谢病筛查滤纸干血斑标本采集技术和传递常规

新生儿代谢病筛查滤纸干血斑标本采集技术和传递常规梅州市新生儿疾病筛查中心一、滤纸干血斑标本滤纸干血斑标本（dried blood spots （DBS）on filter paper）是将采集的新生儿血样滴在筛查专用滤纸上而制成的圆形均匀斑状血样，一般用于新生儿疾病筛查实验检测。

新生儿干血斑标本采集是新生儿疾病筛查整个过程中最首要、并且是十分关键的环节，滤纸血斑标本质量直接影响实验室检测结果，由于标本质量问题导致的假阴性可引起筛查漏诊，或假阳性过高也给新生儿及其监护人造成不必要的复查和精神负担。

新生儿查筛滤纸干血斑标本一般由产科医院婴儿室的医务人员负责，采血人员必须经过专项技术培训后上岗，严格按照采血常规和管理规范进行采血，保证质量。

二、采血时间新生儿干血斑标本的采集时间一般依据筛查指标的体内变化规律而决定。

我国目前新生儿疾病筛查项目为先天性甲状腺功能低下（CH）和苯丙酮尿症（PKU）；广东省增加G6PD缺乏症，三个项目的筛查指标分别为促甲状腺素（TSH）水平，苯丙氨酸（Phe）浓度和G6PD活性。

胎儿体内Phe通过自身肝细胞和母体肝细胞Phe羟化酶的作用而正常代谢，保持血Phe浓度于正常水平，故PKU胎儿体内Phe浓度亦能保持正常水平。

PKU 患儿出生后经过哺乳摄入蛋白质，由于新生儿肝细胞Phe羟化酶缺陷而Phe不能正常代谢，血Phe浓度将逐渐升高。

新生儿出生后由于寒冷刺激及环境的改变，体内TSH呈生理性反应性增高，一般于48小时后回落至与机体病理生理状况一致的真值（true value）水平。

G6PD活性一般不受生后日龄等因素的影响。

由此可见，新生儿干血斑标本应于新生儿充分哺乳和出生48小时后采集，最佳采血时间为出生72小时（或生后3天），喂奶8次以上。

在某些情况下，新生儿可能不能按时采到血样，如①新生儿生后出院过早；②新生儿因特殊病情需转院诊治；③新生儿因出生体重过低、病重、输血或血浆等未符合采血条件者。

滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价

滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价李秋荣;姚均;邢文革;龙小山;潘品良;张麒;蒋岩【期刊名称】《中国艾滋病性病》【年(卷),期】2008(14)2【摘要】目的探索滤纸固定艾滋病病毒Ⅰ型核酸(HIV-1 DNA)的稳定性、均一性,评价滤纸片干血斑HIV-1DNA检测方法的敏感性、特异性。

方法套式PCR扩增HIV-1的env、gag、pol三区。

不同环境条件下保存的滤纸片干血斑,分别在不同的时间段检测;滤纸片干血斑的中心及圆斑的上下左右4个边缘,随机打取5个2.5mm圆片用于检测。

采自新疆现场的94份阴性样本和90份阳性样本,分别制成滤纸片干血斑样本和全血样本,比较两者的HIV-1DNA检测结果。

结果滤纸片干血斑-20℃或4℃放置1年或室温放置3个月,或在37℃放置两天或冻融2次,实验的敏感性未见下降;37℃放置3天或冻融3次,已经有样本不能检出。

滤纸干血斑不同位点随机打取圆片扩增,4个样本中,中点均阳性,但在上点、左点、右点分别出现一份阴性结果。

滤纸干血斑法和全血法检测HIV-1前病毒DNA比较,敏感性是96.1%,特异性是98.9%。

结论滤纸干血斑在室温条件下运输是可行的,推荐尽量靠近滤纸干血斑的中间位点打取圆片扩增;该方法操作简便、经济、敏感、特异。

【总页数】3页(P118-120)【关键词】滤纸干血斑;艾滋病病毒;稳定性;敏感性;特异性【作者】李秋荣;姚均;邢文革;龙小山;潘品良;张麒;蒋岩【作者单位】朝阳区疾病预防控制中心;中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】R373.9【相关文献】1.滤纸片干血斑HIV-1DNA检测技术在婴儿HIV早期诊断中的应用 [J], 杨朝军;陈敏;陈玲;苏莹珍;陈会超;闫文云;杨莉2.干血斑用于HIV-1耐药基因型检测的研究 [J], 马鹏飞;陈曦;邵一鸣;邢辉;廖玲洁;陈彬;赵全壁;全宇;孙峰;杨绍敏;苏斌3.滤纸片干血斑检测TT病毒DNA [J], 刘江华;奚翔云4.检测艾滋病患者滤纸干血斑标本中的HIV-1 DNA [J], 范雪莉;徐文严5.滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的建立 [J], 李秋荣;邢文革;姚均;龙小山;潘品良;张麒;蒋岩因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

滤纸片干血斑技术ppt课件

静脉采血法
2014年3月20日
11
样品采集
温育采血部位：不超过41℃， 3~5分钟。
酒精消毒，用无菌纱布垫擦干。
针刺，无菌纱布垫擦去第一滴血。
用滤纸蘸取单个血滴，让血滴充分浸润采血圈。至少采集3个采血圈。
12
2014年3月20日
样品采集

血样采集完毕后，将制成的滤纸片干血斑采集卡在干燥、清洁、平整、无吸水性的桌面放置3~4小时风干。或将采集卡放置于专业纸质干燥架上自然风干。不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法（如烘干机）加速干燥。静脉采血：用移液器移取80μL全血，对准采样圈中心缓慢将血液滴加在滤纸上，避免气泡产生。
• 无粉手套 • 干燥架 • 药棉或棉签和纱布 • 采血针 • 滤纸采血片、信息卡 • 污物桶
2014年3月20日
10
样品采集

填写滤纸卡：信息完整，以免混淆样品。确定采血部位：
脚后跟采血法： 6周~4月或小于5kg的婴儿
脚大拇指采血法： 4~10月或5~10kg 的婴儿手指尖采血法：大于10月或大于10kg 的婴儿
HIV相关临床表
●临床怀疑HIV感染的儿童

儿童HIV/AIDS的诊断
>18M的儿童先用ELISA初筛，再用WB确诊 <18M婴儿检测HIVRAN前DNA或HIV抗原（P24）或病毒培养
4

2014年3月20日
HIV阳性母亲所生、未受感染的婴儿
VL 母亲抗体抗体阳性率 %
婴儿月龄
2014年3月20日
13
2014年3月20日
DBS有效性的判断

干血斑的DNA分析用于新生儿筛查

干血斑的DNA分析用于新生儿筛查聊城市妇幼保健院山东聊城 252000【摘要】新生儿足跟血干血斑制备简便、安全、稳定，在DNA分析中对干血斑进行筛选是非常可行的。

随着筛查技术的发展，可筛查疾病的数量不断增加，有效地提高了新生儿筛查的有效性。

这篇文章分析了新生儿干血斑的DNA筛查。

【关键词】干血斑；DNA分析；新生儿筛查前言：在20多个国家为新生儿筛查几种可治疗的遗传疾病对患有这些疾病的新生儿的健康具有重大影响。

新生儿筛查通常会在滤纸收集血液样本分析，分析血液疾病相关基因产物或异常血清代谢物水平，证实该方法是一种提供一个稳定可靠的生物材料进行分析的方法，由于滤纸是便于携带，为筛查大的或区域性隔离的人群提供了方便。

含有D N A分析的遗传筛选方案受到技术困难的阻碍，尽管有大量关于与许多遗传缺陷相关的D N A主要结构序列变化的数据。

这些困难包括：使标准技术适应在遗传筛选方案中收集的大量样本；需要用放射性探针进行常规分析。

而且很难从干燥的斑块中分离出足够的D N A。

1 干血斑用于新生儿筛查的分析前程序及注意事项干血斑指将采集的新生患儿足跟血血样滴在专用滤纸上制成的圆形、均匀斑状血样。

所使用的滤纸大多为Schleicher&Scheull 903滤纸或Whatman gradel/3滤纸，其物理特性符合美国测试和材料协会的标准，滤纸是FDA批准装载干血斑的Ⅱ类医疗设备。

血液样本中颗粒的厚度（决定其承载能力和扩散能力）、均匀性、孔隙大小、保留和吸收能力等特征因批次而异，在临床使用过程中，滤纸的质量必须严格控制，在新生儿疾病筛查实验中，滤纸的质量由新生儿疾病筛查质量控制方案进行规范。

其主要目的是确保上述各项指标在不同批次的滤纸上的一致性。

新生儿筛查的正常采血期为出生后72小时、出生后7天内和完全母乳喂养后。

干血斑滤纸符合下列四项条件：（1）不少于三个直径超过8mm的血斑。

（2）血滴自然渗出，滤纸两侧的血斑一致。

滤纸片干血斑技术

12
2014年3月20日
样品采集

血样采集完毕后，将制成的滤纸片干血斑采集卡在干燥、清洁、平整、无吸水性的桌面放置3~4小时风干。或将采集卡放置于专业纸质干燥架上自然风干。不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法（如烘干机）加速干燥。静脉采血：用移液器移取80μL全血，对准采样圈中心缓慢将血液滴加在滤纸上，避免气泡产生。
2014年3月20日
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DBS在HIV检测中的应用

以下数据引自中国CDC性艾中心网页。
1、HIV抗体检测 2、HIV-1前病毒DNA检测， 3、HIV-1基因序列测定和亚型分析

HIV抗体检测：
• 相同血样的滤纸片干血斑样本与血浆样本用EIA法检测，符合率为 100%，相关性为0.919。
• 两种样本经WB确认，条带完全一致的占总数的42.85%,其中主要条带（至少有2条env带出现，或至少1条env和p24带同时出现）的符合率为100%
艾滋病阳性产妇分娩婴幼儿早诊标本的采集
滤纸片干血斑技术
罗玉珍桂林市妇女儿童医院检验科
2014年3月20日 1
概述

滤纸片是血液标本采集和运输的极好载体。全血滴在滤纸片上制成滤纸片干血斑（Dried blood spots，DBS），有很好的生物稳定性和安全性，便于储存和运输。特别适用于发展中国家边远地区的样本采集、贮存与运输。 1973年，国外就开始研究用滤纸收集血样用于疾病的研究。
17

2014年3月20日
DBS的质量控制

合格血斑的六条标准是
①每个血斑直径要达到10mm；
③血液必须完全渗透到滤纸背面； ⑤无污染；

我国婴儿艾滋病早期诊断工作研究进展

2402019.11医苑纵横●课题项目：广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题（Z20180090）。

我国婴儿艾滋病早期诊断工作研究进展张　华　丘小霞广西壮族自治区妇幼保健院广西壮族自治区南宁市 530001【摘　要】艾滋病母婴传播是儿童感染HIV 的主要途径。

普通人群HIV 抗体检测存在3个月的“窗口期”，而母体的HIV-1抗体可通过胎盘进入婴儿体内，并可持续到18个月龄后才逐渐消失，因此，未满18月龄的儿童应用HIV 抗体检测就不能准确确定婴儿是否感染了HIV 病毒[1]。

婴儿艾滋病早期诊断（以下简称：EID）检测工作将确定婴儿是否感染HIV 的时间提前到6月龄，是促进HIV 暴露儿童早发现，早治疗，降低HIV 感染儿童死亡的有效措施[2]，对HIV 预防、治疗和控制具有重要意义。

本文对EID 工作做一综述，以期促进艾滋病母婴阻断工作的推进，从而实现儿童“0”艾滋的目标。

【关键词】艾滋病；早期诊断；检测；母婴阻断艾滋病全称为获得性免疫缺陷综合症（acquired immundeficiencysyndrome,AIDS ），主要有三大传播途径，即性传播，血液传播和母婴传播。

艾滋病母婴传播是15岁以下婴幼儿感染艾滋病病毒(HIV)的主要途径[3]，感染HIV 的婴儿疾病进展非常迅速，如不接受任何抗病毒治疗，50%以上会在2岁前死亡[4]。

尽早明确艾滋病感染孕产妇所生婴儿（以下称HIV 暴露儿童）的艾滋病感染状态，是对其进行治疗和干预的前提。

婴儿艾滋病早期诊断（EID ）工作是预防母婴传播（prevention of mother-to-child transmission ，PMTCT ）工作的一个重要环节，是艾滋病防治工作的一个重要组成部分。

1 婴儿艾滋病早期诊断工作的开展传统HIV 暴露儿童艾滋病诊断方法是HIV 抗体检测，由于HIV 感染母亲的HIV 抗体可在其所生婴幼儿体内持续存在时间达18个月，甚至更长时间，所以，以往诊断HIV 暴露儿童是否感染HIV 需满18个月，从而导致HIV 感染儿童没有得到及时诊断和救治。

一种检测干血斑标本中人类免疫缺陷病毒1型的试剂盒及其检测方法[

专利名称：一种检测干血斑标本中人类免疫缺陷病毒1型的试剂盒及其检测方法
专利类型：发明专利
发明人：朱托夫
申请号：CN201510175620.3
申请日：20150414
公开号：CN104911277A
公开日：
20150916
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测干血斑标本中HIV-1的试剂盒及其检测方法，该试剂盒对干血斑样品检测简单高效，含有高敏感度的引物组和探针，设计多重循环并提到引物退火温度，有极高灵敏度和特异性，使干血斑中HIV-1检测灵敏度达到血浆病毒载量检测灵敏度水平。

本发明加入细胞定量体系，可以检测单个细胞内HIV-1前病毒载量，基本不受干血斑制作差异影响，有助于不同试验中结果对比分析。

本发明的试剂盒中还加入制备简单、稳定，溯源可靠的定量标准品，可解决目前HIV-1 DNA定量溯源性问题。

本发明对标本收集、运输及保存要求低，检测灵敏，可利于在HIV-1感染早期检测、新生儿或高危人群HIV-1感染筛查中推广。

申请人：广州海力特生物科技有限公司
地址：510663 广东省广州市高新技术产业开发区科学城揽月路80号D区第二层218-220、219-221单元
国籍：CN
代理机构：广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：郑莹
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HIV暴露儿童早期诊断采血制度

HIV暴露儿童早期诊断采血制度1、目的规范并落实全市婴儿早期诊断工作，尽早明确艾滋病感染孕产妇所生婴儿艾滋病感染状况，使感染艾滋病的婴儿得到及时转介治疗。

2、标准2.1严格按照国家《预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作规范(2020版)》开展婴儿早期诊断服务。

2.2 早期诊断服务应按照《HIV感染产妇所生婴儿艾滋病早期诊断服务流程》(见附件1)进行。

2.3助产机构应为在本机构分娩的艾滋病感染孕产妇所生婴儿提供48 小时内早期诊断采血服务，承担随访工作的辖区妇幼保健院(所)则分别在婴儿出生后6周及3个月时提供HIV 早诊服务。

2.4负责早诊服务的机构需按照婴儿早期诊断检测标本采集、运输及保存的标准操作程序(见附件1),采集、制备标本，记录相关信息，填写婴儿早期诊断检测标本送样单，将标本和送样单快递给省婴儿艾滋病早期诊断实验室。

若承担随访工作的辖区妇幼保健院(所)没有早诊采血条件，可委托莆田学院附属医院（梅峰院区）进行早诊采血并递送广东省婴儿艾滋病早期诊断实验室，市妇幼保健院相关工作人员收到结果后第一时间反馈给区县(市)儿童随访负责人。

如标本不合格，应尽快召回家长重新采集血标本并递送。

承担艾滋病感染孕产妇所生婴儿随访工作的区县(市)儿童随访负责人尽快将检测结果反馈给婴儿母亲或其他监护人并提供后续服务或转介。

2.5对确诊核酸检测阳性的患儿及时进行传染病上报，同时转介至市艾滋病治疗机构进行治疗。

3、相关文件《预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播工作规范(2020版)》、《全国艾滋病检测技术规范》及《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》,制订本方案。

附件1婴儿艾滋病感染早期诊断检测标本采集、运输及保存的标准操作程序一、目的确保滤纸片干血斑标本的采集、运输、接收和贮存工作按标准操作程序进行，从而保证标本的完好、完整、不相互污染。

二、范围本婴儿艾滋病感染早期诊断检测标本采集、运输及保存的标准操作程序规定了滤纸干血斑标本的采集、运输、接收和贮存的处理方法，适用于所有开展该项工作的实验室对检测标本的管理。

滤纸片干血斑技术在婴儿HIV感染早期诊断中的应用

滤纸片干血斑技术在婴儿HIV感染早期诊断中的应用杨朝军;杨莉;马艳玲;陈玲;苏莹珍;陈会超【期刊名称】《卫生软科学》【年(卷),期】2012(026)003【摘要】[目的]探讨滤纸片干血斑HIV-1DNA检测技术在婴儿HIV早期感染诊断中的应用.[方法]于2009至2011年在云南省红河州5所妇幼保健院,用滤纸片干血斑和罗氏HIV-1DNA检测技术分析HIV母婴阻断项目下未满18个月的婴儿的HIV感染状况.[结果]检测 249名婴儿,其中10名婴儿HIV-1DNA阳性,与病毒载量或18月龄后的HIV抗体结果相吻合.采取母婴阻断干预措施后的婴儿感染率为3.7％,如果从孕期就开始采取干预措施的,婴儿感染率可降到0.65％,未采取任何干预措施的,婴儿感染率为16.6％.[结论]滤纸片干血斑的HIV-1 DNA检测技术的简便、快速,其定性结果与病毒载量一致,可以作为HIV母婴传播早期诊断的检测方法,可及时评估母婴阻断的效果.【总页数】2页(P237-238)【作者】杨朝军;杨莉;马艳玲;陈玲;苏莹珍;陈会超【作者单位】云南省疾病预防控制中心,云南昆明650023;云南省疾病预防控制中心,云南昆明650023;云南省疾病预防控制中心,云南昆明650023;云南省疾病预防控制中心,云南昆明650023;云南省疾病预防控制中心,云南昆明650023;云南省疾病预防控制中心,云南昆明650023【正文语种】中文【中图分类】R512.91【相关文献】1.存储温度和时间对滤纸片干血斑标本葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性的影响 [J], 章印红;朱宝生;王瑞红;陈红2.滤纸片干血斑HIV-1 DNA检测方法的建立 [J], 李秋荣;邢文革;姚均;龙小山;潘品良;张麒;蒋岩3.滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价 [J], 李秋荣;姚均;邢文革;龙小山;潘品良;张麒;蒋岩4.荧光测定法定量测定滤纸片干血斑标本G6PD酶活性的可靠性分析 [J], 章印红;朱宝生;王瑞红;陈红5.应用HIV IgA抗体检测婴儿HIV感染的早期诊断 [J], 赵清慧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

滤纸干血片用于HIV-1抗体检测现状

滤纸干血片用于HIV-1抗体检测现状李秋荣;邢文革;姚林;王广增【期刊名称】《传染病信息》【年(卷),期】2005(018)004【摘要】自1981年6月美国CDC首次报道AIDS至今，短短20年的时间，HIV－1病毒感染者已遍布全球，成为全球关注的公共卫生和社会热点问题。

各国都投入了大量的人力、物力和财力进行HIV感染检测方面的研究，想达到预防和控制AIDS的目的。

传统的HIV－1抗体检测是采集单个患者或受检者的静脉血，分离得到血清或血浆作为标本，通过ELISA或WB进行抗体检测。

但静脉血样的采集、运输和储存都存在一定的实际困难，特别是在发展中国家和热带边远地区，如：须要大量的静脉采血器材、专业采血人员，从采血点到实验室运输途中血液样本须冷藏等。

滤纸干血片（dried blood spots，DBSs）HIV－1抗体检测弥补了传统方式的不足。

由于滤纸干血片便于储存和运输，且具有很好的生物稳定性，已被用于HIV感染的检测。

【总页数】2页(P156-157)【作者】李秋荣;邢文革;姚林;王广增【作者单位】华北煤炭医学院,唐山,063000;中国疾病预防控制中心,北京,100050;华北煤炭医学院,唐山,063000;华北煤炭医学院,唐山,063000【正文语种】中文【中图分类】R51【相关文献】1.滤纸干血片样品用于自愿咨询检测HIV抗体的研究 [J], 冯长华;郑扬云;付玲;魏芳芳2.干血滤纸片样品用于HIV抗体检测的研究 [J], 臧希卉;佐合拉;张麒;李秋荣;强来英;张桂云;蒋岩3.滤纸片干血斑用于HIV-1 DNA检测的评价 [J], 李秋荣;姚均;邢文革;龙小山;潘品良;张麒;蒋岩4.干滤纸血片用于日本血吸虫病患者抗体检测的现场应用研究 [J], 郑莉;杨光斌;李秋萍;唐丽;魏凤华;徐兴建5.滤纸干血片TSH免疫放射分析用于新生儿甲状腺功能低下筛查的初探 [J], 顾玉海;王振华;张建婷;孟丽华;石龙;周琳;金成恩;李全乐;曹惠萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。