滤纸片干血斑技术.概要
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13
2014年3月20日
DBS有效性的判断
有效样品
无效样品
样本量 不足 样品未 干
血斑粘 连过度
血斑褪色、 污染 出现血清 环 血斑分层
2014年3月20日 14
DBS保存
样品风干后，将每张滤纸片采 集卡分别装入薄玻璃袋。 装好后放入封口袋，多个薄玻 璃袋可以装入一个封口袋，同 时放进干燥剂和湿度卡。 轻轻将封口袋的空气积压出去， 封口。 冷藏干燥－20℃保存。
12
2014年3月20日
样品采集
血样采集完毕后，将制成的滤纸片干血斑采 集卡在干燥、清洁、平整、无吸水性的桌面 放置3~4小时风干。或将采集卡放置于专业 纸质干燥架上自然风干。 不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法（如 烘干机）加速干燥。 静脉采血：用移液器移取80μL全血，对准采 样圈中心缓慢将血液滴加在滤纸上，避免气 泡产生。
15
2014年3月20日
DBS递送
DBS采集卡可以专人送样或通过邮寄。
将采集卡和送检单一同放入大信封。邮寄前 再次核对送检单与样品是否相符。 要写明采样点的联系方 式：采样点名称、送样 人、送样日期、结果反 馈地址/电话/传真等。
16
2014年3月20日
DBS的质量控制
未采血的滤片应放置在干燥处保存，滤纸表面必须 保持清洁，不能与手、奶、消毒液、清洁剂、水等 物质接触防止污染。 滴在采血圈内的血液，必须从正面吸入并渗透到滤 纸背面。正反面的血斑直径要求一致。避免正反两 面滴血及采集有大量组织液的血液或凝固的血液。 避免血斑血量不足，渗透不够，而出现梅花状、夹 心状和直径＜8mm血斑。
2014年3月20日 2
概述
国家艾滋病参比实验室 （NARL）从2004年开 始，应用滤纸片干血斑 检测HIV-1抗体、DNA、 基因分型与病毒载量测 定等方面的研究。
2014年3月20日
3
HIV感染产妇所生婴幼儿HIV抗体 检测策略及流程
适用范围
●HIV感染产妇所生婴幼儿； ●已满18个月的儿童，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现
艾滋病感染产妇所生新生儿
新生儿护理、应用抗病毒药物 对家长进行喂养指导、营养咨询等 定期随访、体格检查及生长发育监测
出 生 后 6周 采 集 第 一 份 血 样 本 制 备 成 滤 纸 片 干 血 斑 （ DBS） 将干血斑滤纸片转运到省级妇幼保健机构， 由省级妇幼保健机构统一转运到相应的检测机 构进行早期诊断检测 阳性反应 尽快采集第二份血 样本，送检 呈阳性反应 阴性反应 阴性反应 婴 儿 满 3个 月 ， 再 次 采 集 血 样本，送检 阳性反应 阴性反应 报 告 “婴 儿 HIV感 染早期诊断检测 结果阴性”
5
HIV阳性母亲所生、在宫内或产道受感染的婴儿
母亲抗体 VL 婴儿抗体
抗 体 阳 性 率
%
婴儿月龄
2014年3月20日
6
HIV阳性母亲所生、产后因哺乳受感染的婴儿
母亲抗体 VL 抗 体 阳 性 率 婴儿抗体
%
婴儿月龄
2014年3月20日
7
艾滋病感染孕产妇所婴幼儿HIV感染早期诊断检测及服务流程
2014年3月20日
9
物品准备
耗材储物柜：干燥、整洁、安全、方便取用， 存放样本制作所需的相关耗材。 耗材：
• 无粉手套 • 干燥架 • 药棉或棉签和纱布 • 采血针 • 滤纸采血片、信息卡 • 污物桶
2014年3月20日
10
样品采集
填写滤纸卡：信息完整，以免混淆样品。 确定采血部位：
艾滋病阳性产妇分娩婴幼儿 早诊标本的采集
滤纸片干血斑技术
罗玉珍 桂林市妇女儿童医院检验科
2014年3月20日 1
概述
滤纸片是血液标本采集和运输的极好载体。 全血滴在滤纸片上制成滤纸片干血斑（Dried blood spots，DBS） ，有很好的生物稳定性 和安全性，便于储存和运输。 特别适用于发展中国家边远地区的样本采集、 贮存与运输。 1973年，国外就开始研究用滤纸收集血样用于 疾病的研究。
17
2014年3月20日
DBS的质量控制
合格血斑的六条标准是
①每个血斑直径要达到10mm；
③血液必须完全渗透到滤纸背面； ⑤无污染；
②同时取3个血斑；
④无重叠； ⑥易洗脱。
采集好的血斑标本应按要求保存，避免因保存不当造成 血标本固化于滤纸上，检测时被测物洗脱不下或部分洗 脱，出现假阴性结果而漏诊。
HIV相关临床表
●临床怀疑HIV感染的儿童
儿童HIV/AIDS的诊断
>18M的儿童先用ELISA初筛，再用WB确诊 <18M婴儿检测HIVRAN前DNA或HIV抗原（P24）或病毒培 养
4
2014年3月20日
HIV阳性母亲所生、未受感染的婴儿
VL 母亲 抗体 抗 体 阳 性 率 %
婴儿月龄
2014年3月20日
脚后跟采血法： 6周~4月或小于5kg的 婴儿
脚大拇指采血法： 4~10月或5~10kg 的婴儿 手指尖采血法：大于10月或大于10kg 的婴儿
静脉采血法
2014年3月20日
11
样品采集
温育采血部位： 不超过41℃， 3~5分钟。
酒精消毒，用 无菌纱布垫擦 干。
针刺，无菌纱 布垫擦去第一 滴血。
用滤纸蘸取单 个血滴，让血 滴Biblioteka Baidu分浸润采 血圈。至少采 集3个采血圈。
报 告 “婴 儿 HIV感 染 早期诊断检测结果 阳性”
阳性反应
尽快再次采集 血样本，送检
阴性反应
诊 断 儿 童 HIV感 染 ， 2014 年介 3月20 日 提供 转 服 务，随 访并监测病情
按照未感染儿童处 8 童 理，继续提供儿 保健及随访服务
概述
目前国际上最常用：Whatman903滤纸干血斑采 集卡。 该卡是Whatman(沃特曼)公司特制的棉花制片。 由美国疾控中心批批检合格后上市，被WHO等国 际组织公认为采集血样的最佳载体。 FTA（干血点采样）
2014年3月20日
18
DBS在HIV检测中的应用
以下数据引自中国CDC性艾中心网页。
1、HIV抗体检测 2、HIV-1前病毒DNA检测， 3、HIV-1基因序列测定和亚型分析
HIV抗体检测：
• 相同血样的滤纸片干血斑样本与血浆样本用EIA法检测，符合率为 100%，相关性为0.919。
• 两种样本经WB确认，条带完全一致的占总数的42.85%,其中主要 条带（至少有2条env带出现，或至少1条env和p24带同时出现）的 符合率为100%
2014年3月20日
DBS有效性的判断
有效样品
无效样品
样本量 不足 样品未 干
血斑粘 连过度
血斑褪色、 污染 出现血清 环 血斑分层
2014年3月20日 14
DBS保存
样品风干后，将每张滤纸片采 集卡分别装入薄玻璃袋。 装好后放入封口袋，多个薄玻 璃袋可以装入一个封口袋，同 时放进干燥剂和湿度卡。 轻轻将封口袋的空气积压出去， 封口。 冷藏干燥－20℃保存。
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2014年3月20日
样品采集
血样采集完毕后，将制成的滤纸片干血斑采 集卡在干燥、清洁、平整、无吸水性的桌面 放置3~4小时风干。或将采集卡放置于专业 纸质干燥架上自然风干。 不要放在太阳下晾晒或用任何人工方法（如 烘干机）加速干燥。 静脉采血：用移液器移取80μL全血，对准采 样圈中心缓慢将血液滴加在滤纸上，避免气 泡产生。
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2014年3月20日
DBS递送
DBS采集卡可以专人送样或通过邮寄。
将采集卡和送检单一同放入大信封。邮寄前 再次核对送检单与样品是否相符。 要写明采样点的联系方 式：采样点名称、送样 人、送样日期、结果反 馈地址/电话/传真等。
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2014年3月20日
DBS的质量控制
未采血的滤片应放置在干燥处保存，滤纸表面必须 保持清洁，不能与手、奶、消毒液、清洁剂、水等 物质接触防止污染。 滴在采血圈内的血液，必须从正面吸入并渗透到滤 纸背面。正反面的血斑直径要求一致。避免正反两 面滴血及采集有大量组织液的血液或凝固的血液。 避免血斑血量不足，渗透不够，而出现梅花状、夹 心状和直径＜8mm血斑。
2014年3月20日 2
概述
国家艾滋病参比实验室 （NARL）从2004年开 始，应用滤纸片干血斑 检测HIV-1抗体、DNA、 基因分型与病毒载量测 定等方面的研究。
2014年3月20日
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HIV感染产妇所生婴幼儿HIV抗体 检测策略及流程
适用范围
●HIV感染产妇所生婴幼儿； ●已满18个月的儿童，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现
艾滋病感染产妇所生新生儿
新生儿护理、应用抗病毒药物 对家长进行喂养指导、营养咨询等 定期随访、体格检查及生长发育监测
出 生 后 6周 采 集 第 一 份 血 样 本 制 备 成 滤 纸 片 干 血 斑 （ DBS） 将干血斑滤纸片转运到省级妇幼保健机构， 由省级妇幼保健机构统一转运到相应的检测机 构进行早期诊断检测 阳性反应 尽快采集第二份血 样本，送检 呈阳性反应 阴性反应 阴性反应 婴 儿 满 3个 月 ， 再 次 采 集 血 样本，送检 阳性反应 阴性反应 报 告 “婴 儿 HIV感 染早期诊断检测 结果阴性”
5
HIV阳性母亲所生、在宫内或产道受感染的婴儿
母亲抗体 VL 婴儿抗体
抗 体 阳 性 率
%
婴儿月龄
2014年3月20日
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HIV阳性母亲所生、产后因哺乳受感染的婴儿
母亲抗体 VL 抗 体 阳 性 率 婴儿抗体
%
婴儿月龄
2014年3月20日
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艾滋病感染孕产妇所婴幼儿HIV感染早期诊断检测及服务流程
2014年3月20日
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物品准备
耗材储物柜：干燥、整洁、安全、方便取用， 存放样本制作所需的相关耗材。 耗材：
• 无粉手套 • 干燥架 • 药棉或棉签和纱布 • 采血针 • 滤纸采血片、信息卡 • 污物桶
2014年3月20日
10
样品采集
填写滤纸卡：信息完整，以免混淆样品。 确定采血部位：
艾滋病阳性产妇分娩婴幼儿 早诊标本的采集
滤纸片干血斑技术
罗玉珍 桂林市妇女儿童医院检验科
2014年3月20日 1
概述
滤纸片是血液标本采集和运输的极好载体。 全血滴在滤纸片上制成滤纸片干血斑（Dried blood spots，DBS） ，有很好的生物稳定性 和安全性，便于储存和运输。 特别适用于发展中国家边远地区的样本采集、 贮存与运输。 1973年，国外就开始研究用滤纸收集血样用于 疾病的研究。
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2014年3月20日
DBS的质量控制
合格血斑的六条标准是
①每个血斑直径要达到10mm；
③血液必须完全渗透到滤纸背面； ⑤无污染；
②同时取3个血斑；
④无重叠； ⑥易洗脱。
采集好的血斑标本应按要求保存，避免因保存不当造成 血标本固化于滤纸上，检测时被测物洗脱不下或部分洗 脱，出现假阴性结果而漏诊。
HIV相关临床表
●临床怀疑HIV感染的儿童
儿童HIV/AIDS的诊断
>18M的儿童先用ELISA初筛，再用WB确诊 <18M婴儿检测HIVRAN前DNA或HIV抗原（P24）或病毒培 养
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2014年3月20日
HIV阳性母亲所生、未受感染的婴儿
VL 母亲 抗体 抗 体 阳 性 率 %
婴儿月龄
2014年3月20日
脚后跟采血法： 6周~4月或小于5kg的 婴儿
脚大拇指采血法： 4~10月或5~10kg 的婴儿 手指尖采血法：大于10月或大于10kg 的婴儿
静脉采血法
2014年3月20日
11
样品采集
温育采血部位： 不超过41℃， 3~5分钟。
酒精消毒，用 无菌纱布垫擦 干。
针刺，无菌纱 布垫擦去第一 滴血。
用滤纸蘸取单 个血滴，让血 滴Biblioteka Baidu分浸润采 血圈。至少采 集3个采血圈。
报 告 “婴 儿 HIV感 染 早期诊断检测结果 阳性”
阳性反应
尽快再次采集 血样本，送检
阴性反应
诊 断 儿 童 HIV感 染 ， 2014 年介 3月20 日 提供 转 服 务，随 访并监测病情
按照未感染儿童处 8 童 理，继续提供儿 保健及随访服务
概述
目前国际上最常用：Whatman903滤纸干血斑采 集卡。 该卡是Whatman(沃特曼)公司特制的棉花制片。 由美国疾控中心批批检合格后上市，被WHO等国 际组织公认为采集血样的最佳载体。 FTA（干血点采样）
2014年3月20日
18
DBS在HIV检测中的应用
以下数据引自中国CDC性艾中心网页。
1、HIV抗体检测 2、HIV-1前病毒DNA检测， 3、HIV-1基因序列测定和亚型分析
HIV抗体检测：
• 相同血样的滤纸片干血斑样本与血浆样本用EIA法检测，符合率为 100%，相关性为0.919。
• 两种样本经WB确认，条带完全一致的占总数的42.85%,其中主要 条带（至少有2条env带出现，或至少1条env和p24带同时出现）的 符合率为100%