口蹄疫液相阻断ELISA PPT
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口蹄疫课件-本科兽医传染病学
发热：体温升高，可达 40-41℃
口腔病变：口腔黏膜红肿、 溃疡、坏死
蹄部病变：蹄冠、蹄踵、 蹄壁出现红肿、溃疡、坏 死
呼吸系统症状：咳嗽、气 喘、呼吸困难
消化系统症状：腹泻、呕 吐、食欲不振
神经症状：共济失调、瘫 痪、抽搐
口蹄疫的病变过程
潜伏期：感染后2-14天，无明显症状 前驱期：体温升高，精神不振，食欲减退 急性期：口腔黏膜、蹄部、乳房等部位出现水疱 恢复期：水疱破裂，形成溃疡，逐渐愈合 慢性期：少数病例出现心肌炎、肺炎等并发症 死亡：严重病例可能出现死亡，死亡率约1%-5%
口蹄疫病毒的传播方式
直接接触：通过 接触病畜或其分 泌物传播
空气传播：通过 飞沫、气溶胶等 方式传播
间接接触：通过接 触被污染的饲料、 水、器具等传播
垂直传播：通过 胎盘、乳汁等方 式传播
口蹄疫病毒的致病机理
病毒侵入：口蹄疫病毒通过口腔、鼻腔、皮肤等途径侵入动物体内
病毒复制：病毒在细胞内复制，产生大量病毒粒子
汇报人：PPT
疫苗接种：定期对健康畜进行疫苗接种，提高免疫力 加强管理：加强饲养管理，提高畜群的抵抗力，减少感染风险
口蹄疫的控制策略与措施
疫苗接种：定期进行疫苗接种，提高动物免疫力 加强管理：加强养殖场管理，保持环境卫生，减少疾病传播 隔离治疗：发现病畜及时隔离治疗，防止疾病扩散 消毒灭菌：对养殖场、运输工具等进行消毒灭菌，减少疾病传播风险 加强监测：定期进行疾病监测，及时发现疫情并采取措施 宣传教育：加强公众宣传教育，提高公众对疾病的认识和防范意识
细胞损伤：病毒复制过程中，导致细胞损伤，影响细胞功能
免疫反应：动物免疫系统对病毒产生免疫反应，导致炎症反应和组织损 伤
传播途径：病毒通过分泌物、排泄物等途径传播给其他动物
液相阻断ELISA在口蹄疫抗体检测中的应用
试剂盒（生产批号：20200109134,抗原批号：101/24）。 1.3试验步骤 1.3.1 羊群免疫
使用口蹄疫0型灭活疫苗，按照产品使用说明规定免疫剂 量及免疫方法对该湖羊养殖家庭农场羊群接种免疫， 于 2 免 24d后采血，并进行免疫效果检测［2］。 1.3.2洗涤液准备
用蒸馏水或去离子水按1：10稀释洗涤液（如取100ml洗涤 液，需要900ml蒸馏水或去离子水稀释），充分混匀后备用。 1.3.3 样品稀释和加样
本次试验主要采取液相阻断ELISA法追踪检测郎溪某羊羊 牲畜养殖家庭农场养殖的湖羊0型口蹄疫免疫抗体滴度。通过 利用口蹄疫病毒0型抗体会与包被板上的重组抗原和抗羊二抗 酶标结合物特异性结合，以及抗羊二抗酶标结合物底物反应显 色原理反映岀待测血清中口蹄疫病毒0型抗体情况叫 为监管 基层国家强制免疫计划工作开展，保证养殖场健康发展提供坚 实数据支撑，现将检测应用报告情况汇报如下。 1 材料与方法 1.1检测才样品
本次试验共使用3块ELISA板，每板2个阴性对照孔OD 值均小于0.15, 3块ELISA板试验结果均有效。计算岀1号板 Cov值为0.168,抗体阳性孔数88个，抗体阴性孔数2个，合
格率97.7%； 2号板Cov值0.187,抗体阳性孔数86个，抗体 阴性孔数4个，合格率95.5%； 3号板Cov值0.178,抗体阳性 孔数34个，抗体阴性孔数0个，合格率100% (详见表2)遥 3讨论
揭开封板膜，甩去孔内液体。排枪注满配置好的洗涤液 （约300滋l），滞留1min后甩去遥重复洗涤3次，最后一次甩 净，在吸水纸上拍干。 1.3.5 加酶反应
除空白对照孔外，其余每孔加入酶标结合物50滋l，盖好封 板膜，37益避光恒温箱反应30min。 1.3.6 包被板洗涤
液相阻断ELISA在口蹄疫病毒抗体水平检测中的应用
关 键 词 ：口蹄 疫 ； 体 水 平 ； 相 阻断 Ｅ １Ａ 抗 液 ＬＳ 中图 分 类 号 ： ５ ． Ｓ８ ２４ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ３４ １ （０ ８ ０ —０ ８０ １ ０—３ ５ ２０ ）３０ １—３
Ａｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｉ ｕ ｄ ｐ ａ ｅ ｂ ｏ ｋ ｎ ｐ ｉ ｔｏ ｆｌ ｉ — ｈ ｓ ｌ ｃ ｉ ｇ ＥＬＩ Ａ ｎ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｃ ｑ Ｓ ｉ ｈ ｅ ｅ ｔ ｆ ｏ
刘 俊 林 ， 祁淑 芸 马 军 武 崔 燕 ， ，
（ ．甘肃 农业 大 学 动 物 医学 院 ， 肃 兰州 ７ ０ ７ ；２ １ 甘 ３ ０ ０ ．中 国农 业 科 学 院 兰 州 兽 医 研 究 所 ， 国家 家 畜 疫 病病 原 生 物学 重 点 实 验 室 ， 农业 部畜 禽 病 毒 学 重 点 实 验 室 ， 国家 口蹄 疫参 考 实 验 室 。 肃 兰 州 ７ ０ ４ ） 甘 ３０ ６
３ Ｂ － Ｅ ＩＡ 对 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ 方 法 所 选 的部 分 阴 性血 清进 行 了 验证 试 验 ． 果 显 示 ： 用 Ａ ｉ Ｉ 和 ０ 型 液 Ａ Ｃ Ｉ ＬＳ － ＬＳ 结 利 ｓ －型 ａ 相 阻 断 Ｅ ＩＡ 方 法 筛选 的 阴 性动 物 ， 免 疫 和 攻 毒 后 ， 清 抗 体 水 平 显 著 升 高 ， 明 该 法 可 完 全 用 于 口蹄 疫 阴 性 ＬＳ 在 血 表 动 物 筛 选 及 口蹄 疫 病 毒 抗 体 水 平 的 检 测 ．
维普资讯
２０ 年 ６
大
学
学
报
第 ４３卷
双 月 刊
第 ３期 １ ￣２ ８ ０
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＬ ＴＵＲＡＬ Ｕ ＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
Ａｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｉ ｕ ｄ ｐ ａ ｅ ｂ ｏ ｋ ｎ ｐ ｉ ｔｏ ｆｌ ｉ — ｈ ｓ ｌ ｃ ｉ ｇ ＥＬＩ Ａ ｎ ｔ ｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｃ ｑ Ｓ ｉ ｈ ｅ ｅ ｔ ｆ ｏ
刘 俊 林 ， 祁淑 芸 马 军 武 崔 燕 ， ，
（ ．甘肃 农业 大 学 动 物 医学 院 ， 肃 兰州 ７ ０ ７ ；２ １ 甘 ３ ０ ０ ．中 国农 业 科 学 院 兰 州 兽 医 研 究 所 ， 国家 家 畜 疫 病病 原 生 物学 重 点 实 验 室 ， 农业 部畜 禽 病 毒 学 重 点 实 验 室 ， 国家 口蹄 疫参 考 实 验 室 。 肃 兰 州 ７ ０ ４ ） 甘 ３０ ６
３ Ｂ － Ｅ ＩＡ 对 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ 方 法 所 选 的部 分 阴 性血 清进 行 了 验证 试 验 ． 果 显 示 ： 用 Ａ ｉ Ｉ 和 ０ 型 液 Ａ Ｃ Ｉ ＬＳ － ＬＳ 结 利 ｓ －型 ａ 相 阻 断 Ｅ ＩＡ 方 法 筛选 的 阴 性动 物 ， 免 疫 和 攻 毒 后 ， 清 抗 体 水 平 显 著 升 高 ， 明 该 法 可 完 全 用 于 口蹄 疫 阴 性 ＬＳ 在 血 表 动 物 筛 选 及 口蹄 疫 病 毒 抗 体 水 平 的 检 测 ．
维普资讯
２０ 年 ６
大
学
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报
第 ４３卷
双 月 刊
第 ３期 １ ￣２ ８ ０
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＬ ＴＵＲＡＬ Ｕ ＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
口蹄疫介绍PPT培训课件
03 预防措施与控制 策略
疫苗接种及免疫程序
01
02
03
疫苗种类选择
针对不同口蹄疫病毒血清 型，选择相应疫苗进行接 种，如O型、A型、Asia 1 型等单价或多价疫苗。
免疫程序制定
根据动物种类、年龄、饲 养环境等因素，制定合理 的免疫程序，包括基础免 疫和加强免疫等。
疫苗接种操作
确保疫苗接种操作规范， 包括疫苗保存、注射部位 消毒、正确注射等，以提 高免疫效果。
疫苗研发
针对不同口蹄疫病毒株的疫苗研发具有挑战性，需要不断更新以 适应病毒变异。
防控措施
实施有效的防控措施，如疫苗接种、疫情监测和报告等，以降低 疫情传播风险。
国际合作
加强国际间口蹄疫防控合作，共同应对疫情挑战，维护全球公共 卫生安全。
未来发展趋势预测
疫苗技术创新
随着生物技术的不断发展，口蹄疫疫苗研发将更加高效、精准。
临床表现
口蹄疫的潜伏期一般为2-7天，病初动物体温升高，精神不振，食欲减退。随后 在口腔、蹄部、乳房等部位出现水泡和烂斑，严重时可能导致蹄壳脱落和跛行。 病猪还可能出现鼻盘、唇边和母猪乳头等部位的水泡和烂斑。
流行病学特点
• 易感动物：口蹄疫主要侵害偶蹄动物，如猪、牛、羊等，不同品种和年龄的动 物均可感染。
THANKS
感谢观看
其他抗病毒药物
如阿糖腺苷、病毒唑等，也有一定的抗病毒效果 ，但需在医生指导下使用。
辅助治疗手段探讨
对症治疗
针对患者出现的发热、疼痛等症状，可采用解热镇痛药、镇痛药 等进行对症治疗。
局部治疗
对于口腔黏膜、皮肤等部位的病变，可采用局部涂抹药物、口腔喷 雾等方式进行治疗，以减轻症状、促进愈合。
口蹄疫及其防治PPT课件
2.疫苗在使用前和使用过程中，均应充分振摇。疫苗瓶开封后，应当日用完。 3.注射器具和注射部位应严格消毒，每注射1头猪，应更换1个针头。注射时，进针应达到适
当深度(肌肉内)，以免影响疫苗效果。 4.不得使用无标签、疫苗瓶有裂纹或封口不严、疫苗中有异物或变质的疫苗。 5.接种前应对猪进行检查。患病、瘦弱或临产母猪不予注射。 6.本疫苗适用于接种疫区、受威胁区、安全区的猪。接种时，应从安全区到受威胁区，最后
再接种疫区内安全群和受威胁群。 7.非疫区的猪，接种疫苗21日后方可移动或调运。 8.接种时，应严格遵守操作规程，接种人员在更换衣服、鞋、帽和进行必要的消毒之后，方
可参与疫苗的接种。 9.接种时，须有专人做好记录，写明省(区)、县、乡(镇)、自然村、畜主姓名、家畜种类、大
小、性别、接种头数和未接种头数等。在安全区接种后，观察7—10日，并详细记载有关情况。 10.由于口蹄疫的特殊性，特别忠告：接种疫苗只是消灭和预防该病的多项措施之一，在接种
罕见. 因为口蹄疫病毒对胃酸敏感，所以人类通常不会通过食用
肉类感染口蹄疫病毒. 在英国，最後一次确认人类罹患口蹄疫是
在1967年。在欧洲大陆，非洲以及南美也只有很少感染案例。口
蹄疫感染人类的症状包括不舒服，发烧，呕吐，口腔组织发生红
色溃疡腐烂(表面腐蚀性水疱)，偶有皮肤小水疱。对于人类，值
得注意的是，该症状与另外一种病毒疾病的症状类似，那种疾病
至四个礼拜再注射第二剂，以提高抗体之产生，此免
疫抗体即可保护猪只不受口蹄疫病毒的感染。
7. 已注射疫苗之猪只，其猪肉可以安心食用吗？
“口蹄疫疫苗”是无毒的，打入猪只体内所产生
的免疫抗体则是安全的蛋质成分，来自免疫猪只的猪
肉经过加热烹调后，当然可以安心食用。
当深度(肌肉内)，以免影响疫苗效果。 4.不得使用无标签、疫苗瓶有裂纹或封口不严、疫苗中有异物或变质的疫苗。 5.接种前应对猪进行检查。患病、瘦弱或临产母猪不予注射。 6.本疫苗适用于接种疫区、受威胁区、安全区的猪。接种时，应从安全区到受威胁区，最后
再接种疫区内安全群和受威胁群。 7.非疫区的猪，接种疫苗21日后方可移动或调运。 8.接种时，应严格遵守操作规程，接种人员在更换衣服、鞋、帽和进行必要的消毒之后，方
可参与疫苗的接种。 9.接种时，须有专人做好记录，写明省(区)、县、乡(镇)、自然村、畜主姓名、家畜种类、大
小、性别、接种头数和未接种头数等。在安全区接种后，观察7—10日，并详细记载有关情况。 10.由于口蹄疫的特殊性，特别忠告：接种疫苗只是消灭和预防该病的多项措施之一，在接种
罕见. 因为口蹄疫病毒对胃酸敏感，所以人类通常不会通过食用
肉类感染口蹄疫病毒. 在英国，最後一次确认人类罹患口蹄疫是
在1967年。在欧洲大陆，非洲以及南美也只有很少感染案例。口
蹄疫感染人类的症状包括不舒服，发烧，呕吐，口腔组织发生红
色溃疡腐烂(表面腐蚀性水疱)，偶有皮肤小水疱。对于人类，值
得注意的是，该症状与另外一种病毒疾病的症状类似，那种疾病
至四个礼拜再注射第二剂，以提高抗体之产生，此免
疫抗体即可保护猪只不受口蹄疫病毒的感染。
7. 已注射疫苗之猪只，其猪肉可以安心食用吗？
“口蹄疫疫苗”是无毒的，打入猪只体内所产生
的免疫抗体则是安全的蛋质成分，来自免疫猪只的猪
肉经过加热烹调后，当然可以安心食用。
口蹄痘诊断技术——液相阻断ELISA试验在操作中的注意事项
使用 ； 需配制较长时间使用 ， 用１ ０ ｍ Ｌ离心管分装避
光 于 一２ ０ ℃保 存 ， 根据测定 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ板 数 量 取 用 （ 一 板 大约 用 ５ ｍＬ ） ， 用前 避 光溶 化 ， 临用 时 必须 加 双氧
水， 如 忘记 加 双氧 水 ， 反应 溶 液不 能 显 色 ， 会 导 致 试 验 失败 。注 意 ： 加底 物后 就不 能再甩 了 １
疫病 防 制
口蹄痘诊断技术
冯妹 玲
（ 广 阳区动物疫 病预 防控 制 中心 河 北廊坊 ０ ６ ５ ０ ０ ０ ） 液相阻断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 实验 最 大 的优 点 是使 用 灭 活 抗原 ， 因 而 无 需担 忧 散 毒 ， 也摆 脱 了对 细 胞 培 养 和 实验 动物 的依 赖 ， 用 以检 测 动物 接种 疫 苗后 血 清 中 抗 体 的分 泌水 平 ， 具 有 快速 、 灵敏 、 准确 等 优 点 ， 此 方法 克 服 了病 毒 中和 试验 无 法 在 临床 检 测 中 推 广 的缺 点 ， 适 合 于 大批 样 品 的血 清 学 调查 ， 是 国际认 可的 一种标 准化 诊断技 术 。但 是此实验 过程 比较 繁 琐、 时 间 比较 长 ， 操 作 过 程 中一 个 环 节 稍 有 不 慎 就 有可 能 导致 实验 数 据不 准 、 试验 失 败 。根据 近 几 年 的实 验 室 实 际操 作 的 过 程 现将 操 作 细 节 及 注 意 事
器从稀释倍数高的孑 Ｌ 开始转移 ， 必须及时更换枪头
（ 即移 一孔 更换一 次枪 头 ） 。
４温育 ： 在 实际操 作 中 ， 总 习惯 将微 量板 放 入温 箱 即开始 计 时 ， 没有 考 虑微量 板 孑 Ｌ 内温 度 从 室温 升 到３ ７ 尚需 一定 时 问 （ 大约 １ ０ ｍｉ ｎ ） ， 这 样 容 易造 成
口蹄疫讲课PPT课件
一进口动物发生口蹄疫，对相 关人员进行追踪调查和隔离观 察
口蹄疫的案例分析重点
案例选择：选择具有代表性的口蹄疫病例，如大规模爆发或造成严重影响的事件。
症状识别：介绍口蹄疫的症状，如何通过观察动物的行为和体征来判断是否患病。
传播途径：详细说明口蹄疫的传播方式，如直接接触、空气传播等，以及防止疾病扩散的 措施。
口蹄疫的控制策略
疫苗接种：定期 为易感动物接种 口蹄疫疫苗，提 高其免疫力。
隔离措施：发现 疑似病例时，应 立即隔离，防止 疫情扩散。
消毒措施：对养 殖场、屠宰场等 场所进行定期消 毒，消灭病毒传 播源。
监测与报告：建 立健全的监测体 系，及时发现并 报告疫情，为防 控提供科学依据。
口蹄疫的疫苗接种
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口蹄疫讲课PPT 课件
汇报人：
汇报时间：20X-XX-XX
汇报人员
口蹄疫的预防与 控制
口蹄疫的概述
口蹄疫的案例分 析
口蹄疫的症状与 诊断
口蹄疫的未来展 望
单击汇报人员：XX医院-XX
口蹄疫的概述
口蹄疫的定义
口蹄疫是一种 由口蹄疫病毒 引起的动物传
染病
主要感染偶蹄 动物，如牛、
易感动物：牛、 猪、羊等偶蹄动 物
流行特点：季节 性、地区性、周 期性
口蹄疫的传播途径
直接接触传播：口蹄疫病毒可通 过患病动物和健康动物直接接触 传播。
空气传播：在特定条件下，口蹄 疫病毒可形成气溶胶，通过空气 传播。
间接传播：口蹄疫病毒也可通过 被病毒污染的物品、水源、土壤 等间接接触传播。
消化道传播：摄入被病毒污染的 食物和饮水也可感染口蹄疫。
防治措施：介绍针对口蹄疫的预防和治疗措施，如疫苗接种、隔离病畜等。
口蹄疫液相阻断ELISA
二、实验前准备
1、使用前，试剂 盒所有组份应回复 到18-26℃，试剂 要混合均匀，每个 样品使用一个吸头。 2、浓缩洗涤液用 蒸馏水或去离子水 25倍稀释。
三、实验操作步骤
1、抗原抗体反应布板
图 2 96 孔酶标板检测 20 份样品布局图
S1 1:32 1:64 1:128 1:256 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 +1:32 1:64 1:128 1:256 -1:4 1:8
4、温育设备要精确度要高，温度过高过 低都会影响OD值高低。 5、包被板反应时严禁堆叠放置，应平铺 且板间有间隙，切不可离箱壁太近。 6、所用移液器和设备要精准。 7、备检样品要合格。
操作要点
严谨的设计，优质的试剂，正确的操作 和良好的仪器是保证ELISA必要条件。
严格遵照规定操作，必能得出准确的结 果。
抗体效价≥1：128，判为阳性； 抗体效价≤1：64，判为阴性； 抗体效价在1：64- 1：128之间，判为可 疑；可以血清需要复检，复检抗体效价 ≥1：128，判为阳性；抗体效价≤1：64， 判为阴性；
五、注意事项
1、实验前必须认真阅读说明书。 2、试剂盒所有浓缩试剂在低温放置下， 可能有无机盐结晶，如果有结晶盐出现， 80℃温育30min可溶解，且不影响实验。 3、所有试剂必须回复室温使用，以免影 响抗原抗体反应
5、同上洗板5次，拍干， 50vl/孔加入底 物溶液（显色液A和B按1：1混合），37 ℃避光温育15min。 6每孔再加50vl终止液终止反应，立即在 450nm波长下读取OD值。
四、结果分析
口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测两种实验方法结果对比
酶 联 免 疫 吸 附 试 验 ， 这 种 检 测 方 法 有 灵 敏 性 、特 过 夜 。④ 将 血 清 抗 原 混 合 转 移 到 口蹄 疫 ０型 兔 抗
异 性 、 稳 定 性 的优 点 ，并 且 检 测 结 果 精 确 ，实 验 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ板 ， ５ ０便 捷 ，是 现 在 口蹄 疫 抗 体跟 踪 监 测 首选 的 实 板 ３～ ５次 ，甩 干 ，加 口蹄 疫 ０型豚 鼠抗 体 工 作
验 方 法 。
液 ，５ ０虬 ／孔 ，封 板 ３ ７℃温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑥ 洗 板
本 次 试 验 用 兰 州 兽 医 研 究 所 生 产 的 口蹄 疫 ０ ３～ ５次 ，甩 干 ，加 兔 抗 豚 鼠 Ｉ ｇ Ｇ — Ｈ Ｒ Ｐ工 作 液 ， 型液相 阻断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ抗 体 检 测 试 剂 盒 进 行 口蹄 疫 ０ ５ ０儿 ／孔 ，封 板 ３ ７℃ 温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑦ 洗 板 ３～ ５ 型 抗 体 检 测 ，试 验 方 法 是 对 同 一 批 猪 血 清 样 品 分 次 ， 加 入 底 物 Ａ与 底 物 Ｂ等 量 混 合 后 的 混 合
同情 况 下 使 用 不 同 实验 方 法 的建 议 。
① 在 稀 释 板 上 稀 释 样 品血 清 及 阴 阳 性 对 照 血 清 ， ５ ０儿 ／孔 。② 在 样 品血 清 和 阴 阳性 对 照 血 清 中加 入抗原 ，５ ０儿 ／孔 。 ③ 封 板 ， 振 荡 ， 将 稀 释 板
３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ。④ 将 血 清 抗 原 混 合 转 移 到 口
别 进 行 ４℃ 静 置 过 夜 和 ３ ７℃ 温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ，并 且 液 ，５ ０儿 ／孔 ，避 光 反 应 １ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑧ 加 入 终 止 液 ， 其 他 检 测 步 骤 相 同情 况 下 进 行 结 果 对 比 。试 验 结 ５ ０ Ｌ ／孑 Ｌ ，读 取 Ｄ ４ ９ ２ ｎ ｍ 。 果 讨 论 两 种 实 验 方 法 得 出 的检 测 结 果 差 异 和 对 不 ｉ ． ３ ． ２第 二 组 实 验 （ ３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ）步 骤 ：
异 性 、 稳 定 性 的优 点 ，并 且 检 测 结 果 精 确 ，实 验 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ板 ， ５ ０便 捷 ，是 现 在 口蹄 疫 抗 体跟 踪 监 测 首选 的 实 板 ３～ ５次 ，甩 干 ，加 口蹄 疫 ０型豚 鼠抗 体 工 作
验 方 法 。
液 ，５ ０虬 ／孔 ，封 板 ３ ７℃温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑥ 洗 板
本 次 试 验 用 兰 州 兽 医 研 究 所 生 产 的 口蹄 疫 ０ ３～ ５次 ，甩 干 ，加 兔 抗 豚 鼠 Ｉ ｇ Ｇ — Ｈ Ｒ Ｐ工 作 液 ， 型液相 阻断 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ抗 体 检 测 试 剂 盒 进 行 口蹄 疫 ０ ５ ０儿 ／孔 ，封 板 ３ ７℃ 温 育 ３ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑦ 洗 板 ３～ ５ 型 抗 体 检 测 ，试 验 方 法 是 对 同 一 批 猪 血 清 样 品 分 次 ， 加 入 底 物 Ａ与 底 物 Ｂ等 量 混 合 后 的 混 合
同情 况 下 使 用 不 同 实验 方 法 的建 议 。
① 在 稀 释 板 上 稀 释 样 品血 清 及 阴 阳 性 对 照 血 清 ， ５ ０儿 ／孔 。② 在 样 品血 清 和 阴 阳性 对 照 血 清 中加 入抗原 ，５ ０儿 ／孔 。 ③ 封 板 ， 振 荡 ， 将 稀 释 板
３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ。④ 将 血 清 抗 原 混 合 转 移 到 口
别 进 行 ４℃ 静 置 过 夜 和 ３ ７℃ 温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ，并 且 液 ，５ ０儿 ／孔 ，避 光 反 应 １ ０ ｍ ｉ ｎ 。⑧ 加 入 终 止 液 ， 其 他 检 测 步 骤 相 同情 况 下 进 行 结 果 对 比 。试 验 结 ５ ０ Ｌ ／孑 Ｌ ，读 取 Ｄ ４ ９ ２ ｎ ｍ 。 果 讨 论 两 种 实 验 方 法 得 出 的检 测 结 果 差 异 和 对 不 ｉ ． ３ ． ２第 二 组 实 验 （ ３ ７℃温 育 ９ ０ ｍ ｉ ｎ ）步 骤 ：
口蹄疫防治规范(幻灯片)PPT课件
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19
鼻镜边缘水泡
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20
猪口蹄疫， 颊部粘膜糜 烂
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21
蹄锺部水 泡破溃
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22
蹄叉部水泡 破溃，蹄冠 部水肿
-
23
猪乳房上的水疱
-
24
四、病变
口腔、蹄部的水疱和烂斑 咽喉、气管、支气管和前胃粘膜有时可见烂斑 心肌切面上有黄白条纹相间于红色心肌纤维间，
称为“虎斑心”，心肌松软、似煮熟样。
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37
口蹄疫扑灭再发的原因(四)
毒力强
1g水泡皮毒稀释到1000万倍（10-7 ） 以上可以使1头牛发病，也就是说，1头 牛的排毒量可以感染100万头
1g猪水泡皮可以使10万头猪感染发病。
5、传染源多，传播方式多，传播迅速
处在潜伏感染期和临床表现期的病畜 的排泄物
-
38
消灭口蹄疫必备条件
该病传染快、流行广、发病率高，往往牛、 羊、猪在同一时间内发病
近年来，猪发生有扩大的趋势
-
10
行病流学----传播方式
1、空气传播 2、接触传播
提示：加强空气消毒和带动物消毒
-
11
流行形式：
在牧区：常大流行
半农半牧区：流行
在农区：
该病的流行可呈跳跃式传播：主要是流通原因
季节性： 一年四季均可发生，秋季开始，冬季加剧，春 季减轻、夏季基本平息；在农区或半农区不明显， 猪秋末、冬春多发
-
4
型和亚型
● 有7个主型 每一个主型又有若干亚型我国仅见A、O、和亚洲
1型。各型之间不能互相免疫。
C SAT1 SAT2 SAT3
A O 亚洲１型
-
5
存在部位：
口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法
xpenmentaTstudy on online—口蹄疫病毒o型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法莫荣艳，熊丽文，梁惠娟，黄钰，黎益图，何涛，覃磊（来宾市动物疫病预防控制中心546100）摘要：应用液相阻断ELISA实验方法检测猪口蹄疫病毒O 型灭活疫苗免疫的猪血清80份,80份样品抗体效价逸1：64有78份，抗体保护率为98%遥通过口蹄疫病毒O型液相阻断ELISA免疫抗体检测快捷方法，能快速、高效的提高工作效率遥关键词：O型口蹄疫;液相阻断ELISA；抗体检测；猪本实验应用液相阻断ELISA检测方法检测猪血清样品80份,快速检测猪的O型口蹄疫抗体效价逸1：64有多少份。
ELISA 抗体效价与免疫动物攻毒保护的关系:猪的抗体效价逸1：64,99%以上保护;抗体效价＜1：4,不保护;效价在1：4~45,50%保护。
1材料和方法检测样品:猪血清80份（样品不能有溶血状态、受污染、破损、变质）,编号为DA1-DA80遥实验器材:酶标仪；37益恒温箱；超纯水仪；移液器；配套移液枪尖;96孔U型微量血凝板;移液槽；吸水纸；检测试剂盒是中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒。
2试剂准备将口蹄疫病毒O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒从冰箱取岀，放置常温解冻,试剂恢复常温后使用遥打开超纯水仪,取岀2L超纯水装在容器备用，按照检测试剂盒说明书，配制25倍PBST浓缩液，用超纯水稀释成1倍PBST（例如：1mL浓缩液加入24mL超纯水）。
打开恒温箱电源，设置温度到37益，温度上升到37益才能按实验要求正常工作。
配制口蹄疫O型病毒抗原:按照抗原配制比例，用PBST稀释液稀释到工作浓度（1：25,即1mL病毒抗原加24mL PBST稀释液）。
3实验操作步骤3.1稀释血清80份血清需要96孔U型微量血凝板共5块，在血凝板边缘标记数字（横向标记为1,2-12，纵向标记为A, B-H），一块板可以稀释16份血清样品。
口蹄疫液相阻断ELISA PPTPPT共22页
55、 为 中 华 之 崛起而 读书。 ——周 恩来
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
口蹄疫液相阻断ELISA PPT
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
谢谢！
51、 天 下 之 事 常成 于困约 ，而败 于奢靡 。——陆 游 52、 生 命 不 等 于是呼 吸，生 命是活 动。——卢 梭
53、 伟 大 的 事 业，需 要决心 ，能力 ，组织 和责任 感。 ——易 卜 生 54、 唯 书 籍 不 朽。——乔 特
口蹄疫液相阻断ELISA PPT
51、没有哪个社会可以制订一部永远 适用的 宪法， 甚至一 条永远 适用的 法律。 ——杰 斐逊 52、法律源于人的自卫本能。——英 格索尔
53、人们通常会发现，法律就是这样 一种的 网，触 犯法律 的人， 小的可 以穿网 而过， ——申 斯通 54、法律就是法律它是一座雄伟的大 夏，庇 护着我 们大家 ；它的 每一块 砖石都 垒在另 一块砖 石上。 ——高 尔斯华 绥 55、今天的法律未必明天仍是法律。 ——罗·伯顿
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6每孔再加50vl终止液终止反应，立即在 450nm波长下读取OD值。
四、结果分析
1、实验成立条件 病毒抗原对照OD值应在2.0±1范围内。 阳性对照抗体效价应在1：1024±1滴度
范围内。 阴性对照抗体效价应＜1：8. 如果实验无效，实验中的操作值得怀疑，
最好重新作一遍。
2、结果判定
抗原对照4孔，弃去1个最高和最低值， 计算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即 50%对照值，该值即为临界值，表示阻 断50%反应的对照OD450值。
备检血清OD450值＞临界值，判为阴性；
备检血清OD450值≤临界值，判为阳性；
每份血清系列滴度稀释中，阳性孔的最 高稀释倍数即为该备检血清的抗体效价。
抗体效价在1：64- 1：128之间，判为可 疑；可以血清需要复检，复检抗体效价 ≥1：128，判为阳性；抗体效价≤1：64， 判为阴性；
五、注意事项
1、实验前必须认真阅读说明书。 2、试剂盒所有浓缩试剂在低温放置下，
可能有无机盐结晶，如果有结晶盐出现， 80℃温育30min可溶解，且不影响实验。 3、所有试剂必须回复室温使用，以免影 响抗原抗体反应
2、样抗原抗体混合液及病毒抗原对照从 血清稀释板上按次序转移到包被板上 50vl/孔，封板， 37℃反应30Min。
3、洗涤液洗版5次，拍干。加抗体溶液 50vl/孔，封板， 37℃反应35Min。
4、同上洗板5次，拍干。加酶结合物 50vl/孔，封板， 37℃反应35Min。
5、同上洗板5次，拍干， 50vl/孔加入底 物溶液（显色液A和B按1：1混合），37 ℃避光温育15min。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
1.1稀释病毒抗原：用配制好的洗涤液在孔外6 倍稀释病毒抗原。
1.2待检血清稀释：在血清稀释板上，使用洗 涤液连续2倍稀释每份被检血清，每份血清稀 释2-8孔，根据检测用途而定。使每孔最终量 都为50vl。
1.3稀释阳性对照，参照步骤1.2，连续2倍稀释， 从1：16-1：1024。
4、温育设备要精确度要高，温度过高过 低都会影响OD值高低。
5、包被板反应时严禁堆叠放置，应平铺 且板间有间隙，切不可离箱壁太近。
6、所用移液器和设备要精准。
7、备检样品要合格。
操作要点
严谨的设计，优质的试剂，正确的操作 和良好的仪器是保证ELISA必要条件。
严格遵照规定操作，必能得出准确的结 果。
口蹄疫液相阻断ELISA
一、液相阻断ELISA基础知识
液相阻断ELISA（LB-ELISA）通途： 1、检测口蹄疫感染，广泛用于国际贸易
中，是OIE指定方法之一； 2、监测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口
蹄疫免疫效价，评价口蹄疫疫苗免疫效 果。
BL-ELISA原理图
显色液
检测抗体
病毒酶结合物
阳性不显色 阴性显黄色
1.4稀释阴性对照，参照步骤1.2，连续2倍稀释， 从1：2-1：4。
1.5血清稀释板加样：使用稀释好的病毒 抗原加样，其中预设的4孔病毒抗原对照 孔按100vl/孔加入，其余待检血清、阴阳 性对照按50vl/孔加入。加样完毕，所有 样品孔和因阳性对照孔稀释度翻倍，变 为图1图、2所示。
1.6将加好样的Biblioteka 清稀释板封板，置于 37℃反应2h。
待检血清与病 毒抗原混合液
捕获抗体
BL-ELISA反应原理：
将预先滴定好的病毒抗原与被检血清首先在液 相中反应，然后将抗原抗体复合物转移到包被 了口蹄疫特异性抗体的ELISA板中，没有完全 被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗 体捕获，再通过酶结合物与底物显色。按照实 验孔呈现颜色与抗原对照（未加血清）孔呈现 颜色相比较判定结果。
抗体滴度以阻断50%病毒抗原的血清稀释度表 示。
二、实验前准备
1、使用前，试剂 盒所有组份应回复 到18-26℃，试剂 要混合均匀，每个 样品使用一个吸头。
2、浓缩洗涤液用 蒸馏水或去离子水 25倍稀释。
三、实验操作步骤
1、抗原抗体反应布板
图 2 96 孔酶标板检测 20 份样品布局图
若临界值处于2孔之间，抗体效价取相邻 阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间 值，如果处在1：64和1:128之间，则该 份血清抗体效价是1：90。
定性检测时，两个孔只有一个孔为阳性， 则抗体滴度为1：128，2孔均为阳性，则 抗体效价＞1：128.
抗体效价≥1：128，判为阳性；
抗体效价≤1：64，判为阴性；
四、结果分析
1、实验成立条件 病毒抗原对照OD值应在2.0±1范围内。 阳性对照抗体效价应在1：1024±1滴度
范围内。 阴性对照抗体效价应＜1：8. 如果实验无效，实验中的操作值得怀疑，
最好重新作一遍。
2、结果判定
抗原对照4孔，弃去1个最高和最低值， 计算剩余2孔的平均OD值，再除以2，即 50%对照值，该值即为临界值，表示阻 断50%反应的对照OD450值。
备检血清OD450值＞临界值，判为阴性；
备检血清OD450值≤临界值，判为阳性；
每份血清系列滴度稀释中，阳性孔的最 高稀释倍数即为该备检血清的抗体效价。
抗体效价在1：64- 1：128之间，判为可 疑；可以血清需要复检，复检抗体效价 ≥1：128，判为阳性；抗体效价≤1：64， 判为阴性；
五、注意事项
1、实验前必须认真阅读说明书。 2、试剂盒所有浓缩试剂在低温放置下，
可能有无机盐结晶，如果有结晶盐出现， 80℃温育30min可溶解，且不影响实验。 3、所有试剂必须回复室温使用，以免影 响抗原抗体反应
2、样抗原抗体混合液及病毒抗原对照从 血清稀释板上按次序转移到包被板上 50vl/孔，封板， 37℃反应30Min。
3、洗涤液洗版5次，拍干。加抗体溶液 50vl/孔，封板， 37℃反应35Min。
4、同上洗板5次，拍干。加酶结合物 50vl/孔，封板， 37℃反应35Min。
5、同上洗板5次，拍干， 50vl/孔加入底 物溶液（显色液A和B按1：1混合），37 ℃避光温育15min。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
1.1稀释病毒抗原：用配制好的洗涤液在孔外6 倍稀释病毒抗原。
1.2待检血清稀释：在血清稀释板上，使用洗 涤液连续2倍稀释每份被检血清，每份血清稀 释2-8孔，根据检测用途而定。使每孔最终量 都为50vl。
1.3稀释阳性对照，参照步骤1.2，连续2倍稀释， 从1：16-1：1024。
4、温育设备要精确度要高，温度过高过 低都会影响OD值高低。
5、包被板反应时严禁堆叠放置，应平铺 且板间有间隙，切不可离箱壁太近。
6、所用移液器和设备要精准。
7、备检样品要合格。
操作要点
严谨的设计，优质的试剂，正确的操作 和良好的仪器是保证ELISA必要条件。
严格遵照规定操作，必能得出准确的结 果。
口蹄疫液相阻断ELISA
一、液相阻断ELISA基础知识
液相阻断ELISA（LB-ELISA）通途： 1、检测口蹄疫感染，广泛用于国际贸易
中，是OIE指定方法之一； 2、监测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口
蹄疫免疫效价，评价口蹄疫疫苗免疫效 果。
BL-ELISA原理图
显色液
检测抗体
病毒酶结合物
阳性不显色 阴性显黄色
1.4稀释阴性对照，参照步骤1.2，连续2倍稀释， 从1：2-1：4。
1.5血清稀释板加样：使用稀释好的病毒 抗原加样，其中预设的4孔病毒抗原对照 孔按100vl/孔加入，其余待检血清、阴阳 性对照按50vl/孔加入。加样完毕，所有 样品孔和因阳性对照孔稀释度翻倍，变 为图1图、2所示。
1.6将加好样的Biblioteka 清稀释板封板，置于 37℃反应2h。
待检血清与病 毒抗原混合液
捕获抗体
BL-ELISA反应原理：
将预先滴定好的病毒抗原与被检血清首先在液 相中反应，然后将抗原抗体复合物转移到包被 了口蹄疫特异性抗体的ELISA板中，没有完全 被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗 体捕获，再通过酶结合物与底物显色。按照实 验孔呈现颜色与抗原对照（未加血清）孔呈现 颜色相比较判定结果。
抗体滴度以阻断50%病毒抗原的血清稀释度表 示。
二、实验前准备
1、使用前，试剂 盒所有组份应回复 到18-26℃，试剂 要混合均匀，每个 样品使用一个吸头。
2、浓缩洗涤液用 蒸馏水或去离子水 25倍稀释。
三、实验操作步骤
1、抗原抗体反应布板
图 2 96 孔酶标板检测 20 份样品布局图
若临界值处于2孔之间，抗体效价取相邻 阳性孔和阴性孔稀释倍数的反对数中间 值，如果处在1：64和1:128之间，则该 份血清抗体效价是1：90。
定性检测时，两个孔只有一个孔为阳性， 则抗体滴度为1：128，2孔均为阳性，则 抗体效价＞1：128.
抗体效价≥1：128，判为阳性；
抗体效价≤1：64，判为阴性；