吸附柱色谱法的操作步骤课件
有机染料的吸附柱色谱
柱色谱分离示意图
色谱分离效果与固定相的颗粒直径大小、含 水量有关，也与流动相和被分离物质的极性的间的关系如图所示。
样品极性吸附剂活性和洗脱剂极性三者关系图
氧化铝是一种极性吸附剂，对极性较强的物质的 吸附力强；对极性较弱的物质的吸附力较弱。氧化铝 和硅胶的活性与含水量有关。一般分离用2级活性的吸 附剂。
二实验原理分类方法色谱类型分离原理分离原理吸附色谱分配色谱凝吸附色谱分配色谱凝胶色谱离子交换色谱固定相和流动相状态气相色谱液相色谱固定相所处的状态柱色谱薄层色谱纸色谱吸附柱色谱是利用装在柱中的经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂常用的吸附剂有氧化铝硅胶等在色谱分离中称固定相对待分离混合物中各组分的吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同进行分离的
七、思考题
1、若色谱柱装填不紧密均匀，对分离结果又和影响？ 如何避免？ 2、为什么极性大的组分要用极性大的溶剂洗脱？ 3、根据本实验的分离结果，判断甲基橙和亚甲基兰的 极性大小？ 4、在氧化铝柱子上分别分离下列两组混合物时，哪一 个组分先被洗脱下来? （1）邻硝基苯胺和对邻硝基苯胺 （2）偶氮苯和4-苯偶氮苯偶氮-2-萘酚（苏丹III）
HO
－N＝N－
－N＝N－
－N＝N－
5、在回收率测定时，需配制有机染料混合溶液，为什 么要用0.1mol· L-1HCl溶液定容？ 6、根据实验结果，分析影响两种染料回收率不同的原因。
八、作业
撰写实验报告。 回答思考题1、2、4、5。 预习“合成制取甲基橙”实验，冰水 浴操作。 阅读实验指导书P52～54和 《有机化学》含氮化合物中的伯胺的 性质的内容。
2、洗脱分离
当柱中流动相下降到滤纸片 上端1mm时，立即小心地滴加入 吸量管中的0.50mL有机染料混合 溶液，待混合溶液液面下降到将 与滤纸片相平时，用少量95％乙 醇将色谱柱内壁沾附的混合溶液 淋洗入柱内，然后少量多次地加 入95％乙醇洗脱，用25mL容量瓶 接收第一种染料洗脱分离液；再 改用0.1 mol· L-1HCl溶液继续洗 脱，用另一个25mL容量瓶接受第 二种染料洗脱分离液。
有机化学实验-色谱法
4.干法装柱和湿法装柱
干法装柱：固定相通过干燥的玻璃漏斗连续而缓慢地加入洗 净干燥的色谱柱中，再将溶剂用滴管沿柱壁加入，直至下方 放置容器中接收到液体。 湿法装柱：将用溶剂和固定相调成的糊状物一次性快速导入 洗净干燥的色谱柱中，吸附剂在溶剂中慢慢下沉。
注意事项： 1. 装柱过程中，用洗耳球或玻璃棒轻轻敲击色谱柱，使填料均匀； 2. 柱内液面必须保持高于固定相的高度； 3. 固定相的顶部不能形成斜面或凹凸不平； 4. 固定相上方需始终保持一定量的溶剂。
实验四 色谱法
二、实验原理
2.吸附剂的选择
吸附剂吸附能力大小常用“活性”来表示。
颗粒大小：颗粒越小，活性越大，分离效果
相关因素
越好，洗脱速率越慢；
含水量：含水量较大存在失活可能；
常用吸附剂：氧化铝、硅胶等。
3.容器的选择
根据被分离样品量的大小等因素，色谱柱 的长短粗细也会影响分离效果。
实验四 色谱法
2、加氧化铝
用玻璃漏斗辅助加入，加完后轻轻抽出玻璃棒，用洗耳球或 玻璃棒轻轻敲击柱侧面，直至氧化铝不再沉降。
3、压柱子
油泵抽气或其它方法压柱子,确保氧化铝压实,以防氧化铝中 残留气体导致装柱失败。
实验四 色谱法
四、实验操作步骤
步骤二、加洗脱剂(淋洗剂)
95%乙醇冲洗柱子，适当多加些洗脱剂，延长走柱子的时间，以充分赶 走气泡，达到平衡状态。
1.洗脱剂的选择
极性化合物 → 极性溶剂 非极性化合物 → 非极性溶剂
常用流动相极性： 石油醚＜汽油＜庚烷＜己烷＜二硫化碳＜二甲苯＜甲苯＜氯丙 烷＜苯＜溴乙烷＜溴化苯＜二氯乙烷＜三氯甲烷＜异丙醚＜硝 基甲烷＜乙酸丁酯＜乙醚＜乙酸乙酯＜正戊烷＜正丁醇＜苯酚 ＜甲乙醇＜叔丁醇＜四氢呋喃＜二氧六环＜丙酮＜乙醇＜乙腈 ＜甲醇＜氮氮二甲基甲酰胺＜水
柱层析色谱实验操作
缺点：使用湿法则需要较多的溶剂，导致上 样层变厚，分离效果不好。
洗脱与检测
在洗脱过程中，柱内不断地发生解吸、吸附，再解吸、再吸附的过程。
当我们选定好洗脱液后，洗脱的方式可分为简单洗脱、分步洗脱和梯度洗脱 三种。
简单洗脱：柱子始终用同样的一种溶剂洗脱，直到层析分离过程结束为止 。如果被分离物质对固定相的亲合力差异不大，其区带的洗脱时间间隔（或 洗脱体积间隔）也不长，采用这种方法是适宜的。但选择的溶剂必须很合适 方能使各组分的分配系数较大。否则应采用下面的方法。
流动相体系的选择
特殊样品：会造成拖尾，严重影响分离效果 碱性物质
洗脱剂中加千分之一的三乙胺，或用千分之一到百分之 一的氨水、三乙胺或者氨甲醇，碱化柱子。
酸性物质
洗脱剂中加千分之一的醋酸。
如果流动相中加入酸碱，再洗脱完毕时，有必要时应水 洗除去洗脱剂中的酸碱。
层析柱的选择
关于柱子的尺寸，应该是粗长 的最好 ：横截面/高度比
柱层析色谱
基本原理
色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在 两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同 来进行分离的。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与 固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随 着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次 的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不 同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适 当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的 分离与检测。
气泡的产生与排除
气泡产生原因 由于溶剂和吸附剂之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产
生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽然 产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加 溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花。另外，在 变换洗脱剂时，由于溶剂极性的改变页容易产生气泡；天气太热，溶剂挥发 也易产生气泡。 排除对策： 1.装柱之前应搅拌均匀，然后装柱； 2.装柱尽可能一次性的装完， 3.一定要用较多的溶剂“走柱子”，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到 室温后再撤去压力 4.过柱的时候，你是否干过柱，这也会产生气泡； 5.在装完柱后，最好在硅胶上方加一片圆形滤纸，加上后再加一块棉花，这 样加溶剂冲洗时，可以避免冲起硅胶，产生气泡； 如果气泡已经产生，可以： 1.加压驱赶气泡；
吸附柱色谱法[精华]
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吸附柱色谱法1．柱色谱的分离过程图1为柱色谱分离过程示意图。
用一根下端缩口的玻璃柱管，下端加棉花或玻璃毛，管内加入一些吸附剂，用一种溶剂润湿后，即为一个吸附剂如（a）。
然后在柱顶部加入被分离的溶液如（b）。
假设样品中含有A与B两种成分，则两者被吸附剂吸留在柱的上端，形成一个层如（c）。
图中虚线是溶液中溶剂前沿到达的地方。
样品溶液全部溶入吸附柱中之后，接着就加入溶剂冲洗，成分A与B也将随着溶剂的向下移动而移动，最后得到分离，如图中（d）与（e）。
加入的溶剂就叫“冲洗剂”或“洗脱剂”、“显层剂”。
冲洗过程叫“冲洗”，“洗脱”，“展开”或“显层”。
管下流出的液体叫“洗脱液”或“流出液”。
成分A与B显出的色图叫做“色带”或“色区”。
在显层过程中，加入溶剂来冲洗，管内就连续不断的发生溶解，吸附，再溶解，再吸附的现象，经过适当的时间移动后，成分A与B就可完全分开，形成两个环节。
若成分A与B有颜色，就能清楚地看到色层。
如果样品无色，可借助紫外光下看萤光位置或用其他方法观察，为了把它们分别提出，可将吸附剂柱从管中顶出来，按照色带位置，用刀割切开，然后分别洗脱得出成分。
现在采用溶剂洗脱法较多。
即继续加溶剂直到各成分顺序全部由柱中洗出为止。
这就是“洗脱法”。
2．吸附剂：吸附剂的性质与选择，是吸附柱色谱法中的关键问题，选择得当，分离便能顺利进行。
吸附剂的选择虽已积累了很多经验，但是具体实验时，还需要通过实验而定。
（1）对吸附剂的要求：a 有大的表面积与足够的吸附能力。
b 对不同的化学成分有不同的吸附平衡常数，能较好地把不同化学成分分离。
c 与冲洗剂，溶剂及样品中各成分不起化学反应。
d 在所用的溶剂及冲洗剂中不溶解。
e 颗粒均匀，操作过程中不会碎裂。
（2）吸附剂的类别：a 有机类，有淀粉，葡萄糖，聚酰胺，纤维素。
b 无机类，常用的有氧化铝，硅胶，活性碳，碳酸钙，酸性白土等。
（3）吸附剂的处理：很多吸附剂可以不经过处理就直接应用，但是有的由于含有某些杂质以及吸附力较弱，需先加处理，以得到合格的性能，首先可用过筛办法，取得颗粒大小比较均匀的部分。
柱色谱分离实验ppt课件
二、实 验 原 理
固定相、流动相的物理状态
液—固色谱法 气—固色谱法 气—液色谱法
液—液色谱法 柱柱色色谱谱法法（（ccoolluummnncchhrroommaattooggrraapphhyy））
色
纸色谱法（paper chromatography）
谱 操作形式 薄层色谱法（TLC）
法
气相色谱（GC）
级的物质量。 分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试样分析。
柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝
实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:
甲基橙
亚甲基蓝
由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的 吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、
解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析 速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实验以 硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水 作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。
三、实 验 内 容
加样 样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选
择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管 壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。
洗脱
三、实 验 内 容
在柱顶不断加入洗脱剂，使 洗脱剂永远保持有适当的量，不 要让洗脱剂表面流干，使流动相 流速适当。
•洗脱时应注意：
•（1）向柱内加入95%乙醇溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安 装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度1滴/秒 。逐渐出现色层带分离。
三、实实验验步 内骤:容 柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶 +乙醇
•先用乙醇 后用水
•操作
色谱分析—柱色谱(分析化学课件)
柱色谱应用
（五）分子排斥色谱 （size- exclusion chromatography） 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝
胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通 过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外 ，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。
全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按 质量分离。
柱色谱应用
（三）离子交换色谱（ion-exchange chromatography） 原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应； 固定相：阴离子或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子 交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 阳离子交换：R-SO3H+M+ =R-SO3 M+H + 阴离子交换：R-NR4OH+X-=R-NR4 X+OH应用：离子、可离解的化合物、氨基酸和核酸等。
柱色谱应用
1.吸附剂 吸附剂为多孔性微粒物质。常用的有硅胶、氧化铝、聚酰胺和大孔吸附树脂等。 需满足以下条件： ❖具有较大的吸附表面和吸附中心； ❖与样品、溶剂和洗脱剂均不发生化学反应； ❖不能被溶剂或洗脱剂溶解； ❖粒度均匀，且有一定的粒度。
柱色谱应用
（1）硅胶 适用于酸性或中性物质 （2）氧化铝 碱性氧化铝 pH 9.0～10.0 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4.0～5.0 适于分析酸性、中性物质 （3）聚酰胺 氢键作用，氢键能力↑强，组分越后出柱。 注：吸附剂含水量越大，活性级别越高，吸附活性越低，吸附能力越弱。
柱色谱应用
A
B
C
D
柱色谱应用
柱色谱法 中国药品检验标准操作规范 2010年版
柱色谱法柱色谱法是将固定相装在柱内，使样品随流动相沿一个方向移动而达到分离的方法。
（《中国药典》2010年版二部附录Ⅴ C）附录收载的柱色谱法包括吸附柱色谱法和分配柱色谱法。
1 吸附柱色谱法吸附柱色谱法是利用色谱柱内吸附剂对于样品中的各组分的吸附能力的差异以达到分离目的的方法。
1.1吸附剂常用的有：氧化铝、硅胶、聚酰胺、大孔吸附树脂等。
吸附剂的颗粒应尽可能大小均匀，除另有规定外，通常多采用直径为70～150 m的颗粒。
1.2色谱柱色谱柱为内径均匀，下端缩口或具活塞的硬质玻璃管，下端通常用棉花或玻璃纤维塞住，以防止吸附剂流失。
1.3吸附剂的填装1.3.1干法将吸附剂均匀地一次加入至色谱柱中，振动管壁使其均匀下沉，打开色谱柱下端活塞，沿管壁缓缓加入洗脱剂，待柱内吸附剂全部湿润，且不再下沉为止，也可在色谱柱内加入适当的洗脱剂，旋开活塞，使洗脱剂缓缓滴出，然后自管顶端缓缓加入吸附剂，使其均匀地湿润下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。
装柱完毕，关闭下端活塞。
操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。
1.3.2湿法将吸附剂与洗脱剂混合均匀，采用搅拌方式除去其中气泡，打开下端活塞，缓缓倾入色谱柱中，必要时，振动管壁使气泡排除，用洗脱剂将管壁吸附剂洗下，使色谱柱面平整。
待平衡后，关闭下端活塞，操作过程中应保持吸附层上方有一定量的洗脱剂。
1.4供试品的加入1.4.1干法加入法如供试品不易溶解于初始洗脱溶剂，可预先将供试品溶于易溶溶剂中，用少量吸附剂拌匀，采用加温或挥干方式除去溶剂，待干燥后，再将带有供试品的吸附剂加入至已装好的吸附剂上面，加入洗脱剂。
1.4.2湿法加入法先将色谱柱中洗脱剂放至与吸附剂面相齐，关闭活塞；用少量初始洗脱溶剂使供试品溶解，沿色谱管壁缓缓加入供试品溶液，应注意勿使吸附剂翻起（亦可在吸附剂表面放入面积相当的滤纸），待供试品溶液完全转移至色谱管中后，打开下端活塞，使液面与柱面相齐，加入洗脱剂。
吸附柱色谱——精选推荐
吸附柱色谱吸附柱色谱一、实验目的1. 学习和掌握柱色谱分离有机化合物的基本原理和实验技术。
2. 巩固薄层色谱的实验技术。
二、基本原理柱色谱是在一根玻璃管或金属管中迸行的色谱技术，将吸附剂填充到管中而使之成为柱状，这样的管状柱称为吸附色谱柱。
使用吸附色谱柱分离混合物的方法，称为吸附柱色谱。
这种方法可以用来分离大多数有机化合物，尤其适合于复杂的天然产物的分离。
分离容量从几毫克到百毫克级，所以，适用于分离和精制较大量的样品。
在吸附柱色谱中，吸附剂是固定相，洗脱剂是流动相，相当于薄层色谱中的展开剂。
吸附剂的基本原理与吸附薄层色谱相同，也是基于各组分与吸附剂间存在的吸附强弱差异，通过使之在柱色谱上反复迸行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程而完成的。
所不同的是，在进行柱色谱的过程中，混合样品一般是加在色谱柱的顶端，流动相从色谱柱顶端流经色谱柱，并不断地从柱中流出。
由于混合样中的各组分与吸附剂的吸附作用强弱不同，因此各组分随流动相在柱中的移动速度也不同，最终导致各组分按顺序从色谱柱中流出。
如果分步接收流出的洗脱液，便可达到混合物分离的目的。
一般与吸附剂作用较弱的成分先流出，与吸附作用较强的成分后流出。
三、吸附剂与洗脱剂根据待分离组分的结构和性质选择合适的吸附剂和洗脱剂是分离成败的关键。
1. 吸附剂的要求一种合适的吸附剂，一般应满足下列几个基本要求:①对样品组分和洗脱剂都不会发生任何化学反应，在洗脱剂中也不会溶解。
②对待分离组分能够进行可逆的吸附，同时具有足够的吸附力，使组分在固定相与流动相之间能最快地达到平衡。
③颗粒形状均匀，大小适当，以保证洗脱剂能够以一定的流速(一般为1.5 mL·min-1)通过色谱柱。
④材料易得，价格便宜而且是无色的，以便于观察。
可用于吸附剂的物质有氧化铝、硅胶、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙 (镁)、淀粉、纤维素、蔗糖和活性炭等。
其中有些对几类物质分离效果较好，而对其它大多数化合物不适用。
吸附柱色谱法的操作步骤
柱色谱 化学 成分 操作
操作 过程 鉴别
课后习题
1、干法与湿法装柱有何操作要点。 2、柱色谱的洗脱溶剂应如何选择。
课后预习
分配柱色谱法
操作、分离
《中药化学实用技术》
吸附柱色谱法操作步骤 （CC）
教学目标：
1、学会吸附柱色谱的操作方法及要点。 2、知道吸附柱色谱的原理。 3、了解柱色谱的英文（CC）缩写。 教学重点： 吸附柱色谱法的操作及要点，收集液的鉴别方法。 教学难点： 系统溶剂的选择。
复习旧课
色谱法按操作形式可以分为哪几类？
薄层色谱法、纸色谱法、柱色谱法
导入新课
约300元 /g
Rd,17500元 /g
吸附柱色谱法(CC)
分离
？
龙舟
化学成分
水 阻力
固定相 吸附力
龙舟比赛
先后
？
人 推力
流动相 解吸附力
一、原理
三要素
固定相
吸附力
： 解析附力
流动相
化学成分
二、操作过程
装柱
上样
洗脱
收集
1、装柱
分组操作
干法
选柱
适量 硅胶
装柱
直径0.5-10cm，长度 为直径的10-40倍
样品：硅胶 1:20-1:50
均匀、检查
1、装柱
湿法
选柱
硅胶+初始 洗脱剂
装柱
比较
直径0.5-10cm ，长度为直 径的10-40倍
混悬液
装均匀
2、上样
干法
硅胶 样品液
混匀、 阴干
上样
溶剂易溶
样品：硅胶 1:1-1:2
干法装柱方 式，均匀
2、上样
实验四 柱色谱
实验五柱色谱计划学时：3学时一、实验目的：学习柱色谱的操作方法。
二、实验原理：柱色谱（柱上层析）常用的有吸附色谱和分配色谱两类。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶作固定相；而分配色谱中以硅胶、硅藻土和纤维素作为支持剂，以吸收较大量的液体作固定相，而支持剂本身不起分离作用。
吸附柱色谱通常在玻璃管中填入表面积很大经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂。
当待分离的混合物溶液流过吸附柱时，各种成分同时被吸附在柱的上端。
当洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，于是形成了不同层次，即溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小分别形成若干色带，再用溶剂洗脱时，已经分开的溶质可以从柱上分别洗出收集；或将柱吸干，挤出后按色带分割开，再用溶剂将各色带中的溶质萃取出来。
1、吸附剂常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。
吸附剂一般要经过纯化和活性处理，颗粒大小应当均匀。
对于吸附剂而言，粒度愈小表面积愈大，吸附能力就愈高，但颗粒愈小时，溶剂的流速就太慢，因此应根据实际分离需要而定。
供柱色谱使用的氧化铝有酸性、中性、碱性三种，本实验选择中性氧化铝。
2、溶质的结构与吸附能力的关系化合物的吸附性与它们的极性成正比，化合物分子中含有极性较大的基团时，吸附性也较强。
各种化合物对氧化铝的吸附性按以下次序递减：酸和碱> 醇、胺、硫醇> 酯、醛、酮> 芳香族化合物> 卤代物、醚>烯> 饱和烃3、溶剂溶剂的选择是重要的一环，通常根据被分离物中各化合物的极性、溶解度和吸附剂的活性等来考虑。
先将要分离的样品溶于一定体积的溶剂中，选用的溶剂极性要低，体积要小。
如有的样品在极性低的溶剂中溶解度很小，则可加入少量极性较大的溶剂，使溶液体积不致太大。
色层的展开首先使用极性较小的溶剂，使最容易脱附的组分分离。
然后加入不同比例的极性溶剂配成的洗脱剂，将极性较大的化合物自色谱柱中洗脱下来。
常用洗脱剂的极性按如下次序递增：己烷和石油醚<环己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸所用溶剂必须纯粹和干燥，否则会影响吸附剂的活性和分离效果。
柱层析的操作步骤和注意事项
精心整理柱层析技术常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。
我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。
由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。
柱子可以分为：加压，常压，减压。
压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。
所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
头了。
有0.5相差0.1是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。
至于是加压、常压、减压，随需而定。
因为是schlenk操作，所以点板是个问题，假如样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。
假如样品无色，只好预备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。
像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。
因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很轻易是样品分解，非凡是金属有机化合物和含磷化合物。
而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。
听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。
哪位做过可以提出来大家参详参详。
--※关于湿法、干法上样。
湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。
很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。
可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，假如不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。
柱色谱PPT课件
吸附色谱三要素－洗脱剂
极性 小
大
溶剂组合
己烷－苯 苯－乙醚 苯－乙酸已酯 氯仿－乙酸已酯 氯仿－甲醇 丙酮－水 甲醇－水
25
吸附色谱三要素－洗脱剂
层析时，如被分离的物质含有羧基或氨 基等极性强的官能团，容易发生色带扩散和 拖尾现象，为了防止这种现象达到有效分离: ❖ 在分离含有羧基的试样时，可加少量的醋 酸； ❖在分离含有氨基试样时，可加少量的氨水、 吡啶、二已胺等溶剂，以控制它们的解离， 消除拖尾，提高层析效能。
溶于层析时所用的溶剂中； 2）能保持一定量的固定相，并使流动相能自由通过，
并不改变其组成； 3）保持固定相的量应尽量多，最好能达到支持剂重
量的50％以上。
30
分配色谱三要素-支持剂和固定相
❖ 纤维素：含水量可达25％，层析用纤维素可分两 种，即天然纤维素和微晶纤维素。纤维素上有许 多羟基，易与水形成氢键而将水吸附，这种吸附 着的水分形成分配柱层析中的固定相。
31
分配色谱三要素-洗脱剂
2 溶剂（洗脱剂） 一般是根据分配层析所使用的固定相和欲分
离化合物的性质来选择溶剂。在分配层析中通常 是用水为固定相，选用与水不混溶的溶剂作为流 动相。
在实际操作中多用混合溶剂作为洗脱剂，使 用时可调整溶剂系统的组成和各组分的比例，以 获得理想的溶剂系统，并加入醋酸、氨水等弱酸、 弱碱，以防止某些被分离组分的离解。
干法装柱 将吸附剂通过漏斗形成细流，慢慢加入柱内， 同时不断敲打使之均匀。 打开下端活塞，从上端倒入洗脱剂冲柱，以排 出柱内气泡，并保留一定液面
湿法装柱
在柱中装入最初要用的洗脱剂，再倒入吸附剂， 同时打开下端活塞，使洗脱剂带动吸附剂沉降 到柱下端至完全，在吸附剂上面加少许棉花或 小片滤纸。
气相色谱柱专业知识课件
装柱过程： 1）空柱管→酸洗，碱洗，乙醚洗 2）固定液（<20%）→溶解在有机溶剂→载体 3）静态老化 4）动态老化
第四节 检测器
检测器：是将流杰出谱柱旳被测组分旳浓度转变为 电信号旳装置
一、气相色谱检测器分类 二、常用检测器旳特点和检测原理 三、检测器旳性能指标
气相色谱柱
（一）载体
1．作用：承载固定液旳作用
2．要求： 比表面积大（多涂渍固定液） 无吸附性（不吸附被测组分） 化学惰性（不与固定液发生化学反应） 热稳定性好 一定旳机械强度
续前
3．分类： （1）硅藻土类：具有一定粒度旳多孔性固体微粒
红色：吸附力强，与非极性物质配伍 白色：吸附力弱，与极性物质配伍 （2）非硅藻土类：玻璃微球，石英微球，
注：对于中档极性组分，若沸点相同， 则按极性顺序出柱，极性较强旳后出柱
续前
b．按化学官能团相同选择： 固定液与被测组分化学官能团相同，作用力强， 选择性高
酯类——选酯或聚酯固定液 醇类——选醇类或聚乙二醇固定液
（2）按组分性质旳主要差别选择
组分旳沸点差别为主 —— 选非极性固定液 按沸点顺序出柱 沸点低旳先出柱
➢ 小结：
固定液分类，固定液选择，分离条件选择 两种类型检测器特点，检测原理，使用注意 敏捷度与检测限优劣衡量
Sm
A C1
C2 w
60
[mV s / g]
S m 指1秒钟携带1g样品进入检测器所产生的信号强度
A — —峰面积(cm2 )
C1 — —记录器灵敏度（mV / cm） C2 — —记录纸纸速倒数（min/ cm）
w — —进样量（g）
（三）检测限（敏感度）：
吸附柱色谱法的操作步骤PPT课件123
下口活塞。 ② 湿法装柱 吸附剂中加入适量洗脱剂调成稀糊状，再把放好棉花或
砂芯的下口打开，然后徐徐将制好的糊浆灌入柱子。操作要慢，不要将气泡压入吸
附剂中，而且要始终保持吸附剂上有溶剂，最后让吸附剂自然下沉。当洗脱剂刚好
覆盖吸附剂平面时，关紧下口活塞。 （3）上样 ①湿法上样 把被分离的物质溶在少
吸附柱色谱法的操作步
骤PPT课件123
演讲人
（1）色谱柱的选择 色谱柱通常用玻璃柱。柱入口端应该有进料分布器，柱顶端加
一层多孔的尼龙圆片或保持段缓冲液层，柱底部可以用玻璃棉或砂芯玻璃板。
（2）装柱 ①干法装柱 在柱下端加少许棉花或玻璃棉，再轻轻地撒上一层5mm厚的
干净砂粒。打开下口，然后将吸附剂经漏斗缓缓加入柱中，同时轻轻敲动色谱柱，
量洗脱剂中，小心加在吸附剂上层，注意保持吸附剂上表面仍为一水平面。
②干法上样 选用一种对样品溶解度大而且沸点低的溶剂，取尽可
能少的溶剂将样品溶解。再溶液中加入少量吸附剂，拌匀，挥干
溶剂，研磨使之成松散均匀的粉末，轻轻撒在色谱柱吸附剂上面，
再撒一层细砂。 （4）洗脱 在装好吸附剂的色谱柱中缓缓加入洗
脱剂，进行剃度洗脱，各组分先后被洗出。采用薄层色谱定性检
查各流分中的化学成分组成。含单一色点的部分用合适的溶剂结
晶；仍为混合物的部分进一步寻找分离方法再进行分离。
谢谢
液固吸附色谱法
液固吸附色谱法是一种基于吸附剂与被分离物质之间相互作用力的差异来实现分离的色谱技术。
在液固吸附色谱法中，被分离物质在流动相和固定相之间的分配平衡是其分离的基础。
液固吸附色谱法的原理是利用固体吸附剂的吸附作用，将被分离物质吸附在固体表面，然后通过改变流动相的组成或条件，使得被分离物质在固定相和流动相之间的分配平衡发生变化，从而实现分离。
液固吸附色谱法的操作步骤一般包括装柱、上样、洗脱和检测等步骤。
首先，将固体吸附剂填充到色谱柱中，然后将被分离物质加入到色谱柱的流动相中。
在流动相的带动下，被分离物质在固定相和流动相之间进行分配平衡。
在洗脱过程中，改变流动相的组成或条件，使得被分离物质在固定相和流动相之间的分配平衡发生变化，从而实现分离。
最后，通过检测器对分离后的组分进行检测和分析。
液固吸附色谱法的优点包括分离效果好、分离时间短、柱子可重复使用等。
由于液固吸附色谱法是基于吸附作用实现分离的，因此它可以用于分离大多数类型的化合物，如脂肪酸、氨基酸、醇、醛、酮等。
此外，液固吸附色谱法的柱子填充简单，可以方便地更换或再生，因此其应用范围广泛。
然而，液固吸附色谱法也存在一些局限性。
首先，对于某些极性较强或分子量较小的化合物，液固吸附色谱法的分离效果可能较差。
其次，液固吸附色谱法的洗脱剂的选择也比较重要，如果选择不当可能会影响分离效果。
此外，对于某些特殊类型的化合物，液固吸附色谱法的分离效果可能不如其他色谱技术。
在实际应用中，需要根据具体的分离需求和被分离物质的性质选择合适的液固吸附色谱法条件。
例如，可以选择不同的吸附剂、流动相的组成和浓度、洗脱剂的组成和浓度等来优化分离效果。
同时，还需要注意液固吸附色谱法的操作温度和流速等参数的控制，以确保分离效果和实验的重现性。
总之，液固吸附色谱法是一种重要的分离和分析方法，具有广泛的应用前景。
通过不断优化实验条件和应用范围，相信液固吸附色谱法将会在未来的科学研究和工业生产中发挥更加重要的作用。
大孔树脂柱色谱ppt课件
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1 大孔吸附树脂法的基本原理
工业化的大孔吸附柱色谱设备
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1 大孔吸附树脂法的基本原理
1.3 大孔吸附树脂的分离原理
大孔吸附树脂也叫大网格吸附剂，是继 离子交换色谱之后又一新型分离介质。它既 不同于离子交换树脂，又有别于凝胶分子筛， 同时兼有吸附性和选择性，是吸附性和筛选 性原理相结合的分离材料。
目前，大孔吸附树脂广泛应用于废水处理、医药工 业、化学工业、分析化学、临床鉴定、工业脱色、环境 保护等领域。
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2 大孔树脂的结构、性质与种类
2.2 大孔吸附树脂的结构和理化性质
大孔吸附树脂的 理化性质稳定， 骨架结构主要有 不溶于酸、碱及 大孔吸附树脂一 苯乙烯、丙烯酸 有机溶剂，对有 般为白色球状颗 脂、丙烯腈、异 机物选择性好， 粒，粒度为20-60 丁烯等，致孔剂 不受无机盐类及 目，宏观小球系 有甲苯、石蜡、 强离子、低分子 由许多彼此间存 汽油、煤油、碳 化合物存在的影 在孔穴的微观小 醇、聚乙烯醇等， 响，在水和有机 球组成。 分散剂有明胶等， 溶剂中可吸附溶 交联剂有二乙烯 剂而膨胀。 苯等
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1 大孔吸附树脂法的基本原理
1.3 大孔吸附树脂的分离原理
其吸附性能与活性炭相似，从相互作用 力的角度观察，它所具有的吸附性与范德华 力或氢键有关，筛选性能与具有网状结构和 很高的比表面积有关。通过上述这种吸附和 筛选原理，有机化合物根据吸附力的不同及 分子量的大小，在大孔吸附树脂上经一定的 溶剂洗脱而达到分离的目的。
利用大孔吸附树脂 对欲分离物质的吸 附作用和筛选作用 达到分离目的的方法。
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1 大孔吸附树脂法的基本原理
1.2 大孔树脂柱色谱
以大孔吸附树脂为固定相，使分离物提取 液通过装有大孔树脂的柱子，其中的有效成分 选择性地吸附在树脂上，而杂质成分不被吸附， 在经过适当的溶剂洗脱，收集含有效成分的流 出液，合并浓缩，回收溶剂，便可以除掉分离 物提取液中的杂质成分，达到有效成分分离与 纯化的目的。