第二章2植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作
第2章+植物组培实验室及实验基本操作
5.有机溶剂 5.有机溶剂
苯、二甲苯、丙酮等。 二甲苯、丙酮等。 适用范围： 适用范围：用于浸洗除去小件异形 仪器，如活栓孔、 仪器，如活栓孔、吸管及滴定管的 尖端等
(二)、洗涤方法
1.新购买的玻璃仪器的清洗 1.新购买的玻璃仪器的清洗 2.使用过的玻璃仪器的清洗 2.使用过的玻璃仪器的清洗 3.塑料器皿的清洗 3.塑料器皿的清洗 仪器清洗后 4.金属用品洗涤 4.金属用品洗涤 干净的标准： 干净的标准： 5.除菌过滤器清洗 5.除菌过滤器清洗 以内外不挂 有水珠为宜。 有水珠为宜。
第三节 培养基及其配制
一、培养基的种类 二、培养基的成分 三、培养基的配制 四、培养基的配制及其灭菌 五、常用培养基的配方及其特点
一、 培养基的种类
根据培养基成分种类和含量：主要有MS、 （一）根据培养基成分种类和含量：主要有MS、 White、 White、B5、N6、SH等 SH等 根据无机盐的浓度：1.高无机盐 2.高硝 （二）根据无机盐的浓度：1.高无机盐 2.高硝 3.中等无机盐 4.低无机盐 态氮 3.中等无机盐 4.低无机盐 培养基根据其态相:固体、 （三）培养基根据其态相:固体、液体 培养基根据培养物的培养过程：初代、 （四）培养基根据培养物的培养过程：初代、 继代。 继代。 培养基根据其作用：诱导、增殖、生根。 （五）培养基根据其作用：诱导、增殖、生根。 （六）培养基根据其营养水平：基本、完全。 培养基根据其营养水平：基本、完全。
1.干热灭菌 1.干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器 械的灭菌。操作方法： 械的灭菌。操作方法： 150℃，40min或120℃， 150℃，40min或120℃， 120min， 120min，如果发现芽孢杆 160℃，90－120min。 菌，160℃，90－120min。 使用的仪器干燥消毒柜。 使用的仪器干燥消毒柜。 干燥消毒柜
植物组织培养的基本条件—组培常用的仪器设备及使用
目录
基本仪器与设备 无菌操作设备 培养器皿及实验工具
灭菌设备 材料培养设备
一、基本仪器与设备
1、天平
天平存放的环境要求： 干燥、无震动、无腐蚀性药品的地方，避免移动，天平匣内应放硅胶或其他 中性干燥剂以保持干燥（如万分之一天平）。 A.电子天平 精度高、称量快。
恒温水浴锅
恒温箱
4、培养箱
生化培养箱 光照培养箱
生化培养箱Βιβλιοθήκη 光照培养箱5、解剖镜
用于剥离茎尖。 多采用双筒实体解剖镜，在分离茎尖等较小组织时，便于观察、操作，通常 放大5-80倍。
6、显微镜
双目体视显微镜用的较多，多用于剥离茎尖以及隔瓶观察内部植物组织生长 情况。
双目体视显微镜
生物显微镜，用以观察花粉发育时期以及培养过程中细胞核的变化 生物显微镜
A. 烘箱类 有些材料需要烘干，或器皿需要干燥，实验室需要配备烘干设备。烘箱和干 燥箱差别不大，主要在烘干时间上以及强度上有差异。 迅速干燥，在烘箱内烘干，80-100℃为宜。 干热灭菌，温度升至150-180℃，持续1-3h。 培养物分析，在80℃条件下烘干。
B. 恒温箱类 恒温箱用于原生质体和酶制剂保温，也用于暗培养。 恒温箱内装上日光灯可进行温度及光照小型实验。 恒温水浴锅可用于超低温保存的材料的解冻实验。
B.分析天平
精度为0.0001g，用来称取微量元素和植物生长调节物质及微量附加物。 选择平稳，干燥，没有腐蚀性药品和水气的地方放置。
2、冰箱和冰柜
A.普通冰箱 很多材料需要提前配制（如母液），于冰箱内保存。 B.低温冰箱 某些试剂、药品和母液需要低温保存，有些材料需低温处理。
3、烘箱、干燥箱、恒温箱和恒温水浴锅
植物组织培养教学大纲(生物)
《植物组织培养》教学大纲适用专业：高职应用生物技术等专业总学时：86学时１．课程的性质和任务：植物组织培养是现代植物生物技术的重要分支之一，是人们在无菌条件下利用人工培养基对植物细胞、组织或器官的培养。
这项技术目前已在科研和生产上取得了令人瞩目的进展，该学科在我国高等农林院校植物生产类专业中已被列为一门重要的专业基础课程。
由此可见，不论在理论研究上或在生产实践上，植物组织培养都日益显示出十分重要的作用。
通过对植物组织培养的基础理论和基本方法的学习，使学生较能准确地掌握这门技术并能应用于自己的学习和工作中。
２．教学基本要求：根据《植物组织培养》课程的特点，结合本专业的实际情况，要求以理论教学（即课堂讲授）和实践相结合的教学方式完成该课程的教学任务。
理论教学重点讲授基本概念、基本原理和基本方法（总论）。
至于一些典型植物（主要是园艺作物或观赏植物）的组培理论和组培方法则放在课程实习时加以概述，具体的培养技术有待于同学们在以后的工作中实践。
课堂讲授要求重点突出，条理清晰，层次分明，详略得当。
与此同时，植物组织培养也是一门与生产实际结合比较紧密的课程，相应的实验和实习环节是不可缺少的。
通过参加一定的实验和实习，能进一步提高学生对所学知识的理解，培养和锻炼学生的动手能力和实践技能。
３．理论教学内容第1章绪论教学目的和要求本章要求学生了解植物组织培养的发展简史及研究现状，理解和掌握植物组织培养的有关概念，深刻认识植物组织培养在科学研究与生产实践中的重要作用和地位。
植物组织培养的一般概念教学重点难点植物组织培养概念教学内容§1-1植物组织培养的发展简史1．探索阶段2．奠基阶段3．迅速发展阶段§1-2植物组织培养在科学研究和生产实践中的地位与作用第2章实验室的设计、基本设备及一般操作技术教学目的和要求通过对本章的学习，要求学生对植物组织培养实验室的基本组成、基本设备及基本操作技术能有一个较全面的认识。
植物组织培养实验室构建
植物组织培养实验室构建概述植物组织培养实验室是进行植物细胞培养、愈伤组织培养、植物遗传转化等实验的重要场所。
建立一个高效的植物组织培养实验室对于开展植物生物技术研究至关重要。
本文将介绍植物组织培养实验室的构建步骤及相关设备和操作流程。
步骤1. 确定实验室位置植物组织培养实验室应设置在通风良好、光线充足的环境中，并且远离其他实验室以避免交叉污染。
实验室的位置选择也应考虑到未来扩建或改造的可能性。
2. 设计实验室布局实验室布局应合理，设备摆放应符合操作流程，同时要考虑实验室的通风、安全和卫生条件。
实验台、培养室、设备间等区域的划分要清晰明了。
3. 购置必要设备植物组织培养实验室需要配备必要的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、离心机、恒温培养箱等。
设备的选择应考虑实验需求和预算。
4. 保障实验室安全实验室安全是第一位的，必须确保实验室的电路、水源等设备安全可靠，设备操作人员应接受相关安全培训，并且定期进行检查和维护。
5. 制定实验操作规程建立完善的实验操作规程是保证实验结果准确可靠的关键。
制定实验操作规程时应考虑到每个操作步骤的细节，包括消毒步骤、培养条件控制等。
6. 建立实验室管理制度建立实验室管理制度有利于实验室的日常管理和运行。
管理制度包括实验室卫生、设备维护、实验记录等方面，确保实验室的正常运转。
操作流程1.准备工作–检查实验室设备是否正常运转。
–准备培养基、试剂和实验器具。
2.植物组织采集–从健康植物中采集需要的组织。
–进行消毒处理。
3.组织培养–将组织放入无菌条件下的培养基中进行培养。
–控制培养条件，如温度、光照等。
4.植物遗传转化–遗传工程操作，将外源基因导入植物组织中。
–过筛、筛选转化株。
5.结果分析–观察转化效果，记录实验数据。
–分析实验结果，撰写实验报告。
结论建立一个高效的植物组织培养实验室需要全面考虑实验室的位置选择、布局设计、设备购置等方面。
制定操作规程、建立管理制度是保证实验室运行的基础。
组培实验仪器配置清单
组培实验仪器配置清单植物组织培养(Planttissueculture)是以植物生理学为基础发展起来的一门新生的生物技术学，科针对此项目，托普云农特整理出组培实验仪器配置清单供新老客户参考。
如果您需要更详细的清单和参数。
植物组培实验室设置条件及器具一、实验室组成二、基本设备三、培养器皿及实验用具四、无菌条件及创设五、无菌操作六、组培的环境条件和营养条件组织培养实验室布局的总体要求基本实验室辅助实验室实验室组成准备室缓冲室无菌操作室培养室细胞生物学实验室温室生化分析实验室基本实验室布局平面图实验台搁架培养架培养架培养架培养架药品及仪器柜无菌台无菌台搁架拉窗冰箱搁架水槽电炉门 4.5m 3.0m 3.5m 4.0m 准备室缓冲室无菌室培养室组织培养准备实验室缓冲室培养室无菌室（一）无菌室（二） 1 冰箱酸度计电炉天平纯水器培养基分装器搅拌器2、灭菌设备蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
蒸汽压力灭菌锅干热消毒柜无菌瓶顶过滤装置喷雾消毒器（参考图）（参考图）3、无菌操作设备超净工作台无菌接种箱4、细胞培养设备摇床培养架H Z C - 2 5 0 恒温振荡培养箱1 5 0 C 2 5 0 D 光照培养箱5、细胞学鉴定设备光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜1、玻璃器皿三、培养器皿及实验用具培养皿三角瓶培养瓶2、金属材质用具镊子解剖刀接种针无菌条件物理方法：物理灭菌干热、湿热、射线处理、物理除菌、过滤、离心、沉淀等化学方法：消毒剂、抗菌素灭菌1、灭菌方法2、灭菌（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法压力在9.8×10 4 —10.8×10 4 Pa 温度在121℃灭菌20—30min （2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌干热消毒灭菌（3）塑料器皿灭菌：多采用高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用（5）接种室灭菌空气消毒灭菌接种室超净工作台紫外灯照射70%—75% 的酒精擦洗培养材料的接种紫外灯照射（6）外植体灭菌流水冲洗10—20min 或更长时间70%—75% 酒精中浸泡30s 0.1%—0.2%氯化汞液中浸泡10min左右蒸馏水冲洗4—5次在10%的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡30min左右备用六、无菌操作实验员消毒实验室、无菌台灭菌实验器材的灭菌无菌接种消毒实验台卫生培养室培养1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
1 植物组织培养实验室的构建
医用手提式灭菌锅
不锈钢立式灭菌锅
3、超净工作台
陈列于操作室（接种室）内
类型：垂直式和水平式
作用：无菌操作
（二）药品贮存和配制仪器设备
1、冰箱
作用：低温保存材料，存 放药品、培养基母液、激 素、酶制剂。
2、天平
陈列于制备室中
作用：称取大量元素、微 量元素、酶制剂
3、酸度计
注意！ 实际应用中要通过试验筛选。
基本培养基对西洋杜鹃增殖的影响
三、培养基的配制
（一）培养基母液的配制
1.基本培养基母液 类型：四液式（钙盐最后加入）、三液式、 五液式（钙盐和铁盐单独配制）。 成分：大量元素、微量元素、铁盐、 有机成 分。 贮藏：2~4冰箱内贮藏。 倍数：10X、100X。 标记：名称、配制倍数、日期等。
取容器（搪瓷缸），加入1/3~2/3左右的蒸馏水，加热至沸腾； 称取定量的琼脂和蔗糖加入上述煮沸的水中并不断搅拌， 直到完全溶解。 用移液管量取所需量的母液加入一只干净的烧杯中， 待琼脂完全溶解后加入 用NaOH或稀HCl调节pH值 高压灭菌，（121℃，15 min~20min） 冷却，取出，备用
植物组织培养材料移到田间前，通常 先移到温室进行练苗，待生根成活后， 再移到大田。
二、仪器和设备
（一）无菌操作设备 １、烘箱：
作用：干燥洗后的器皿
高温干热灭菌 测定培养物的干重时烘干培 养材料。
2、灭菌锅
类型：普通医用消毒锅 大的高压灭菌锅
作用：培养基、水和各种用具的消毒
（四）培养设备 1.空调
作用：控制培养温度
2.加湿器和去湿机
控制培养室内湿度状况
3.定时器
植物组织培养实验室的设计与设备
植物组织培养实验室的设计与设备首先，植物组织培养实验室的设计应该满足以下要求：1.空间：实验室需要足够的空间容纳各种设备和工作区域。
实验室应该根据实验室的规模设计合理的面积大小，通常一个中小型实验室的面积应该在100-200平方米之间。
2.实验台：实验台是进行实验的主要工作区域，应该设计宽敞、舒适，便于操作和清洁。
实验台上应该有足够的空间来放置显微镜、培养皿、试管和其他实验室用具。
3.显微镜室：实验室中应该设有一个专门的显微镜室，用于观察和分析植物细胞和组织。
显微镜室应该有良好的光线和通风条件，以便在观察过程中获得清晰的图像。
4.无菌区：植物组织培养实验室中的细胞和组织培养工作需要在无菌条件下进行。
因此，实验室应该设置一个无菌区，以防止外部菌和霉菌的污染。
无菌区应该具备空气过滤和紫外线消毒等设备。
5.视频监控系统：为了确保实验操作的安全性和监测工作过程，实验室应该配备视频监控系统，能够记录下实验操作的全过程。
其次，植物组织培养实验室还需要配备适当的设备，以支持实验工作。
以下是一些常见的植物组织培养实验室设备：1.培养箱：培养箱用于控制温度、湿度和光照条件，以提供适合植物生长和繁殖的环境。
培养箱通常配备可调节的温度控制装置和光源。
2.植物生长室：植物生长室用于保持恒定的环境条件，包括温度、湿度和光照。
生长室可以根据不同的植物需求设置不同的生长条件。
3.培养皿和试管：培养皿和试管是进行植物细胞和组织培养的主要容器，用于种植和培养植物细胞和组织。
它们通常是无菌的，以防止污染。
4.高压灭菌器：高压灭菌器用于对培养介质、工具和试剂进行高温高压灭菌处理，以消除外部细菌和霉菌的污染。
5.霉菌培养箱：霉菌培养箱用于培养和繁殖霉菌，以供实验室使用。
这些霉菌可以用来制备蘑菇菌种或用于生产其他植物培养基的配方。
6.显微镜：显微镜是观察和分析植物细胞和组织的主要工具。
实验室应该配备高质量的显微镜，以保证观察到正确而清晰的图像。
植物组织培养技术
植物组织培养技术第一章绪论第二章植物组织培养实验室组成、仪器设备及无菌操作技术第三章植物组织培养基本原理第四章器官培养技术第五章植物胚胎培养第六章花粉及花药培养第七章细胞及原生质体培养第八章组培培养技术在中药学上的应用第一章绪论一、植物组织培养的概念1. 概念植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。
2.主要特征（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。
（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。
二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。
1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
2、根据再生途径分为：（1）器官发生途径（Organogenesis）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。
如茎尖培养。
间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程。
组织培养所需的实验条件和器具
组织培养所需的实验条件和器具图片怎样才能发上来？请帮助！一、植物组织培养全过程：二、植物组织培养常用的设备和器材1、培养室:包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间，是组织培养实验所必须具备的基本条件。
2、仪器设备：主要有超净工作台、冰箱、水浴锅、高压蒸汽灭菌锅、烘箱等。
超净工作台高压蒸汽灭菌锅水浴锅3.实验常用用具三、常用药品组织培养所需药品主要用于培养基的配制，也有部分用于消毒，主要有以下几类：1、光照光照是组织培养中的重要外界条件之一，它对外植体生长和分化有很大的影响。
光照对组织培养的影响主要表现在光周期、光照强度（光强）和光质这三个方面。
2、温度温度最重要的作用是决定呼吸的速度和控制植物组织代谢过程的化学反应。
在植物组织培养中，不同植物繁殖的最适温度不同，大约为23～28℃之间，但也有不少例外，差异比较大。
通常低于15℃时，培养的外植体组织生长缓慢或出现停滞，但高于35℃对生长也不利。
在实际工作中，在考虑某种培养物的温度要求时，也应考虑原植物的生态环境所处温度条件，如生长在高海拔和较低温度环境的植物，则培养的环境温度可适当低些。
3、湿度植物组织培养中的湿度影响主要有两个方面：一是培养容器内的湿度条件，二是培养室的湿度条件。
培养容器内的湿度主要受培养基的影响，相对湿度可达100%，而培养室的湿度变化随季节而有很大变动，它可以影响培养基的水分蒸发，一般要求70%～80%的相对湿度。
4、培养基的PH值外植体的培养增殖都要求一定的PH值。
通常一般培养基的PH值都在5.6～6.0之间。
如果PH值不适则直接影响外植体对营养物质的吸收，进而影响外植体的脱分化、增殖和器官形成。
不过PH值对不同植物的影响会有差异，有的宜偏酸，有的宜偏碱，在实际工作中，依不同植物而调整。
5、氧和其他气体培养容器中的气体成分会影响到培养物的生长和分化。
氧是植物组织培养必需的，在接种时应避免把整个外植体全部埋入培养基中，以免造成缺氧。
组织培养实验室及操作技术
清水 冲洗
2%—5%盐 酸浸泡 30min
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3、金属用品洗涤
热洗衣粉水 洗净
冲洗
擦干
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清洁液配方
配方成分
弱液 次强液 强液 常用配方
重铬酸钾（g） 50
100
60
100
浓硫酸（ml） 100
200
800
200
蒸馏水（ml） 1000 1000
200
800
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五、灭菌技术
1、灭菌方法
N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷 脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中 占有重要的位置。
P是磷脂的主要成分。培养基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。
K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等 有密切关系。
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Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶 的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；
饱和蒸汽压力与其对应的温度
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
饱和蒸汽压力
kg/cm2
1b/m2
温度（℃）
0.0 0.141 0.281 0.442 0.563 0.703 0.844 0.984
0
100
2
103.6
4
106.9
6
109.8
8
112.6
10 115.2
12 117.6
14 119.9
叶较小，叶脉间失绿,有坏 死斑点，且叶边缘焦枯， 向内卷曲。
十字花科植物缺钼时叶片 卷曲畸形，老叶变厚且枯 焦。
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白菜
55
缺硼典型症状： 受精不良,籽粒减少 ，
任务二植物组织培养室相关仪器设备的使用
1
根据要求完成任务，掌握电子分析天平、高压灭 菌锅、超净工作台的使用
以小组为单位，提交工作总结报告
2
老师对各组的任务完成情况进行点评，最后对此
3
任务完成情况依据工作考核标准进行评分
任务二 植物组织培养室相关仪器设备的使用
拓展训练
熟悉酸度计的使用与维护 熟悉蒸馏水发生器的使用与维护
熟悉调湿机的安装与使用 熟悉显微镜与双筒解剖镜的使用
料以测定干物质。
5.其它辅助设备
⑥纯水机与蒸馏水发生器 实验室必备的仪器
5.其它辅助设备
⑦天平
天平包括分析天平，电子天平，药物天 平等，用于制备母液时培养基组成成分 的称取。如一些需要量少的激素和维生 素类物质，天平的精确度要到0.0001g，
这就要求精确度更高的分析天平
5.其它辅助设备
⑧显微镜
待压力上升到0.05MPa时，打开放气阀，放出冷空气
待压力表指针归零后，再关闭放气阀
压力表上升达0.1-0.15Mpa时，维持20min后，断电
待压力降至零时，打开放气阀，取出灭菌材料
1.灭菌设备：高压蒸气灭菌锅
注意 事项
对高压灭菌后不变质的物品，如无菌水、栽培介质、接种用具， 可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间， 既要保压彻底，又要防止培养基中的成分变质或效力降低，不能 随意延长时间 对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干 后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min
4.驯化设备
温室和防虫网室
5.其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
5.其它辅助设备
②空调机 用于接种室和培养室温度的控制
使培养室的湿度保 持在定的范围之内
植物组织培养实验室的组成及特点
植物组织培养实验室的组成及特点植物组织培养实验室是用于进行植物组织培养的科研实验室，主要用于研究植物生长、发育和遗传变异等方面的问题。
该实验室的组成和特点如下。
一、组成：1. 培养室：用于培养植物组织的主要场所，具备恒温、恒湿、光照等环境条件控制设备，以提供适宜的生长环境。
2. 器械室：用于存放和管理植物组织培养所需的器械、耗材和试剂等。
3. 培养箱：用于在无菌条件下培养植物组织，保证培养过程的无菌性。
4. 植物材料库：用于存放和管理各类植物材料，如种子、离体器官等。
5. 实验台：用于进行植物组织培养实验的操作台，配备显微镜、离心机、培养皿、移液器等实验器材。
6. 数据分析室：用于对实验数据进行统计和分析，以及进行相关的科研文献检索和资料整理。
二、特点：1. 无菌环境：植物组织培养实验室的一个重要特点是要保持无菌环境，以防止外界微生物的污染对实验结果的影响。
因此，实验室内需要进行严格的无菌操作，包括无菌培养箱的使用、培养基的制备和无菌操作技术的掌握等。
2. 精密控制条件：植物组织培养实验室需要精密控制培养环境的温度、湿度、光照等条件，以提供适宜的生长环境。
这样可以促进植物组织的生长和发育，并提高培养效果。
3. 多种培养方法：植物组织培养实验室可以采用多种培养方法，如组织培养、离体培养、原代培养等。
这样可以满足不同研究目的的需求，并开展多样化的实验研究。
4. 多样化的研究内容：植物组织培养实验室的研究内容涉及植物生长、发育、遗传变异、细胞学、生理学、分子生物学等多个方面。
通过培养不同植物组织或植物材料，可以对这些方面进行深入研究，为进一步理解植物的生物学特性提供重要依据。
5. 团队合作和交流：植物组织培养实验室通常由一支研究团队组成，团队成员之间需要密切合作和交流，共同解决实验中遇到的问题，提高实验效率和科研水平。
此外，实验室还需要与其他实验室、学术机构和产业界进行合作和交流，以促进学术交流和科技创新。
植物组织培养设备及其使用标准版资料
⑥纯水机与蒸馏水 发生器：
是实验室必备的仪 器。
⑦天平和显微镜：天平包括分析 天平，电子天平，药物天平等， 用于制备母液时培养基组成成分 的称取。如一些需要量少的激素 和微生素类物质，天平的精确度 要到0.0001g，这就要求精确度 更高的分析天平。
显微镜包括解剖镜，生物显微镜，倒置显微镜等。 如茎尖的分离则需要解借助解剖镜。
①温室 ②防虫网室
5、其它辅助设备
①培养基灌装机及洗瓶机
②空调机：用于接 种室和培养室温度 的控制。
③ 除湿机：使培
养室的湿度保持 在定的范围内。
⑤冰箱：用于在常温下易变 性或失效的试剂和母液的储 藏，细胞组织和试验材料的 冷冻保藏，以及某些材料的 预处理。
④烘箱：用于干燥洗净后的玻 璃器皿，还可用80℃的温度烘 干组织培养植物材料以测定干 物质。
②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。 第二章 植物组织培养设备及其使用 ①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。 ②对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。 显微镜包括解剖镜，生物显微镜，倒置显微镜等。 0001g，这就要求精确度更高的分析天平。 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。 ③ 除湿机：使培养室的湿度保持在定的范围内。 ②空调机：用于接种室和培养室温度的控制。 三次放气后，关阀再通电，压力表上升达0．1-0．15Mpa时，维持20min后，断电，待压力降至零时，打开入入气阀，取出灭菌材料。 ③ 除湿机：使培养室的湿度保持在定的范围内。 ④烘箱：用于干燥洗净后的玻璃器皿，还可用80℃的温度烘干组织培养植物材料以测定干物质。 如一些需要量少的激素和微生素类物质，天平的精确度要到0.
第二章 植物组织培 养设备及其使用
：高压蒸气灭菌锅
植物组织培养的设备与培养条件
培养基、植物材料、接种工具、器皿及环境的消毒处理。
（一）常用灭菌方法及其使用范围
湿热
高温
物 理
干热 超声波
物 理
灭
射线 微波
菌
紫外线
灭 菌
滤膜过滤
无菌水反复冲洗
升汞 福尔马林 双氧水
升汞 来苏水 高锰酸钾
漂白粉 次氯酸钠 抗菌素 酒精
第四节 基本操作技术与实验室管理
三 无菌操作及注意事项
（一）常用灭菌方法及其使用范围
二 光照
最常用的周期是16h的光照，8h的黑暗。 常用的光照强度，一般为1000-5000lx。 一般用日光灯进行光照，光谱成分主要是蓝紫光，波长为 419-467nm。针对不同的植物种类，不同的培养阶段，根据 不同的培养目的，选用合适的光质照明。
第三节 植物组织培养所需环境条件
三 湿度
一是培养容器内的湿度条件，容器内主要受培养基水分含 量和封口材料的影响。 一是环境的湿度条件。环境的相对湿度一般要求70～80%。
第三节 植物组织培养所需环境条件
四 气体
氧气是培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题， 可用附有滤气膜的封口材料。 液体培养采用振荡培养。 高浓度的乙烯对正常的形态发生是不利的。培养基高压灭 菌时，可能产生乙烯，培养物本身也可能产生乙烯。
第三节 植物组织培养所需环境条件
五 培养基的渗透压
培养基中添加的盐类、蔗糖等化合物影响到渗透压的变化。
实验室设计原则： ① 保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。 ② 培养室减少通风。 ③ 具有缓冲室。
第二节 植物组织培养所需要的基本仪器和设备
一 玻璃器皿
培养器皿 盛装容器
三角瓶 培养皿
培养瓶 试管
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第二章 植物组织培养实验室的组 成、仪器设备及基本操作
第二节 培养基的组成、配制与灭菌
一、培养基（medium）的组成和作用
通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类
成分，即矿质营养、有机成分、植物生长 调节剂、碳源、琼脂以及其他附加物等。
培养基的主要指标是: 营养成分的浓度 植物生长调节物质的浓度
（3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入 95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。
2、培养基灭菌：
采用高压蒸汽灭菌。120℃ 15－20分 钟。
培养基体积越大，灭菌时间越长。
高温高压灭菌对培养基成分的影响：
a.pH值普遍下降。
b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发 生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca+2与 PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。
（一）准备室（化学实验室）：
1. 主要功能：
用于培养器皿的清洗、干燥、培养基 的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及 整理等工作。
2. 主要仪器设备及用品：
药品柜、实验台、水槽、超声波洗涤 仪、凉干架、干燥箱、各种玻璃器皿 （烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角 瓶等）、蒸馏水制造装置。
天平、移液器、 pH计、水浴锅、微波 炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、及培 养基分装用品等、高压灭菌锅、 冰箱。
第二章 植物组织培养实验室的组 成、仪器设备及基本操作
第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术
一、植物组织培养实验室的结构及设计要求：
完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、 接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需 要和条件进行设计。
但从功能上至少包括准备室（化学实验室）、接种室以 及培养室三部分，并且按顺序排列。 在化学实验室与接种 室之间应留有缓冲空间。
倒置显微镜
用途：主要用于细 胞、原生质体的细 胞分裂和细胞团形 成的观察。
二、实验室基本操作：
（一）洗涤：
1. 普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中 性洗涤剂洗涤。
2. 难清洗器皿及移液管等：用水清洗后 再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗， 或用超声波仪清洗。
重铬酸钾洗液的配制方法：43g重铬酸钾溶于 1000ml蒸馏水中，将浓硫酸缓慢倒入重铬酸钾 溶液中，浓度比例为1：1。
（二）灭菌：
灭菌 是指用物理和化学方法杀死物体表面和内 部的所有微生物（包括芽胞），使之呈无菌状态。 经过灭菌的物品称“无菌物品”。
1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。
（1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱 内，150 ℃保温2小时，成本较高。
（2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃ 15－20分钟 。1、功能：主要用于植物材 Nhomakorabea的培养。
要求室内洁净并能保持一定的温度、 光照以及湿度，以促进植物材料的生 长和分化。
2、仪器设备及用品：
培养架及灯管、摇床（振荡 器）、空调、自动定时器、加湿及 除湿器、光照培养箱等。
（四）细胞学实验室：
1、功能：
主要用于培养材料的显微观察及 照相等。
2、仪式设备及用品：
（一）矿质营养：
矿质营养又称无机营养，是指植物生 长发育所需要的各种化学元素。
矿质元素的生理作用：
（1）组成各种化合物，成为结构物质；
（2）许多酶和附酶的组成部分，参与 代谢；
（3）维持离子平衡、胶体稳定及电荷 平衡等电化学作用；
（4）影响形态发生和组织、器官的建 成等。
根据植物对元素的吸收量，可以把植物必 需元素分为大量元素和微量元素。
（二）接种室（无菌操作室）：
1、功能：
接种材料的灭菌、接种以及培养物的 继代转接等。
接种室要求保持洁净，与化学实验室 之间应设置缓冲室。
2、仪器设备及用品：
超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、 磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手 术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷 雾器、细菌过滤器等）等。
（三）培养室：
体视显微镜、普通显微镜、倒 置显微镜、荧光显微镜、配套显 微照相装置、普通相机或数码相 机、切片机及配套制片及染色用
品等。
体视显微镜
用途：放大倍数5~80 倍主要用于植物形态 分化的观察、茎尖的 切取。
普通光学显微镜
用途：用于植物切 片观察，确定植物 的发育进程，如： 不定芽、不定胚的 分化过程以及其它 器官组织的分化等。
c.不少培养基颜色加深。
d.体积和浓度有所变化。
e.营养成分有时受到破坏。
3、不耐高温材料的灭菌：
采用过滤灭菌，如IAA、ZT、天然有机 添加物等。
4、外植体的表面灭菌：
采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效 氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－ 0.2%的氯化汞（2-15分钟）等杀菌剂中加 入几滴吐温－20或80（Tween－20或80） 效果较好。
（三）无菌操作：
1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸 或喷雾处理。接种前打开超净工作台及紫 外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气 体散出后开始操作。
2、保持超净工作台的洁净：接种前用70 ％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前， 将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用 品用乙醇擦拭后放入超净工作台。
3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前 后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交 叉污染。
4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑 出，以减少污染源。
5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽， 出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。
第二章 植物组织培养实验室的组成、 仪器设备及基本操作
第一节 实验室结构、仪器设备及操作技术 一、植物组织培养实验室的结构及设计要求 二、 实验室基本操作
1、大量元素：
N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无 机盐提供。
不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求 不同，需经试验确定。
目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。其 中以MS应用最广泛。
国际植物生理学会规定植物所需浓度大于0.5 mmol/l的的元素称为大量元素。低于0.5 mmol/l 的元素称为微量元素。
大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、 Mg、S 分别占植物干重的百分数为18％、 10％、70％、0.3%、0.07％、0.3%、0.3 ％、0.07%、0.05％。
微量元素：Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、 Co、Cl等。