液相色谱实例分析共76页
经典液相色谱法 ppt课件
和薄层色谱。
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1.2 吸附色谱法的依据
吸附过程的两个规律： 1）吸附过程是可逆的，存在着吸附 平衡,存在一个吸附平衡常数 解附的动态
K=Cs/Cm
2）吸附剂对不同物质的吸附行为有差异
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吸附机理
流动相通过固定相时，吸附剂表面的活性中心吸附流
动相分子，当组分分子进入柱子时，会赶走流动相分 子而占据吸附剂的活性中心位，即组分被吸附；反之， 溶剂分子也可把溶质分子赶走，即解吸。
SO3H CH CH2 CH
SO 3H CH2 CH
SO3H CH2 CH
SO3H CH2 CH
SO3H
SO3H
SO3H
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SO3H
SO3H
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交换反应： R-SO3-H+ + Na+ + ClR-SO3- Na+ + H+ + Cl-
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1.2 阴离子交换树脂
根据可交换的离子的不同
低交联度树脂－网状结构疏松，网眼大，具有较好的渗 透性，但存在着易变形和耐压差等缺点。
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根据分离对象选择树脂交联度：
分离小分子物质（氨基酸） ——选择8%树脂为宜
分离分子量较大的物质（多肽）
——选择2－4%树脂为宜
保留：极性越小的组分保留越强
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3. 载体
作用：负载固定液 要求：化学惰性，粒度小而均匀，纯净，与固定液间
有较大的分子间作用力。
常用载体：硅胶 、硅藻土 、纤维素
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4. 固定液相与流动液相
《液相色谱分析法》课件
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
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数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
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核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
液相色谱实验报告
液相色谱实验报告液相色谱实验报告一、实验目的本实验的主要目的是了解液相色谱法的基本原理和操作方法，学习液相色谱法在实际应用中的应用。
二、实验原理液相色谱法是一种将物质分离、鉴定、定量的分析方法，是在流动相作用下，根据进样物质与固定相之间的相互作用程度不同而分离各组分的方法。
在液相色谱法中，最常用的是高效液相色谱法（HPLC），该方法利用高压泵将样品送进柱子中，和流动相进行相互作用，使其在柱子中分离出各个组分。
三、实验仪器与试剂本实验所用的仪器有：高压液相色谱装置、超声波清洗器、天平等；本实验所用的试剂有：甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸等。
四、实验操作1. 准备工作：将柱子底座经超声波清洗器清洗干净，待干燥后加入饱和蒸气的流动相，在HPLC进样口处加入10μl的样品；2. 实验步骤：打开HPLC附带的软件，进行仪器的预热和样品的进样；进行液相色谱分离实验，并通过检测器进行检测，记录检测结果；3. 数据处理：根据样品的检测结果，利用相关公式进行数据处理和分析，得出各组分的含量。
五、实验结果本实验共得出5个样品的检测结果，即甲酸、乙酸、丙酸、丁酸及异丁酸的含量分别为8.9mg/L、10.2mg/L、6.5mg/L、9.3mg/L和7.7mg/L。
其中，甲酸含量最低，乙酸含量最高。
六、实验分析本实验结果反映了液相色谱法在实际应用中的可行性和准确性。
在实验中，操作步骤的严谨性和检测数据的准确性是保证实验成功的关键。
通过对实验结果的分析，不仅可以了解样品的组成情况，还可以为实际应用提供参考。
七、实验总结液相色谱法是一种重要的分析方法，适用于分离、鉴定和定量各种化合物和物质，具有分离效果好、分离速度快、精密度高的特点，可广泛用于化学、生化、食品、药品等领域，在实验中应用广泛。
通过本次液相色谱实验，不仅增加了我们对液相色谱方法的了解和认识，也提高了我们的实验操作技能。
液相色谱法定量分析与案例分享
液相色谱法定量分析与案例分享
定量分析是在定性分析的基础上，需要纯物质作为标准样品。
液相色谱的定量是相对的定量方法，即：由已知的标准样品推算出被测样品的量。
液相色谱法定量的依据
被测组分的量(W)与响应值(A)（峰高或峰面积）成正比,W=f×A。
定量校正因子(f)：是定量计算公式的比例常数，其物理意义时单位响应值（峰面积）所代表的被测组分的量。
由已知标准样品的量和其响应值可以求得定量校正因子。
测定未知组分的响应值，通过定量校正因子即可求得该组分的量。
定量分析常用术语：
样品（sample）：含有带测物，供色谱分析的溶液。
分为标样和未知样。
标样（standard）：浓度已知的纯品。
未知样（unknow）：浓度待测的混合物。
样品量（sampleweight）：待测样品的原始称样量。
稀释度（dilution）：未知样的稀释倍数。
组分（componance）：欲做定量分析的色谱峰，即含量未知的被测物。
组分的量（amount）：被测物质的含量（或浓度）。
积分（integerity）：由计算机对色谱峰进行的峰面积测量的计算过程。
校正曲线（calibrationcurve）：组分含量对响应值的线性曲线，由已知量的标准物建立，用于测定待测物的未知含量。
常用的定量方法
1外标法
标准曲线法，分为外标法和内标法。
外标法在液相色谱中用的最多。
内标法准确但是麻烦，在标准方法中用的最多。
实例解析——高效液相色谱(HPLC)
实例解一一高效液相色谱(HPLC)一、原理利用不同物质在两相中(液液、液固、离子交换、尺寸排阻)具有不同的分配系数，当二者相对运动时候，物质在两相中反复多次分配，从而使得物质得到完全分离二、适用范围高沸点、热不稳定的天然产物、生物大分子、高分子化合物、离子型样品、生化样品三、特点高压、高效、高灵敏度四、仪器组成流动液贮存提供脱气，输液系统、进样系统、分离系统、检测系统，控制记录系统贮液瓶、高压泵、进样器、分离柱、检测器、记录仪五、仪器选择由实验条件确定是选用二元高压还是四元低压、一般来说，二元高压的准确度较高。
四元低压是先将样品按比例混合再泵入，而二元高压是先泵入不同比例的溶剂再混合。
确定采用的脱气系统，一般采用在线脱气。
确定进样方式，人工手动六通阀进样，还是进样针自动进样，一个适用于少量样品，一个适用于大量样品。
选择检测器，如果是有较强的紫外吸收的可用紫外可见检测器(二极管阵列检测器)，如果是芳香族化合物，可选用荧光检测器，对于离子可采用电导检测器。
六、实验条件优化配置待测物质的标准溶液1、色谱柱的确定分析样本确定是采用何种类型的色谱柱(1)分配色谱，两项间分配系数流动相选用极性的物质(甲醇、乙腈、水)则固定相选择非极性物质。
一般用C18 ODS 柱。
(2)吸附色谱，(3)离子交换色谱各种离子与树脂上交换集团的交换能力不同。
固定相：离子交换树脂，流动相为无机酸、无机碱。
常用于分离离子或者可解离的化合物(4)排阻色谱法配置含待测物质的标准品溶液，采用不同C18柱分离，检测，对照不同色谱图像，可得到分离效能最高的色谱柱2、最佳流动相梯度洗脱程序的确定梯度洗脱：按照一定的程度，不断改变流动相中个溶剂组成的比例以改变流动相的极性。
将色谱柱上不同的组分洗脱出来。
配置不同的梯度洗脱方案，用标准溶液进行试验，并选取能达到最高分离效能的梯度洗过方案作为最佳流动相梯度洗脱程序3、流动相的确定在分离效能相似条件下选择更经济、毒性小的流动相4、流速确定流速太大，待分离组分来不及与固定相充分作用，故其中的组分较易被洗脱下来，出峰时间变短，而且柱压比较高，会引起泵负荷的增加，进而导致色谱柱的使用命的缩短，色谱峰的分离度变差。
液相色谱方法开发案例
液相色谱方法开发案例全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：液相色谱是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物和环境领域。
液相色谱方法的开发通常涉及样品预处理、柱填料选择、流动相优化等方面。
本文将以某种化合物的分析为例，介绍液相色谱方法的开发过程。
为了开发一种液相色谱方法用于分析某种药物残留物，首先需要准备样品。
样品可能包含复杂的基质，需要进行适当的前处理。
通常可以选择提取、浓缩或洗涤样品，以去除干扰成分或减少基质中其他化合物的干扰。
经过前处理后的样品将被注入色谱仪进行分析。
柱填料的选择是液相色谱方法开发中的关键步骤。
柱填料的种类、尺寸和性质将影响色谱分离的效果。
在选择柱填料时，需要考虑到目标分析物的性质、分子大小、亲水性或疏水性等因素。
通常会进行试验性的柱填料筛选，确定最适合的柱填料种类。
流动相的选择和优化也对液相色谱方法的开发至关重要。
流动相的成分、流速、温度等参数将直接影响分析的灵敏度和分离度。
通过对不同流动相条件的尝试和优化，可以找到最佳的流动相组合，以实现对目标化合物的高效分离和检测。
在经过样品预处理、柱填料选择和流动相优化后，可以开始进行基准分析。
通过注入标准品和重复试验，确定色谱方法的准确性、重复性和灵敏度。
也可以进行不同因素对色谱分离的影响研究，以进一步优化色谱方法。
在实际应用中，可能会遇到复杂样品矩阵、稀有目标成分等挑战。
在这种情况下，需要进行更深入的研究和优化，可能需要调整柱填料种类、流动相组合或色谱条件等。
通过持续地改进和优化，可以开发出适用于不同类型样品的高效液相色谱方法。
液相色谱方法的开发是一个复杂而细致的过程，需要多方面的考虑和实验。
通过样品预处理、柱填料选择、流动相优化和基准分析等步骤，可以开发出高效、灵敏和可靠的液相色谱方法，用于不同领域的分析和检测。
在未来的研究中，还需要不断改进和完善液相色谱方法，以应对越来越复杂的样品要求。
第二篇示例：液相色谱方法是一种用于分离和检测化合物的常用技术，它通过利用溶解在液相中的化合物在固定相上的不同吸附性质来实现分离，是现代化学分析中不可或缺的手段之一。
液相色谱实例分析共78页文档
液相色谱实例分析
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
谢谢
11、越是没有本领的别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
液相色谱应用案例2
Heterozygous 7 (SNP)
SNP Detection
Heterozygous 6 (SNP)
DHPLC的分离模式
Non denaturing: 50 C (Size Dependent, Sequence Independent)
High-Resolution dsDNA Fragment Separations
bp 587 458 434 298 257+267 174
102 80
主要杂质的LC-离子阱质谱鉴定
主成分及相邻杂质的MS1图（略）
主成分及相邻杂质的MS 2图谱（略）
建立HPLC分析方法——方法优化与验证
原料与制剂的含量测定
确定定量方法/含量限度
系统适用性试验——理论塔板数、主峰与相邻杂质的分离度 供试品溶液的稳定性 方法验证——专属性、线性、精密度、回收率、耐用性 各三批供试品测定
柱后衍生 离子交换色谱-茚三酮-570nm/440nm
氨基酸分析方法
柱前衍生 衍生-反相色谱-荧光检测或UV检测
血浆同型半胱氨酸
样品前处理：血浆—加入内 标（磺基同型半胱氨酸 ）— 沉淀蛋白—衍生化
色谱柱：Waters NovPak ODS柱 （3.9mm x 150mm）及保护柱 血浆中游离Hcy大约占总量的<2%以下。 Hcy值可以作为一种疾病预警指标，即血 液中同型半胱氨酸含量升高，标志着动脉 流动相：A 0.05mol/L醋酸盐缓冲 液，pH 6.8，含8%乙腈；B 乙腈 梯度洗脱 荧光检测：激发波长335nm，发 射波长455nm
液相色谱实例分析
鬼峰
流动相被污染 进样阀残余峰 样品中未知物 色谱柱中的污染物
鬼峰的出现
流动相
水 / 甲醇梯度 ODS 柱
鬼峰
溶剂前处理
过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色
谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲 液时。
峰的变形
根部变宽
有肩或分叉
溶解样品的溶剂选择不当
最好不要选择高溶解性的试剂作为溶解样品的溶剂
液相色谱常见问题
压力异常（偏高、波动） 漏液 保留时间漂移 基线问题（漂移、噪声） 峰形异常
压力
压力是液相色谱中最重要的指标，要经常关注 压力的变化。
保留时间的变化经常是由于压力问题引起的。 不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力 也是不同的。
记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、 流速、温度等）的压力显示值。
基线漂移
流动相污染，变质或由低品质溶剂配成 流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂) 温度波动 系统平衡时间不够 流通池被污染或有气泡 流通池窗口破裂
峰形问题
死体积太大 柱子被污染或堵塞 色谱柱塌陷 流动相缓冲不足或不合适 样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大 样品过载（浓度或体积） 柱温过低
吸滤头脏 泵输液不正常（压力波动、气泡等） 流动相组分变化 流动相缓冲能力不够 色谱柱平衡时间不够 柱温的变化 柱子问题
噪音大
流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 漏液 流动相、泵、检测器流通池内有气泡 流动相各溶剂不相溶或混和不均匀 检测池能量不足 流通池被污染 温度影响（检测器和柱温差别太大） 其他电子设备的影响或电源、地线等源自甲醇 作为溶剂 20 uL
Caffeine
乙醇 作为溶剂 20 uL
液相色谱 例子
液相色谱例子
液相色谱是一种常用的分离和检测技术，其应用广泛，下面是一个例子：
在食品检测中的应用
液相色谱可以用于食品中的有害物质检测。
例如，在食品安全领域，液相色谱可以用于检测食品中的农药残留、重金属、添加剂等有害物质。
通过液相色谱的分离和检测，可以快速、准确地确定食品中这些有害物质的含量，从而保障食品安全。
在上述例子中，液相色谱的原理是通过不同的溶剂和固定相的组合，使得不同的物质在色谱柱中得到分离。
流动相将样品中的各组分带入色谱柱，固定相则对不同组分具有不同的吸附或溶解能力，从而实现分离。
在分离后，通过检测器对各组分进行检测，可以得到各组分的含量或浓度。
这只是液相色谱的一个应用例子，实际上，液相色谱在医药、化工、环保等领域也有广泛的应用。
高效液相色谱仪分析应用实例
高效液相色谱仪分析应用实例高效液相色谱仪分析应用实例高效液相色谱仪分析应用实例《高效液相色谱仪分析应用实例》由赛智科技（杭州）有限公司为您收集提供，液相色谱应用实例包括环境气体分析、药物分析、食品分析、生物制药等方面的液相色谱应用实例。
例1．稠环芳烃分析(环境气体分析)样品：含六苯并苯等8种稠环芳烃的混合物色谱仪：STI501液相色谱仪梯度系统， 7725I手动进样阀，N2000色谱工作站。
检测器：UV501紫外检测器，340nm色谱柱：C18键合相（ODS-224）,5μm，柱长25cm，柱径4.6mm流动相：甲醇-二氯甲烷（8:2）混合溶剂流速：1mL/min进样：20μL结果：所有组分在25min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：六苯并苯，二苯二萘嵌苯，三苯二萘嵌苯，苯萘并二萘嵌苯，四苯二萘嵌苯，萘六苯并苯，二苯萘并二萘嵌苯，苯菲并五苯。
例2．磺胺分析（药物分析）样品：磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物色谱仪：STI501液相色谱仪梯度系统， 7725I手动进样阀，N2000色谱工作站。
检测器：UV501型紫外检测器，波长240nm色谱柱：μ-Bondapak C18 , 5μm，柱长25 cm，柱径4.6 mm流动相：由KH2PO4（0.05mol/L）和Na2HPO4(0.05 mol/L)以及MeOH所组成，其用量比例为200:10:165，流速：1mL/min进样：10μL结果：所有组分在6min之内全部流出，各组分完全分离，组分出峰顺序为：磺胺保留时间为2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为5.19min。
例3．银杏内酯分析（药物分析）样品：含银杏苦内酯等4种物质的混合物色谱仪：STI501液相色谱仪梯度系统， 7725I手动进样阀，N2000色谱工作站。
检测器：500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器漂移管温度为91℃，氮气流速为2.75L/min色谱柱：Platinum OPS，5μm，柱长25cm，柱径4.6mm流动相：水:甲醇:四氢呋喃 = 75:20:10流速：1mL/min进样：10μL结果：所有组分在15min之内全部流出，各组分完全分离，组分流出顺序为：峰1为银杏苦内酯C, 峰2为白果内酯, 峰3银杏苦内酯A, 峰4为银杏苦内酯B。