山梨酸苯甲酸实验报告
食品中山梨酸、苯甲酸的测定
分析步骤
1 样品处理 1.1 汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二 氧化碳，用氨水1＋1调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜 0.45μm过滤。 1.2 果汁类：称取5.00～10.0g样品，用氨水1＋1调pH约7，加水定 容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。 1.3 配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇， 用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜0.45μm过滤。 2 高效液相色谱参考条件 2.1 色谱柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不锈钢柱。 2.2 流动相：甲醇：乙酸铵溶液0.02m0l/L5：95。 2.3 流速：1mL/min。 2.4 进样量：10μL。 2.5 检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
计算
式中式中：X2——样品中苯甲酸或山梨酸的含量， g/kg； m3——进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg； V4——进样体积，mL； V3——样品稀释液总体积，mL； m4——样品质量，g。
注意事项
1.使用过程中应注意机器是否有异常情况的发生（声 音），压力是否过高（超过200Bar不可再做实验）， 流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。 2.所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干 净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后 方可使用。 先抽滤、后超声（10-15分钟） 3.进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇 涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。 4.实验完毕后用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸 或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲 洗一小时。
高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量
分析检测高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量字琴江1，杨 冲1，王 瑾2，左李美3，赵 芳1，罗桂槐1（1.洱源县检验检测院，云南洱源 671200；2.云南农业职业技术学院，云南昆明650031；3.昆明市城市排水监测站，云南昆明 650118）摘 要：本文采用高效液相色谱法对橙汁中的防腐剂山梨酸、苯甲酸含量进行测定，对方法的线性、加标回收率、精密度进行验证。
结果显示，山梨酸和苯甲酸浓度与峰面积在0.5～20.0 mg/L呈良好的线性关系，相关系数为0.999 6，样品的加标回收率为93.60%～95.90%，RSD为0.97%~1.96%。
该方法能准确测定橙汁中的防腐剂山梨酸和苯甲酸，且操作简单、准确度高，适用于大多数检测机构。
关键词：山梨酸；苯甲酸；高效液相色谱Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid by HPLC ZI Qinjiang1, YANG Chong1, WANG Jin2, ZUO Limei3, ZHAO Fang1, LUO Guihuai1(1.Eryuan County Inspection and Testing Institute, Eryuan 671200, China; 2.Yunnan V ocational and Techical College of Agriculture, Kunming 650031, China; 3.Kunming City Drainage Monitoring Station, Kunming650118, China)Abstract: In this paper, determination sorbic acid and benzoic acid in orange juice by high performance liquid chromatography (HPLC), and the linearity, recovery rate and precision of the method were verified. The results show that there is a good linear relationship between the concentration of 0.5～20.0 mg/L, and the correlation coefficient is 0.999 6, the recovery rate of the samples is between 93.60%～95.90%, and the relative standard deviation (RSD) ranged from 0.97%～1.96%. This method is suitable for accuracition of determination of the content of benzoic acid and sorbic acid in orange juice, which showed great prospect most institutions.Keywords: sorbic acid; benzoic acid; high performance liquid chromatography近年来，随着食品工业的快速发展，食品添加剂已被广泛应用于食品加工、储存中，防腐剂能抑制微生物繁殖，延长食品的保质期，防止食物变质、腐败，防腐剂的出现给人们生活带来极大便利[1]。
苯甲酸山梨酸的测定方法
实验十七、酱油中山梨酸、苯甲酸的测定1、目的与要求掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。
2、原理样品中的苯甲酸在酸性条件下蒸馏，馏出液剧烈氧化除去杂质，再次蒸馏后，所得苯甲酸在220nm处有最大吸收，它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律，因此可以据此定量测定。
同时山梨酸在酸性条件下也能随水蒸汽一起蒸馏出来，可在酸性溶液中，用蒸汽蒸馏的方法将样品中的山梨酸蒸馏出来，并除去非挥发性的干扰物质。
山梨酸在弱氧化条件下氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸反应，生成红色的化合物。
其颜色的深浅与山梨酸含量成正比，可以比色测定之。
3、仪器与试剂3.1 仪器3.1.1 蒸馏设备。
3.1.2 紫外可见分光光度计。
3.2 试剂3.2.1 无水硫酸钠。
3.2.2 85%正磷酸。
3.2.3 0.034mol/L重铬酸钾溶液：溶解4.9g重铬酸钾于水中，稀释到500mL。
3.2.4 2mol/L硫酸溶液：稀释66.5mL浓硫酸至500mL。
3.2.5 氢氧化钠溶液：1mol/L、0.1mol/L、0.01mol/L。
3.2.6 0.5%重铬酸钾溶液。
3.2.7 0.5%硫代巴比妥酸溶液：称取硫代巴比妥酸0.5g，加入20mL水，再加1mol/L 氢氧化钠溶液10mL，用玻璃棒搅拌使之溶解，然后加入1mol/L盐酸11mL，用水稀释至100mL，摇匀。
3.2.8 0.15mol/L硫酸：取浓硫酸1mL加入到100mL水中，并用用水稀释至120mL。
3.2.9 山梨酸标准溶液：精密称取在105℃干燥至恒量的山梨酸0.0500g用0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解后，移入500mL容量瓶中，加0.1mol/L 氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，每毫升含山梨酸100μg。
临用时取1mL置于50mL容量瓶中，加入0.01mol/L氢氧化钠溶液到刻度，摇匀，每毫升含山梨酸2μg。
3.2.10 苯甲酸标准溶液：准确称量经过干燥的苯钾酸0.1000g，溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，以水定容至1000mL，每毫升溶液相当于苯甲酸0.1mg。
液相色谱测定苯甲酸和山梨酸钾的含量
液相色谱法测定苯甲酸和山梨酸钾的含量一、仪器液相色谱仪一台（配C18-BP反相色谱柱，紫外检测器，六通阀，化学工作站），超声波清洗器，流动相过滤装置二、试剂分析纯：甲醇，醋酸铵，高纯水，苯甲酸，山梨酸，NaHCO3三、准备工作1、1mg/ml 苯甲酸标准贮备液准确称取0.100g苯甲酸，用水适量，加5ml NaHCO3溶液，定容至100ml备用2、1mg/ml山梨酸贮备液准确称取0.100g山梨酸，用水适量，加5ml NaHCO3溶液，定容至100ml备用3、苯甲酸山梨酸混合标准液利用苯甲酸和山梨酸标准贮备液配置不少于2个不同浓度标准混合液10ml，取少量过滤后贮存于样品瓶中备用如：4、流动相称取02g醋酸铵固体，用纯水溶解稀释到1000ml 配成2g/L醋酸铵溶液，与甲醇混合成（体积比NH4Ac:CH3OH=95:5）流动相，经0.45um滤膜过滤，装于流动相贮液瓶中，用超声波脱气20min备用。
三、实验条件和方法进样量：10uL；流动相流量：1mL/min；检测器波长：230nm定性方法：保留时间定性；定量方法：外标峰面积定量。
四、实验步骤1.打开液相色谱仪开关和检测器开关，仪器自检。
2.打开液相色谱仪冲洗阀，铵冲洗键，冲洗约5~10毫升溶液直至流动相管路无气泡，再次按冲洗键，关闭冲洗，并关闭冲洗阀3.按色谱仪“运作/停止”键，启动高压泵系统。
4.打开工作站软件5.仪器控制→系统配置→验证系统配置→确定。
6.仪器控制→流量1ml/min最大压力25Mpa 检测器→波长230nm→确定。
7.启动基线监测→基线平稳后→停止基线监测。
8.启动数据菜单→屏幕出现绿色小瓶子→进样“LOAD”位置转到“INJECT”位置9.先进0.1的标样再进0.3/0.35的标样再进试样→保存数据。
10.定量→用标样计算→右击中间空白位置→打开标准样品→选择样1→添加→选标样2→添加→打开右击中间空白位置→设置标准样品→点第一个标准样→双击组分名→输入“组分名”和浓度→确定；点第二个标准样→双击组分名→输入“组分名”和浓度→确定。
食品中防腐剂苯甲酸和山梨酸的测定.
实验9.3 食品中防腐剂苯甲酸(钠和山梨酸(钾的测定薄层色谱法一、实验目的掌握薄层色谱定性和斑点面积半定量测定法。
学会制备聚酰胺薄层板。
二、仪器吹风机层析缸玻璃板10 ×18cm 玻璃板50×80 cm 微量注射器10μL喷雾器三、试剂与试样聚酰胺粉200目乙醚可溶淀粉无水硫酸钠盐酸溶液6mol ? L-14%氯化钠酸性溶液于4%氯化风俗溶液中加入少量mol ? L-1 盐酸溶液展开剂:(1 正丁醇:氨水:无水乙醇=7:1:2(2异丙醇:氨水:无水乙醇=7:1:2显色剂:0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液用0.1mol ? L-1氢氧化钠调至PH=8苯甲酸标准溶液:精密称取苯甲酸0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于2mg苯甲酸。
山梨酸标准溶液:精密称取山梨酸0.2000g ,用少量乙醇溶解后移入100mL 容量瓶中,并用乙醇稀释至刻度摇匀,此溶液每亳升相当于2mg 山梨酸试样酱油、水果汁、果酱等四、实验步骤1、试样提取—试样溶液的制备称取 2.5g 混合均匀的试样,置于25mL 带塞量筒中,加0.5mL , 6 mol? L-1盐酸酸化,用乙醚提取两次(15mL 、10mL 每次振摇1min , 将上层乙醚提取液吸入另一25mL 带塞量筒中, 合并乙醚提取液。
用3mL4%氯化钠酸性溶液洗涤两次,静置15min ,乙醚层通过无水硫酸钠脱水后过滤于25mL 容量瓶中。
加乙醚稀释至刻度, 摇匀。
吸取10.00mL 乙醚提取液分两次置于10mL 离心管中, 在约40℃水浴上除去乙醚, 加入0.1mL 乙醇溶解残渣,制成试样测定液备用。
2、聚酰胺粉板的制备称取 1.6g 聚酰胺粉,加4g 可溶性淀粉,加15mL 水,研磨3~5min,使其均匀即可涂10×18cm 厚度0.3mm 的薄层板两块。
涂好的薄层板置于水平大玻璃板上, 于室温干燥后, 于80℃ 干燥1h 取出,置于干燥器中保存。
10实验二 食品添加剂苯甲酸
实验二食品添加剂苯甲酸、山梨酸同时测定一、目的要求1.理解反相色谱的原理和应用。
2.掌握标准曲线定量法。
3.学习HPLC法测定多种食品添加剂方法。
4.学习ageilent1100HPLC分析仪器的操作使用。
二、原理糖精钠是易溶于水的盐类，样品中的苯甲酸、山梨酸经氢氧化钠溶液(O.50 mol·L )浸泡后，转化为易溶于水的苯甲酸钠、山梨酸钠，经沉淀蛋白质、过滤等处理后，四种被测组分滞留于水相中与杂质分离。
若样品含有二氧化碳和乙醇，则应加温除去。
调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，以紫外检测器进行检测，以标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度做工作曲线，再根据样品中的对应物峰面积，由工作曲线算出其浓度。
三、试剂与样品方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。
1甲醇：经滤膜(0.5μm)过滤。
2稀氨水(1＋1)：氨水加水等体积混合。
3乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。
4碳酸氢钠溶液(20g/L)：称取2g碳酸氢钠(优级纯)，加水至100mL，振摇溶解。
5苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL 容量瓶中，加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。
6山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液(20g/L)5mL，加热溶解，移入100mL 容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。
7 苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各1.0mL，放入10mL容量瓶中，加水至刻度。
此溶液含苯甲酸、山梨酸、糖精钠各0.1mg/mL。
经滤膜(0.45μm)过滤。
9 乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜(0.45μm)过滤。
实验八 苯甲酸、山梨酸含量的测定
实验八苯甲酸、山梨酸含量的测定方法提要苯甲酸、山梨酸在食品中都是作为防腐剂使用的，由于它们对人体具有一定的危害作用，它们的用量必须严格控制，因此测定它们的含量是十分必要的。
一般样品经酸化后，山梨酸、苯甲酸用乙醚提取浓缩后，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量，就可以测定它们的含量。
仪器、设备气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器。
容量瓶等玻璃仪器。
试剂乙醚。
石油醚：沸程30～60℃。
盐酸。
无水硫酸钠。
山梨酸、苯甲酸标准溶液: 精密称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g,置于100ml 容量瓶中,用石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解后并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于2mg山梨酸或苯甲酸。
山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液,以石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂稀释至每毫升相当于50、100、150、200、25Oμg山梨酸或苯甲酸。
操作步骤样品提取：称取2.5g事先混合均匀的样品,置于25ml带塞量筒中,加0.5ml 6N盐酸酸化,用15、10ml乙醚提取两次,每次振摇1min,将上层醚提取液吸入另一个25ml带塞量筒中,合并乙醚提取液。
用3ml4％氯化钠酸性溶液洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25ml容量瓶中。
加乙醚至刻度,混匀。
准确吸取5mL乙醚提取液于5mL带塞刻度试管中,置40℃水浴上挥干,加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶剂溶解残渣,备用。
色谱条件：色谱柱：玻璃柱,内径3mm,长2m,内装涂以5%DEGS+1%H3PO4固定液的60～80目Chromosorb W AW。
气流速度：载气,氮气,50ml/min(氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件。
)温度：进样口 230℃;检测器230℃;柱温170℃。
测定：进样2μL 标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中,可测得不同浓度山梨酸,苯甲酸的峰高,以浓度为横坐标,相应的峰高值为纵坐标,绘制标准曲线。
实验四 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量
2分钟出现的可能是溶剂峰脱机文件调用实验结果
推一针浓度峰面积
提取10ml雪碧（只含苯甲酸）稀释至50ml 稀释五倍六个芒果（只含山梨酸）
4,5组雪碧样品
4,5组芒果样品
数据处理：
雪碧检测样品中苯甲酸含量y=2257 代入标准曲线y=73.548x-47.704 得x=31.33 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的雪碧， ml ug c v v v c v c /33.31,5,
2122211==⋅=⋅
所以c 1=5*31.33=156.5ug/ml
芒果饮料检测样品中山梨酸含量y=5736 代入标准曲线y=84.55x-21.065 得x=68.10 ug/ml 由于检测样品为稀释了五倍的原饮料，
所以c 3=340.5ug/ml 由GB 中饮料的山梨酸含量不得超过200ug/ml ， 碳酸饮料中苯甲酸含量不得超过500ug/ml ，
可知测得样品符合国家标准。
芒果饮料的速溶图中5min 处出现峰，并非苯甲酸。
因为笨甲酸的峰出现时间为6.293min, 查配料表及其他数据可推出其为乙酰胺酸钾。
山梨酸苯甲酸实验报告
酱油中山梨酸、苯甲酸含量的测定概述：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂。
目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。
第一部分、苯甲酸一、实验原理：苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。
通过查找资料，苯甲酸在230nm处具有最大吸收。
另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。
二、实验试剂及器材试剂：无水乙醚(回收后可重复使用)、苯甲酸标准液(1mg/ml)、5%NaHCO3溶液、5%NaCL 溶液、(1+2v)盐酸溶液器材：紫外分光光度计、125ml分液漏斗×2，铁架台一套，量筒100ml、容量瓶（100ml、50ml、）移液管（5ml×2、1ml×2）、胶头滴管、试剂瓶100ml×2、水浴锅、蒸馏回流装置一套。
三、实验步骤：1、试剂准备：标准液：125.0mg苯甲酸+250ml无水乙醚5%NaHCO3：5.0g NaHCO3+100mlH2O(1+2)HCl：20ml浓盐酸+40mlH2O2、样品的处理：取酱油5.00ml于125nl分液漏斗中加入（1+2）盐酸2ml酸化，再用无水乙醚萃取三次，每次用量30ml，每次振摇1min。
合并乙醚层于另一分液漏斗，用5%NaCl 溶液洗涤二次，每次5—10ml，然后蒸馏回收乙醚，用20ml、5%NaHCO3溶解、定容到100ml 容量瓶中。
备用。
3、标准曲线绘制：取苯甲酸标准使用液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8ml分别置于100ml 容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液2ml，加水至刻度，摇匀。
放置15min,尽量让CO2逸尽。
实验8 毛细管电泳仪分离测定苯甲酸、山梨酸
正因子分别为：1.000、0.262、0.224，苯甲酸通过归一化公式可以计算出：
未知样中苯甲酸的百分含量：
0.262 22 .2364
100 % 8.40 %
1.000 59 .4683 0.262 22 .2364 0.224 18 .2952
未知样中山梨酸的百分含量：
测器上都能产生信号的样品，可用归一化法定量，其中组分 i 的质量分数按如下公式计算：
Wi
fi Ai
fi Ai
100%
式中 Ai 为组分 i 的峰面积，fi 为组分 i 的质量（或摩尔、体积）校正因子。
优点：简便、准确，特别是在进样量不容易控制时，进样量以及流速、柱温等测定条件对定量结果影响很小。
过.45μm 的滤膜过滤后，转移至进样瓶中备用。 称量 0.1g 的苯甲酸样品，用超纯水加热溶解于 100ml 的容量瓶中，再从中移取 5mL 溶液至 50ml 容量
管中定容。 称量 0.1g 的山梨酸样品，用超纯水加热溶解于 100ml 的容量瓶中，再从中移取 5mL 溶液至 50ml 容量
管中定容。
• 粒子的运动速度：由于同时存在着泳流和渗流，粒子在毛细管电介质中的运动速度应当是这两种速度的矢量 和，其迁移速率是电泳和电渗力的函数：
正离子：运动方向和电渗一致，应当最先流出；中性离子：泳流速度为 0，将随电渗而行； 负离子：因其运动方向和电渗相反，在电渗速度大于电泳速度时，它将在中性离子之后流出；
3、归一化定量的优缺点是什么？
答：优点：简便、准确，特别是在进样量不容易准确控制时，进样两的变化对定量结果的影响很小。其他操作条 件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。
缺点：校正因子测定很麻烦。
HPLC法测饮料中苯甲酸、山梨酸
苯甲酸结构
山梨酸的结构
二：实验部分
（一）
仪器和设备 试剂和原料 溶液的配制 样品前处理
（二）
（三） （四）
（一）仪器和设备
高效液相色谱仪（Agilent Technologies 1200Series）配有二极管阵 列检测器恒温水浴锅、微量进样器、1次性注射器(10uL)、0.45µm滤膜、电 子天平
（二）试剂和原料
氨水、乙酸铵、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸钾、碳酸氢 钠等试剂均为分析纯，甲醇为色谱纯。实验用碳酸饮料，橙 汁饮料样品均从当地超市购买。
（ 三）溶液的配制
甲醇：经滤膜（0.45µm）过滤。 稀氨水（1+1）:氨水加水等体积混合。 乙酸铵溶液(0.02mol/L):经0.45µm滤膜过滤。 (0.02mol/L): 0.45µm 苯甲酸标准储备液、山梨酸标准储备液。 标准使用溶液：分别各吸取5、10、15、20、25mL苯甲酸 、山梨酸标准储备液转移至编号为1、2、3、4、5的100mL 容量瓶中，加水稀释，定容至刻度后摇匀，此时溶液浓度分别 为50、100、150、200、250µg/mL。
900 800 700 600 y = 3740.4x + 36.195 2 R = 0.999
2500 2000 y = 7911x + 509.98 R2 = 0.9897
1500
500 400 300 200 100 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
系列1 线性 (系列1)
DAD1 B, Sig=230,16 Ref=360,100 (A001151.D) 5 .8 1 1 mAU 600 500 400 300 200
-35 mAU -10 -15 -20 -25 -30 DAD1 C, Sig=260,16 Ref=360,100 (A001149.D) 8 .5 2 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
毛细管电泳法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的含量(1)
实验毛细管电泳法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的含量一、实验目的1、掌握毛细管电泳法的基本原理2、熟悉Beckman P/ACE™ MDQ 毛细管电泳仪以及其32Karat工作站的使用方法。
3、掌握毛细管电泳法测定苯甲酸和山梨酸含量的方法。
二、实验原理苯甲酸和山梨酸是广泛使用在饮料、调味品中的防腐剂，由于此类防腐剂带有一定的负效应，甚至还有微量毒素，使用不当会给人体带来危害，应严格限制其在食品中的添加量，所以其检测工作也变得极其重要。
毛细管电泳（CE）技术是以高电场为驱动力，在细内径毛细管内荷电粒子按其淌度或（和）分配系数的不同而进行分离的一种新技术。
毛细管电泳具有高效快速、进样体积小、溶剂消耗少和样品预处理简单等优点，现已广泛地用于分离分析领域。
传统的食品添加剂的测定一般采用气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）方法，当采用GC与HPLC分析时一般都必须对样品进行复杂的前处理。
而CE与之相比，实验成本低，分析时间短，适用范围宽，可同时分离和检测多个组分。
本实验使用的毛细管区带电泳法（CZE），在毛细管中仅填充缓冲液，基于溶质组分的迁移时间或淌度的不同而分离，除了溶质组分本身的结构特点和缓冲溶液组成，不存在其他因素如聚合物网络、pH梯度的影响。
实验采用硼砂为缓冲液，待测饮料只需用缓冲液稀释，在特定的条件下，以峰高为定量依据，测定3种待测饮料中苯甲酸的含量。
三、仪器和试剂仪器：Beckman P/ACE™ MDQ 毛细管电泳仪试剂：硼砂缓冲溶液（45mmol/L）、NaOH溶液（0.1mol/L）、苯甲酸钠和山梨酸钠的混标1mg/ml。
市售3种果汁饮料四、实验步骤1、制作标准曲线分别吸取上述苯甲酸钠储备液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml于50ml容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，配置成折合苯甲酸、山梨酸浓度为10、20、40、60、80μg/ml的标准液，在上述实验条件下，测各苯甲酸的峰值，和山梨酸的峰值，绘制各标准曲线。
食品中山梨酸、苯甲酸的测定
3 分析步骤
• 结果计算： • 试样中山梨酸或苯甲酸(X)以毫克每千克表示，按式(3-1)计算：
• • • • • • • • •
式中： X——试样中山梨酸或苯甲酸的含量，mg/kg； A——测定用试样液中山梨酸或苯甲酸的质量，μg； V1——加入石油醚-乙醚（3+1)混合溶剂的体积，mL； V2——测定时进样的体积，μL； m——试样的质量，g； 5——测定时吸取乙醚提取液的体积，mL； 25——试样乙醚提取液的总体积，mL。
1
2015-3-23
（1）苯甲酸
• 近年来由于它的毒性，有用山梨酸代替的倾向。 我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB27602011）规定：最大使用量根据不同食品要求不 同，其范围是0.2～2.0g/kg。其中碳酸饮料和 配制酒为0.2g/kg；腌制的蔬菜、酱及酱制品、 蜜饯（凉果）类为0.5g/kg；复合调味料为 0.6g/kg；葡萄酒、果酒、乳脂糖果、凝胶糖果 为0.8g/kg；酱油、醋、果酱（不包括罐头）、 果汁（味）冰、果蔬汁（肉）饮料、风味饮料 为1.0g/kg；食品工业用浓缩果蔬汁为2.0g/kg。
（2）山梨酸
• 山梨酸结构式为 • 别名花楸酸，分子量为112.13，是具有特殊 气味的白色单斜结晶。熔点132～135℃， 室温时，在100g水中能溶解0.16g山梨酸 （20℃），在100g无水乙醇或100g冰乙酸 中能溶解13g山梨酸，在100g油中能溶解 0.5～1.0g山梨酸
（2）山梨酸
• 山梨酸的急性毒性，大鼠经口LD50为 10.5±1.96g/kg体重，山梨酸和其他防腐剂同时使 用时不改变其急性毒性。用含10％山梨酸的饲料喂 养大鼠42天，没有发现有害影响。用此剂量的山梨 酸喂养大鼠120天，引起体重增加及肝增重，但动 物的繁殖能力仍正常。用5%山梨酸的饲料喂养大鼠 和狗90天，未发现有害影响。重量增加可能是由于 山梨酸的热能的利用。其ADI为0～ 25mg/kg(bw)(FAO/WHO,1994)。 • FAO/WHO联合食品添加剂委员会将其列为A类，可 以安全使用的食品添加剂。FDA评定为GRAS，是 目前较为安全的防腐剂。
防腐剂的测定山梨酸苯甲酸
7.2.2 糖精钠的测定方法
高效液相色谱法
薄层色谱法
7.2.2.1 高效液相色谱法测定糖精钠的含量
以饮料为样品，讲解甜味剂糖精钠的测定，并演示 样品的处理、HPLC的使用
原理：
样品经加温除去二氧化碳和乙醇后，调节pH至 近中性，过滤后进高效液相色谱仪。经反相色谱柱 分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
进样量：20µL
(3)测定：仪器稳定后，分别将20µL标准溶液和样品溶
液注入色 谱系统，根据保留时间定性，峰面 积定量。
结果计算：
A样 C标 V样 X (m g / Kg或m g / L) A标 m样
A样----样品的峰面积 A标----标样的峰面积
C标----标样的浓度(ug/mL）
V样----样品的定容体积（mL）
m样----样品质量(g)
说明：
( 1）本方法国家标准检验方法(GB/T5009.28），适 用于各类食品中糖精钠含量的测定。另外，本方法 可同时测定食品中糖精钠、苯甲酸、山梨酸的含量。 （2）被测溶液的PH值对测定和色谱柱使用寿命均有 影响， PH>8或PH<2时会影响被测组分的保留时间， 对仪器有腐蚀作用，以中性为宜。
• 我国1995年颁布《食品卫生法》，2009年6月1被 《食品安全法》取代
• 1997年颁布《食品添加剂使用卫生标准》（最新 GB 2760—2007）
测定意义
食品添加剂的检测，目的在于监督、保证和 促进正确合理地使用食品添加剂，确保人们的身 体健康。
7.2 甜味剂（糖精钠）的测定 7.2.1概述
将制备好的样品溶液放入分液漏斗中加2ml盐酸三正辛胺正丁醇溶液5951020ml振摇重复提取至无机相无色合并有机相用饱和硫酸钠溶液洗22次将有机相于水浴加热浓缩至10ml转移到分液漏斗中加60ml正己烷混匀加氨水2298提取2233次每次5ml合并氨水层含水溶性酸性色素用正己烷洗22次氨水层加乙酸调成中性水浴加热蒸发至近干加水溶解定容至5ml
肉制品中苯甲酸和山梨酸的测定能力验证探究
分析检测肉制品中苯甲酸和山梨酸的测定能力验证探究张 斌（山西省检验检测中心（山西省标准计量技术研究院），山西太原 030000）摘 要：按照《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》（GB 5009.28—2016）第一法展开实验，采用高效液相色谱仪测定目标样品中苯甲酸和山梨酸。
结果发现，目标样品中苯甲酸和山梨酸的|Z|值均小于2，表明本实验室对苯甲酸和山梨酸的测定能力较好。
通过参加ACAS-PT1793肉制品中苯甲酸、山梨酸的测定能力验证，加强了本实验室对肉制品中苯甲酸、山梨酸的检测能力，对于保障食品安全监督抽检工作质量有重要意义。
关键词：苯甲酸；山梨酸；能力验证Validation of the Determination Ability of Benzoic Acid andSorbic Acid in Meat ProductsZHANG Bin(Shanxi Inspection and Testing Center (Shanxi Standard and Technique Academy), Taiyuan 030000, China) Abstract: According to the first method of GB 5009.28—2016, the experiment was conducted to determine benzoic acid and sorbic acid in the target sample using a high-performance liquid chromatograph. It was found that the |Z| values of benzoic acid and sorbic acid in the target sample were both less than 2, indicating that the laboratory has a good ability to determine benzoic acid and sorbic acid. By participating in the validation of the determination ability of benzoic acid and sorbic acid in ACAS-PT1793 meat products, the laboratory has strengthened its detection ability for benzoic acid and sorbic acid in meat products, which is of great significance for ensuring the quality of food safety supervision and sampling work.Keywords: benzoic acid; sorbic acid; capability verification苯甲酸、山梨酸是一种存在于天然植物中的食品防腐剂，具有较强的抑菌、防止有害微生物繁殖的作用，且不破坏食物原有的风味，故被广泛用作食品防腐剂。
2019年苯甲酸和山梨酸的测定.doc
食品中苯甲酸和山梨酸的检测摘要：近年来食品安全卫生已成为社会、政府关注的焦点之一。
食品安全已越来越引起广大消费者的密切关注和担忧。
目前我国每年食物中毒报告例数约2万人，但据专家估计实际数量要比这个数字大10倍左右。
食品安全问题不仅涉及广大消费者的健康，还涉及相关企业的经济效益和市场空间，关系到整个食品行业的发展。
苯甲酸可与人体内的氨基乙酸结合生成马尿酸而随尿液排出体外。
如过量摄入苯甲酸和苯甲酸钠，将会影响肝脏酶对脂肪酸的作用，其次苯甲酸钠中过量的钠对人体血压、心脏、肾功能也会产生影响。
特别是对心脏、肝、肾功能弱的人群而言，苯甲酸和苯甲酸钠的摄食是不适合的嘲。
另外还会出现代谢性酸中毒、惊厥和气喘等病症。
在体外测定中还可以测到一些弱断裂剂的放射性。
苯甲酸及其钠盐因为有叠加中毒现象的报道，在使用上有争议，虽仍为各国允许使用，但应用范围愈来愈窄。
日本的进口食品中就限制使用，甚至部分禁止使用，日本已停止生产。
但因价值低廉，在中国仍作为主要防腐剂使用。
山梨酸具有较低的毒性，是迄今为止国际公认的最好的防腐剂，已经成为了西方发达国家的主流防腐剂。
但事实上，现在已经报道了许多案例(荨麻疹和假过敏)说明人体中对过多的山梨酸所带来的危害。
由于山梨酸和苯甲酸在食品中的广泛使用,所以在此讨论苯甲酸和山梨酸的检测以技术及以及各种检测技术的利弊。
1防腐剂的检测在食品工业中，作为防腐剂，不能影响人体正常的生理功能，一般说来，在正常规定的使用范围内使用食品防腐剂对人体没有毒害或毒性极小。
因此，食品防腐剂的定性与定量的检测在食品安全性方面是非常重要的。
目前，测定防腐剂的方法主要有：薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相气谱法等1.1苯甲酸和山梨酸各种检测方法1.1.1高效薄层色谱法和高效液相色谱法M．Thomassin等人曾经采用高效薄层色谱法和高效液相色谱法对尼泊金酯类作过检测，实验发现高效薄层色谱法的相对标准偏差要大于高效液相色谱法，但是高效薄层色谱法对于尼泊金酯类的定量就更为快速。
气相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的含量(精)
气 相 色 谱 法 测 定 饮 料 中
3．样品溶液的配制 吸取2.50 mL混合均匀的试样于25 mL带塞的量筒中， 加 0.5 mL 6mol·L-1 HCl 酸化，分别用 15 mL 和 10 mL 乙 醚各提取1次，每次振摇1min，将上层醚液合并于50 mL
分液漏斗中。用 6 mL 4 ％ HCl 酸性溶液分 2 次洗涤醚液，
大 学 通 用 化 学 实 验 技 术
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焰，待基线稳定后进样。
(2) 将前面配制的山梨酸标准溶液系列、苯甲酸 标准溶液系列、试样溶液各进样 2 μL于气相色谱仪 中，记录色谱图。
在线答疑：yanjie0001@ liaolw@
苯 甲 酸 和 山 梨 酸 的 含 量
气 相 色 谱 法 测 定 饮 料 中
实验100 气相色谱法测定饮料中 苯甲酸和山梨酸的含量
100.1 实验目的
(1) 掌握气相色谱外标法定量分析的方法。 (2) 初步了解气相色谱仪的使用。
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苯 甲 酸 和 山 梨 酸 的 含 量
气 相 色 谱 法 测 定 饮 料 中
在线答疑：yanjie0001@ liaolw@
度，摇匀。
2．苯甲酸标准溶液的配制 (1) 苯甲酸标准储备液。准确称取 0.2000 g 苯甲酸于小
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烧杯中，用少量 3︰1 的石油醚 - 乙醇溶解后定容于 100 mL 容
量瓶。此溶液含苯甲酸2.0 mg·mL-1。 (2) 苯甲酸标准溶液系列。取 5 个 10 mL 容量瓶，依次加
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将针头插入试样反复抽排几次，再慢慢抽入试样，并稍多于
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸并探究流动相最佳
高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸并探究流动相最佳分离比实验报告姓名：尼玛旦增学号：515110910015 同组成员：高夏鑫一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇，然后过滤注入高效液相色谱仪，经反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230 nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪（LC-20T，日本岛津公司）；LCsolution Multi-PDA色谱工作站（日本岛津公司）；ODs色谱柱（C184.6’250mm,中科院大连化物所）；定量环：20uL；100 ml烧杯若干； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；容量瓶若干；0.45μm有机相滤膜；过滤器；2、试剂：（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02 mol/L，色谱纯）；流动相分别超声脱气（10 min）（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g山梨酸，加去离子水定容至250 ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500 g苯甲酸，加去离子水定容至250 ml。
（4）氨水（1+1）四、实验步骤 :1、样品处理（雪碧）：吸取20-30 ml碳酸溶液超声5 min，用氨水( 1 + 1)调节pH 至近中性，加至50mL容量瓶中，经0．45μm微孔滤膜过滤，滤液待分析。
（小桃汽）：吸取20-30mL饮料，经干过滤后，取后滤液，用氨水（1+1）调节至pH至中性，加至50mL容量瓶中，经0．45μm微孔滤膜过滤，滤液待分析。
酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定
酱油中苯甲酸和山梨酸含量测定摘要：目的：采用碱溶液反相萃取—高效液相色谱法（HPLC）测定酱油中苯甲酸和山梨酸。
方法：以国标萃取法为基础，再对其用碱溶液进行反萃取的方法，对酱油样品进行前处理，通过加内标物的方法提高实验的精确度。
结果：苯甲酸和山梨酸的线性回归相关指数都大于0.99、最小检出限（LOD）都低于0.1ppm，加标回收率皆大于84%，相对偏差皆小于16%。
结论：该方法灵敏、可靠，可用于酱油中苯甲酸和山梨酸的快速定量检测。
关键词：反相萃取；高效液相色谱法；酱油；苯甲酸；山梨酸酱油是我国传统的、富有特色的、使用最广的、味道鲜美的调味品，它赋予食品以适当的色、香、味，具有杀菌治病、调味之功用。
由于酱油营养丰富，适于微生物生长繁殖，而微生物又是到处不在无孔不入，所以细菌、霉菌和酵母之类微生物的侵袭通常是导致酱油败坏的主要因素。
为了保藏酱油，防止酱油腐败变质，保持酱油的鲜度和良好的品质，达到其对保质期的要求，酱油中一般都使用食品常用防腐剂—苯甲酸和山梨酸，但过多防腐剂会严重损害人体健康，国家对防腐剂的使用有严格限量规定，因而检测酱油中防腐剂的含量具有重要意义。
目前酱油中苯甲酸和山梨酸的测定方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法，其中高效液相色谱法因其仪器精确度高，在苯甲酸和山梨酸的检测中最常用。
对于酱油的前处理国标是对其先进行酸化，再通过乙醚进行萃取，除此之外还有其他诸多方法，如对粘度比较大的进行固相萃取、通过加入亚铁氰化钾和乙酸锌溶液沉淀蛋白质、脂肪并过滤后进行测定、还有就是本文所用的对国标处理后的样品进行碱溶液反相萃取。
这样可以大大的减少样品中的杂质，从而减少了杂质峰对高效液相色谱检测的影响。
另外本文所采用的内标法的处理方法是一个创新之举，避免了外标法测定时前处理萃取不完全以及其他处理过程带来的损失从而大大的提高了检测的准确度。
1 实验部分1.1 溶液配制乙酸铵溶液( 0. 02 mol /L) : 准确称取乙酸铵1. 542 g, 用水溶解, 定容至1 000 mL, 经0. 45Lm 膜过滤。
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析
防腐剂苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱分析一、实验目的1、了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理，初步掌握其操作技能。
2、掌握高效液相色谱保留值定性方法和外标定量方法。
二、实验原理高效液相色谱法是重要的液相色谱法。
它选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。
根据使用的固定相及分离机制的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排阻色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K ；组分在流动相中的浓度组分在固定相中的浓度K显然，K 越大，组分在固定相上停留时间越长，固定相与流动相间的极性差值也越大，因此，相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。
若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极性或弱极性的化合物。
据此，采用反相液相色谱法可分离防腐剂苯甲酸和山梨酸。
本实验采用外标法测定样品中苯甲酸和山梨酸的浓度。
外标法又称定量进样-标准曲线法，指用欲测组分纯物质配制成不同浓度的标准溶液，取固定量标准溶液进行分析，从所得色谱图上测出响应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐标）对浓度（横坐标）的标准曲线。
分析样品时，取和制作标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该样品的响应信号，由标准曲线即可查出其浓度。
三、仪器DIONEX UltiMate3000（USA ） 高效液相色谱仪（配有自动进样器，紫外检测器）。
四、试剂和溶液苯甲酸（分析纯）、山梨酸（分析纯）、甲醇（色谱纯)、高纯水、0. 02 mol/ L 乙酸铵溶液、标准储备液、标准使用液、标准混合使用液、未知溶液。
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酱油中山梨酸、苯甲酸含量的测定
概述：防腐剂是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂。
目前，我国允许使用的品种主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、对羟基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸钠、丙酸钙、脱氢乙酸等。
第一部分、苯甲酸
一、实验原理：苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。
通过查找资料，苯甲酸在
230nm处具有最大吸收。
另一方面，它在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。
二、实验试剂及器材
试剂：无水乙醚(回收后可重复使用)、苯甲酸标准液(1mg/ml)、5%NaHCO3溶液、5%NaCL 溶液、(1+2v)盐酸溶液
器材：紫外分光光度计、125ml分液漏斗×2，铁架台一套，量筒100ml、容量瓶（100ml、50ml、）移液管（5ml×2、1ml×2）、胶头滴管、试剂瓶100ml×2、水浴锅、蒸馏回流装置一套。
三、实验步骤：
1、试剂准备：标准液：125.0mg苯甲酸+250ml无水乙醚
5%NaHCO3：5.0g NaHCO3+100mlH2O
(1+2)HCl：20ml浓盐酸+40mlH2O
2、样品的处理：取酱油5.00ml于125nl分液漏斗中加入（1+2）盐酸2ml酸化，再用无水乙醚萃取三次，每次用量30ml，每次振摇1min。
合并乙醚层于另一分液漏斗，用5%NaCl 溶液洗涤二次，每次5—10ml，然后蒸馏回收乙醚，用20ml、5%NaHCO3溶解、定容到100ml 容量瓶中。
备用。
3、标准曲线绘制：取苯甲酸标准使用液0、0.1、0.2、0.
4、0.6、0.8ml分别置于100ml 容量瓶中，各加入5%NaHCO3溶液2ml，(1+2v)盐酸溶液2ml，加水至刻度，摇匀。
放置15min,尽量让CO2逸尽。
用1cm吸收池于波长230nm处测定其吸光度。
以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线。
4、取样品处理液5ml于100ml容量瓶中加入(1+2v)盐酸溶液2ml,摇荡以排除CO2，加水至刻度、摇匀、放置15min，与标准系列一起进行比色测定，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其对应量，就可以计算出样品中苯甲酸（钠）的含量。
四、数据处理：
苯甲酸含量=0.025mg/L×样品稀释倍数20×（100ml/5ml）=10.0mg/L
实验结果分析：本实验测得该酱油中的苯甲酸含量为10.0mg/L，高于国标中最低检出浓度 1 mg／kg，低于G B／T 5009．29—1996中最大被检出量 1.0g/k g。
该酱油合格。
注意事项：
第二部分：山梨酸
一、实验原理：样品经氯仿(三氯甲烷)提取后，再加人碳酸氢钠，使山梨酸形成山梨酸钠而
溶于水溶液中。
纯净的山梨酸钠水溶液在254nm处有最大吸收，经紫外分光光度计测定其吸光度后即可测得其含量。
二、实验试剂及器材：
试剂：三氯甲烷：以三氯甲烷体积50％的碳酸氢钠(0.5mol/L)提取2次，而后以无水硫酸钠干燥，过滤备用。
0.5mol/L碳酸氢钠：称取21g碳酸氢钠于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解，移至500mL
容量瓶中加水定容至刻度
0.3mol/L碳酸氢钠：25.2g碳酸氢钠+1000ml水
山梨酸标准溶液：准确称取250mg山梨酸，用0.3mol/L的碳酸氢钠定容至250mL 器材：紫外分光光度计，容量瓶（1000ml、250ml、50ml×6），移液管（5ml、1ml），锥形瓶250ml。
三、实验步骤：
1、样品处理：去酱油5ml于50ml容量瓶中用水定容，再从中取5ml于250ml分液漏斗中，加100ml（精确）三氯甲烷提取1min。
分层后将氯仿层分至125ml锥形瓶中，加5g无水硫酸钠，备用。
2、标准曲线绘制：分别吸取山梨酸标准使用液0.0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25mL于50mL 容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氢钠定容。
于紫外分光光计中254nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
3、取氯仿提取液50ml于125ml分液漏斗中，用50ml NaHCO3(0.3mol/L)溶液提取1min，分层，小心弃除氯仿层，将NaHCO3提取液于紫外分光光度计254nm处比色，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其对应量，就可以计算出样品中山梨酸的含量。
四、数据处理：
1.0mg/L、，样品吸光值代入得0.9018mg /L
苯甲酸含量=0.9018mg /L×样品稀释倍数10×（100ml/50ml）=18.036mg/L
实验结果分析：本实验测得该酱油中的山梨酸含量为18.036mg/L，高于国标中最低检出浓度 1 mg／kg，低于G B／T 5009．29—1996中最大被检出量 1.0g/k g。
该酱油合格。
注意事项：。