菲牛蛭近20年的研究进展
广东菲牛蛭水蛭素基因的克隆和序列测定
收稿日期:2001-05-28 基金项目:国家自然科学基金资助项目(3880068,39160017) 作者简介:谭恩光(1936-),男,广东阳江人,教授;刘秀平,广东药学院.广东菲牛蛭水蛭素基因的克隆和序列测定谭恩光,刘秀平(中山医科大学生物学教研室,广东广州 510089)摘 要:【目的】研究地理因素对水蛭素基因结构变异的影响。
【方法】抽提广东菲牛蛭基因组DNA ,根据已发表的水蛭素基因设计一对引物,从基因组DNA 扩增出一特异性的大约700bp 片段,再回收、克隆和测序。
【结果】广东菲牛蛭水蛭素基因全长为642bp ,基因有4个外显子,被三个内含子隔开。
与马尼拉菲牛蛭水蛭素基因Hm 1、Hm 2的同源性分别为90%与和8816%。
【结论】地理因素会影响菲牛蛭水蛭素基因结构的变异。
关键词:水蛭素基因;基因扩增;序列分析;菲牛蛭中图分类号:Q78 文献标识码:A 文章编号:1000-257X (2002)02-0084-03Cloning and Sequencing of Hirudin G ene of Hirudina ria Ma nillensis in G uangdong ,China TA N En 2guang ,L IU Xiu 2ping.(Depart ment of Biology ,S un Yat 2sen U niversity of Medical Sciences ,Guangz hou 510089,China )Abstract :【Objective 】To study the effect of geological factors on hirudin gene variation in construction 【Methods 】The genomic DNA were isolated from Hirudinaria m anillensis living in Guangdong.A pair of primers was designed from published hirudin genes.A specific DNA segment about 700bp full 2length was obtained from genomic DNA amplification by PCR.The segment was re 2trieved 、purified 、cloned and sequenced.【Results 】The hirudin gene from Guangdong Hirudinaria m anillensis consisted of 640bp.The gene contained four exons interru pted by three introns.The gene sequence had a homology with Hm 1of 90%,Hm 2of 8816%from Manila Hirudinaria m anillensis.【Conclusion 】The geological factors have an effect on hirudin gene variation of Hirudinaria m anillensis.K ey w ords :hirudin gene ;gene amplification ;sequence analysis ;Hirudinaria m anillensis 关于水蛭素的研究,早在100年前就发现水蛭抽提物有抗血液凝固作用。
菲牛蛭素科研及应用
菲牛蛭素的科研和应用被水蛭噬咬时，为什么不会感到疼痛? 为什么血液不能自动凝固？为什么不像被蚊子叮过那样会起疙瘩? 正是这一连串的问号引发了人类对水蛭药用价值的探索、研究和应用人类应用水蛭治疗疾病的历史。
最早可追溯到3百多年前古埃及金字塔的墓道壁刻上，而现代水蛭生物研究则起于十九世纪后期。
水蛭不仅在国内用于水蛭活体疗法治疗各种治病，在国外也得到广泛应用，印度利用水蛭疗法治疗秃顶，水蛭疗法在法国方兴未艾，自古埃及起人类就利用水蛭治疗血液失调和免疫疾病，其起重要治疗作用的是体内含有的水蛭抗凝血酶。
水蛭主要分为非吸血水蛭和吸血水蛭两大类，其中，菲牛蛭是吸血水蛭中研究最多、最深入、最具药用价值的水蛭品种。
上个世纪九十年代，中国科学院水生生物研究所和中国中医研究院等研究人员，分别对菲牛蛭、日本医蛭和宽体金线蛭中的抗凝血酶作用进行了深入的研究。
结果表明，菲牛蛭和日本医蛭比宽体金线蛭具有更强的抗凝血活性，且菲牛蛭的抗凝血活性又强于日本医蛭。
由于菲牛蛭的个体在吸血水蛭中为最大，其唾液分泌量最多，因此所含的菲牛蛭素（菲牛蛭抗凝血酶）含量也就最多，菲牛蛭素是水蛭抗凝血酶最好的研究品种。
菲牛蛭素是从菲牛唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分，它对凝血酶有极强的抑制作用，是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。
其特点为：菲牛蛭素的抗栓功能不需要其它因子的参与；其分子量远比肝素要小、渗透性强、容易到达血栓内部，并将其溶解；菲牛蛭素不会引起出血等难以克服的严重副作用，从而使菲牛蛭素成为世界公认的防治心脑血管疾病最好的天然药物。
菲牛蛭素可用于治疗各种血栓疾病，尤其在静脉血栓和弥漫性血管内凝血的治疗应用更加广泛，也可用于外科手术后预防动脉血栓的形成，预防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成，改善体外血液循环和血液透吸过程，及在显微外科手术中常因为吻合处血管栓塞而导致失败，采用菲牛蛭素可促进伤口愈合。
研究表明，菲牛蛭素在肿瘤治疗中也能发挥作用，它能防止肿瘤细胞的转移，已证明有效的肿瘤如纤维肉瘤、骨肉瘤、血管肉瘤、黑素瘤、淋巴瘤和白血病细胞等。
菲牛蛭的研究进展
·综述·菲牛蛭的研究进展*韦桂丽1，王硕2，周小雷2，龚小妹2，欧春丽2，王杰1综述，缪剑华1△审校（1.广西中医药大学药学院，广西南宁530001；2.广西药用植物研究所西南濒危药材资源开发国家工程实验室，广西南宁530023）【关键词】菲牛蛭；化学成分；药理作用；临床应用；研究进展DOI ：10.3969/j.issn.1009⁃5519.2018.10.017文献标识码：A 文章编号：1009⁃5519（2018）10⁃1496⁃03*基金项目：广西科技厅资助项目（桂科合14123001⁃2）；南宁市科学研究与技术开发计划（20162102）；现代中药高技术产业发展专项（发改办高技〔2012〕51号）△通信作者，E⁃mail ：mjh1962@菲牛蛭为医蛭科牛蛭属、动物菲牛蛭的干燥体，别名马尼拟医蛭，俗称金边蚂蟥，是目前常见吸血蛭类中个体较大的品种。
其性平，味咸、苦；有小毒，归肝经；具有破血通经，逐瘀消癥之功效，可用于血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫、跌打扭伤等症[1]。
自1992年STEINER 等[2]首次从菲牛蛭提取菲牛蛭素以来，菲牛蛭的抗凝活性一直是医药领域研究的热点[3⁃4]。
本文对菲牛蛭的活性成分、化学成分、药理作用及临床应用进行综述，为菲牛蛭的进一步研究提供参考。
1活性成分及化学成分1.1活性成分菲牛蛭的主要活性成分是菲牛蛭素和水蛭素，菲牛蛭素是一种多肽，由60多个氨基酸组成，其中50%~60%的氨基酸残基与水蛭素相同，菲牛蛭与水蛭素均为抑制凝血酶，作用机制相同[5]。
1992年STEINER 等[2]首次从菲牛蛭中提取、分离到2种新水蛭素，将其命名为Hm1和Hm2，并阐明了Hm1和Hm2的一级结构，表明2种新水蛭素均有抗凝作用。
1993年SCACHERI [6]测定了菲牛蛭中2种新水蛭素异构体氨基酸序列，对其基因进行了克隆，并研究了Hm1和Hm2全基因的结构和功能，也表明Hm1和Hm2有抗凝活性。
一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺[发明专利]
![一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b90570e9a48da0116c175f0e7cd184254b351b0f.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101230087A[43]公开日2008年7月30日[21]申请号200710026462.0[22]申请日2007.01.22[21]申请号200710026462.0[71]申请人广东海洋大学地址524088广东省湛江市广东省湛江市湖光岩东[72]发明人苗艳丽 宋文东 方富永 李思东 彭少伟范润珍 黄甫 谷长生 林宏图 覃亮 [51]Int.CI.C07K 1/14 (2006.01)C07K 2/00 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 2 页 附图 1 页[54]发明名称一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺[57]摘要一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料的水蛭素生产工艺，属于中药制药领域，涉及动物有效成分的提取，目的是解决传统水蛭素提取工艺难以工业化生产的问题。
该工艺采用从整体菲牛蛭中提取水蛭素，可以工业化生产。
先把菲牛蛭匀浆，浆状物用生理盐水提取三次，过滤。
滤液煮沸、过滤除杂蛋白。
收集滤液，经冷冻浓缩，醇沉后得水蛭素粗品。
再用生理盐水洗涤水蛭素粗品，然后浓缩洗涤液，最后冷冻干燥得到产品。
本水蛭素生产工艺方法简单，成品质量合格。
药理实验结果表明，用本工艺提取的水蛭素有很好的药理作用。
200710026462.0权 利 要 求 书第1/1页1.一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料水蛭素生产工艺其特征在于： 所用原料为菲牛蛭冷冻新鲜体，是指人工养殖并经喂饲猪血后捞起马上放在-18℃的条件下冷冻保存的菲牛蛭个体。
2.一种以菲牛蛭冷冻新鲜体为原材料水蛭素生产工艺其特征在于： 该工艺采用菲牛蛭活体冷冻融溶后生理盐水提取的方法生产的具有生物活性的冻干提取物。
3.按照权利2所述，采用菲牛蛭为原料，通过提取、醇沉、浓缩、冷冻干燥制得本品，其特征采用如下步骤和方法：1)把冷冻(-18℃)的菲牛蛭新鲜体解冻后，放入组织捣碎机内打成浆状。
菲牛蛭冻干粉 标准-概述说明以及解释
菲牛蛭冻干粉标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述菲牛蛭冻干粉是一种由菲牛蛭经过特殊处理制成的粉末状产品。
菲牛蛭，又被称为水牛蛭，是一种生活在淡水湖泊、河流等水域中的寄生蛭虫。
它具有强大的寄生能力和药理活性，因此在医学和生物科学领域有着广泛的应用前景。
菲牛蛭冻干粉的制备方法是通过将新鲜的菲牛蛭经过处理、整理、冷冻和干燥等工艺步骤，最终得到粉末状的产品。
制备过程中需要严格控制温度、湿度等环境因素，以确保菲牛蛭的活性成分得以保留并达到理想的质量标准。
菲牛蛭冻干粉的理化指标包括颜色、气味、溶解性、含水量、纯度、有效成分含量等。
其中，颜色应为均一且无明显异色，气味应纯正且无异味，溶解性应良好且易溶于水，含水量应符合标准要求，纯度应达到一定的标准，有效成分含量要适中且稳定。
菲牛蛭冻干粉在医学领域具有广泛的应用领域，可作为药物原料用于制备中药注射剂、口服药物和外用药膏等。
它能够提供多种药理活性成分，如抗凝血、抗炎、抗菌等，对于心脑血管疾病、食欲不振、感染性疾病等具有一定的治疗和预防效果。
本文旨在详细介绍菲牛蛭冻干粉的制备方法、理化指标和应用领域，并探讨菲牛蛭冻干粉标准的重要性。
通过对菲牛蛭冻干粉的研究和应用，我们可以进一步发挥其药理活性，提高其质量和效果，为医学领域的治疗和研究工作提供可靠的支持。
未来，我们也可进一步探索菲牛蛭冻干粉的潜力，并寻找更多的应用领域，为人类健康事业做出更大的贡献。
1.2 文章结构文章结构部分可以包括以下内容：文章结构的意义和作用：文章结构是指文章在整体上采用何种组织形式，以便让读者更好地理解和接受文章的内容。
良好的文章结构可以使文章的逻辑性更强、表达更清晰、信息更有条理，从而提高文章的可读性和说服力。
一个清晰的文章结构可以帮助读者快速抓住文章的主题和重点，同时也有助于作者自身在写作过程中更好地组织思路。
文章结构的基本要素和层次：一个完整的文章结构通常包括引言、正文和结论三个部分。
菲牛蛭室内高密度养殖技术研究
减少。另一方面，一旦菲牛蛭进入中药典，以菲牛蛭为原料的中成
药品或其他产品获得突破，大量上市，将引起利益驱动型的滥捕乱 捉，菲牛蛭的野生资源将急剧破坏，这一点宽体金线蛭和日本医蛭 已有前车之鉴。微山湖是我国水蛭的主产区，于九十年代初期曾有 过年产１２０吨的辉煌历史，从１９８９年开始，以宽体金线蛭为原料的 中成药工业大量投料，为此，水蛭有限的资源被年复一年地破坏性 地捕捉，于今能够在微山湖中捉到的水蛭廖廖无几。河北白洋淀， 安徽的怀远，安徽湖北江西三省交界处，江苏的洪泽湖、江西九江， 浙江的湖州，都有着同样的命运。由北而南，一处发现、开发、旺 产到资源灭绝，往往仅有三到五年的时间。 开发菲牛蛭的人工养殖技术，未雨绸缪，既可以为菲牛蛭相关 产品的开发应用提供原材料来源的技术保证，又可以保护野生资源，
式，采用泡沫箱加冰干运法，２卜３０℃条件下长途运输２９小时，存
活率达９９％。统计了菲牛蛭卵茧的大小、湿重，平均大小为２．０５ｅｍ ×１．２８ｅｍ，平均湿重１．６６９，采用卵茧上覆盖湿布保湿，室温孵化，
孵化率８２．８％，刚产出的稚蛭平均重量Ｏ．０６９。进行了幼蛭培育试验，
养殖密度１２２７尾／ｍ２，２５＿３ｌ℃温度下，经３０天培育，平均体重由
中山大学 硕士学位论文 菲牛蛭室内高密度养殖技术研究 姓名：于翔 申请学位级别：硕士 专业：生物工程 指导教师：何建国 20091212
菲牛蛭室内高密度养殖技术研究
专
业：
生物工程硕士
硕士生：于翔 指导教师：何建国教授
中文摘要
从运输、孵化、生长特性、幼蛭培育和成蛭养殖等方面较系统地 研究了菲牛蛭的人工养殖技术。摸索出了菲牛蛭的安全长途运输方
ｆｏｒ
ｌｅｅｃｈ ｗｉｔｈ ｗｅｉｇｈｔ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ
菲牛蛭营养成分分析与评价
菲牛蛭营养成分分析与评价戚敏;杨秀娟;陶琳丽;陈琛;曹胜雄;刘廷丹;张曦【摘要】通过对菲牛蛭营养成分进行测定,评价其营养价值.结果表明:菲牛蛭粗蛋白含量为16.7％、灰分为1.33％、粗脂肪为1.35％、水分含量为80.55％;菲牛蛭冻干粉17种氨基酸总量为66.09％,必需氨基酸含量为24.37％,非必需氨基酸含量为41.72％,药用氨基酸含量为43.44％;必需氨基酸/总氨基酸的值为36.87％,必需氨基酸/非必需氨基酸的值为58.41％,药用氨基酸/总氨基酸的值为65.73％;氨基酸组成比例平衡、评分好、药用氨基酸丰富;菲牛蛭冻干粉中18种脂肪酸的总量为27.86 mg/g,必需脂肪酸为5.49 mg/g,饱和脂肪酸的为12.92 mg/g,不饱和脂肪酸为15.13 mg/g,不饱和脂肪酸占比高于50％,对心脑血管健康有积极意义.菲牛蛭冻干粉5种矿物元素总量为16.804 mg/g,镁、钙、铁、锌、铜含量分别为12.044、2.357、1.015、1.362、0.026 mg/g,含量丰富.菲牛蛭具有良好的营养保健价值.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)021【总页数】7页(P179-185)【关键词】菲牛蛭;常规营养成分;氨基酸;脂肪酸;矿物质【作者】戚敏;杨秀娟;陶琳丽;陈琛;曹胜雄;刘廷丹;张曦【作者单位】云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南昆明 650201【正文语种】中文菲牛蛭（Poecilobdella manillensis），别名马尼拟医蛭，俗名金边（铜边）蚂蟥，属医蛭科，牛蛭属，广泛分布于我国广西、广东、海南等地区[1-2]。
菲牛蛭研发利用前景十分广阔
菲牛蛭研发利用前景十分广阔在浩瀚无垠的宇宙空间，生命的奇迹无时不在迸发，在地球这个蓝色的球上，从遥远的冰川时期开始，地球上的生物便以神奇的生命力，见证着地球恒远的历史，在后冰川时代，随着地球不断的地理变化，生活在地球上的生物物种便多了起来，水蛭—这种生活在水里的蛭纲类物种，恐怕远比人类的出现要早得多，水蛭——俗称蚂蝗，外型丑陋喜欢生活在阴暗潮湿水域，主要靠吸食脊椎动物的血液和液体，维系生存，和水蛭一样有着可怕的外型的物种，在大自然中还有很多，生活在陆地上的爬行动物蛇、蜈蚣，都因为对人类有威胁而让人难以接近，其实虽然它们外表狰狞，而另一面，人们却从它们身上发现，并利用了对人类有用的特质，正是人们认识了它们的作用和功效时，慢慢的改变了人类对它们的观点，我国最早应用水蛭的历史记载，来源于《神农本草经》，医圣张仲景、明代李时珍，也有利用水蛭，治疗女子月闭、漏血不止、产后血晕，及跌打损伤等症的记载，现代最先利用水蛭的历史则源自欧洲，1884年，威尔士国家医学院J.B.海克拉夫特，首先发现吸血水蛭咽部，具有水溶性抗凝血物质，1904年，C.雅各比将这种物质命名为水蛭素，1955年德国人F.马克沃德特，首次从日本医蛭体内，成功分离出较纯的水蛭素，人类也由此而知水蛭生物，水蛭素生物组成成分，至此，水蛭这一神奇而富有神秘色彩的面纱被揭开，也开创了人类，利用生物资源的新的篇章。
菲牛蛭素也称水蛭素，由净雪皇生物工程有限公司对菲牛蛭标准化养殖-研发-提取-生产-销售为一体，从菲牛蛭唾液腺及分泌物提取中的一种纯天然生物活性物质，价比黄金。
它和胰岛素、青蒿素被称为世界三素。
现代中外医学实践和实验都证明：在全世界已知物质中，在清除血液垃圾、抗血凝、溶解血栓、疏通微循环方面，菲牛蛭素功能最强，当之无愧的世界冠军，是防治心脑血管疾病的天然首选。
同时对微循环障碍引起的各种慢性疾病，有良好的调理康复作用。
菲牛蛭素在逐渐的被人们认识和利用后的一个世纪以来，因为在自然界中，能够提取的天然水蛭素实在太少，所以人们不得不投入到人工，合成重组水蛭素的研究当中，血液，被称为人身体当中最大的营养剂，人体机能的润滑剂，通畅的血液循环，健康的血液，不仅能使现在生活紧张的都市人身心得到彻底的放松，消除疲劳，还能有效提高人体自身的免疫力，让我们的生活质量大大的提高，在世界各国进行的大量生物研究中表明，从菲牛蛭提取的菲牛蛭素，和菲牛蛭素保健食品，具有极大的临床价值和保健价值，菲牛蛭素也是迄今为止，世界上已知物质中，最强的天然抗凝血酶物质，对人类心脑血管疾病，尤其是血栓性疾病有着显著的疗效。
水蛭与水蛭素的区别和应用水蛭（菲牛蛭）中药口服饮片揭秘水蛭素的前世今生
水蛭与水蛭素的区别和应用水蛭（菲牛蛭）中药口服饮片揭秘水蛭素的前世今生一、对付心脑血管疾病，水蛭与水蛭素的区别和应用水蛭，俗称蚂蛾，它是我国传统的名贵中药材。
关于其药用功能，在我国历代本草药物专著和现代各版的《中国药典》均有记载。
如《神农本草经》记载水蛭“主逐恶血、癖血、月闭，破血消积聚……”，医圣张仲景取其祛邪扶正，治疗“疲血”等症。
明代李时珍在《本草纲目》中记载水蛭主要用来治疗女子月闭、漏血不止、产后血晕及跌打损伤等症。
《中国药典》则记载水蛭的功能与主治为破血、逐癖、通经;用于跌打损伤、血痕经闭等。
水蛭的药理作用肯定，且无明显毒副作用，中医临床广泛应用，在治疗多种因疲血所致的疾病中疗效确切，适应症涉及心脑血管、肝肾和血液病变、男科妇科疑难症、外伤疼痛及呼吸、神经系统等，如中风、冠心病、高脂血症、高血压、糖尿病、前列腺增生、更年期综合症、痛经、阳痰、老人痴呆症、肾病综合征、骨质增生症等。
正因为水蛭有如此多的作用，在1986年召开的全国活血化疲学术会议上，水蛭被定为活血化疲作用最显著的前10种中药材之一。
同时，水蛭还被国家列人“十五”重大科技专项“创新药物和中药现代化”课题中进行重点研究的30种中药材之一。
在欧美、日本和中国等国家已将活体水蛭应用于外科手术上。
法国人工饲养的蚂蜡于2004年8月获准美国FDA(美国食品与药品管理局)的医用许可证书。
水蛭依其食性不同，可分为非吸血水蛭和吸血水蛭两大类。
非吸血水蛭:以螺类(如福寿螺等)、河蚌等软体动物的汁液为食，在国内主要分布于长江中下游沿岸的省区(如湖北、江苏、浙江、上海等)，较常见的是宽体金线蛙(Whitmanpigra)，其成年个体重在20克以上，它是目前中药材市场上的主流品种。
吸血水蛭:主要以吸吮人和脊椎动物(如牛、青蛙等)的血液为生，较常见的是菲牛蛙(PoeeilobdellamanillensiS)。
生活在稻田、水沟、江河、池塘和湖泊中，主要分布于华南的广西和广东等省区。
菲牛蛭的研究进展
菲 牛蛭 （ ｏｃ ｏｄ ｌ ａ ｉｅｓ ） 名 马 尼 拟 Ｐ ｅｉ ｂ ｅｌ ｍ ｎｌ ｎｉ 别 ｌ ａ ｌ ｓ 医蛭 ， 称金边 蚂蟥 ， 俗 隶属 于无吻蛭 目、 医蛭科 、 牛蛭
对人类 心脑血 管疾病 尤是 一种分 泌 型生物活性 物质 ， ］ 仅 存 在于 吸血水蛭 （ 菲牛蛭 ） 如 头部 的唾液腺及 其所 分 泌 的唾液 中［ ， ４ 因此 ， ］ 白天然 水蛭 素 的作用 被人们 发现 的 １ ０ 年 以来 ， ０多 科技 界一直 被“ 自然 界 中能够
Ｎａ ｎ ｎ ｙ ｅ ｉ ｔ ｃ ｎ ｌｇ ｏ Ｌｔ ．， ｎ ｉ ｇ， ａ ｇ ｉ ５ ０ ０ ， ｉ ａ ｎ ｉ ｇ Ｋｅ ｋ ｎ Ｂ ｏ ｅ ｈ ｏｏ ｙ Ｃ ． ｄ Ｎａ ｎ ｎ Ｇｕ ｎ ｘ ， ３ ０ ７ Ｃｈ ｎ ）
摘 要 ： 述 菲 牛蛭 （ ｏｃｏｄｌ ａ ｉｅｓ ） 综 Ｐ ｅｉ ｂ ｅ ａｍ ｎ ｌ ｉ 的人 工 养 殖 技 术 、 ｌ ｌ ｌｎ ｓ 营养 价 值 与 化 学成 分 、 活性 成分 、 效学 研 究 及 药 临 床 应 用 、 性 与有 害 物 质 等 方 面 的研 究进 展 。菲 牛 蛭具 有较 高 的营 养 价 值 ， 毒 同时 在 临 床 上 具 有抗 凝 血 、 血 溶 栓 、 血 小 板 聚集 、 低 血 脂 和 改 善 血 液 循 环 等 作 用 ，并 且 未 见 明显 毒 副 作 用 ， 一 种 极 具 发 展 潜 力 的药 用 抗 降 是 动物。 关 键 词 ： 牛蛭 菲 养殖技术 天 然 水蛭 素 药理作用 毒性
ｃ ｎ ｔ ｕ ｎ ， ａ ｔ ｅ ｎ ｒ ｄｅ ｔ ｔ ｘ ｃ ｌｇ ｏ ｓｉ ｅ ｔ ｔ ｃ ｉ ｉ ｇ ｅ ｉｎ ， ｏ ｉ ｏ ｙ， ｐ ａ ｍ ａ ｏ ｙ ａ ｉ ａ ｄ ｃ ｎ ｃ ｌ ｐ ｌ ａ ｉｎ ｏ ｖ ｏ ｈ ｒ ｃｄ ｎｍ ｃ ｓ ｎ ｌ ｉ ａ ｐ ｉ ｔ ｆ ｉ ａ ｃ ｏ
人工养殖菲牛蛭性腺分化的组织学观察
DOI：10.3969/j.issn. 1004-6755.2017.07.001人工养殖菲牛蛭性腺分化的组织学观察张涛1，于翔1，龚元S李军1，张健1(1.辽宁省淡水水产科学研究院，辽宁辽阳111000;2.荆州市民康生物科技有限公司，湖北荆州434300)菲牛魅（wzawiZZewM、）属于无吻 蛭目，俗名金边蚂蟥，主要以吸食人和动物的血液 为生，在我国华南地区分布较广，福建、海南、香港 等地均有发现[1]。
近几年，国内外学者通过大量 研究发现其体内存在生物活性物质k8]，功能与 水蛭素相似，具有抗凝活性，对降低血酸和血脂有 一定药理作用，在心血管疾病和血栓疾病方面疗 效明显。
因此，菲牛蛭的人工养殖开发具有广大 的市场前景。
目前，随着我国野生菲牛蛭采捕量逐年减少，人工繁殖菲牛蛭技术至关重要，于翔[9]报道了菲 牛蛭产卵茧孵化温度24. 0〜30. 0 °C下，产卵茧周 期一般从几天到几十天；张彬[1°]报道了温度对菲 牛蛭卵茧孵化影响显著，26 °C和28 °C下菲牛蛭 卵茧孵化率较高；笔者通过越冬实验发现，菲牛蛭 冬季也有产茧孵化现象。
因此，能否通过一定物 理刺激或强化饲料等因素作用，缩短菲牛蛭繁殖 周期，并在发育成熟阶段集中繁殖产卵茧，是人工 繁殖菲牛蛭最重要的一环。
而本文则通过生物组 织学角度来剖析菲牛蛭在饲喂强化饲料条件下的 性腺发育成熟度，为人工繁殖菲牛蛭技术的发展 提供了一定的科学依据。
1材料和方法1.1材料菲牛蛭由湖北省荆州市民康生物技术公司提 供，挑选健康无病，平均每条体重为1.24±0. 13 g 亚成体菲牛蛭。
1.2方法实验在室内进行，将实验小水蛭暂养到土壤厚度为 20 〜30 mm 的 380 mm X275 mm X140 m m的60目网箱中，再将网箱置于同等大小的聚 乙烯塑料箱中，用水调节干湿度至70%〜80%。
每箱实验组投放100尾小水蛭，并设三个平行组，暂养周期为7 d。
不同体色菲牛蛭体成分差异研究
ｎｉｌｌｅｎｓｉｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｏｄｙ ｓｕｒｆａｃｅ ｃｏｌｏｒｓ， ｐｒｏｖｉｄｅ ｄａｔａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｖａｌｕｅ ｏｆ Ｈｉｒｕｄｉｎａｒｉａ ｍａｎｉｌｌｅｎｓｉｓ， ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｂａｓｉｃ ｒｅ⁃
品＋称 量 皿 的 重 量 （ ｇ）； Ｍｃ 为 冻 干 后 样 品 ＋ 称 量 皿 的 总
和粗蛋白质，其含量见图 １。 图 １ 表明，不同体表颜色菲牛蛭
２．４ 蛋白质的测定 使用全量凯氏定氮法。 称 ０．２ ｇ 样品
（准确至 ０．０００ １ ｇ） 于消化管中，加入无水硫酸钠、硫酸铜和
浓硫酸消化，用 ＳＫＤ － １０００ 上海沛欧全自动凯氏定氮仪测
学院云南省营养与饲料重点实验室提供。
１．３ 主要仪器 冷冻干燥机（型号 ＦＤ－１Ｃ－５０），购自北京博
９６
安徽农业科学 ２０２３ 年
医康实验仪器有限公司；全 自 动 凯 氏 定 氮 仪 （ 型 号 ＳＫＤ －
菲牛蛭是一种水蛭，俗名金边蚂蟥，是一种特色的药用
医院医学伦理委员会鉴定。
８０．５５％，粗蛋白含量较高，粗脂肪含量低［２］ 。 菲牛蛭含 １６ 种
愈发珍贵，高质量地提取菲牛蛭素势在必行。 近年来，国内
６３．３４％，不饱和脂肪酸占 ３４．０５％，含量最高的脂肪酸是十六
位［１１］ 、菲牛蛭素检测方法［１２］ 等因素是否会对菲牛蛭体成分
菲牛蛭素对血管新生作用的研究
菲牛蛭素对血管新生作用的研究刘言香;黎渊弘;钟小斌【摘要】目的:通过菲牛蛭素刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管,研究其对血管新生的影响.方法:体外培养HUVEC,以血管内皮生长因子(VEGF)作阳性对照药,采用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法测定菲牛蛭素对HU-VEC细胞活力的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测菲牛蛭素对HUVEC培养液中VEGF 释放含量的影响;制备CAM模型,生理盐水作对照,观察不同浓度菲牛蛭素对血管生成的影响.结果:菲牛蛭素终浓度0.25 U/mL时细胞活力最强,与空白对照组比较增殖率为28.4％,且在此浓度培养液中VEGF含量最高,比空白对照组高出80.7％;与生理盐水对照组比较,CAM血管总数明显增加,大、中血管数增加显著(P＜0.01),小血管数变化不明显(P＞0.05),其中以22 U/mL剂量组增生作用最明显.结论:菲牛蛭素对血管新生具有促进作用,这可能为缺血性疾病治疗提供依据.【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2014(031)001【总页数】3页(P55-57)【关键词】菲牛蛭素;内皮细胞;鸡胚绒毛尿囊膜;血管新生【作者】刘言香;黎渊弘;钟小斌【作者单位】广西医科大学药学院南宁530021;广西医科大学第一附属医院南宁530031;广西医科大学第一附属医院南宁 530031【正文语种】中文【中图分类】R965血管新生不仅在生理条件下，而且在多种疾病如血栓栓塞性疾病、缺血性心肌病、创伤等都是一个重要的生物学过程，此过程的实质是产生新血管，它是生殖、发育和修复过程中的基础。
而近年提出的“治疗性血管新生”，即通过某些干预，刺激心肌缺血区小血管生长和侧支循环的形成, 达到恢复缺血心肌供血、改善患者症状和预后的目的，又称之为“药物搭桥”。
因此, 治疗心血管新生已成为一种旁路生物学策略, 这对相当数量的弥漫性冠脉病变以及难以接受手术血管重建治疗的患者, 可能成为一种极具吸引力的治疗模式[1]。
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表明， 从存 活 率 和 个 体 体 质量 增 长 率 两 项 指 标 考 虑 ， 人 工养 殖 菲 牛蛭 ， 建议养殖密度为 ５ Ｏ尾／ 箱， 饲 料 采
极 强 的抑制 作用 。方 富永 等ｎ 建 立 水蛭 素 的双 水 相
萃 取一 凝 胶 色谱联 用提 取法 ， 进而 从菲牛 蛭 中提 取 出水
水蛭 的品种来源 ， 保 留原 有 日本 医蛭 ， 增补 菲牛蛭 。 如何将 菲牛蛭 与其 它 品种 区分 开来 ， 对 于 合 理使 用 菲 牛蛭至 关重要 。 目前 ， 对 于 菲牛 蛭 品种 的鉴 别 方 法 主 要有垂 直平 板 十二 烷 基 硫酸 钠一 聚 丙 烯 酰胺 凝 胶 电泳
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ４ — ４ ６ １ ６ ． ２ ０ １ 近 ２ Ｏ 年 的研 究 进 展
潘 雪 严 亚 萍 林亚明
云 南省 中 医医院 ， 昆明 ６ ５ ０ ０ ２ １ 。 云 南 海 瑞 迪 生 物 药 业 有 限公 司 ， 云 南保 山 ６ ７ ８ ２ ０ ６ 菲 牛蛭 （ ｐ ｏ ｅ ｃ ｉ ｌ ｏ ｂ ｄ ｅ ｌ ｌ ａ ｍａ ｎ ｉ ｌ ｌ ｅ ｎ ｓ ｉ ｓ ） 俗 称 金 边 蚂
汪 波等 提 出在 菲牛 蛭 养殖 生 产 中 ， 种 蛭选 择 是 关 系 养 殖 效 益 的关 键 环 节 ， 选 种 主要 考 虑 三 个 因 素 ： 一 是
３ 化 学 成 分 与 有 效 成 分
苗 艳 丽 等［ １ 。 对 菲 牛 蛭 中 的脂 肪 酸 、 氨基酸 、 微
量元 素成分 及含 量进 行 了分析 ， 结 果 表 明菲 牛 蛭 含 有 １ ６种脂 肪酸 、 １ ８种 氨基 酸 、 ８ 种 微 量元 素 ， 并 指 出天 门 冬氨酸、 甘氨酸、 亮 氨 酸 等 在 菲 牛蛭 活血 化 瘀 的 功 效
２ 品 种 鉴 别
张卫 等 ］ 通过 系统 地本 草 文 献 梳 理 与研 究 指 出 ，
传统 中医使用 的水 蛭是 生 于水 中 ， 个 头 较小 且 能 吸食 人及 牛 马血 的水蛭 ， 具 有 这些 特 性 的水 蛭 品种 有 日本
蛭属（ ｐ ｏ ｅ ｃ ｉ ｌ ｏ ｂ ｄ ｅ ｌ ｌ ａ ｂ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｒ ｄ ） ， 是 吸 血类 水 蛭 中个 体 较 大 的 品种 ， 生 活 在稻 田 、 水 沟、 江河或池塘里， 以吸 吮人 和脊椎 动 物 （ 如牛、 青蛙等） 的血液为生 ， 主要 分 布于 我 国华 南 的广 西 、 广东 、 福建、 海南和香港， 国外
法（ Ｓ Ｄ Ｓ － Ｐ ＡＧＥ） ＿ ９ ］ 、 基 因 序 列 及 分 子 进 化 分 析
法［ １ Ｏ － １ ２ 等。
菲牛蛭 喜 欢 在 土 壤 含 铁 量 较 高 、 水 体 呈 弱 酸 性 （ ｐ Ｈ值 ５ ． ５ ～７ ． Ｏ ） 的 环境 中生 存 繁衍 ， 野外 多 发 现 于 荒芜 的 山塘和 山冲 田块 或 湿 草地 中 ， 尤其 是 在 土 层深 厚、 土质疏 松潮 湿 、 各 种 水 草生 长 旺 盛 ， 并 且 经 常 有耕 牛、 人活 动 、 呈 土畦式 水 体 相 对 固定 的环 境 中多 见 ＿ ５ ］ 。
蛭 素 。 由此 可见 ， 菲牛 蛭 的化 学 成分 主要 有 多 种脂 肪
用 工号配方 （ 血球 蛋 白粉 ７ ５ ． ０ ０ ｇ 、 复 合 维 生素 预 混合
中起 到 了十分 重要 的药 理 作 用 ， 菲 牛蛭 的抗 癌作 用 与 其含 有 的微量 元 素 有 关 。黄 爱 民等＿ 】 朝从 广 西 菲 牛 蛭 中分 离 出 ２种抗 凝 物质 ， 分别 为 菲 牛蛭 素 Ａ（ Ｂ Ｄ Ａ） 和
菲 牛蛭 素 Ｂ（ Ｂ Ｄ Ｂ ） ， 且表明 Ｂ Ｄ Ａ、 Ｂ Ｄ Ｂ对 凝 血 酶 具 有
蟥， 别 名 马尼 拟 医 蛭 ， 在 动 物 分 类 上 隶属 于环 节 动 物
门（ ａ ｎ ｎ ｅ ｌ ｉ ｄ ａ ） 、 蛭纲（ ｈ ｉ ｒ ｕ ｄ ｉ ｎ ｅ ａ ） 、 无 吻蛭 目（ ａ ｒ ｈ ｙ ｎ ｃ ｈ ｏ ｂ — ｄ ｅ ｌ ｌ ｉ ｄ ａ ＂ ｂ ｌ ａ ｎ ｃ ｈ ａ ｒ ｄ ） 、 医蛭 科 （ ｈ ｉ ｒ ｕ ｄ ｉ ｎ ｉ ｄ ａ ｅ ｗｈ ｉ ｔ ｍａ ｎ ） 、 牛
linyaming77126畅com20年的研究进展云南省中医医院昆明650021云南海瑞迪生物药业有限公司云南保山678206菲牛蛭poecilobdellamanillensis俗称金边蚂别名马尼拟医蛭在动物分类上隶属于环节动物门annelida蛭纲hirudinea无吻蛭目arhynchobdellidablanchard医蛭科hirudinidaewhitman蛭属poecilobdellablanchard是吸血类水蛭中个体较大的品种生活在稻田水沟江河或池塘里吮人和脊椎动物如牛青蛙等的血液为生主要分布于我国华南的广西广东福建海南和香港国外主要分布于菲律宾印度尼西亚泰国越南等云南省于2013年将菲牛蛭收录到枟云南省中药材标养殖技术菲牛蛭喜欢在土壤含铁量较高水体呈弱酸性ph7畅0的环境中生存繁衍野外多发现于荒芜的山塘和山冲田块或湿草地中尤其是在土层深厚土质疏松潮湿各种水草生长旺盛并且经常有耕牛人活动呈土畦式水体相对固定的环境中多见提出在菲牛蛭养殖生产中种蛭选择是关系养殖效益的关键环节选种主要考虑三个因素
主要 分 布 于 菲 律 宾 、 印度尼 西亚 、 泰 国、 越 南 等口 ］ 。 云南 省 于 ２ ０ １ ３年 将 菲 牛蛭 收 录到 《 云南 省 中药 材 标 准》 中， 推 动了菲 牛蛭 药材 的标准 化进程 ］ 。 １ 养殖技 术
医蛭 、 丽医蛭 、 南京 牛蛭 、 菲牛 蛭 以及 湖 北 牛蛭 ５个 品 种， 但与 ２ ０ １ ０年 版 《 中 国药 典 》 水 蛭项 下 所 规 定 的动 物 品种 来源 不完全 一 致 ， 建议 《 中 国药 典 》 修 改 并补 充
中西 医结合 研究 ２ ０ １ ５ 年 ８ 月第 ７ 卷 第 ４期
Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｏ ｆＩ ｎ ｔ ｅ ｇ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ ａ ｎ ｄ Ｗ ｅ ￣ ｅ ｒ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｅ２ ｎ ０ １ ５ Ａ ￣ ｏ ｖ ２ ｓ ｔ Ｖ ｏ １ ． ７ Ｎｏ ． ４
产茧多 ， 二是卵茧大， 三 是 卵 茧 孵化 率 和幼 蛭 成 活 率 高， 并通 过实 验进一 步 指 出体 质量 、 年龄、 环 境 刺 激 对 菲 牛蛭 繁殖性 能有 影 响 。李 军 等ｌ ＿ ７ ］ 研究 养 殖 密 度 、 饲
料 配 比和投 饲频率 对 菲 牛蛭 成 活和 生 长 的影 响 ， 结 果