(精编资料推荐)RNA提取中各种试剂的作用
提取DNA、RNA过程中各成分的作用
CTAB呈白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水，震荡时产生大量泡沫，能与阴离子、非离子、两性表面活性剂有良好的配位性。
具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。
中文名十六烷基三甲基溴化铵英文名Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide别称西曲溴铵，CTAB，CTMAB化学式C16H33(CH3)3NBr分子量364.36CAS登录号57-09-0EINECS登录号200-311-3熔点250-237℃水溶性13 g/L (20°C)外观白色或浅黄色结晶体应用本品为天然、合成橡胶、硅油和沥青乳化剂，表面活性剂。
十六烷基三甲基溴化铵别称:西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸蜡基三甲基溴化铵；CTAB；CTMAB；HTAB；CTABr；阳性皂英文名 Hexadecyl trimethyl ammonium Bromide；Cetrimonium Bromide 分类季铵盐CAS号 57-09-0分子式 C16H33(CH3)3NBr 或C19H42NBr分子量 364.446熔点：250-237℃溶解性：13 g/L (20°C)密度：1.3220 g/ml2物理化学性质编辑本品呈白色或浅黄色结晶体至粉末状，有刺激气味，易溶于异丙醇，可溶于水,震荡时产生大量泡沫，能与阴离子、非离子、两性表面活性剂有良好的配位性。
具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。
本品化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。
用途：本品为天然、合成橡胶、硅油和沥青乳化剂；合成纤维、天然纤维和玻璃纤维的抗静电剂、柔软剂；护发素的调理剂；相转移催化剂；乳液起泡剂、表面活性剂，分析试剂，涤纶真丝化剂，皮革加脂剂，它还用于助焊剂、焊锡膏生产里起表面活性剂作用，活性强，对亮点、虚焊、焊电饱满都有一定作用。
HLB值15.8,属于阳离子表面活性剂[1]，溶于热水、乙醇、三氯甲烷,易溶于异丙醇水溶液,微溶于丙酮,不溶于醚。
rna提取试剂盒原理
rna提取试剂盒原理RNA提取试剂盒是用于从细胞或组织样品中提取RNA的一种化学试剂盒。
RNA提取是分子生物学和基因表达研究的重要步骤之一，能够有效地分离RNA并去除DNA、蛋白质和其他杂质。
本文将详细介绍RNA提取试剂盒的原理。
一、RNA提取试剂盒的组成RNA提取试剂盒主要由以下几个部分组成：1. 细胞裂解缓冲液：用于破坏细胞膜和核膜，释放出细胞内的RNA。
2. 溶解液：用于溶解破坏后的细胞和组织样品中的核酸。
3. 酚/氯仿：用于分离RNA。
4. 筛选柱：用于去除DNA、蛋白质和其他杂质。
5. 洗涤缓冲液：用于洗涤筛选柱，去除残留杂质。
6. 去离子水：用于洗涤筛选柱后洗脱纯化后的RNA。
二、RNA提取试剂盒的原理1. 细胞裂解首先，需要将样品中的细胞或组织裂解，释放出RNA。
细胞裂解缓冲液中包含有破坏剂，如SDS和EDTA等，能够破坏细胞膜和核膜，并释放出细胞内的RNA。
2. 核酸溶解经过细胞裂解后，需要将样品中的核酸溶解。
溶解液中含有高浓度的盐和pH调节剂，能够使DNA和RNA分子变性并溶于水相中。
3. RNA分离接下来，需要将RNA与DNA、蛋白质和其他杂质分离。
酚/氯仿是一种常用的分离试剂，可以将RNA从DNA、蛋白质和其他杂质中分离出来。
酚/氯仿具有不同的密度，在试管中形成两个不同层次的相，上层为水相（含有RNA），下层为有机相（含有DNA、蛋白质和其他杂质）。
这样就可以通过移液器或吸管将上层水相取出。
4. RNA纯化虽然通过酚/氯仿可以将RNA分离出来，但仍然存在一些杂质。
因此需要进行纯化步骤。
筛选柱中含有硅胶或磁性珠等材料，能够吸附RNA并去除DNA、蛋白质和其他杂质。
经过洗涤缓冲液的洗涤后，去离子水可以将纯化后的RNA从筛选柱中洗脱。
三、RNA提取试剂盒的应用RNA提取试剂盒广泛应用于基因表达研究、分子生物学和遗传学等领域。
例如，可以用于分离不同组织或细胞类型中的RNA，并进行基因表达谱分析；也可以用于研究基因转录调控机制等。
核酸提取常见试剂地作用原理
核酸提取常见试剂地作用原理核酸提取是分子生物学研究中的基础步骤之一，常用于从细胞或组织中提取和纯化核酸。
核酸提取试剂包括细胞裂解缓冲液、蛋白酶、盐溶液、有机溶剂等。
核酸提取试剂的作用原理主要涉及以下几个方面：1.细胞裂解缓冲液：细胞裂解缓冲液是为了打破细胞膜和核膜，使细胞内的核酸暴露出来。
细胞裂解缓冲液一般含有一些离子和试剂，如EDTA、SDS等。
EDTA可以螯合离子，使核酸不被酶降解。
SDS则可以破坏细胞膜和核膜的完整性，使核酸释放出来。
2. 蛋白酶：蛋白酶的作用是降解核酸分子上的蛋白质，使核酸与蛋白质分离。
在核酸提取的过程中，蛋白酶可以去除核酸表面的蛋白质，从而提高核酸的纯度。
常用的蛋白酶有蛋白酶K和蛋白酶ase。
3.盐溶液：盐溶液的作用是使DNA在溶液中凝集并沉淀。
盐的高浓度可以中和DNA的负电荷，使DNA之间的静电斥力减弱，从而导致DNA分子的凝集和沉淀。
4.有机溶剂：有机溶剂在核酸提取中起到萃取作用，使DNA从细胞裂解液中分离出来。
有机溶剂常用的有酚类、氯仿和异丙醇。
酚类溶剂可以破坏细胞和核膜的完整性，同时与DNA形成无水醇相互作用，促使DNA分离出来。
氯仿可以和DNA结合，并与水进行分配，从而加速DNA的沉淀。
异丙醇则可改变溶液的表面张力，使DNA分子凝胶化和沉淀。
5.离心：离心是核酸提取中的一个重要步骤。
通过离心，可以将细胞碎片、蛋白质、碎屑等杂质与纯净的核酸分离开来。
离心的原理是通过旋转离心机，利用离心力将混合液中的成分分离开来，使沉淀物和上清液分离。
总的来说，核酸提取试剂是通过改变细胞的环境和物理化学性质来实现核酸的分离纯化。
通过使用细胞裂解缓冲液打破细胞膜和核膜，加入蛋白酶降解蛋白质，使用盐溶液凝集和沉淀DNA，加入有机溶剂进行DNA的萃取，最后通过离心分离杂质和DNA。
这些步骤综合起来，能够从复杂的样品中纯化出相对纯净的核酸。
rna提取试剂盒原理
rna提取试剂盒原理标题：RNA提取试剂盒原理及其在分子生物学中的应用引言：RNA（核糖核酸）是生物体内的重要分子之一，它承担着转录和翻译过程中的信息传递和表达功能。
为了研究RNA的结构、功能和调控机制，科学家们发展了各种RNA提取试剂盒，通过这些试剂盒可以将RNA从生物样本中提取出来。
本文将重点介绍RNA提取试剂盒的原理及其在分子生物学研究中的应用。
一、RNA提取试剂盒的原理1. 细胞破碎与裂解：在RNA提取过程中，首先需要对细胞进行破碎和裂解，以释放细胞内的RNA。
这一步可以通过物理方法（如超声波处理、高压破碎）或化学方法（如细胞裂解缓冲液）来实现。
2. RNA的选择性结合：细胞裂解后，需要将RNA与其他细胞成分（如DNA、蛋白质）分离。
RNA提取试剂盒通常使用硅胶或磁珠等材料，通过其表面带有的亲和基团与RNA特异性结合，实现RNA的选择性分离。
3. 杂质的去除：在RNA分离过程中，还常伴随着DNA、蛋白质等杂质的存在。
为了获得纯度较高的RNA样品，RNA提取试剂盒会添加特定的缓冲液或柱子材料，能够去除这些杂质。
4. RNA的洗脱与回收：经过前面几步处理后，RNA会被特定的洗脱缓冲液溶解，并从材料表面或柱子中释放出来，最终得到高纯度的RNA可用于后续实验分析。
二、RNA提取试剂盒在分子生物学中的应用1. 基因表达分析：RNA提取试剂盒是进行基因表达分析的重要工具。
通过提取细胞或组织中的RNA，可以进一步通过定量PCR、实时荧光定量PCR或基因芯片等方法来测量特定基因的表达水平。
2. RNA测序：随着高通量测序技术的发展，RNA提取试剂盒在RNA 测序（RNA-seq）中的应用越来越广泛。
通过提取RNA，可以对全转录组进行测序，从而揭示基因的组成、结构和表达模式。
3. miRNA研究：miRNA（微小RNA）在基因调控中发挥着重要作用。
RNA提取试剂盒可以用于提取细胞或组织中的miRNA，并进一步研究其在疾病发生机制、肿瘤诊断和治疗等方面的功能。
RNA提取中各种试剂的作用
RNA提取中各种试剂的作用1. 细胞裂解缓冲液：细胞裂解缓冲液通常包含非离子性表面活性剂(如Triton X-100)、蛋白酶，以及缓冲盐等成分。
这些成分的组合可以有效破坏细胞膜和核膜，使得细胞释放RNA分子。
2.离子吸附柱：离子吸附柱是用于提取RNA的常用工具。
其表面具有对RNA具有亲合力的柱子，可以选择性地结合RNA分子，同时去除其他污染物。
离子吸附柱通常与玻璃纤维滤芯结合使用，可用于去除DNA、蛋白质和其他杂质。
3. DNAase：DNA酶主要用于去除RNA提取物中的DNA污染。
DNA酶可以特异性地降解DNA分子，从而避免在RNA分析中可能引起的干扰。
4. DNase inactivation reagent：这是一种用于阻断DNA酶活性的试剂。
添加DNase inactivation reagent可以有效地阻止DNAase继续降解RNA。
5. RNase inhibitor：RNase抑制剂是用于保护RNA分子免受RNase 降解的试剂。
RNase抑制剂可以结合并抑制RNase的活性，从而保持RNA 完整性。
6.酚-氯仿提取：酚-氯仿提取是一种用于去除蛋白质和DNA污染的方法。
在这个步骤中，RNA溶液被混合使用酚和氯仿，这样可以将蛋白质和DNA分配到有机相中，而RNA则留在水相中。
7.乙醇沉淀：乙醇沉淀是用于净化RNA的常用方法。
通过在RNA溶液中加入高浓度乙醇，可以使RNA分子与乙醇形成沉淀，从而将其他污染物分离。
8.RNA溶解缓冲液：RNA溶解缓冲液可以在最后的步骤中重悬沉淀的RNA。
这个缓冲液可以保持RNA的完整性，防止其降解。
以上只是RNA提取过程中一些常用试剂及其作用的简要介绍。
在实际操作中，可能还会使用其他试剂以满足特定的需求，例如使用Trizol试剂实现RNA、DNA和蛋白质的同时提取。
此外，不同实验目的和样本类型也可能需要不同的试剂和方法进行处理。
分子生物学实验报告试剂
一、实验背景分子生物学是一门研究生物大分子如核酸、蛋白质等结构与功能的科学。
在分子生物学实验中，试剂的选择和使用对实验结果的准确性至关重要。
本实验报告将详细介绍分子生物学实验中常用的试剂及其作用。
二、实验试剂1. 核酸提取试剂（1）酚/氯仿：用于从细胞中提取DNA和RNA，具有强烈的蛋白变性作用。
（2）异丙醇：用于DNA的沉淀，降低DNA的溶解度。
（3）无水乙醇：用于RNA的沉淀，降低RNA的溶解度。
（4）RNA酶抑制剂：防止RNA降解，保证实验结果的准确性。
2. DNA提取试剂（1）Tris-HCl缓冲液：用于DNA的提取，调节pH值，保持酶的活性。
（2）EDTA：抑制金属离子与DNA结合，防止DNA降解。
（3）SDS（十二烷基硫酸钠）：用于蛋白质的变性，使蛋白质与DNA分离。
（4）蛋白酶K：降解蛋白质，去除蛋白质杂质。
3. DNA纯化试剂（1）琼脂糖凝胶：用于DNA的分离和纯化。
（2）DNA纯化试剂盒：用于DNA的纯化和回收。
4. DNA扩增试剂（1）PCR反应缓冲液：提供反应所需的pH值、盐浓度等。
（2）dNTPs（脱氧核苷三磷酸）：作为PCR反应的原料。
（3）引物：用于PCR反应的特异性扩增。
（4）Taq酶：DNA聚合酶，负责DNA的合成。
5. DNA检测试剂（1）溴化乙锭（EB）：用于DNA的染色，便于在紫外光下观察。
（2）琼脂糖凝胶电泳缓冲液：用于DNA的电泳。
（3）DNA标记物：用于DNA的定量分析。
6. 蛋白质提取试剂（1）裂解缓冲液：用于蛋白质的提取，保证蛋白质的完整性。
（2）蛋白酶抑制剂：防止蛋白质降解。
（3）SDS：使蛋白质变性，便于与核酸分离。
7. 蛋白质纯化试剂（1）柱层析：用于蛋白质的纯化。
（2）凝胶过滤：用于蛋白质的纯化。
8. 蛋白质检测试剂（1）考马斯亮蓝G-250：用于蛋白质的定量分析。
（2）BCA法：用于蛋白质的定量分析。
（3）SDS-PAGE凝胶：用于蛋白质的分离和纯化。
核酸提取常见试剂的作用原理
核酸提取常见试剂的作用原理核酸提取是从细胞、组织中分离、纯化出核酸的过程。
核酸提取的常见试剂包括细胞裂解液、蛋白酶K、乙酸钠、异丙醇以及盐溶液等。
这些试剂根据其作用原理可分为裂解细胞膜、消化蛋白质、沉淀杂质、精炼核酸等几个步骤。
首先，细胞裂解液是核酸提取中最关键的试剂之一，其作用是破坏细胞膜和核酸与蛋白质间的非共价键，使其释放到裂解液中。
细胞裂解液主要由含有蛋白酶的缓冲盐溶液组成，蛋白酶的作用是分解蛋白质，使核酸得以顺利释放。
其次，蛋白酶K是一种特异性水解蛋白质的酶，主要作用是将裂解产物中的核酸外源性污染物进行消化降解，从而提高核酸的纯度。
蛋白酶K在酸性、碱性和高温条件下都具有较好的活性，因此可以在一定程度上去除核酸提取过程中可能存在的污染。
乙酸钠在核酸提取中主要用作沉淀钙离子，这是因为钙离子可以结合核酸形成不溶于水的盐类沉淀，从而使核酸纤维变得更加容易提取。
乙酸钠在碱性条件下结合钙离子，并形成不溶于水的钙酸盐沉淀，从而使得核酸能够更好地沉淀，减少杂质的存在。
异丙醇是核酸提取中的一种有机试剂，主要作用是通过改变核酸和水的亲合性来实现核酸的提纯。
异丙醇可以显著降低核酸与水之间的溶解度，使核酸从水中沉淀出来。
除了降低溶解度，异丙醇还能减少核酸与蛋白质之间的相互作用，从而防止核酸与蛋白质的复合物形成。
最后，盐溶液在核酸提取过程中主要用作洗涤核酸的试剂，其作用是去除核酸中的杂质以及一些可能残留的试剂。
盐溶液中的高离子浓度能够帮助核酸与水中的杂质分离，使核酸在洗涤过程中保持稳定。
综上所述，核酸提取常见试剂在提取过程中有着不同的作用原理，包括裂解细胞膜、消化蛋白质、沉淀杂质以及精炼核酸等几个步骤。
它们通过不同的机制来实现核酸的纯化、提纯以及去除污染物，为后续的核酸分析提供高质量的样品。
核酸提取常见试剂的作用原理
异硫氰酸胍强用力得蛋白质变性剂,能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构得破坏消失而迅速与核酸分离。
胍盐就是破坏蛋白质三维结构得离液剂,在通常使用得蛋白质变性剂中作用最强得就是异硫氰酸胍,它们可以使多数蛋白质转换成一随机得卷曲状态。
含有强力得阴离子与阳离子基团,它们可以形成较强得氢键。
在还原剂存在得情况下,异硫氰酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如SDS存在得情况下,可以破坏疏水作用、盐酸胍、尿素盐酸胍就是一个核酸酶得强抑制剂,它并不就是一种足够强得变性剂,可以允许完整得ＲＮA从富含RＮaｓe得组织中提取出来。
４-8M可断裂氢键,有两种可能机制:1变性蛋白与盐酸胍、尿素优先结合,形成变性蛋白—变性剂复合物,当复合物被除去,从而引起N－D反应平衡向右移动,随着变性剂浓度增加,天然状态得蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;２盐酸胍、尿素对氨基酸得增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水得氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为非极性残基得较好溶剂,使蛋白质内部得疏水残基伸展与溶解性加强,盐酸胍、尿素引起得变性往往就是不可逆得、高浓度尿素使蛋白质变性并抑制Rnase活性十二烷基肌氨酸钠使蛋白质解体变性巯基试剂1防止蛋白质或酶等(如辅酶Ａ)分子中SH基团氧化成二硫键,2在某些酶反应过程中维持体系得还原环境。
DＴT,DDＴE、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于她就是生物体内得还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放、ＤNA提取中,常使用巯基乙醇,维持缓冲液得还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定得毒性,浓度不应高于2%。
巯基乙醇β-巯基乙醇得主要作用就是破坏ＲNaｓｅ蛋白质中得二硫键(肽与蛋白质分子中得半胱氨酸残基中得键)、1 还原蛋白质二硫键,使Rna酶变性２抑制酚类氧化,若氧化,核酸会变成灰黑色,苯酚得氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二酯键得断裂及导致ＲNA与DＮA得交联３保护蛋白质得巯基蛋白质提取中需要巯基乙醇还原二硫键,使RNA酶失活化学变性剂SＤS、尿素、盐酸胍能破坏疏水键、盐键、氢键、范德华力使蛋白质变性但不影响肽键与二硫键,不能使蛋白质彻底变性加上还原剂巯基乙醇或DTＴ,能还原二硫键,使RＮA彻底变性ＤTT二硫苏糖醇刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。
核酸提取常见试剂的作用原理复习课程
核酸提取常见试剂的作用原理异硫氰酸胍强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。
胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，在通常使用的蛋白质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍，它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态。
含有强力的阴离子和阳离子基团，它们可以形成较强的氢键。
在还原剂存在的情况下，异硫氰酸胍可以断裂氢键，而去垢剂，如SDS存在的情况下，可以破坏疏水作用。
盐酸胍、尿素盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，它并不是一种足够强的变性剂，可以允许完整的RNA从富含RNase的组织中提取出来。
4-8M可断裂氢键，有两种可能机制：1变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合，形成变性蛋白-变性剂复合物，当复合物被除去，从而引起N-D反应平衡向右移动，随着变性剂浓度增加，天然状态的蛋白不断转变为复合物，最终导致蛋白质完全变性；2盐酸胍、尿素对氨基酸的增溶作用，能形成氢键，当浓度高时，能破坏水的氢键结构，结果盐酸胍、尿素就称为非极性残基的较好溶剂，使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强，盐酸胍、尿素引起的变性往往是不可逆的。
高浓度尿素使蛋白质变性并抑制Rnase活性十二烷基肌氨酸钠使蛋白质解体变性巯基试剂1防止蛋白质或酶等（如辅酶A）分子中SH基团氧化成二硫键，2在某些酶反应过程中维持体系的还原环境。
DTT，DDTE、巯基乙醇应用最广，谷胱甘肽也常应用，由于他是生物体内的还原剂，同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放。
DNA提取中，常使用巯基乙醇，维持缓冲液的还原环境，防止多酚类氧化，由于具有一定的毒性，浓度不应高于2%。
巯基乙醇β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键（肽和蛋白质分子中的半胱氨酸残基中的键）。
1 还原蛋白质二硫键，使Rna酶变性2 抑制酚类氧化，若氧化，核酸会变成灰黑色，苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联3 保护蛋白质的巯基蛋白质提取中需要巯基乙醇还原二硫键，使RNA酶失活化学变性剂SDS、尿素、盐酸胍能破坏疏水键、盐键、氢键、范德华力使蛋白质变性但不影响肽键和二硫键，不能使蛋白质彻底变性加上还原剂巯基乙醇或DTT，能还原二硫键，使RNA彻底变性DTT二硫苏糖醇刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。
核酸提取常见试剂的作用原理
核酸提取常见试剂的作用原理核酸提取是分子生物学和遗传学研究中的重要步骤，其目的是从生物样本中分离和纯化核酸。
常见的核酸提取试剂有离体腺苷酸（ATP）、蛋白酶K、脲和异碘酸等。
这些试剂在核酸提取中起到不同的作用，下面详细介绍它们的作用原理。
离体腺苷酸（ATP）是核酸提取试剂中的一种常用溶液。
它的主要作用是通过竞争性抑制蛋白酶活性，防止蛋白酶降解核酸。
蛋白酶是存在于细胞中的一类酶，它能降解蛋白质。
在核酸提取过程中，为了保护核酸不被蛋白酶降解，需要加入ATP来与蛋白酶竞争结合位点，从而保护核酸的完整性。
蛋白酶K是一种广泛应用于核酸提取的酶。
它主要通过切断蛋白质和核酸间的化学键来释放核酸分子。
蛋白酶K能够识别蛋白质表面的多肽链，然后切断其肽键，从而解离蛋白质和核酸的相互作用，使核酸释放出来。
在核酸提取过程中，加入蛋白酶K可以帮助溶解蛋白质，使核酸可以从蛋白质中分离出来。
脲是核酸提取试剂中一种常用的溶液，它的作用是通过改变溶液中的离子浓度和盐浓度来调节核酸的溶解性。
脲能够与核酸分子形成氢键，从而增加核酸的稳定性。
在核酸提取过程中，将生物样本加入含有脲的溶液中，可以使细胞破裂并释放出核酸，同时保护核酸不被降解，并增加核酸在溶液中的溶解度。
异碘酸是一种氧化剂，它在核酸提取中的作用是氧化生物样本中的蛋白质和多肽链，从而分解它们。
异碘酸的氧化性能够破坏蛋白质和多肽链的化学键，将其分解成小分子，使得核酸可以从中解离出来。
异碘酸还可以去除细胞中的多聚腺苷酸，从而降低核酸提取过程中的阻碍。
综上所述，离体腺苷酸、蛋白酶K、脲和异碘酸是核酸提取过程中常见的试剂，它们分别通过竞争性抑制蛋白酶活性、切断蛋白质和核酸的化学键、调节核酸的溶解性和氧化蛋白质和多肽链，完成核酸的提取和纯化。
在核酸提取实验中，合理使用这些试剂，可以保护核酸的完整性和纯度，为后续的分子生物学和遗传学研究提供可靠的基础数据。
RNA 提取试剂盒
RNA 提取试剂盒1、总RNA 提取试剂（TRI Reagent，RNA Isolation Reagent）TRI ® Reagent 是改进型的一步法细胞总RNA 纯化试剂。
它可以快速、经济、有效的提取人、动物、植物、酵母、细菌和病毒的总RNA。
也可以同时提取DNA 和蛋白质。
该产品含有硫氰酸胍和苯酚，能够有效溶解RNA，DNA 和蛋白质。
在加入氯仿并离心后，上层水相中含有RNA。
水相的RNA 经过沉淀和洗涤后几乎没有DNA 或者蛋白质污染，可以用于Northern blots、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 酶保护分析、克隆或者PCR 等等。
该产品可以有效分离0.1-15 kb 长度单位内的RNA 分子，每毫升TRI® Reagent 可以提取5-10×106细胞、50-100mg 组织或者10 cm 2培养瓶表面的单层培养细胞。
完全移走水相的离心产物加入无水乙醇沉淀DNA，用柠檬酸钠乙醇溶液洗涤，溶解后可用于PCR、限制性酶切以及Southern blotting 等。
沉淀DNA 后的水相加入异丙醇沉淀蛋白质，用盐酸胍乙醇溶液洗涤，分离的蛋白质可用于Western blotting 等。
优点：1）可用于多种组织：人、动物、植物、酵母、细菌和病毒。
2）提取大量或者少量的组织细胞效果良好。
3）比传统的硫氰酸胍/氯化铯方法产率高。
4）1 ml 最多可以提取107细胞或者100 mg 组织。
货号名称适用范围产品规格价格T9424TRI Reagent组织，培养细胞，细胞团25ml, 100 ml, 200ml506，1590，2860T3809TRI ReagentBD全血，血浆，血清25ml, 100 ml, 200ml536，1699，2978T3934 TRI Reagent LS 细胞悬浮液，脑脊液，羊水25ml, 100 ml, 200ml938，2603，43362、哺乳动物细胞总RNA 提取试剂盒（GenElute TM Mammalian Total RNA Miniprep Kits）该试剂盒结合了硅质膜技术和离心柱技术，可以快速结合、洗涤、溶解获得高质量的细胞总RNA。
核酸提取常见试剂的作用原理
异硫氰酸胍强用力得蛋白质变性剂,能迅速溶解蛋白质,导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构得破坏消失而迅速与核酸分离。
胍盐就是破坏蛋白质三维结构得离液剂,在通常使用得蛋白质变性剂中作用最强得就是异硫氰酸胍,它们可以使多数蛋白质转换成一随机得卷曲状态。
含有强力得阴离子与阳离子基团,它们可以形成较强得氢键。
在还原剂存在得情况下,异硫氰酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如SDS存在得情况下,可以破坏疏水作用。
盐酸胍、尿素盐酸胍就是一个核酸酶得强抑制剂,它并不就是一种足够强得变性剂,可以允许完整得RNA从富含RNase得组织中提取出来。
4-8M可断裂氢键,有两种可能机制:1变性蛋白与盐酸胍、尿素优先结合,形成变性蛋白-变性剂复合物,当复合物被除去,从而引起N-D反应平衡向右移动,随着变性剂浓度增加,天然状态得蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;2盐酸胍、尿素对氨基酸得增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水得氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为非极性残基得较好溶剂,使蛋白质内部得疏水残基伸展与溶解性加强,盐酸胍、尿素引起得变性往往就是不可逆得。
高浓度尿素使蛋白质变性并抑制Rnase活性十二烷基肌氨酸钠使蛋白质解体变性巯基试剂1防止蛋白质或酶等(如辅酶A)分子中SH基团氧化成二硫键,2在某些酶反应过程中维持体系得还原环境。
DTT,DDTE、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于她就是生物体内得还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放。
DNA提取中,常使用巯基乙醇,维持缓冲液得还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定得毒性,浓度不应高于2%。
巯基乙醇β-巯基乙醇得主要作用就是破坏RNase蛋白质中得二硫键(肽与蛋白质分子中得半胱氨酸残基中得键)。
1 还原蛋白质二硫键,使Rna酶变性2 抑制酚类氧化,若氧化,核酸会变成灰黑色,苯酚得氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二酯键得断裂及导致RNA与DNA得交联3 保护蛋白质得巯基蛋白质提取中需要巯基乙醇还原二硫键,使RNA酶失活化学变性剂SDS、尿素、盐酸胍能破坏疏水键、盐键、氢键、范德华力使蛋白质变性但不影响肽键与二硫键,不能使蛋白质彻底变性加上还原剂巯基乙醇或DTT,能还原二硫键,使RNA彻底变性DTT二硫苏糖醇刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。
RNA提取原理及实验详细步骤介绍
总RNA提取一、实验材料及作用原理1，Trizol主要成分：苯酚，8-羟基喹啉，异硫氰酸胍，β-巯基乙醇Trizol 法提RNA时，加入氯仿RNA在上层水相，DNA及蛋白质在下层有机相中（也有人说是在中间层和有机相中）。
酚氯仿法提取DNA时：提取试剂Tris 饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1à主要成分苯酚，氯仿，异戊醇用酚氯仿法提取DNA时，DNA出现在水相中，DNA出现在不同位置的原因是Trizol方法是通过剧烈变性，导致基因组DNA和核蛋白，如核小体，发生共沉淀，因此，加入有机溶剂萃取后，基因组DNA不会溶解，可能会出现在沉淀或者两相之间的界面。
而游离的RNA，以及部分DNA碎片则会保留在水相中。
TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA；TRNzol可保持RNA完整性，同时裂解细胞，溶解细胞内含物。
异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，其主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白/核酸物质解聚得到释放。
酚可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNAase。
在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA 在上层水相中，取出水相后，用异丙醇沉淀可回收RNA，用乙醇沉淀中间层可回收DNA，用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。
2，异丙醇的作用是通过羟基的疏水作用使得RNA链中的亲水基团收到保护，等同于沉淀。
因为RNA和某些杂质不溶于异丙醇，所以用乙醇来沉淀去盐和有机溶剂。
3，D EPC(Diethyl pyrocarbonate)，中文名为焦碳酸二乙酯。
分子式为C6H10O5，分子量为162.14。
是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性，常用于生物实验中RNA的提取等。
DEPC37℃溶于水中，处理12h，然后120℃高温高压灭菌30min。
核酸提取常见试剂地作用原理
核酸提取常见试剂地作用原理核酸提取是分离纯化DNA或RNA的过程，以获得高质量的核酸样品用于进一步的分子生物学实验。
核酸提取的常见试剂主要有细胞裂解缓冲液、蛋白酶、溶剂和混合物。
下面将详细介绍这些常见试剂的地作用原理。
1.细胞裂解缓冲液：细胞裂解缓冲液主要包含盐、缓冲剂、洗涤剂和螯合剂等成分。
其主要作用是破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出核酸。
细胞裂解缓冲液中的盐通过渗透压作用使细胞膜破裂，使细胞内部的核酸暴露在外。
缓冲剂可以调节溶液的酸碱度，使其维持在适合核酸稳定的范围内。
洗涤剂的作用是将细胞中的脂质和蛋白质溶解，进一步破坏细胞膜。
螯合剂能够与金属离子形成配合物，阻止金属离子催化核酸降解反应。
2.蛋白酶：蛋白酶一般用于去除核酸提取过程中的蛋白质污染物。
蛋白酶能够水解蛋白质，将其分解成氨基酸和小肽，从而达到去除蛋白质的目的。
在核酸提取过程中，蛋白酶通常添加在核酸的溶解和洗涤步骤中，以去除细胞中的蛋白质。
3.溶剂：在核酸提取过程中，常用的溶剂有酚、异丙醇和乙醇等。
这些溶剂的作用是通过改变核酸和其他杂质的溶解特性，从而实现纯化目的。
酚能够溶解DNA，并与蛋白质形成复合物，其中DNA会在酚的上层，而蛋白质则在下层。
异丙醇和乙醇主要用于沉淀和纯化核酸。
添加这些溶剂后，核酸会从溶液中析出形成沉淀，然后可以通过离心沉淀核酸，将杂质剔除。
4.混合物：核酸提取中常用的混合物有实验用试剂盒等。
实验用试剂盒通常包含多种试剂和材料，提供了从细胞裂解到纯化核酸的全部步骤。
这些试剂盒经过精心配置，能够实现快速、高效和可靠的核酸提取。
其中的各种试剂按照特定的顺序和比例添加，以实现细胞裂解、去除蛋白质、去除杂质、沉淀核酸等步骤。
总的来说，核酸提取的常见试剂通过不同的地作用原理实现细胞裂解、去除蛋白质和杂质、纯化核酸等功能。
这些试剂能够有效地提取出高质量的DNA或RNA，为后续的分子生物学实验提供可靠的基础。
rna提取过程中氯仿的作用
rna提取过程中氯仿的作用嘿，咱今儿就来说说 RNA 提取过程中氯仿那神奇的作用。
你可别小瞧了这氯仿，它在里面可扮演着相当重要的角色呢！想象一下，RNA 提取就像是一场精心编排的舞蹈，而氯仿就是那个关键的领舞者。
它能把原本杂乱无章的混合物变得有序起来。
氯仿啊，就像是一个厉害的分拣员。
它能把细胞裂解后产生的各种成分分离开来。
比如说，那些蛋白质呀，DNA 呀之类的，氯仿都能巧妙地把它们和我们想要的 RNA 区分开来。
这就好比在一堆杂物中，准确地挑出我们需要的宝贝。
它能让 RNA 乖乖地待在它该在的地方，而把其他不相干的东西给弄走。
这可不是随便什么东西都能做到的呀！你说神奇不神奇？而且呀，氯仿还特别稳定可靠呢！就像一位忠实的伙伴，每次都能出色地完成任务。
它不会随便出岔子，总是稳稳地发挥着自己的作用。
没有氯仿的 RNA 提取过程，那可真是不敢想象。
就好像一场演出没有了主角，那还怎么进行下去呢？氯仿就是这样不可或缺的存在呀！你想想看，如果没有氯仿，那提取出来的东西会是多么混乱呀！RNA 可能会和其他乱七八糟的东西混在一起，那我们还怎么去研究它，怎么去利用它呢？所以呀，可别小看了这小小的氯仿在 RNA 提取过程中的大作用。
它真的是功不可没呢！咱得好好感谢它，让我们的实验能够顺利进行，让我们离科学的真相更近一步。
总之呢，氯仿在 RNA 提取过程中的作用那是杠杠的！它就是那个让一切变得有条理、有秩序的魔法使者。
下次你再进行 RNA 提取实验的时候，可一定要好好感受一下氯仿的神奇力量哟！。
RNA提取中各种试剂的作用
氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取 RNA 时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。
RNA 提取过程，有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和 RNA 脱离， RNA 进入水相。
氯仿的作用有多个方面，加入氯仿，虽然有变性蛋白质的作用，但是其主要用处是用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层。
一般的 trizol 试剂在 4度下是油状悬浮液，提高温度，放置一段时间，自然也会分相。
离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。
RNA 无一例外地存在于水样层当中。
水样层的容量大约为400ul。
【标准：1mlTrizol 加200ul的氯仿，水样层的容量大约为所加 Trizol 容量的 60% 】上层水相， PH 5.1 左右，当溶液 pH 在酸性的时候， RNA 分子就会沉淀在酚与溶液的界面，只有 RNA 分子留在水相。
而当 pH 接近中性时， RNA 就会溶解在水相，（导致PH 中性的大概原因是trizol 与样品比例不对，应该尽量保证提取量的前提下使 trizol 过量）Trizol 法提 RNA ，加氯仿就是要剧烈震荡才行，这样才能彻底地两相混匀。
异丙醇的作用是通过 -OH 的疏水作用使得 RNA 链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。
通过将水样层和异丙醇混合来沉淀 RNA ， RNA 沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。
只不过用量少一点， 0.6V~1V 就够了，在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。
不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候。
【400ul 的水相对应500ul 的的异丙醇。
】醇沉淀是很经常用的方法，因为 RNA 和某些杂质不溶于异丙醇，所以可以用来沉淀。
乙醇沉淀的主要目的是沉淀 +除盐。
TRIzol 主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使ＲＮＡ释放出来的同时，保护ＲＮＡ的完整性。
RNA提取中各种试剂的作用
氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。
RNA提取过程，有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和RNA脱离，RNA进入水相。
氯仿的作用有多个方面，加入氯仿，虽然有变性蛋白质的作用，但是其主要用处是用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层。
一般的trizol试剂在4度下是油状悬浮液，提高温度，放置一段时间，自然也会分相。
离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。
RNA无一例外地存在于水样层当中。
水样层的容量大约为400ul。
【标准：1mlTrizol加200ul的氯仿，水样层的容量大约为所加Trizol 容量的60% 】上层水相，PH 5.1左右，当溶液pH在酸性的时候，RNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，只有RNA分子留在水相。
而当pH接近中性时，RNA就会溶解在水相，（导致PH中性的大概原因是trizol与样品比例不对，应该尽量保证提取量的前提下使trizol过量）Trizol法提RNA，加氯仿就是要剧烈震荡才行，这样才能彻底地两相混匀。
异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。
通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA，RNA沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。
只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。
不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来xx的时候。
【400ul的水相对应500ul的的异丙醇。
】醇沉淀是很经常用的方法，因为RNA和某些杂质不溶于异丙醇，所以可以用来沉淀。
乙醇沉淀的主要目的是沉淀+除盐。
TRIzol主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使ＲＮＡ释放出来的同时，保护ＲＮＡ的完整性。
加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。
RNA提取中各种试剂的作用
氯仿是分子量比较大的有机溶剂，正在提与RNA 时，氯仿不妨灵验的使有机相战无机相赶快分散.RNA提与历程，有机相中主假如酚战蛋黑分散，进而使得蛋黑战RNA摆脱，RNA加进火相.之阳早格格创做氯仿的效率有多个圆里，加进氯仿，虽然有变性蛋黑量的效率，然而是其主要用处是用去分相，本量上是加速有机相战火相的分层.普遍的trizol试剂正在4度下是油状悬浮液，普及温度，搁置一段时间，自然也会分相.离心后混同物分成三层：下层苯酚氯仿层，中间层，表层无色的火样层.RNA无一例中天存留于火样层核心.火样层的容量约莫为400ul.【尺度：1mlTrizol加200ul的氯仿，火样层的容量约莫为所加Trizol容量的60% 】表层火相，PH 5.1安排，当溶液pH正在酸性的时间，RNA分子便会重淀正在酚与溶液的界里，惟有RNA分子留正在火相.而当pH靠近中性时，RNA便会溶解正在火相，（引导PH中性的大概本果是trizol与样品比率分歧过失，该当尽管包管提与量的前提下使trizol过量）Trizol法提RNA，加氯仿便是要剧烈震荡才止，那样才搞真足天二相混匀.同丙醇的效率是通过OH的疏火效率使得RNA链中的亲火基团受到呵护，等共于重淀，然而是那是个反当令爆收正在火相中，与前里的氯仿没有冲突.通过将火样层战同丙醇混同去重淀RNA，RNA重淀正在离心前常常没有成睹，产死一胶状片状重淀附着于试管壁战管底.同丙醇是重淀核酸用的，效率战乙醇一般.只没有过用量少一面，0.6V~1V便够了，正在火相很多，离心管容积有限，加没有下太多乙醇的时间普遍会用同丙醇重淀.没有过感觉效验没有如乙醇，奇我会有重淀没有出去物品的时间.【400ul的火相对于应500ul的的同丙醇.】醇重淀是很经时常使用的要领，果为RNA战某些纯量没有溶于同丙醇，所以不妨用去重淀.乙醇重淀的主要脚段是重淀+除盐.TRIzol主要物量是同硫氰酸胍，它不妨损害细胞使ＲＮＡ释搁出去的共时，呵护ＲＮＡ的完备性 .加进氯仿后离心，样品分成火样层战有机层.RNA存留于火样层中.支集上头的的火样层后，RNA 不妨通过同丙醇重淀去还本.无论是人、动物、动物仍旧细菌构造，TRIzol法对于少量的构造(50100 mg)战细胞(5×106)以及洪量的构造(≥1 g)战细胞(>107)均有较佳的分散效验.TRIZOL试剂支配上的简朴性允许共时处理多个的样品.所有的支配不妨正在一小时内完毕.TRIZOL抽提的总RNA不妨预防DNA战蛋黑的传染.故而不妨做RNA 印迹分解、乌面纯接、poly(A)+ 采用、体中翻译、RNA酶呵护分解战分子克隆.提与时需要注意一些问题：提与时要搞到超洁台内支配、支配戴一次性脚套、EP管及Tip头皆要用0.1%处理（0.1%DEPC浸泡过夜后，下压蒸气灭菌）、留神、粗致、摆动及屡屡移液要沉.那样搞的唯一脚段便是二个，一是留神RNAse的传染落解RNA；二是动做过分暴力损害RNA的完备性.其余您提的RNA搞电泳的问题，普遍RNA电泳该当是搞甲醛变性电泳，然而是普遍的琼脂糖电泳也不妨，需要上样量沉微大些，而且跑电泳的时间越短越佳（那样也是为了缩小中界RNAse对于RNA的落解），跑完电泳坐刻瞅察，那样也不妨，然而是如果样品中的RNA量很矮大概者道没有是很下的话是检测没有到的.果为那些试剂皆市效率后绝真验,所以用酒粗洗一到二遍.一是酒粗不妨溶解一些重淀中大概的有机物纯量,二是洗掉同丙醇,氯仿试剂,酒粗的易挥收性正在那里的到使用,末尾的乙醇主假如洗涤同丙醇，也不妨溶解一部分蛋黑，痕量的乙醇很简单挥收掉.。
dna rna共提取试剂成分
dna rna共提取试剂成分
DNA和RNA共提取试剂通常包含以下成分：
1. 裂解液：用于裂解细胞或组织，释放出DNA和RNA。
2. 洗涤缓冲液：用于清洗样品，去除杂质和未结合的分子。
3. 结合缓冲液：用于促进DNA和RNA与磁珠的结合。
4. 洗涤液：用于清洗磁珠，去除未结合的分子。
5. 洗脱缓冲液：用于从磁珠上洗脱DNA和RNA。
此外，有些共提取试剂还包含蛋白酶K、RNase抑制剂、醋酸铵等成分，以优化提取过程。
需要注意的是，不同厂商的共提取试剂成分可能会有所不同，具体可参考试剂盒说明书或咨询厂商技术人员。
RNA提取相关试剂——DEPC和TRIS
DEPC焦碳酸二乙酯（DEPC）：DEPC即diethypyrocarbonate，DEPC结构式中文名为。
分子式为C6H10O5，分子量为162.14。
是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。
DEPC 可以抑制植物细胞上的NSCC，即nonselective cation channel （非选择性阳离子通道）。
是常用的NSCC抑制剂.DEPC毒性1．DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯) 是一种高效烷化剂。
配置：加0.1% DEPC 到去离子水中，混匀过夜，然后高温高压121℃，20min，DEPC即降解成二氧化碳和水无毒。
2．DEPC有刺激性，对眼睛气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最强的，使用时戴口罩，不小心占到手上注意立即冲洗。
3．DEPC是一种潜在的致癌物质，主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯类衍生物，其中尿烷是一种已知的致癌物质。
DEPC水泡过一次枪头后还能再用吗?是否每次都要重配？答：不能再用。
每次处理耗材时都要用新配的。
DEPC水用于配制电泳缓冲液和溶解RNA.DEPC在水中的半衰期25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4 min（pH 6）、9 min（pH 7）。
Tris缓冲液中DEPC的降解会加快，25℃时，半衰期为1.25 min（pH 7.5）、0.37 min（pH 8.2）。
DEPC加入到水中之后并不会立即溶解，而是形成小的球状液滴（类似于油滴），需要彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀。
此时的溶液才可以拿去高温除菌除DEPC。
一般灭菌15min即可将DEPC彻底除去。
（试验所用试剂也可用DEPC处理，加入DEPC至0.1%浓度，然后剧烈振荡10分钟，再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC，否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性）配制泡实验器具的DEPC水的配制：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1000ml容量瓶中静置4小时后备用。
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氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。
RNA提取过程，有机相中主要是酚和蛋白结合，从而使得蛋白和RNA脱离，RNA进入水相。
氯仿的作用有多个方面，加入氯仿，虽然有变性蛋白质的作用，但是其主要用处是用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层。
一般的trizol试剂在4度下是油状悬浮液，提高温度，放置一段时间，自然也会分相。
离心后混合物分成三层：下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。
RNA无一例外地存在于水样层当中。
水样层的容量大约为400ul。
【标准：1mlTrizol加200ul的氯仿，水样层的容量大约为所加Trizol 容量的60% 】
上层水相，PH 5.1左右，当溶液pH在酸性的时候，RNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，只有RNA分子留在水相。
而当pH接近中性时，RNA就会溶解在水相，（导致PH中性的大概原因是trizol与样品比例不对，应该尽量保证提取量的前提下使trizol过量）
Trizol法提RNA，加氯仿就是要剧烈震荡才行，这样才能彻底地两相混匀。
异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。
通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA，RNA沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。
只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。
不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候。
【400ul的水相对应500ul的的异丙醇。
】
醇沉淀是很经常用的方法，因为RNA和某些杂质不溶于异丙醇，所以可以用来沉淀。
乙醇沉淀的主要目的是沉淀+除盐。
TRIzol主要物质是异硫氰酸胍，它可以破坏细胞使ＲＮＡ释放出来的同时，保护ＲＮＡ的完整性。
加入氯仿后离心，样品分成水样层和有机层。
RNA存在于水样层中。
收集上面的的水样层后，RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。
无论是人、动物、植物还是细菌组织，TRIzol法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。
TRIZOL 试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。
所有的操作可以在一小时内完成。
TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。
故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。
提取时需要注意一些问题：提取时要做到超净台内操作、操作带一次性手套、EP管及Tip头都要用0.1%处理（0.1%DEPC浸泡过夜后，高压蒸气灭菌）、小心、细致、晃动及每次移液要轻。
这样做的唯一目的就是两个，一是小心RNAse的污染降解RNA；二是动作过度暴力破坏RNA的完整性。
另外你提的RNA做电泳的问题，一般RNA电泳应该是做甲醛变性电泳，但是一般的琼脂糖电泳也可以，需要上样量稍微大些，并且跑电泳的时间越短越
好（这样也是为了减少外界RNAse对RNA的降解），跑完电泳立刻观察，这样也可以，但是如果样品中的RNA量很低或者说不是很高的话是检测不到的。
因为这些试剂都会影响后续实验,所以用酒精洗一到两遍.一是酒精可以溶解一些沉淀中可能的有机物杂质,二是洗掉异丙醇,氯仿试剂,酒精的易挥发性在这里的到运用,
最后的乙醇主要是洗涤异丙醇，也可以溶解一部分蛋白，痕量的乙醇很容易挥发掉。