TransZol法rna提取试剂盒说明
RNAzol RT RNA 提取剂说明书
Product codeE01010AProduct nameRNAzol® RT RNA Isolation ReagentContact manufacturerGeneCopoeia, Inc.9620 Medical Center Drive, Suite 101 Rockville, MD 20850 USAPhone: 301-762-0888 Toll free: 1-866-360-9531 Fax: 301-762-3888 Chemical Name CAS-No Weight %Phenol 108-95-2 30-60 Guanidine isothiocyanate 593-84-0 15-40 Ammonium thiocyanate 1762-95-4 7-13Contact with acids or bleach liberates toxic gases. DO NOT ADD acids or bleach to any liquid wastes containing this product. We recommend handling all chemicals with caution. GHS – ClassificationSignal Word DANGERHealth HazardsMaterial Safety Data SheetRevision Date: September 12, 2014Health Hazards (continued)Physical hazardsNot hazardousHazard StatementsH314 - Causes severe skin burns and eye damageH341 - Suspected of causing genetic defectsH373 - May cause damage to organs through prolonged or repeated exposureH412 - Harmful to aquatic life with long lasting effectsH302 - Harmful if swallowedH312 - Harmful in contact with skinH332 - Harmful if inhaledH335 - May cause respiratory irritationPrecautionary StatementsP301 + P312 - IF SWALLOWED: Call a POISON CENTER or doctor/physician if you feel unwellP304 + P340 - IF INHALED: Remove victim to fresh air and keep at rest in a position comfortable for breathingP301 + P330 + P331 - IF SWALLOWED: rinse mouth. Do NOT induce vomitingP303 + P361 + P353 - IF ON SKIN (or hair): Remove/Take off immediately all contaminated clothing. Rinse skin withwater/showerP305 + P351 + P338 - IF IN EYES: Rinse cautiously with water for several minutes. Remove contact lenses, if present and easy to do. Continue rinsingP310 - Immediately call a POISON CENTER or doctor/physicianP308 + P313 - IF exposed or concerned: Get medical advice/attentionP273 - Avoid release to the environmentP280 - Wear protective gloves/protective clothing/eye protection/face protectionPrinciple Routes of ExposurePotential Health EffectsEyes Causes burns. Risk of serious damage to eyes. Corrosive to the eyesand may cause severe damage including blindness.Skin Causes burns. Possible risk of irreversible effects. Harmful in contactwith skin.Irritating to skin and mucous membranes.Inhalation Harmful by inhalation.Ingestion Harmful if swallowed. Ingestion causes burns of the upper digestive andrespiratory tracts. Ingestion may cause gastrointestinal irritation, nausea,vomiting and diarrhea.Specific effectsCarcinogenic effects Phenol has been classified by the International Agency for Research onCancer (IARC) as not classifiable as to carcinogenicity to humans(Group 3).Mutagenic effects Not ApplicableReproductive toxicity Not ApplicableSensitization Not ApplicableTarget Organ Effects SkinLungsLiverSpleenKidneyHMISSkin contactWash off immediately with soap and plenty of water while removing all contaminated clothes and shoes. Call a physician immediately.Eye contactIF IN EYES: Rinse cautiously with water for several minutes. Remove contact lenses, if present and easy to do. Continue rinsing. Rinseimmediately with plenty of water, also under the eyelids, for at least 15 minutes. Call a physician immediately.Ingestion Call a physician or poison control center immediately. Rinse mouth. Do not induce vomiting without medical advice. Never give anything by mouth to an unconscious person.InhalationRemove to fresh air. Call a physician or poison control center immediately.Notes to physicianTreat symptomatically.Suitable extinguishing media Dry chemical. Carbon dioxide (CO2). Water spray. Foam. Special protective equipment for firefighters Wear self-contained breathing apparatus and protective suit.Australia HazChem Code 2XPersonal precautionsELIMINATE all ignition sources (no smoking, flares, sparks or flames in immediate area). Use personal protection equipment. Avoid contact with skin, eyes or clothing. Ensure adequate ventilation. Keep people away from and upwind of spill/leak. Evacuate personnel to safe areas.Methods for cleaning upPrevent product from entering drains. Soak up with inert absorbentmaterial. Neutralize spill with slaked lime, sodium bicarbonate or crushed limestone. Collect powdered material and deposit in sealed containers and dispose of phenol as hazardous waste. Isolate area and deny entry.Environmental precautionsPrevent further leakage or spillage if safe to do so. Prevent product from entering drains. Do not allow material to contaminate ground water system.See Section 12 for more informationHandling Always wear recommended Personal Protective Equipment. Avoidcontact with skin, eyes or clothing. Remove all sources of ignition. Storage Keep containers tightly closed in a cool, well-ventilated place. Keep awayfrom heat, sparks, flame and other sources of ignition (i.e., pilot lights,electric motors and static electricity). Protect from sunlight.Exposure limitsEngineering measures Use in a chemical fume hoodPersonal protective equipment Personal Protective Equipment requirements are dependent on the userinstitution's risk assessment and are specific to the risk assessment foreach laboratory where this material may be used.Respiratory protection In case of insufficient ventilation wear suitable respiratory equipment Respirator Up to 50 ppmRecommendations, NationalInstitute of OccupationalSafety and Health, U.S.(APF = 10) Any air-purifying half-mask respirator with organic vaporcartridge(s) in combination with an N95, R95, or P95 filter. The followingfilters may also be used:N99, R99, P99, N100, R100, P100.(APF = 10) Any supplied-air respiratorUp to 125 ppm:(APF = 25) Any supplied-air respirator operated in a continuous-flowmode.(APF = 25) Any powered air-purifying respirator with an organic vaporcartridge in combination with a high-efficiency particulate filter.Up to 250 ppm:(APF = 50) Any air-purifying full-facepiece respirator equipped withorganic vapor cartridge(s) in combination with an N100, R100, or P100filter.(APF = 50) Any air-purifying, full-facepiece respirator (gas mask) with achin-style, front- or back-mounted organic vapor canister having anN100, R100, or P100 filter.(APF = 50) Any powered, air-purifying respirator with a tight-fittingfacepiece and organic vapor cartridge(s) in combination with a high-efficiency particulate filter.(APF = 50) Any self-contained breathing apparatus with a full facepiece.(APF = 50) Any supplied-air respirator with a full facepiece.Emergency or planned entry into unknown concentrations or IDLHconditions:(APF = 10,000) Any self-contained breathing apparatus that has a fullfacepiece and is operated in a pressure-demand or other positive-pressure mode.(APF = 10,000) Any supplied-air respirator that has a full facepiece andis operated in a pressure-demand or other positive-pressure mode incombination with an auxiliary self-contained positive-pressure breathingapparatus.Escape:(APF = 50) Any air-purifying, full-facepiece respirator (gas mask) with achin-style,front- or back-mounted organic vapor canister having an N100, R100, orP100 filter. /Any appropriate escape-type, self-contained breathingapparatus.Hand protection Impervious gloves. S24 - Avoid contact with skin. S36 - Wear suitableprotective clothing.Eye protection Tight sealing safety goggles.Skin and body protection Impervious clothing.Hygiene measures Contaminated work clothing should not be allowed out of the workplace.Avoid contact with skin, eyes or clothing. Handle in accordance withgood industrial hygiene and safety practice.Environmental exposureControls Prevent product from entering drains.General informationForm Liquid.Appearance Red, maroon.Odor Medicinal, sweet, tar-like.Boiling point/range°C No data available °F No data availableMelting point/range°C No data available °F No data availableFlash point °C No data available °F No data availableAutoignition temperature°C No data available °F No data availableOxidizing properties No information availableWater solubility SolubleStability Stable under normal conditions.Materials to avoid Strong oxidizing agents. Strong acids. Isocyanates. Heat. Nitriles,Nitrides. Alkaline earth metals. Strong oxidizers, alkali metals andalkaline earth metals may cause fires or explosions.Hazardous decomposition Toxic gas. Sulphur oxides. Hydrogen cyanide (hydrocyanic acid). Carbonoxides,Products Nitrogen Oxides.Polymerization Hazardous polymerization does not occur.Acute toxicityPrinciple Routes of ExposurePotential Health EffectsEyes Causes burns. Risk of serious damage to eyes Corrosive to the eyes andmay cause severe damage including blindness.Skin Causes burns. Possible risk of irreversible effects Harmful in contact withskin. Irritating to skin and mucous membranes.Inhalation Harmful by inhalationIngestion Harmful if swallowed Ingestion causes burns of the upper digestive andrespiratory tracts Ingestion may cause gastrointestinal irritation, nausea,vomiting and diarrheaCarcinogenic effects Phenol has been classified by the International Agency for Research onCancer (IARC) as not classifiable as to carcinogenicity to humans(Group 3).Mutagenic effects No information available.Reproductive toxicity No information available.Sensitization No information available.Target organ effects Skin.Lungs.Liver.Spleen.Kidney.Ecotoxicity Harmful to aquatic organisms, may cause long-term adverse effects inthe aquatic environment.Chronic aquatic toxicity Category 3Mobility See log PowBiodegradation Inherently biodegradableBioaccumulation No information availableDispose of contents/containers in accordance with local regulations.IATAProper shipping name Corrosive liquid, n.o.s. (guanidine thiocyanate-phenol solution).Hazard Class8Subsidiary class NonePacking group IIUN-No1760ERG Code153US Federal RegulationsSARA 313This product contains the following toxic chemical(s) subject to the notification requirements of section 313 of Title III of the Superfund Amendments and Reauthorization Act of 1986. This law requires certain manufacturers to report on annual emissions of specified chemicals and chemical categories. Please note that if you repackage, or otherwise redistribute, this product to industrial customers, a notice similar to this one should be sent to those customers:Clean Air Act, Section 112 Hazardous Air Pollutants (HAPs) (see 40 CFR 61)This product contains the following HAPs:US state regulationsCalifornia Proposition 65This product does not contain any Proposition 65 chemicals.WHMIS Hazard ClassD1A - Very toxic materialsE - Corrosive materialThis product has been classified in accordance with the hazard criteria of the Controlled Products Regulations (CPR) and the MSDS contains all the information required by the CPR.Reason for revision Not Applicable. SDS sections updated.For research use only."The above information was acquired by diligent search and/or investigation and the recommendations are based on prudent application of professional judgment. The information shall not be taken as being all inclusive and is to be used only as a guide. All materials and mixtures may present unknown hazards and should be used withcaution. Since the Company cannot control the actual methods, volumes, or conditions of use, the Company shall not be held liable for any damages or losses resulting from the handling or from contact with the product as described herein.THE INFORMATION IN THIS SDS DOES NOT CONSTITUTE A WARRENTY, EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING ANY IMPLIED WARRANTY OF MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR ANY PARTICULAR PUPOSE"End of Safety Data Sheet。
康为RNA提取试剂盒使用说明书
RNA试剂盒所含药品：Component CW0559S 50 preps DNase I（DNA酶Ⅰ）1000 U 10×Reaction Buffer（10×缓冲液）1000 μlBuffer RL 35 mlBuffer RLC 35 mlBuffer RW1 40 mlBuffer RW2（concentrate）11 ml RNase-Free Water（无RNA酶的水）10 ml50Spin Columns FL with Collection Tubes（含收集管的吸附柱FL）50Spin Columns RM with Collection Tubes（含收集管的吸附柱RM）50RNase-Free Centrifuge Tubes（1.5 ml）（无RNA酶的离心管）自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇（新开封或提取RNA专用）。
实验前准备及重要注意事项：1．预防RNase污染，应注意以下几方面：1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2）配制溶液应使用无RNase的水。
3）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2．预防RNase污染，应注意以下几方面：1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M N aOH 中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3）配制溶液应使用无RNase的水。
4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
3．提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。
4．Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1 ml Buffer RL加10 μl β-巯基乙醇。
加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。
5．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
天漠科技 总RNA提取试剂盒说明书
总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。
∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。
∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。
∙整个过程仅需10分钟。
Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。
2.样品范围：≥17核苷酸。
3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。
4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。
试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。
添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。
总RNA提取试剂盒操作流程
总RNA提取试剂盒操作流程试剂配制：DNA酶1：将550ul无核酶水加入DNA酶1瓶中，分装32瓶，每瓶,可用3次。
注意，轻轻混匀，不要震荡。
置于-20度保存，避免反复冻融，不宜超过3次以上。
RNA裂解液：将1-硫代甘油按2%（V/V）加入RNA 裂解液中，可在4度保存6个月。
RNA洗液：将70ml无水乙醇加入到40mlRNA洗液中。
步骤：1、贴壁细胞裂解物的制备。
胰酶消化离心后得细胞悬浮液，取*103-5*106 细胞，离心后收集细胞沉淀。
（不同样品最适起始用量和裂解液、稀释液的使用量。
悬浮或贴壁细胞*103-5*106使用量，裂解液300ul,稀释液300ul。
）2、加入300ul的RNA裂解液，吹打混匀，移至管中二RNA提取1、加入300ul的RNA稀释液，用移液枪混匀，室温放置3-5分钟，（如果样品比较珍贵，可以选择裂解物加入稀释液后70℃下加热3分钟，可以提高RNA的得率）2、以最大速度离心5分钟，吸取上清液置于另一管中3、加入倍上层清液体积的无水乙醇，移液器吹打3-4次，混匀，4、取出离心柱/细心管（离心柱已安放在收集管上），将混合物移至离心柱中，如果混合物体积过大，可分2次上样过柱。
*g离心1分钟，弃掉滤液5、加入600ulRNA洗液，*g离心45秒，弃掉滤液6、配置DNA酶1孵育液，DNA酶1缓冲液5ul+dna酶1 液5ul+无核酶水40ul.注意轻轻混匀，不要震荡。
（这是提取一管RNA需要的量）7、加入50ulDNA酶1孵育液到吸附膜中央，室温放置15分钟8、加入600ulRNA 洗液，*g离心45秒，弃掉滤液。
将离心柱重新安置于收集管上，*g离心2分钟9、将离心柱转移到洗脱管上，在离心柱膜中央加入50-200ul无核酶水，室温下静置2分钟，*g离心1分钟。
将RNA保存在-70℃。
10、温馨提示，如果将第一次洗脱下来的洗脱液重新加回到离心柱中央，室温下静置2分钟，*g离心1分钟，再次洗脱RNA，可以提高RNA的得率。
试剂盒提取RNA
RNA提取（试剂盒法）1、取适量的植物组织（0.5g）多次加液氮研磨至粉末状，将粉末状样品（50-100mg）加入到含有450uL Buffer RL（使用前加入50×DTT Solution，1mL Buffer RL中加入20uL50×DTT，现用现配）的1.5mL灭菌管中，移液器反复吸打至无明显沉淀2、12,000rpm，5min，4℃3、上清转移到新的1.5mL管4、加入1∕2倍体积的无水乙醇（可能出现沉淀）吸打混匀5、立即将混合液（含沉淀）转入RNA Spin Column（含2mLCollection Tube）中。
（若混合液体积大于600uL，分批加入，每次加入体积不大于600uL）6、12,000rpm，1min，弃滤液，将RNA Spin Column放回2mLCollection Tube7、将500uL Buffer RW A加入RNA Spin Column，12,000rpm，30s，弃滤液8、将600uL Buffer RWB加入RNA Spin Column，12,000rpm，30s，弃滤液（RWB使用前加70mL100％乙醇）（沿RNA Spin Column管壁四周加入Buffer RWB有助于完全冲洗粘附于管壁上的盐分）9、DNase I消化⑴DNase I反应液：5uL 10 × DNase I Buffer，4uL Recombinant DNase I（RNase free，5U∕uL），41uL RNase free dH2O到新的1.5ml RNase free Tube 混匀⑵向RNA Spin Column膜中央加入50uLDNase I 室温静置15min⑶向RNA Spin Column膜中央加入350uL Buffer RWB，12,000rpm，30s，弃滤液10、重复步骤811、将RNA Spin Column重新置于2mLCollection Tube，12,000rpm，2min12、将RNA Spin Column置于1.5mL RNase free Collection Tube上，在RNA Spin Column 膜中央加入50-200uL RNase free dH2O或0.1％DEPC水，室温静置5min13、12,000rpm，2min 洗脱RNA14、若想提高RNA收量可再向膜中央加入50-200uL RNase free dH2O或0.1％DEPC水；若想提高RNA浓度可将第一次的洗脱液重新加回至RNA Spin Column室温静置5min，12,000rpm，2min 洗脱RNA。
病毒基因组RNA提取试剂盒使用说明书
病毒RNA 提取试剂盒Virus RNA Kit(目录号：HS0408)产品包装自备试剂无水乙醇储存条件蛋白酶K 于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）产品简介本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒RNA 。
无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶K 体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与RNA 分离，在蛋白酶K 的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒RNA 选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒RNA 从吸附柱膜上洗脱下来。
本试剂盒操作简单、快速，所得病毒RNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于RT-PCR 、Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。
产品特点1.简便快速，1小时内可获得高纯度的病毒RNA 。
2.无需有机溶剂抽提，使用安全。
北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.3.重复性好，产量高。
4.所得病毒RNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用。
注意事项1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的RNA片段小，提取量下降。
2.如缓冲液Buffer GB、Buffer RD结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。
3.所有离心步骤均为室温下操作。
4.本试剂盒也可提取高质量的病毒DNA，操作步骤相同。
操作步骤1. 取1.5 ml离心管（自备），加入20 ul的Proteinase K溶液。
2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul Buffer GB，涡旋震荡15 sec。
（注意：1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl（自备）补足。
2、为确保样本有效裂解，加入Buffer GB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。
）3．56℃孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
RNA提取trizol试剂盒说明书
注：各种样品的最大使用量（1ml Trizol）操作步骤：1. 在液氮中将组织(单头飞虱)研磨成粉末，趁液氮尚未挥发光时，将粉末转移到1.5ml离心管中。
细胞经计数后直接加入离心管，然后5000rpm室温离心去上清。
每100mg组织或5×106个细胞加1ml的Trizol。
注意：如果组织量（1-10mg）或细胞数很少（1×102-1×104），在样品中加入800μl的Trizol，用枪头反复抽吸混匀，再加入糖原（终浓度为250μg/ml），剧烈振荡或用匀浆器匀浆。
2. 用1ml针筒，26-G号（6#）针头抽吸匀浆液两次以剪切基因组DNA，然后直接从针筒中将样品转移到无菌1.5-ml离心管中。
3. 加入200μl氯仿/异戊醇（24:1）或氯仿，剧烈振荡混匀30秒。
4. 台式离心机上，12000rpm，室温离心5分钟。
5. 将上清液小心转移到RNase-free 1.5ml 离心管中，加入等体积的异丙醇，室温下放置5分钟。
（注意：不要吸取任何中间层物质，否则会出现染色体DNA污染）6. 台式离心机上，12000rpm，室温离心5分钟。
7．小心移去上清液，防止RNA沉淀丢失。
8. 用70%酒精洗涤两次，每次700μl，12000rpm，室温离心2分钟。
9. 尽可能彻底地吸走上清，防止RNA沉淀丢失。
10. 真空离心干燥3-5分钟，或放在室温下使酒精完全挥发。
11. 沉淀用30-50μl DEPC-H2O溶解。
如发现沉淀难溶，68℃处理10分钟。
对于胰腺，肾等组织中RNase含量很高，沉淀用100%去离子甲酰胺溶解。
12．DNA的分析和定量：（1）测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。
按1 OD=40μg RNA计算RNAD的产率：OD260/280在1.8-2.0视为抽提的RNA纯度很高。
若需精确量化，只有浓度在4μg/ml以上的样品适于用光度计测定。
Trizol总RNA抽提试剂盒
Trizol使用说明书一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。
RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。
Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 ips （RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。
它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。
用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。
它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。
RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。
一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。
取RNase-free的物品时必须戴手套。
1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。
对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。
处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。
注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。
2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。
3）在通风柜中室温处理过夜。
4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。
5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。
置于干净处备用。
2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。
四、从组织中提取总RNA1) 液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。
高纯总 RNA 快速提取试剂盒（RLT-离心柱型） 说明书
高纯总RNA快速提取试剂盒（RLT-离心柱型）GK3091 20次GK3092 50次一.试剂盒组成Components GK3091 GK3092GenClean Column 2.0-ml Collection TubeRLT Solution aRW SolutionRPE Solution bDEPC-WaterProtocol202014ml15ml5ml2ml1copy505035ml30ml12ml4ml1copya. 在收到试剂盒后，应将RLT Solution取出存放于4ºC。
b. RPE Solution在首次使用前，必须加入4倍体积的无水乙醇。
无水乙醇必须是新开封的，保证无RNase污染。
用户自备试剂、材料：无水乙醇、70%乙醇(DEPC-H2O配制，植物和丝状真菌用)、PBS(动物细胞用)、液氮(植物和丝状真菌用)、RNase-free的Eppendorf管和Tips。
二．基本原理幼嫩组织和对数生长期的细胞生长旺盛，含有大量的RNA。
RLT Solution能使细胞裂解，释放出RNA的同时灭活RNase。
GenClean柱中的膜能选择性的与RNA结合，而蛋白等杂质不能结合，经RW Solution和RPE Solution的几步洗涤后结合在膜上的RNA用DEPC-H2O洗脱，可用于各种分子生物学实验。
三. 主要特点1. 安全，整个过程没有用酚和氯仿抽提，无须担心酚和氯仿对皮肤和呼吸道的腐蚀。
2. 纯度高，本试剂盒抽提得到的RNA样品可用于任何分子生物学操作。
3. 快速，整个抽提过程只需要20分钟。
四. 操作步骤表1 不同组织和细胞最大使用量样品最大使用量动物细胞 1x107动物组织 50mg细菌 1x109酵母 1x107植物组织 100mg丝状真菌 100mg为获得最佳的结果，采用的样品数量一定要合适。
可以参考表1。
细胞培养物、细菌菌体、酵母以及真菌菌丝应该在对数生长期收集，动物和植物样品应该取生长旺盛的幼嫩部位。
RNA提取试剂盒说明书
Binding Capacity
Each HiBind ® RNA column can bind approximately 100 ìg RNA. Using greater than 250 mg fungal tissue in many cases will not drama tical improve yields and sometimes has
E.Z.N.A.™ Fungal RNA Protocol A (Standard Protocol)
Materials to be provided by user ! Microcentrifuge capable of 10,000 x g ! ! ! ! Nuclease-free microfuge tubes 2-mercaptoethanol Absolute (96%-100%) ethanol Isopropyl alcohol (isopropanol) Liquid nitrogen for freezing/disrupting samples Preheat an aliquot (100 ìl per sample) of DEPC-treated water at 65oC.
H iBind
®
R N A C olum ns
H om ogenizer C olum ns 2 m l C ollection Tubes B uffer R FL B uffer SP B uffer R B R N A W ash Buffer II R N A wash Buffer I D E P C W ater Instruction Booklet
Contents
Introduction.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Overview. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Storage and Stability. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 Kit Contents. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 Before Starting. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 Fungal RNA Protocol A (Standard Protocol). . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 Fungal RNA Protocol B (For difficult Samples)). . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 On-Membrane DNase Digestion Protocol. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8 RNA Isolation from Arthropods.. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10 Quantization of RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11 Troubleshooting. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
RNA病毒基因组提取试剂盒使用说明
RNA病毒基因组提取试剂盒使用说明货号：R2000规格：50T/100T保存：室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。
产品内容：试剂盒组成R2000-50R2000-100蛋白酶K1ml2ml洗柱液50ml2ml结合液25ml50ml×2漂洗液15ml50mlRNase free ddH2O15ml15ml×2RNase free吸附柱50个100个RNase free收集管(2ml)50个100个产品介绍：RNA病毒基因组提取试剂盒适合于从血清、细胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因组，不适合于细胞等组织内RNA病毒基因组的提取。
使用本试剂盒提取的基因组RNA可用于RT-PCR实验。
操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入一瓶新开启的无水乙醇，加入到离瓶口约0.5-1cm距离，盖好摇匀。
所有离心步骤均在2-8℃条件下进行。
1、取病毒上清液0.5ml，12000rpm离心5min，尽量吸尽上清使用，弃去沉淀（如无沉淀可省去此步）。
2、向病毒上清中加入20ul10mg/ml的蛋白酶K，充分混匀，65℃消化10min，期间可颠倒离心管混匀数次。
3、吸附柱前处理：从包装中取出吸附柱，放入收集管中，加入700ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中待用。
4、向病毒上清中加入500ul结合液，充分混匀。
再向管中加入400ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响RNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，静置2min。
（吸附柱的最大容积为750ul，可分两次加入。
一次吸附完离心后再将余下的混合液体加入柱中静置离心。
）5、12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
mRNA提取试剂盒的说明书
mRNA Purification Kit
MagExtractor® - mRNA -
(Code No.: NPK-801)
使用说明书
研究用
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN
目录
[1] 前言.........................................................................................................................1 [2] 纯化流程概要.........................................................................................................1 [3] 对应样品.................................................................................................................1 [4] 试剂盒中所包含的物品（5 次份）*.....................................................................3 [5] 试剂盒以外所需要的其他物品.............................................................................4 [6] 处理RNA时的注意点 ............................................................................................4 [7] 操作程序.................................................................................................................5
RNA 提取试剂盒
RNA 提取试剂盒1、总RNA 提取试剂（TRI Reagent，RNA Isolation Reagent）TRI ® Reagent 是改进型的一步法细胞总RNA 纯化试剂。
它可以快速、经济、有效的提取人、动物、植物、酵母、细菌和病毒的总RNA。
也可以同时提取DNA 和蛋白质。
该产品含有硫氰酸胍和苯酚，能够有效溶解RNA，DNA 和蛋白质。
在加入氯仿并离心后，上层水相中含有RNA。
水相的RNA 经过沉淀和洗涤后几乎没有DNA 或者蛋白质污染，可以用于Northern blots、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 酶保护分析、克隆或者PCR 等等。
该产品可以有效分离0.1-15 kb 长度单位内的RNA 分子，每毫升TRI® Reagent 可以提取5-10×106细胞、50-100mg 组织或者10 cm 2培养瓶表面的单层培养细胞。
完全移走水相的离心产物加入无水乙醇沉淀DNA，用柠檬酸钠乙醇溶液洗涤，溶解后可用于PCR、限制性酶切以及Southern blotting 等。
沉淀DNA 后的水相加入异丙醇沉淀蛋白质，用盐酸胍乙醇溶液洗涤，分离的蛋白质可用于Western blotting 等。
优点：1）可用于多种组织：人、动物、植物、酵母、细菌和病毒。
2）提取大量或者少量的组织细胞效果良好。
3）比传统的硫氰酸胍/氯化铯方法产率高。
4）1 ml 最多可以提取107细胞或者100 mg 组织。
货号名称适用范围产品规格价格T9424TRI Reagent组织，培养细胞，细胞团25ml, 100 ml, 200ml506，1590，2860T3809TRI ReagentBD全血，血浆，血清25ml, 100 ml, 200ml536，1699，2978T3934 TRI Reagent LS 细胞悬浮液，脑脊液，羊水25ml, 100 ml, 200ml938，2603，43362、哺乳动物细胞总RNA 提取试剂盒（GenElute TM Mammalian Total RNA Miniprep Kits）该试剂盒结合了硅质膜技术和离心柱技术，可以快速结合、洗涤、溶解获得高质量的细胞总RNA。
rna提取试剂盒
RNA提取试剂盒1. 简介RNA提取试剂盒是用于从生物样本中提取RNA的一种化学试剂盒。
RNA提取是生物学研究中非常重要的一步，它能够从细胞中分离纯净的RNA，方便后续的RNA分析和研究。
RNA提取试剂盒通常包含了一系列试剂和材料，能够在简单、快速、高效的条件下提取RNA。
本文将介绍RNA提取试剂盒的原理、使用方法和优势。
2. 原理RNA提取试剂盒的原理通常包括以下几个步骤：2.1 细胞破碎首先，生物样本中的细胞需要被破碎，使得细胞内的RNA释放出来。
破碎方法可以采用机械破碎、化学破碎或者超声波破碎等。
2.2 RNA结合经过细胞破碎后，RNA需要与特定的结合试剂结合。
这些结合试剂能够与RNA特异性结合，使RNA保持稳定并与其他杂质分离。
2.3 杂质去除通过洗涤步骤，可以去除非RNA分子，如DNA、蛋白质和其他杂质。
这些杂质的去除可以提高RNA的纯度。
2.4 RNA洗脱最后，将纯化好的RNA从结合试剂中洗脱出来。
这样得到的RNA可以用于后续的实验操作，如逆转录、聚合酶链式反应（PCR）等。
3. 使用方法使用RNA提取试剂盒提取RNA的一般步骤如下：1.准备样本：收集需要提取RNA的生物样本，如细胞、组织等。
2.细胞破碎：将样本进行适当的细胞破碎方法，如使用细胞破碎缓冲液、机械破碎器等。
3.加入结合试剂：将细胞破碎后的样本与RNA提取试剂盒中的结合试剂进行混合，使RNA与结合试剂特异性结合。
4.杂质去除：通过一系列洗涤步骤，去除非RNA分子和其他杂质。
这些洗涤步骤通常使用缓冲液和离心的方式。
5.RNA洗脱：将纯化好的RNA从结合试剂中洗脱出来，得到纯净的RNA。
洗脱可以使用RNA洗脱缓冲液等。
4. 优势RNA提取试剂盒相比传统的RNA提取方法具有以下优势：•快速方便：RNA提取试剂盒提供了一种简单、快速的RNA提取方法，大大节省了实验时间。
•高纯度：RNA提取试剂盒能够高效地去除杂质，提供高纯度的RNA样品。
总RNA提取试剂盒使用说明
总RNA提取试剂盒使用说明货号：R1200规格：50T/100T产品内容：试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期裂解液50ml100ml2-8℃一年漂洗液15ml15ml×2RT一年洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年操作步骤：1.样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。
用取样器吹打混匀。
d.细胞悬液：离心收集细胞。
每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。
弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。
离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。
2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。
4.2-8℃12000rpm离心10分钟。
RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。
5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。
6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm 离心2min，弃废液。
7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm 离心2min，弃废液。
柱式总RNA提取试剂盒说明书
UNIQ-10柱式Trizol 总RNA 抽提试剂盒抽提试剂盒 SK1321 20次反应SK1322 100次反应试剂盒组成: Components SK1321 SK1322Trizol a UNIQ-10 Column b 2.0-ml Collection Tube RPE Solution c DEPC-H 2O Manual 10ml 20 20 5ml 2ml 1 50ml10010022ml4ml1(a) Trizol 为强腐蚀性物质为强腐蚀性物质，，小心存放于4℃。
(b) 试剂盒中的UNIQ-10柱和2ml 收集管经过DEPC 和高温高压蒸汽灭菌处理和高温高压蒸汽灭菌处理。
柱、收集管可以重复进行DEPC 处理和高温高压蒸汽灭菌处理处理和高温高压蒸汽灭菌处理，，烘干温度为90℃左右左右。
(c) 首次使用前首次使用前，，必须在RPE Solution 瓶中加入4倍体积新开瓶的无水乙醇倍体积新开瓶的无水乙醇，，以避免RNase A 污染污染。
取无水乙醇的量筒必须按要求高温烘烤过的取无水乙醇的量筒必须按要求高温烘烤过的，，充分混匀后使用。
基本原理： 研究基因的表达和调控需要从组织或细胞中分离纯化RNA 。
RNA 质量的高低常常决定cDNA 构建，RT-PCR和Northern Blot 等分子生物学实验的成败。
Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
UNIQ-10柱中的膜能选择性的与RNA 结合，而蛋白等杂质不能结合，结合的DNA 和其它杂质用Solution RW 洗去。
结合在膜上的RNA 经DEPC-H 2O 洗脱，可用于各种分子生物学实验。
用户自备试剂用户自备试剂、、材料材料：：氯仿、异戊醇、无水乙醇、糖原、1.5-ml 离心管（RNase-free ）、Tips （RNase-free ）准备工作准备工作：：1． 注意事项：(1) RNA 酶(RNase) 是导致RNA 降解最主要的物质，非常稳定。
TransZol法rna提取试剂盒说明
TransZol法rna提取试剂盒说明TransZol法RNA提取步骤准备试剂：氯仿、无水乙醇。
1.菌体处理(1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中，用纯水冲洗菌体，12000rpm离心2min，仔细去除培养基上清。
(2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。
(3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。
(4)室温静置5min。
2. 每使用1ml TransZol TM Up，加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚)，剧烈震荡30s，室温孵育3min。
3. 10000×g 4℃离心15min。
此时溶液分成三层，无色的水相（上层）、中间层，粉红色有机相（下层）。
RNA分布在水相中，水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%（为了避免吸到中间层导致DNA污染，可以适当留下一部分水相）。
4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中，加入等体积的无水乙醇（此时可能会出现沉淀），轻轻颠倒混匀。
5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液（如果体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。
6. 加入500ul CB9，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。
7. 重复步骤6一次。
8. 加入500ul WB9（使用前请先检查是否加入无水乙醇），12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。
9. 重复步骤8一次。
10．12,000×g 室温离心2min，彻底去除残留的乙醇，在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。
11.将离心柱放入RNase-free Tube（试剂盒已配）中，加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央，室温静置1min。
12. 12,000×g 室温离心1min，洗脱RNA。
天根RNA提取说明书
2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS 洗涤细胞，吸除PBS ，向细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free 的离心管中，300×g 离心5 min ，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。
注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA 的产量降低。
d. 细胞悬液：离心取细胞。
每5×106-107动物细胞和植物细胞加入1 ml TRNzol-A +。
加入TRNzol-A +前不要洗涤细胞，以免降解mRNA 。
e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRNzol-A +(推荐0.25ml 全血加入0.75 mlTRNzol-A +)，充分振荡混匀。
2. 将匀浆样品在15-30℃放置5 min ，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3. 可选步骤：4℃ 12,000 rpm(~13,400×g) 离心10 min ，取上清。
注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。
离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA ，上清中含有RNA 。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。
取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4. 每使用1 ml TRNzol-A +加0.2 ml 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec ，室温放置3 min 。
注意：如不能旋涡混匀，可手动快速颠倒混匀2 min 。
5. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心10-15 min 。
样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相（约500 μl ）转移到新管中。
(如果要分离DNA 和蛋白质，可向天根公司索取提取方法)。
6. 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置20-30 min 。
transzol提取rna的原理
transzol提取rna的原理TransZol是一种用于提取RNA的试剂盒，它基于酚/氯仿法，能够快速、高效地从细胞或组织样品中提取RNA。
下面将介绍TransZol 提取RNA的原理和操作步骤。
TransZol提取RNA的原理主要包括以下几个步骤：细胞或组织样品的裂解、RNA的分离、RNA的洗涤和RNA的溶解。
细胞或组织样品需要经过裂解，使得RNA能够从细胞或组织中释放出来。
TransZol中的裂解缓冲液能够破坏细胞膜和核膜，使得细胞或组织中的RNA能够被释放出来。
同时，裂解缓冲液中的RNase抑制剂能够有效地抑制RNA酶的活性，防止RNA的降解。
接下来，加入氯仿，使得RNA从细胞裂解液中分离出来。
氯仿能够与TransZol中的酚形成两相体系，RNA在两相界面上富集，从而实现RNA的分离。
此时，RNA会在上层的水相中，而DNA和蛋白质则会在下层的有机相中。
然后，使用酒精沉淀法将RNA从水相中沉淀下来。
加入适量的乙醇后，RNA会与乙醇形成沉淀，通过离心将RNA沉淀下来。
此时，RNA 处于乙醇中的沉淀状态，可以通过漩涡混匀或振荡器轻轻悬浮RNA 沉淀。
使用适量的RNase-free水将RNA溶解。
将RNA沉淀洗涤去除残余的盐离子和污染物，然后加入RNase-free水溶解RNA。
RNase-free水中不含有RNase酶，可以有效地保护RNA不被降解。
TransZol提取RNA的操作步骤如下：1. 取出所需的细胞或组织样品，并进行预处理。
预处理包括去除细胞培养基或冷冻保存液，用PBS洗涤细胞或组织等。
2. 加入适量的TransZol裂解缓冲液，充分裂解样品。
裂解缓冲液的用量应根据样品的大小和种类进行调整。
3. 加入适量的氯仿，混匀后离心。
离心后，样品会分为上层的水相和下层的有机相。
4. 将上层的水相转移至新的离心管中，加入适量的乙醇，混匀后离心。
离心后，RNA会沉淀在离心管底部。
5. 倒掉上清液，用70%乙醇洗涤RNA沉淀，然后离心除去乙醇。
植物组织 RNA 磁珠提取试剂盒说明书
广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356
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核酸纯化系列
操作步骤---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------020-87791356
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废液，将纯化柱放回收集管中。 6. 向纯化柱 中加入500 μl 溶液 RW ，室温静置2 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心30 s，弃废液，将纯化柱放回收集管中。 7. 12,000 rpm (~13,400 ×g)离心2 min，去除残余液体，将纯化柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
产品说明 细胞/细菌RNA提取试剂盒是经过改进开发的新一代产品，提高了 裂解液的裂解能力和提取的灵敏度，同时通过可在特定适宜的条 件下特异、可逆地结合RNA，而各种蛋白质和其他杂质均可被去 除掉对硅基质膜的改进增强了对RNA的吸附能力，得到的RNA 纯度更好，质量更高。该试剂盒可从各种培养细胞或菌体中快速 提取总RNA，每个吸附柱每次可处理50–100 mg 组织或5×106 细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提 取的总RNA 没有DNA 和蛋白的污染，可用于Northern blot、Dot blot、polyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。
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TransZol法RNA提取步骤
准备试剂：氯仿、无水乙醇。
1.菌体处理
(1)将发酵后的菌体小心地转入1.5ml离心管中，用纯水冲洗菌体，12000rpm离心2min，仔细去除培养基上清。
(2)加入TransZol TM Up (每≤2×109个细菌中加入1ml TransZol TM Up)。
(3)用移液枪反复吸吹直至裂解液中无明显沉淀。
(4)室温静置5min。
2. 每使用1ml TransZol TM Up，加入0.2ml氯仿或50ul 4-Bromoanisole(间溴茴香醚)，剧烈震荡30s，室温孵育3min。
3. 10000×g 4℃离心15min。
此时溶液分成三层，无色的水相（上层）、中间层，粉红色有机相（下层）。
RNA分布在水相中，水相体积约为所用TransZol TM Up 试剂的50%-60%（为了避免吸到中间层导致DNA污染，可以适当留下一部分水相）。
4. 转移无色的水相于新的RNase-free离心管中，加入等体积的无水乙醇（此时可能会出现沉淀），轻轻颠倒混匀。
5. 将得到的溶液和沉淀一起加入离心柱中，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液（如果体积大于离心柱容量，可以分几次完成）。
6. 加入500ul CB9，12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。
7. 重复步骤6一次。
8. 加入500ul WB9（使用前请先检查是否加入无水乙醇），12,000×g 室温离心30s，弃掉流出液。
9. 重复步骤8一次。
10．12,000×g 室温离心2min，彻底去除残留的乙醇，在室温静置数分钟彻底晾干离心柱。
11.将离心柱放入RNase-free Tube（试剂盒已配）中，加50-200ul RNase-free Water 在离心管的中央，室温静置1min。
12. 12,000×g 室温离心1min，洗脱RNA。
（可选步骤：为获得更多的RNA，建议重复步骤11和12进行二次洗脱）。
13.将RNA置于-80℃保存。