一系列新的小RNA

合集下载

RNA代谢知识点总结

RNA代谢知识点总结

RNA代谢知识点总结1. RNA的合成RNA合成是RNA代谢的第一个步骤。

在细胞内,RNA的合成由RNA聚合酶(RNA polymerase)来完成。

RNA聚合酶可以根据DNA模板合成RNA分子,它在这一过程中可以识别DNA的启动子区域,并且将核苷酸一一进行连接,生成RNA链。

RNA合成的启动子区域通常含有一种特殊的DNA序列,它可以被RNA聚合酶识别并结合,从而启动RNA 的合成过程。

在合成过程中,RNA聚合酶会沿着DNA链进行运动,同时合成RNA链。

合成的RNA链会形成一个RNA-DNA双链复合体,这个复合体在形成之后还需要被RNA聚合酶进一步进行移动和释放,形成成熟的RNA分子。

2. RNA的修饰在合成之后,RNA分子还需要进行一些修饰才能发挥功能。

在RNA代谢中,RNA的修饰主要包括剪接、3’端加工、甲基化等多个方面。

其中,剪接是一个非常重要的过程,它可以使得一个RNA前体分子经过修饰之后可以形成多个不同的成熟RNA分子。

剪接的过程是由剪接体(spliceosome)来完成的,剪接体是一个由蛋白质和小RNA组成的复合体,它可以在合成的RNA前体分子上识别出剪接位点,并且将前体RNA链上的部分区域进行剪接,从而产生出多个不同的成熟RNA分子。

另外,RNA在修饰过程中还需要进行甲基化的修饰。

甲基化是通过一种被称为RNA甲基转移酶的酶来完成的,它可以在RNA的碱基上加上一个甲基基团,从而改变RNA的结构和功能。

在甲基化的过程中,往往是在RNA的腺苷酸或尿苷酸上发生甲基化修饰,其中包括m6A、m5C等多种不同的修饰形式。

这些修饰可以影响RNA的稳定性、翻译效率、局部结构等多个方面。

3. RNA的降解除了合成和修饰之外,RNA代谢的过程中还包括了RNA的降解。

RNA的降解是通过核糖核酸酶(ribonuclease)来完成的,这些酶可以在细胞核或细胞质中对RNA分子进行切割和降解,从而减少RNA的数量,并且清除掉一些过时的或者损坏的RNA分子。

小RNA在植物发育中的调节作用

小RNA在植物发育中的调节作用

小RNA在植物发育中的调节作用在植物发育和生命活动中,RNA分子扮演着重要的角色,尤其是小RNA (small RNA),如miRNA(microRNA)和siRNA(small interfering RNA)等。

小RNA可以通过启动RNA干扰途径,调控基因表达以及保证基因组稳定性。

近年来,越来越多的研究表明,小RNA在植物发育中的调控作用不容忽视。

1. 小RNA对于植物早期发育的调控植物整个生命周期从种子萌发到成熟果实需要经过一系列发育阶段,在这个过程中,小RNA在早期发育中起着至关重要的作用。

miRNA和siRNA从早期胚胎阶段就开始发挥作用,调节早期发育阶段和器官的发育。

如miR161和miR167对于根发育有很重要的作用,miR165/166和miR390则调控了叶片和花器官的发育,miR171则调节了茎的发育。

此外,siRNA也参与了早期发育阶段的调节,如siRNA2909参与了对胚芽的发育调控。

2. 小RNA对于植物花和果实发育的调控小RNA对于植物花和果实的发育也有着重要的作用。

在花的发育过程中,miRNA可以调节花器官的形态。

如miR172和miR156则调节了花发育的时间和下一代花器官的大小,miR159则参与了花的造型调节。

在果实的发育过程中,miRNA还可以参与控制果实的大小和松散度。

如miR156和miR172控制了果实的大小,而miR156还可以调节果实的松散度。

3. 小RNA对于植物环境响应的调控除了对发育的调控外,小RNA还可以参与植物对环境的响应。

植物在面对外界环境刺激(如干旱、盐逆境、低温等)时,会启动一系列应激响应机制来适应环境。

小RNA可以调控环境适应机制中的基因表达,保护植物不受环境刺激的伤害。

如miR398会被调控在氧化应激中调节Cu/Zn SOD的表达,miR156和miR172则控制了温度适应性的基因表达,miR319则参与了植物对盐逆境的响应。

4. 小RNA参与了植物细胞代谢和基因组稳定性的维护小RNA还可以通过RNA干扰的途径,参与了植物细胞代谢和基因组稳定性的维护。

miRNA简介

miRNA简介

miRNA简介Micro RNA简介1.关于microRNAmicroRNAs (简称miRNA)是⼀类进化上⾼度守的⼩分⼦⾮编码RNA,长度⼤约22nt左右,具有转录后调控基因表达的功能。

第⼀个microRNA 于1993 年被发现。

2000年之后,关于miRNA 的研究取得了很⼤进展,⽬前已经有1000多个⼈类被发现,这些miRNA调控⾄少 30% 以上的基因表达,参与多种⽣理病理过程。

编码miRNA的基因可能位于功能基因编码区、⾮编码区,可能成簇表达或独⽴表达。

在细胞核内,基因组DNA 转录⽣成较长的pri-pre-microRNA,之后被Drosha酶切割pri-pre-miRNA 成形成长度⼤约70-100 碱基的、具发夹结构的pre- microRNA。

这些发夹结构的RNA 被核输出蛋⽩exportin5转运到细胞质,在呗胞浆中的Dicer 酶切割形成19-23nt ⼤⼩的成熟的miRNAs 产物。

成熟的单链miRNAs 与⼀系列蛋⽩形成miRNA诱导的沉默复合物(miRISC),结合于靶mRNA的3ˊ-UTR区,阻⽌所结合的mRNA 的翻译或直接降解靶miRNA。

每个miRNA可以调控多个(甚⾄上百个)靶基因,⽽特定靶miRNA也可以同时被多个miRNAs调节。

成熟的miRNA具有如下特点:(1)通常的长度为20~24 nt , 但在3′端可以有1~2 个碱基的长度变化;(2)5′端有⼀磷酸基团, 3′端为羟基, 这⼀特点使它与⼤多数寡核苷酸和功能RNA 的降解⽚段区别开来;(3)具有⾼度保守性、时序性和组织特异性。

序列(特别是种⼦序列)⾼度同源的miRNA被归为⼀个miRNA家族,但这些miRNA并不⼀定是成簇表达的。

例如miR-34 家族3个成员miR-34a、b、c,其中,miR-34a位于1号染⾊体1p36基因座位,单独表达;⽽miR-34b和-34c位于11号染⾊体11q23基因座位,成簇表达(图1),但它们都具有相同的种⼦序列(图1),并且都受到转录因⼦TP53的调控。

RNA的种类及其作用

RNA的种类及其作用

RNA的种类及其作用RNA是一类在细胞中发挥重要作用的核酸分子。

与DNA不同,RNA分子一般是单链的,并且包含有核酸碱基腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)之外还有尿嘧啶(U)。

RNA按照其在细胞中的功能和结构特点可分为以下几类:1.信使RNA(mRNA):mRNA是由DNA模板转录出来的,它携带着DNA上的遗传信息,将其带到细胞质中的核糖体,从而指导蛋白质的合成。

mRNA的信息由一系列的核苷酸三联体(称为密码子)编码,通过翻译过程转化为氨基酸序列,从而合成特定的蛋白质。

2.转运RNA(tRNA):tRNA是一类将mRNA上的密码子与氨基酸相对应的分子。

每一种氨基酸都有自己特定的tRNA,tRNA的结构具有“L”形,其中包含一个特有的适配位点,能与mRNA上的密码子进行互补配对。

tRNA通过与mRNA上的密码子配对,将相应的氨基酸带到正在合成的蛋白质链上。

3.核糖体RNA(rRNA):rRNA是构成细胞质中核糖体的组成部分,核糖体是蛋白质合成的场所。

rRNA与蛋白质相结合组成了核糖体,其中的rRNA起到定位和催化的作用。

不同的细胞中rRNA在结构和序列上有所不同,但整体功能相似。

4. 小核仁RNA(snRNA):snRNA主要存在于细胞的小核仁中,参与在核糖体合成的核糖体RNA前体和mRNA的剪接过程。

剪接是指将mRNA的内含子(非编码区域)切除,将编码区域拼接为一个连续的序列。

snRNA与蛋白质结合在一起,形成剪接体催化剪接反应。

5. 小核RNA(snoRNA):snoRNA主要存在于核仁中,参与核糖体RNA的修饰。

核糖体RNA的修饰包括甲基化、二硫键形成、剪切和伪基因的转录等,这些修饰会影响核糖体RNA的稳定性和功能。

6. 干扰RNA(siRNA):siRNA由双链RNA通过酶切而形成,可以稳定地结合到RNA识别复合体(RISC)上。

siRNA可以通过与mRNA相互配对,导致mRNA的降解或转录的阻断,从而达到基因的沉默或抑制特定基因的表达的作用。

micro RNA

micro RNA


研究microRNA的新工具


小分子RNA的分离:现行的RNA纯化方法包括有机 溶剂抽提+乙醇沉淀,或者是采用硅胶膜离心柱的 方法来纯化RNA。小分子RNA往往被淘汰掉,因而 不适用于小分子RNA。miRNA Isolation Kit主要 采用玻璃纤维滤膜离心柱(glass fiber filter, GFF)方法分离。 小分子RNA探针的制备:要准备目的基因的一小段 寡核苷酸序列,3’s端另外增加8个和T7启动子互 补的碱基,将这段寡核苷酸和T7启动子引物退火, 用Klenow大片断补齐得到双链的转录模版,然后 用T7 RNA聚合酶、rNTP和标记物混合,体外转RNA的出现

1993年,Ambros首先在Cell杂志上撰文发 现了一段非编码的单链小分子RNA,具有调 解发育时相的作用,这是对microRNA的首 次报道。
近年来,Cell/Nature/Science连续把RNA 的研究进展列为“十大科技突破之一”, 其中最引人注目的是microRNA。
此外,一个研究表明,2个miRNAs水平的下降和慢 性淋巴细胞白血病之间的显著相关,提示miRNAs 和癌症之间可能有潜在的关系(Calin 2002)。 然而,大多数的miRNAs的功能仍然是个迷。


microRNA的作用方式

最早发现的两个miRNAs——lin-4 and let-7被认为是通 过不完全互补结合到目标靶mRNA 3’非编码区端,以一种 未知方式诱发蛋白质翻译抑制,进而抑制蛋白质合成,阻 断mRNA的翻译。
什么是同源性?



进化过程中源于同一祖先的分支之间的关系。 由于进化上或个体发育上的共同来源而呈现 的本质上的相似性,但其功能不一定相同,如狗 的前肢和鸟的翅。 从分子水平讲则是指两个核酸分子的核苷酸 序列或两个蛋白质分子的氨基酸序列间的相似程 度。 虽然同源性须通过序列测定来检验,但是 DNA-DNA或DNA-RNA杂交可提供有价值的估计。

RNA在基因表达调控中的作用机制

RNA在基因表达调控中的作用机制

RNA在基因表达调控中的作用机制随着基因组学研究的深入,我们更加了解基因是如何转录成RNA并进一步翻译成蛋白质的。

在这个过程中,RNA通过一系列复杂的调控机制起着重要的作用。

本文将介绍RNA在基因表达调控中的作用机制。

RNA合成与加工RNA在细胞中起着重要的信息传递和调控作用。

RNA的合成和加工是基因表达的最初步骤。

RNA的合成需要通过转录作用实现。

在核内,RNA聚合酶将DNA模板中的基因序列拷贝到一个新的RNA单链上。

在此过程中,RNA聚合酶会根据基因序列中的不同区域及其生物学意义调控转录速度和准确性。

此外,RNA合成后还需要进行加工,如5'端帽、3'端尾、内含子剪接和RNA编辑等,以得到成熟的RNA分子。

miRNAmiRNA是一类小RNA分子,通常包含20-24个核苷酸。

它由RNA聚合酶II在基因组的DNA序列以上转录而来,然后由核外酶Drosha和Dicer进行加工。

miRNA与靶mRNA配对,从而抑制了靶mRNA的翻译和/或导致靶mRNA的降解。

miRNA具有广泛的生物学功能,如细胞周期调控、细胞增殖和凋亡、肿瘤发生和免疫应答等。

siRNAsiRNA是一个双链小RNA分子,由外源性RNA或内源性RNA二级结构特定折叠形成,然后被切割成小单链RNA片段。

siRNA可以特异性地靶向偏外基因表达进行调控。

siRNA对病毒感染,转座子介导的基因沉默和抑制癌症等具有很大的潜力。

piRNApiRNA是RNA家族的一部分,主要由雄生殖系统中的小胞体产生。

与miRNA和siRNA不同,piRNA对靶RNA的调控是通过P戈传递到靶RNA上进行的。

piRNA结合到靶RNA上并将其沉默,以控制转座子过度激活和不稳定的基因组。

lincRNAlincRNA指的是长间隔非编码RNA。

这类RNA无法编码蛋白质,其长度一般超过200nt。

lincRNA是结构上与mRNA相似的RNA分子,但与mRNA不同的是,lincRNA不能被翻译成蛋白质。

生物化学(第三版)第十二章 核酸通论 核算的结构课后习题详细解答_ 复习重点

生物化学(第三版)第十二章  核酸通论 核算的结构课后习题详细解答_ 复习重点

第十二章核酸通论提要1868年Miescher发现DNA。

Altmann继续Miescher的研究,于1889年建立从动物组织和酵母细胞制备不含蛋白质的核酸的方法。

RNA的研究开始于19世纪末,Hammars于1894年证明酵母核酸中的糖是戊糖。

核酸中的碱基大部分是由Kossel等所鉴定。

Levene对核酸的化学结构以及核酸中糖的鉴定作出了重要贡献,但是他的“四核苷酸假说”是错误的,在相当长的时间内阻碍了核酸的研究。

理论研究的重大发展往往首先从技术上的突破开始。

20世纪40年代新的核酸研究技术证明DNA 和RNA都是细胞重要组成成分,并且是特异的大分子。

其时,Chargaff等揭示了DNA的碱基配对规律。

最初是Astbury,随后Franklin和Wilkins用X射线衍射法研究DNA分子结构,得到清晰衍射图。

Watson和Crick在此基础上于1953年提出DNA双螺旋结构模型,说明了基因结构、信息和功能三者之间的关系,奠定了分子生物学基础。

DNA双螺旋结构模型得到广泛的实验支持。

Crick于1958年提出了“中心法则”。

DNA研究的成功带动了RNA研究出现一个新的高潮。

20世纪60年代Holley 测定了酵母丙氨酸tRNA的核苷酸序列;Nirenberg等被破译了遗传密码;阐明了3类DNA参与蛋白质生物合成的过程。

在DNA重组技术带动下生物技术获得迅猛发展。

将DNA充足技术用于改造生物机体的性状特征、改造基因、改造物种,统称之为基因工程或遗传工程。

与此同时出现了各种生物工程。

技术革命改变了分子生物学的面貌,并推动了生物技术产业的兴起。

在此背景下,RNA研究出现了第二个高潮,发现了一系列新的功能RNA,冲击了传统的观点。

人类基因组计划是生物学有史以来最伟大的科学工程。

这一计划准备用15年时间(1990-2005年),投资30亿美元,完成人类单倍体基因组DNA3×109bp全部序列的测定。

tRNA来源的小RNA(tRF)的生物学功能及在癌症中的作用

tRNA来源的小RNA(tRF)的生物学功能及在癌症中的作用

ncRNA),长度约为 14-35 nt。tRFs 源自前体 tRNA(Pre-tRNA)或成熟 tRNA,有如下几种主要类型:tRF-1,tRF-2,
tRF-3,tRF-5 和 i-tRF,其在生命进程中具有调节基因表达、抑制蛋白质翻译等作用机制,并且在肿瘤诊治中也可充
当生物标志物、治疗靶点等。本文就 tRFs 的生物学功能及其在癌症中的研究进展进行系统的综述。
目前,根据大数据的分析发现 tRF 的种类越来 越多,Yao 等[5]已开发出 tRF 的在线数据库资源—— OncotRF( /OncotRF), 它是识别诊断和预后生物标志物、开发癌症治疗靶 点和研究癌症发病机制的宝贵资源库。MINTbase (http://cm. jefferson. edu / MINTbase/) 是 一 个 含 有 多 种 人体组织中发现的 tRF 的数据库,可从中获取有关 tRF 的最大丰度和数据信息;此外还能够生成各种 癌症类型的 tRF 的相对丰度图并将其转换为数字形 式表示[6]。上述两个数据库为将 tRF 用于癌症的临 床诊断、预后以及进一步的研究提供了科学依据。
《转化医学杂志》2021年6月 第10卷 第3期 Translational Medicine Journal,Vo1.10 NO.3, Jun 2021
tRNA 来源的小 RNA(tRF)的生物学功能 及在癌症中的作用
· 191 ·
许琳枫,王显仪,柴彬淑,马中良
[ 摘 要 ] 来 源 于 tRNA 的 RNA 片 段(tRNA-derived Fragments,tRFs)是 一 种 非 编 码 RNA(non-coding RNA,
tRF-1、tRF-3 和 tRF-5 可能通过与 Piwi 蛋白或 Ago 蛋白相互作用来调节基因表达,从而影响基因 的沉默。在胚胎干细胞和胚胎中,来源于 tRNAGlyGCC 的 tRF-5 抑制内源性反转录相关基因的表达。 Piwi 蛋白 Twi12 与 tRF-3 相互作用形成 tRF-3-Twi12 复合物,该复合物与 Xrn2 和 Tan1 协同作用,共同调 节 rRNA 的加工过程[12]。 2.3 调节细胞周期 tRF 和 tiRNA 通过参与细胞周 期过程来调节细胞增殖。敲低 tRF-1001 可以干扰 细胞增殖,将细胞停滞在 G2 期,并抑制 DNA 的生 物合成[13]。

脓毒症相关的microRNA的研究进展

脓毒症相关的microRNA的研究进展

脓毒症相关的microRNA的研究进展阮正上【摘要】微RNA(microRNA)是一系列单链非编码RNA,可以使mRNA降解或抑制其翻译,来最终达到调控基因表达.Toll样受体介导的信号通路被认为与脓毒性休克的发生发展有重要的关系.一些microRNA(miR-223、miR-146、miR-150、miR-4772家族等)能够区分脓毒症患者与正常患者.microRNA存在于血液和尿中,容易获得,并且可以快速测定,这些与细菌学培养相比有很大的优势.这些优势使得microRNA可以作为潜在的判断脓毒症预后的指标.许多研究显示部分mircoRNA(miR-200家族、miR-149、miR-146家族等)作用于TLR-NF-κB信号通路,从而在脓毒症的发病中起到了重要的作用.更重要的是,部分microRNA体现出可能干预脓毒症发展的应用前景.因此,积极研究microRNA在脓毒症中的作用机制不仅可以加深对脓毒症了解,同时对于可能产生的新的治疗方法有相当重要意义.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2016(022)001【总页数】4页(P41-44)【关键词】脓毒症;微RNA;炎症反应【作者】阮正上【作者单位】上海交通大学医学院附属新华医院麻醉与重症医学科,上海200092【正文语种】中文【中图分类】R631.3脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应,是导致多器官功能障碍综合征的重要原因。

脓毒症的发病机制中占主导地位的主要是炎症“瀑布”反应学说:当致病原侵入或损伤组织后可迅速激活人体的非特异性免疫系统,导致释放大量糖皮质激素、儿茶酚胺以及白细胞介素(interleukin,IL)1、肿瘤坏死因子α等促炎细胞因子,并且导致特异性免疫功能障碍,即免疫麻痹。

虽然针对Toll样受体-核因子κB(Toll-like receptor/nuclear factor-κB,TLR-NF-κB)信号通路参与脓毒症发展过程研究颇多,但根据此理论使用抗炎药物如皮质类固醇激素、抗内毒素抗体、白细胞介素1受体拮抗剂以及肿瘤坏死因子拮抗剂使用的效果并没有想像的那么有效[1]。

microRNA简介

microRNA简介

micro RNAMicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控。

到目前为止,在动植物以及病毒中已经发现有28645 个miRNA 分子(Release 21: June 2021) 。

大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster) 的形式存在于基因组中(Lagos2Quintanaet al , 2001 ; Lau et al , 2001) 。

中文名MicroRNA性质非编码单链RNA 分子特点由内源基因编码的长度等缩写miRNA简介MicroRNA (miRNA) 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA,其在细胞内具有多种重要的调节作用。

每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNA也可以调节同一个基因。

这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。

据推测,miRNA调节着人类三分之一的基因。

最近的研究说明大约70 %的哺乳动物miRNA 是位于TUs区( transcriptionmicro RNA units , TUs ) ( Rodriguez et al ,2004) , 且其中大局部是位于内含子区( Kim &Nam , 2006) 。

一些内含子miRNA 的位置在不同的物种中是高度保守的。

miRNA 不仅在基因位置上保守, 序列上也呈现出高度的同源性(Pasquinelli etal , 2000 ; Ruvkun et al , 2001 ; Lee & Ambros ,2001) 。

miRNA 高度的保守性与其功能的重要性有着密切的关系。

miRNA 与其靶基因的进化有着密切的联系, 研究其进化历史有助于进一步了解其作用机制和功能。

MicroRNAMicroRNA〔miRNA〕是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,几个miRNAs也可以调节同一个基因。

microRNA简介

microRNA简介

micro RNAMicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控。

到目前为止,在动植物以及病毒中已经发现有28645 个miRNA 分子(Release 21: June 2014) 。

大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster) 的形式存在于基因组中(Lagos2Quintanaet al , 2001 ; Lau et al , 2001) 。

中文名MicroRNA性质非编码单链RNA 分子特点由内源基因编码的长度等缩写miRNA简介MicroRNA (miRNA) 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA,其在细胞内具有多种重要的调节作用。

每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNA也可以调节同一个基因。

这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。

据推测,miRNA调节着人类三分之一的基因。

最近的研究表明大约70 %的哺乳动物miRNA 是位于TUs区( transcriptionmicro RNA units , TUs ) ( Rodriguez et al ,2004) , 且其中大部分是位于内含子区( Kim &Nam , 2006) 。

一些内含子miRNA 的位置在不同的物种中是高度保守的。

miRNA 不仅在基因位置上保守, 序列上也呈现出高度的同源性(Pasquinelli etal , 2000 ; Ruvkun et al , 2001 ; Lee & Ambros ,2001) 。

miRNA 高度的保守性与其功能的重要性有着密切的关系。

miRNA 与其靶基因的进化有着密切的联系, 研究其进化历史有助于进一步了解其作用机制和功能。

MicroRNAMicroRNA(miRNA)是一类内生的、长度约20-24个核苷酸的小RNA,几个miRNAs也可以调节同一个基因。

micro RNA

micro RNA

RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”,但越来越多的证据清楚的表明,RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。

RNA 干扰(RNA interference)的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识,在2002年度Science评选的10大科学成就中RNAi名列榜首。

随着对小分子RNA研究的不断深入,人们发现有一部分RNA分子通过激活或抑制基因转录控制基因的表达, 在基因组信息转化为分子效应和生物效应过程中发挥着重要的作用。

这种新发现的分子即是我们即将介绍的microRNA(miRNA)。

microRNA是近年来在多种真核细胞及病毒中发现的一类来源于内源性染色体上的非编码单链RNA。

本文依据目前microRNA的研究进展,分别概括了microRNA的发现、合成、特征、功能和应用等方面的内容,应用方面重点介绍了在糖尿病足等慢性创面及瘢痕上取得的一些成果。

最后得出的结论是,microRNA调控着各种生物学过程,在上述疾病的发生上有重要的研究意义,虽然目前研究不甚深入,很多问题有待探索,但可以想象,microRNA的研究将会有深远的影响。

关键词:非编码RNA;microRNA;研究进展;糖尿病足;慢性创面;瘢痕引言分子生物学的中心法则是基因组DNA通过转录产生信使RNA(mRNA),信使RNA翻译成蛋白质。

然而这个法则却因为microRNA及RNAi的发现而受到了挑战,因为一部分DNA转录生成的mRNA前体(pre-mRNA)并非翻译成为蛋白质;相反,这些RNA调节其他基因的表达。

microRNA(miRNA)是近年来在多种真核细胞及病毒中发现的一类来源于内源性染色体上的非编码单链RNA ,长度约为22(18~25)个核苷酸(nt)的短序列,在进化上具有高度的保守性。

它们基于与靶mRNA的序列互补,能够通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对从而抑制其翻译。

与siRNA不同的是microRNA一般不诱导mRNA的降解,而是以一种未知的方式诱发蛋白质翻译抑制,从而对基因进行转录后的表达调控。

RNA的种类及其作用ppt课件

RNA的种类及其作用ppt课件
合成。
精选2021版课件
11
小胞质RNA(scRNA/7s-RNA)
存在于细胞质中的小RNA分子(如信号识别颗粒组分 中含有的7sRNA),是蛋白质内质网定位合成的信号识 别体的组成。
精选2021版课件
12
microRNA
概念: MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—23个碱基的单链小分子
精选2021版课件
4
各类RNA的作用
精选2021版课件
5
核糖体RNA(rRNA)
1. rRNA是核糖体的组成成分
rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起,形成核糖体 (ribosome) 如果把rRNA从核糖体上除掉,核糖体的 结构就会发生塌陷。
2. 定位(起始翻译)
16 S的rRNA3’端有一段核苷酸序列与mRNA的前导序 列是互补的,这有助于mRNA与核糖体的结合,进而起 始翻译。
精选2021版课件
7
信使RNA(mRNA)
作为蛋白质合成时的模板
mRNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则, 转录而形成的一条单链。其功能就是把DNA上的遗传 信息精确无误地转录下来,然后再由mRNA的碱基顺序 决定蛋白质的氨基酸顺序,完成翻译,合成蛋白质。
精选2021版课件
8
不均一核RNA(hnRNA)
对一部分miRNAs的研究分析提示:miRNAs参与生命过程中一系列的重要 进程,包括早期发育,细胞增殖,细胞凋亡,细胞死亡,脂肪代谢和细 胞分化。
精选2021版课件
13
第一个被确认的miRNA——在线虫中首次发现的lin-4 和let-7 ,可以通过部分互补结合到目的mRNA靶的3’ 非编码区(3’UTRs),以一种未知方式诱发蛋白质翻译 抑制,进而抑制蛋白质合成,通过调控一组关键 mRNAs的翻译从而调控线虫发育进程。

微小基因的名词解释

微小基因的名词解释

微小基因的名词解释在基因学领域,微小基因是指长度约为18-25个核苷酸的短RNA分子,也称为小RNA。

它们在基因调控、细胞功能和疾病发展等方面发挥着重要作用。

本文将对微小基因进行全面解释和探讨。

一、定义与特征微小基因(miRNA)是一类具有特定长度和结构的短RNA分子,一般由70至100个碱基对的前体RNA经过加工和调节生成。

它们的长度一般在18-25个核苷酸之间。

与其他RNA分子相比,微小基因具有以下特征:1)双链结构:由于其特殊的二级结构,miRNA分子呈现出较短的发夹结构;2)高保守性:很多miRNA序列在物种之间高度保守,这表明它们在进化过程中扮演着重要角色;3)多样性:人类体内已经发现了上千个不同的miRNA序列,它们在种类和表达水平上具有很高的多样性。

二、生成过程miRNA的生成过程包括转录、加工和调控三个主要阶段。

首先,miRNA基因会被转录成为一种原初的miRNA,称为pri-miRNA。

这类RNA分子具有长链结构,一般由几百个核苷酸组成。

然后,pri-miRNA通过酶切成为预miRNA,它们是一种较短的双链RNA分子。

最后,预miRNA进一步加工成为成熟的miRNA,这一过程包括一系列的酶切和修饰。

成熟的miRNA将与RNA诱导靶化复合物(RISC)相结合,并与靶基因的mRNA相互作用,从而对基因表达进行调控。

三、功能与调控机制miRNA通过与靶基因的mRNA序列相互作用,影响靶基因的转录和翻译过程。

miRNA主要通过以下两种机制发挥功能:1)诱导靶基因的降解:一旦miRNA与靶基因的mRNA配对结合,将会引起mRNA的降解,从而抑制靶基因的表达;2)抑制靶基因的翻译:在某些情况下,miRNA与靶基因的mRNA结合后,并不导致mRNA的降解,而是抑制其翻译过程,从而达到调控基因表达的目的。

miRNA调控基因表达的方式非常灵活多样,一个miRNA可以同时靶向多个基因,而一个基因也可以被多个不同的miRNA靶向调控。

转录名词解释生物化学

转录名词解释生物化学

转录名词解释生物化学生物化学是一门研究生物有机体的组成成分、结构和功能的科学,涉及到生物体的分子组成,运动学,生物化学和生物信息学等方面。

它是一门复杂的科学因素,在它的发展过程中,专业术语和概念的数量也在不断的增加。

针对生物化学的学习,我们首先要掌握一些基础的专业术语,这些词语组成了生物化学科学的基本结构。

转录(transcription)是指一种涉及到从DNA到RNA的信息传递的过程,也就是从双链DNA的一条链复制出一条核酸。

转录过程是基因表达的基础,其在基因表达定位的中间步骤中起着重要的作用。

在转录过程中,DNA的某一短段被读取,并以单链核糖核苷酸组成,形成一条新的复制物RNA,从而创造出新的蛋白质。

转录过程中涉及到许多不同的名词,比如RNA聚合酶、RNA复制、核糖体结合站点(promoter)、转录因子(transcription factor)等。

RNA聚合酶是一种蛋白质,它负责从DNA到RNA的转录过程,它能将一系列的小的核苷酸聚合起来,形成一条RNA新分子。

RNA复制是指RNA由一个DNA分子复制出另一个相同的RNA分子的过程。

它的反应是通过RNA聚合酶完成的。

核糖体结合站点(promoter)是一个特殊的DNA片段,由转录因子识别,并将其结合到RNA聚合酶上。

转录因子是位于DNA上的特殊的蛋白质,它能够与特定的DNA序列结合,从而识别和调节基因的表达。

此外,在生物化学过程中,还涉及到可变剪接(alternative splicing)、消失复制(disappearing replication)、多态性(polymorphism)、整合素(integrase)、转化(transformation)和转录因子受体(TFR)等名词。

可变剪接是指一种非常常见的基因表达调节模式,它可以从单一的基因片段,产生出不同的蛋白质产物。

消失复制是一种激活低水平的表达调节机制,它能够减少基因表达水平。

什么是rnarna有哪些用处

什么是rnarna有哪些用处

什么是rnarna有哪些用处RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子,那么你对RNA了解多少呢?下面就让店铺来给你科普一下什么是rna。

rna的分类RNA是以DNA的一条链为模板,以碱基互补配对原则,转录而形成的一条单链,主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达,是遗传信息传递过程中的桥梁。

tRNA的功能是携带符合要求的氨基酸,以mRNA为模板,合成蛋白质。

RNA由核糖核苷酸经磷酯键缩合而成长链状分子。

一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。

RNA的碱基主要有4种,即A腺嘌呤,G鸟嘌呤,C胞嘧啶,U尿嘧啶。

其中,U尿嘧啶取代了DNA中的T胸腺嘧啶而成为RNA的特征碱基。

mRNA又称信使RNA。

mRNA的功能就是把DNA上的遗传信息精确无误地转录下来,然后再由mRNA的碱基顺序决定蛋白质的氨基酸顺序,完成基因表过程中的遗传信息传递过程。

在真核生物中,转录形成的前体RNA中含有大量非编码序列,大约只有25%序列经加工成为mRNA,最后翻译为蛋白质。

因为这种未经加工的前体mRNA(pre-mRNA)在分子大小上差别很大,所以通常称为不均一核RNA(heterogeneousnuclearRNA,hnRNA)。

tRNA又称转运RNA。

如果说mRNA是合成蛋白质的蓝图,则核糖体是合成蛋白质的工厂。

但是,合成蛋白质的原材料——20种氨基酸与mRNA的碱基之间缺乏特殊的亲和力。

因此,必须用一种特殊的RNA——转移RNA(transferRNA,tRNA)把氨基酸搬运到核糖体上,tRNA能根据mRNA的遗传密码依次准确地将它携带的氨基酸连结起来形成多肽链。

每种氨基酸可与1-4种tRNA相结合,已知的tRNA 的种类在40种以上。

tRNA是分子最小的RNA,其分子量平均约为27000(25000-30000),由70到90个核苷酸组成。

而且具有稀有碱基的特点,稀有碱基除假尿嘧啶核苷与次黄嘌呤核苷外,主要是甲基化了的嘌呤和嘧啶。

microRNA研究课件

microRNA研究课件

疫苗开发
microrna也可以应用于疫苗开发。通过向 细胞中导入特定microrna,可以调节免疫 反应,增强机体对病原体的抵抗力,从而 达到预防和治疗疾病的目的。例如,某些 microrna可以作为疫苗佐剂使用,增强机 体的免疫应答和疫苗效果。
05
研究microrna的方法学
基于生物化学的方法
调节细胞增殖和凋亡
microrna可以调节细胞增殖和凋亡 过程,影响肿瘤的发生和发展。
调节免疫应答
microrna可以调节免疫应答反应, 影响炎症和自身免疫性疾病的发生 和发展。
02
microrna的生物合成及调节机制
microrna的生物合成
细胞核内microrna的生物合成
microrna基因首先在细胞核内被转录成初级转录物(pri-miRNA),然后被核酸酶Drosha和其辅助因子 Pasha加工成约70个核苷酸长的pre-miRNA,最后在核酸酶Dicer的作用下剪切并修饰形成成熟的microrna。
分子克隆技术:用于microrna的 cDNA克隆和序列分析。
Northern印迹杂交:检测microrna在 mRNA水平上的表达。
细胞和组织中microrna的表达:通 过原位杂交和组织芯片技术观察。
基于分子生物学的方法
01
基因组学技术
02
报告基因法
分析microrna基因组的位置和结构。
研究microrna对靶基因的调控作用。
定义
microrna是一类非编码RNA分子,由21-25个核苷酸组成, 通过与靶mRNA结合调节基因表达。
特点
microrna在生物体内具有高度保守性和稳定性,参与多种生 物学过程,包括发育、细胞增殖、凋亡和免疫应答等。

细胞内RNA降解机制探索

细胞内RNA降解机制探索

细胞内RNA降解机制探索细胞内RNA降解机制是维持细胞内RNA稳态的关键过程之一。

RNA降解是指将RNA分解为更小的碎片,以便为新的RNA合成腾出空间和资源。

该过程不仅有助于维持细胞内RNA的数量和质量平衡,还对细胞的正常功能和适应能力至关重要。

本文将探索细胞内RNA降解的机制,包括主要的降解途径和相应的调控因子。

细胞内RNA降解的主要途径包括核内和胞浆中的降解途径。

在核内,RNA降解起源于转录后修饰和质量控制。

研究发现,在RNA转录后,往往会出现一系列的修饰事件,例如剪切、剪接、聚腺酸尾巴的修饰等。

这些修饰有助于标记异常和不稳定的RNA,进而招募降解酶体(例如核外体和聚腺酸核酸酶)将其降解。

此外,核内还存在一些RNA降解的辅助因子,例如RNA沉默和RNA质量控制因子,它们能够参与到核内RNA的识别和降解中。

胞浆中的RNA降解过程包括核外体介导的降解和线粒体介导的降解。

核外体是胞浆中最重要的RNA降解复合体之一。

它由多个核酸酶和辅助因子组成,能够识别和降解多种类型的RNA,包括非编码RNA、mRNA和长链非翻译的RNA。

核外体的降解过程通常始于RNA的聚腺酸尾巴的修饰和去加工,并通过多个核酸酶的协同作用将RNA逐步降解为短碎片,以保证细胞内RNA的稳态。

线粒体作为细胞的能量供应中心,也具有RNA降解的能力。

它通过自身的降解系统,例如核酸内切酶和外切酶,将自身合成的RNA和其他来源的RNA降解为更小的碎片。

这些碎片可以进一步为线粒体内的RNA合成过程提供材料。

除了上述主要的降解途径外,细胞内还存在一些其他的RNA降解机制。

例如细胞核中的排泄体是一个与细胞内稳态和RNA降解相关的重要结构,它具有降解RNA的能力。

此外,细胞质中的小体(例如exosome)也能够介导RNA的降解过程。

这些机制共同作用,保证了细胞内RNA的降解能力以及RNA数量和质量的平衡。

维持细胞内RNA降解机制的稳定和调控需要一系列的调控因子。

sirna的研发流程-概述说明以及解释

sirna的研发流程-概述说明以及解释

sirna的研发流程-概述说明以及解释1.引言1.1 概述siRNA(小干扰RNA)是一种小分子RNA分子,可以通过特定的机制干扰靶向基因的表达。

它的发现引起了生物医学领域的广泛兴趣,并被认为是一种潜在的基因治疗工具。

siRNA研发流程是指通过一系列的实验和分析,寻找并设计出具有高效靶向特异性和生物活性的siRNA分子的过程。

在siRNA研发流程中,研究人员首先需要确定目标基因,即希望通过干扰其表达来达到治疗或研究目的的基因。

然后,他们会使用计算方法和实验证据来设计符合一定准则的siRNA分子。

这些准则包括具有特异性的核苷酸序列、稳定性和生物活性等方面的要求。

接下来,在合成和制备阶段,siRNA分子会通过化学合成或基因工程技术来制备。

这一步骤要求高纯度的siRNA产物,并确保其质量符合要求。

此外,可以使用化学修饰或封血清转染等方法来改善siRNA的稳定性和递送效率。

在合成和制备阶段完成后,siRNA分子将进入体外和体内评估阶段。

这些评估会涉及到诸如靶向特异性、RNA干扰效率和细胞毒性等方面的实验。

通过这些评估,研究人员可以确定哪些siRNA分子具有较好的生物活性和特异性。

最后,研究人员会通过进一步的实验和分析,确定最优siRNA分子并进行进一步的研究或应用。

这些实验可以包括体内动物实验和临床前研究等。

总之,siRNA研发流程是一个复杂而系统的过程,需要通过一系列的实验和分析来确定最佳的siRNA分子。

通过这个流程,研究人员可以为基因治疗和疾病研究提供强有力的工具,为未来的siRNA研究和应用铺平道路。

文章结构部分是对整篇文章的框架进行说明,让读者可以清晰地了解文章的分章节和论述顺序。

在本篇文章中,主要分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分(1.引言)主要包括概述、文章结构和目的三个小节。

在概述部分(1.1 概述)可对siRNA的研发进行简要介绍,指出该领域的重要性和研究的现状。

文章结构部分(1.2 文章结构)即本部分,用于说明整篇文章的组织结构,阐明各个章节的内容和顺序,以引导读者阅读。

相关主题
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

一系列新的小RNA—源自于tRNA的RNA片段新型的不同于miRNAs的小RNA分子随着时间的推移逐渐的在不同的生物体中发现。

为了发现这种新型的小RNAs,我们用前列腺癌细胞系创建了一个17-26个碱基长的RNA库并用高通量的测序方法对其进行了测序。

结果表明很大数量的这种序列是非常确切的来源于成熟的或者前体RNA分子5’末端或者3’末端,它们整体形成了三种类型的tRFs。

即:tRF-5, tRF-3, 和tRF-1。

这些序列共同组成了一种类型的小RNA分子,而这种类型的小RNA分子的丰富度是仅次于miRNAs的。

用杂合反应、定量反转录PCR、夹板结扎化验方法独立的测定了至少17种tRFs。

从而证明了tRFs在生物中的重要性,我们进一步研究了tRF-1001,这是一种起源于3’末端的Ser-TGA 前体tRNA转录区,而这种tRF分子在成熟的tRNA分子中是不存在的,tRF-1001在癌细胞系中很大范围的高度表达,而在组织中却很少表达。

而它的表达是和细胞增殖密切对应的。

通过siRNA调停的方式敲掉tRF-1001缺陷细胞在细胞分裂的G2期有明显的积累,而通过引入寡核糖核苷酸2’-O末端甲基化的tRF-1001分子使表型逆转的个体对siRNA 是有抵抗性的。

tRF-1001是由前列腺癌易感基因在tRNA的3’末端形成的。

我们得出的数据表明tRFs不是在tRNA退化或者生物进化过程中的随机产物,而是大量的新型的小RNA分子都是有着精确的序列结构,这些序列结构有着特殊的表达模式和生物学规则。

非编码RNAs分子在生物的很多方面扮演者重要的参与者。

关于这方面的最多研究是miRNAs,,它调整动植物中目的RNA的转录后加工。

另外一系列与miRNA密切相关的小RNA是siRNA,它在RNA干扰途径中起着关键性的作用。

在植物中,自然发生的siRNA(trans-acting siRNA和natural antisense transcripts siRNA)已经发现。

在果蝇和哺乳动物中的报到最近才发现,与此同时合成的双链DNA和siRNA已经作为一种敲除基因的工具在动物方面应用很多年了。

一系列其他的小RNA分子也在不同的物种中鉴定了出来,包括tncRNA、21URNA、rasiRNA、hcRNA等。

尽管它们中的一部分被证明在异染色质形成和转位子沉默中起生物作用,最近表明它们中的大部分是没有弄清楚的。

我们相信其他的小RNA分子亟待发现,特别是通过高通量测序技术的应用去发现。

在本研究中,我们用454深度测序的方法分析了人前列腺癌细胞系中的小RNA的全部表达产物,接下来是siRNAs,最多的是起源于tRNA的片段。

除了它们在翻译中的知名作用外,tRNA 也表现出了在细胞中的其他作用,像反转录、卟啉生物合成等。

在这里,我们鉴定了tRNA 的新作用。

其特点和大量的tRF个体表达产物如以下所示。

就像它们的精确序列曲线一样,结果表明tRFs不是生物进化过程中的随机退化的中间产物,而是组成了一种具有更深入监察作用的小RNA。

任何一种tRFs在细胞活力中都是不可缺少的。

结果tRF-5, tRF-3, and tRF-1的克隆、鉴定和特征描述。

从两个前列腺癌细胞系中克隆了17-26nt长的小RNA分子,然后454深度测序。

得到了658068个序列结果,萃取之后发现40%的序列是miRNAs,剩下的部分是属于不同于人类基因和序列标签的原序列。

两个不匹配的序列结果可以用来补充nmsRNA的结果,这些序列是序列错误或转录后翻译,比如RNA编辑。

我们主要致力于30个序列,相比之下一个非常有名气的具有生物学功能的miRNA,miR-18a,被克隆了473次,与此同时,一个高丰度的miRNA,let-7a,被克隆了17856次。

数据库中的695中miRNAs中,一大部分(635个)被克隆的次数小于200次。

这些nmsRNA中的大多数都在经过了进一步的鉴定,而这鉴定方法是在USUC的基因组浏览器上审查它们所在的区域。

28种序列可以映射到人类基因组上,在很多情况下是多基因位点。

这其中的6个起源于已知的转录本和snoRNA,从这一点看,小RNA很可能起源于这里。

值得注意的是,过半的丰富nmsRNA序列和tRNA的位置是一一对应的。

考虑到克隆片段是大概反应细胞内的小RNA水平。

这些tRNA相关的小RNA分子应该是比大部分的miRNA多。

成熟tRNA的初级转录物由RNA聚合酶Ⅲ转录,包括5’端前导链和在tRNA成熟过程中被修整的3’端后随链。

对于大多数的真核生物tRNA来说,CCA序列在酶的作用下加到修整过得tRNA中间产物的3’末端。

在这17种tRNA相关的小RNA中。

第五个和第八个分别精确的对应于成熟tRNA的5’和3’末端。

在所有8种tRF-3 RNAs分子都包含在tRNA成熟过程中序列加到3’端的CCA序列。

tRF-1系列的四种小RNA分子被定位在RNA的前体物中,而且它们的5’端合成在成熟tRNA的3’末端。

所有克隆产物的末端序列精确保留明显表明一个精确的分裂事件在这些tRF传代过程中是非常重要的。

为了得到一个更加综合性的tRFs分析,我们扩大分析范围到所有的小RNA序列,而这些序列的扩增都是是不少于五次的。

用与人类基因相对应的1541种nmsRNA,40%的对应的位点包括一个tRNA,其侧翼长25nt。

它们中的77%是由于它们精确的开始和结束位点才被识别的,同时剩下的23%存在于体内tRNA的随机位点。

所有沿着成熟tRNA分子分布的小RNA分子的5’和3’末端的分布规律显示了一个重要的丰富的tRF-5和tRF-3类型的分子,显示了这些并不是tRNA退化的随机产物。

如果推测一下的话,tRF-5 and tRF-3起源于tRNA的成熟,是有内切核酸酶的内切和外切核酸酶的外切作用而生成的。

从454深度测序数据来看,我们测定的是内切酶的切割位点分布和长度分布。

A在tRF-5类型的3’末端较为丰富。

tRF-3类型的切割位点优先定位在A/U 和A/U之间。

tRF-5这种类型的分子显示了15-25nt范围内正常分布的一种模式,这和我们在小RNA克隆中的片段大小选择是非常相似的。

相比较而言,tRF-3则偏向于分布在13-22nt这个较小的范围内。

20 nt的tRF-3耗费非常严重。

酶切位点的选择和tRFs的大小分布,更进一步支持了其产生不适随机的。

这对于tRF-3更为如此。

tRF-1的百分比低于 tRF-3的百分比,tRF-1的较低的百分比可以用一个假设来解释,而这个假设就是其在前体RNA分子时期以3’末端裂解的方式释放了。

就人662个tRNA基因位点而言,成熟tRNA的3’末端和RNA聚合酶Ⅲ的终止信号的距离是可变的。

只有14.6%的tRNA基因座能够产生16-27个碱基长的tRF-1,这是包含在我们的克隆片段里的,这也解释了tRF-1的数量少的问题。

如果所有前体RNA分子的裂解都能产生tRF-1,那么tRF-1类型的分子的大小分布和期望的理论分布不能完美的契合。

这种变异表明某种类型的tRF-1被选择性的加工或者保留在细胞中为了某种特定的生物学功能。

tRF-5, tRF-3, and tRF-1组成了人前列腺上皮细胞中大部分的小RNA,这仅次于miRNAs。

除此之外,它们精确的开始和结束位点或附近的tRNA末端,和它们在大小和酶切位点方面非随机的性质共同强有力的表明其起源于tRNA一种特殊形式的裂解。

通过其他技术确认的tRFs的表达。

杂合反应发现8种tRFs经手住了考验。

我们不仅发现了一系列具有正确大小的tRFs,也发现了80-100nt是非常明显的并且能成为成熟tRFs的前体。

就tRF-1001, tRF-1002, 和tRF-1003而言,其中较大的一种包括pre-tRNA,tRF便起源于这里。

就tRF-5和tRF-3而言,探针也显示对应的成熟tRNA,其存在要比tRFs要多.除了成熟的tRNA外,这里也有一些中等大小的,相当于tRNA的分裂产物的东西最近被报道出来。

我们使用了夹板结扎的方式对tRF-1001进行了测试,这种结扎测试取决于tRF-1001的3’末端和5’末端的结扎点,是通过精确的低聚糖退火而实现的。

因而,这种结扎测试发现具有精确的3’末端序列的RNA分子在测试产生tRF-1001的的前体RNA的转录物时更具有特殊性。

这个结果与杂交测试得出的结果是一致的。

值得提出的是tRF-1001的量与它的前体物往往不具有非常完美的关联性。

这表明tRF-1001的加工过程和其稳定性可能起了调节作用。

两种tRF-1001、tRF-3001、tRF-3009也进行了这种结扎测试。

一些tRFs的表达水平太低使得我们不能使用结扎测试和杂交测试,特别是对于tRF-3和tRF-5而言,存在着一种来自于成熟tRNA和中间产物的强烈的干扰信号。

为了避开这个影响,我们使用了发现miRNA时使用的方法相似的定量逆转录PCR技术。

我们切胶净化了17-26nt合成cDNA的RNA,从而消除了来自于大的tRNA成熟物和其他RNAs的干扰。

12种tRFs都通过逆转录PCR的方式进行了成功测试。

有趣的是,每一种tRF都在细胞系中表现了一种特殊的表达模式,从而否定了tRF来自于非特异性的tRNA的退化中的随机产物这种可能性,如此非特异性的退化将会使得所有tRFs 具有一种相似的模式。

tRF-1001的表达对tRF-1001做了更深入的研究,因为它是数量最多的tRF,而且也能使用杂交的方法进行精确的测定。

tRF-1001在细胞中的表达量比在组织中高。

尽管想EB染色所显示的那样,组织中有很多的RNA退化物,tRF-1001在组织中的量也不高。

这更强烈的表明了tRF-1001不是来自于非特异性的RNA随机退化产物。

tRF-1001在许多不同家系的癌细胞系高表达表明tRF-1001与细胞的增殖有关。

与此一致的是,通过杂家测试和结扎测试的方法得知tRF-1001在血清饥饿的DU145前列腺癌细胞、LNCaP前列腺癌细胞、HCT116结肠癌细胞系中是减少的,通过血清更换的方式修复。

当细胞密度非常高的时候tRF-1001也会降低。

因此较差的细胞增殖条件,如血清消耗和不断增加的细胞密度都和tRF-1001的下调有关系。

相似的tRF-1001的tRNA前体物的降低由于血清消耗而导致的tRF-1001降低是一个细胞新陈代谢中的pre-tRNA转录下调而导致的。

与此形成对比的是,相应的成熟tRNA保持不变。

tRF-1001是细胞增殖所必须的。

证明tRFs不是tRNA新陈代谢过程中随机产物的最好方法就是证明至少一种tRFs的功能。

为了证明这个,我们使用了siRNA的方法敲出掉了tRF-1001。

相关文档
最新文档