LAMP标准操作程序-希望补充

LAMP标准操作程序与注意事项

、甜菜碱、反应体系成分：外引物、内引物、dNTP、BST酶、10*缓冲液、MgSO

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DNA模板、纯水（环引物虽然会提升反应速度，但会增加反应的

非特异性，建议尽量不用）

预防LAMP污染是首要技术

MP所用试剂均需要高压灭菌，包括配置器具和纯水（用以稀释内外引物，

、甜菜碱、dNTP、DNA模板）；

配置MgSO

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2.坚决杜绝污染实验环境，经常紫外线照射，即使是各功能单元分开，也要非常重视保护环境不受扩增产物污染，否则后果不堪设想；

MP体系的配置要在冰上，正压通风隔离房间内的全排生物安全柜内进行；

4.取反应管时应观察反应管质量，有裂痕后盖子不好的要坚决摒弃；LAMP实验所用枪头最好是用带滤芯的那种枪头，每个样品更换；配专用移液器，操作时必须穿工作服（房间特定，不可带出），戴手套、口罩（一次性），有必要时戴帽子；

5.Bst DNA链转移酶最后在加入体系，在体系上加滴矿物油，加入后立即盖好反应管盖，最好用封口膜封上，首选水浴锅中反应；

4.反应结束后，如果是在PCR仪类似的仪器上反应的，一定要等冷却后再取出管子，否则管子容易爆开盖子，造成污染，如果是在水浴锅上进行反应，取出后直接放在冰上冷却；

5.最好是不开盖的检测；如果用电泳来检测LAMP结果，那么体系配置区域与检测区域要严格分开，人员往返这量区域间也必须更换实验服；如果你是用实时浊度仪来检测，需注意的是要确保浊度仪的盖子盖好；

MP检测时，电泳用过的枪头、手套、点样纸等以及剩余的反应液要用封口袋仔细封好，妥善处理，切不可以随处丢弃。电泳液密封好后废弃；

MP反应的特异性取决于各条引物之间是否交叉反应，新引物必须先单独做水反应对照；

8.太过于灵敏和产物量的巨大，使得LAMP及其容易污染！1个扩增的LAMP产物，往往又是同一片段的重复序列，因此，如果实验室一旦遭到气溶胶污染（包括实验人员！），假阳性率会很高而且难于去除；

9. 如果只是刚开始出现轻微污染，可以加入dUTP等来增强反应特异性；换个地方做，这地方一定要与你以前做的地方没有联系，也基本没有以前实验室人员的流动。