染色体微阵列技术在非免疫性胎儿水肿查因中的应用(新)

ＤＯＩ：１０．３７６０ ／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４３８６．２０１６．０５．００２
作者单位：５１００８０ 广州，中山大学中山医学院医学遗传学教研
室（ 张志强、陈晓丹、蒋玮莹） ；５１００８０ 广州，中山大学附属第一医院
胎儿医学中心（ 张志强、陈宝江、林少宾）
通信作者万：方蒋玮数莹据（ Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｗｙ＠ｍａｉｌ．ｓｙｓｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）
１ 对象与方法
１ ．１ 一 般资 料 根据知情同意原则 ，对 ２０１３ 年 １０ 月 －２０１５
年 １０ 月期间在中山大学附属第一医院胎儿医 学中心因胎儿水肿而行产前诊断、排除免疫性 水 肿 并 成万功方进数行据了 Ｇ 显 带 及 ＣＭＡ 检 测 的 ４６ 例
患者的临床资料进行回顾性分析，同期染色体 产前 诊 断 量 为 ４４３９ 例， 占 产 前 诊 断 总 量 的 １畅０４ ％。 ４６ 例 患 者 平 均 年 龄 为 ２９ 岁 （ ２３ ～ ３９ ） 岁， 孕 周 ＜２８ Ｗ 者 ３８ 例 ， 占 ８２畅６１ ％， 孕 周 ≥ ２８ Ｗ 者 ８ 例 ， 占 １７畅３９ ％； 平 均 孕 周 为 ２２ ＋３ Ｗ （ １１ Ｗ ～３７ ＋５ Ｗ ） 。 １ ．１ ．１ 超 声 资 料 超 声 为 典 型 的 水 肿 儿 表 现：主要有胎儿腹腔、 胸腔、 心包积液， 胎儿头 颅可见双重光环（ 头皮水肿），心胸比例增大， 心脏扩大，肝脾肿大，胎盘实质内光点减少（ 胎 盘水肿增厚且大） ，肠管回声增强等。 １ ．２ 仪 器 方 法 １ ．２ ．１ 仪 器 染 色 体 自 动 分 析 仪 ： Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ ６畅０ 版 本 （ ＡＳＩ 公 司 ， 以 色 列 ） 、 ＳＮＰ ７ Ｇ 芯 片 检 测 平 台（ Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ 公 司 ，美 国） 。 １ ．２ ．２ 方 法 细 胞 培 养、 收 获、 染 色 体 制 备 及 核 型 分 析， 按 照 常 规 方 法 进 行。 样 品 的 ＤＮＡ 提 取 按 照 Ｑｉａｇｅｎ 试 剂 盒 （ ＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ ， 德 国） 操 作 说 明 书 进 行。 ＤＮＡ 样 本 与 Ｃｙｔｏ－ Ｓｃａｎ ＨＤ 芯 片 （ Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ 公 司，美 国 ） 杂 交， 按 照 厂 家 的 标 准 操 作 说 明 进 行 。 ＣｙｔｏＳｃａｎ ＨＤ 芯 片 含 有 ２ ７００ ０００ 探 针 ， 具 备 ＣＮＶ 探 针 和 ＳＮＰ 探 针，其 中 ＳＮＰ 检 测 探 针 ７５０ ０００ 个 、 ＣＮＶ 检 测 探针 １ ９５０ ０００ 个，这些探针平均覆盖全基因 组范围，可同时检查染色体拷贝数异常及长片 段 杂 合 性 缺 失 （ ＞１０ ＭＢ ） 。 ＣＭＡ 临 床 数 据 分 析参照文献［４］ 进行。 １ ．３ 统 计 学 方 １０ 月 １５ 日第 ３９ 卷 第 ５ 期 Ｉｎｔ Ｊ Ｇｅｎｅｔ Ｏｃｔ．１５，２０１６，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．５
· 论著·
染色体微阵列技术在非免疫性胎儿水肿 查因中的应用
张志强 陈宝江 林少宾 陈晓丹 蒋玮莹
【摘要】 目的 分析非免疫性胎儿水肿病例中染色体异常及拷贝数变异的发生率，探 讨 染 色 体 微 阵 列 技 术 （ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏ －ａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ， ＣＭＡ ） 在 非 免 疫 性 胎 儿 水 肿 查 因 中 的 应 用 。 方 法 对 超 声 诊 断 为 胎 儿 水 肿 的 ４６ 例 患 者 ， 通 过 检 测 母 胎 Ｒｈ 血 型 和 抗 Ｄ 抗 体 、 ＡＢＯ 血 型及其他相关抗体排除了免疫性水肿因素，计算染色体异常及拷贝数变异比例并对其临床资 料 进 行 回 顾 性 分 析 。 结 果 ４６ 例 胎 儿 水 肿 患 者 中 行 脐 带 血 检 查 的 ２１ 例 （ ４５畅６５ ％ ） ， 羊 水 检 查 的 １６ 例 （ ３４畅７８ ％ ） ， 绒 毛 检 查 的 ９ 例 （ １９畅５７ ％ ） 。 ＣＭＡ 检 测 异 常 的 ２５ 例 （ ５４畅３５ ％ ） ， 其 中 ７ 例 （ １５畅２２ ％ ） 为 Ｘ 单 体 ， ３ 例 （ ６畅５２ ％ ） 为 ２１ 三 体 ， ２ 例 （ ４畅３５ ％ ） 为 １８ 三 体 ， １ 例 （ ２畅１７ ％ ） 为 ＸＸＸ （ ４７ ， ＸＸＸ ） ，１２ 例 （ ２６畅０９ ％ ） 为 微 缺 失 或 微 重 复 。 结 论 染 色 体 异 常 是 导 致非免疫性胎儿水肿发生的重要原因之一，其中 Ｘ 单体、２１ 三体和 １８ 三体是三大主要因素。 对 于 非 免 疫 性 胎 儿 水 肿 的 病 例 ， 应 用 ＣＭＡ 检 测 可 以 替 代 染 色 体 核 型 分 析 ， 且 可 做 到 及 早 发 现、及时处理。 【 关键词】 非免疫性胎儿水肿； 核型分析； 染色体微阵列 基金项目：广东省科学技术厅项目（２０１４ Ａ０２０２１３０２０ ）
胎 儿 水 肿 （ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ， ＨＦ ） 是 指 胎 儿 有 两个或两个以上浆膜腔积液，是一种围产儿病 死率较高的多病因疾病，主要分为免疫性胎儿 水 肿 （ ｉｍｍｕｎｅ ＨＦ ， ＩＨＦ ） 和 非 免 疫 性 胎 儿 水 肿 （ ｎｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ＨＦ ， ＮＩＨＦ ） 两 种［１］ 。 免 疫 性 胎 儿 水 肿的病因明确，主要由母胎血型不合产生的溶 血 造 成 ，其中 ９０ ％是 Ｒｈ 血 型不 合 ，少 数 为 ＡＢＯ 血型及其他血型不合产生。 目前免疫性胎儿水 肿可以通过产前血型检测做出诊断，而非免疫 性胎儿水肿的病因相对复杂，产前诊断相对困 难。 胎儿心脏异常是导致胎儿非免疫性水肿的 第一大因 素， 染 色 体 异 常 为 第 二 大 因 素 ， 染 色 体异 常 导 致 胎 儿 水 肿 的 发 病 率 约 １０ ％［２－３］ 。 染 色体 Ｇ 显带核型分析是检测染色体异常的传 统方法，但 受 分 辨 率 的 限 制 ， 无 法 检 测 到 许 多 微 小 的 异常， 而 染色 体 微 阵 列 技 术 （ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏ －ａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ， ＣＭＡ ） 通过 检测 ＤＮＡ 的 单 核 苷酸多 态性（ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ， ＳＮＰ ） 和 拷 贝 数 变 异 （ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ， ＣＮＶ ） ， 比 Ｇ 显 带 具 有 更 高 的 分 辨 率 ， 因 此 ， ＣＭＡ 技 术 的 应用将为非免疫性胎儿水肿病因的查找及遗传 咨询提供更大的帮助。 本文对 ２０１３ 年 １０ 月－ ２０１５ 年 １０ 月期间因超声诊断为胎儿水肿、 排 除 免 疫 性 水 肿 （ 通 过 检 测 母 胎 Ｒｈ 血 型 及 抗 Ｄ 抗 体、 ＡＢＯ 血 型 及 相 关 抗 体 ） 并 成 功 进 行 了 Ｇ 显带及 ＣＭＡ 检测的 ４６ 例患 者 的 临 床 资 料 进 行 了总结， 旨 在探讨 ＣＭＡ 技 术在 非 免 疫 性 胎 儿 水 肿病因查找及遗传咨询中的优势。
国际遗传学杂志 ２０１６ 年 １０ 月 １５ 日第 ３９ 卷 第 ５ 期 Ｉｎｔ Ｊ Ｇｅｎｅｔ Ｏｃｔ．１５，２０１６，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．５
·２４１·
ｔｈｅｍ ， Ｘ ｍｏｎｏｍｅｒ ， Ｔｒｉｓｏｍｙ ２１ ａｎｄ Ｔｒｉｓｏｍｙ １８ ａｒｅ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｃａｕｓｅ ｎｏｎ －ｉｍｍｕｎｅ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ．Ｆｏｒ ｔｈｅ ｃａｓｅ ｏｆ ｎｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ， ＣＭＡ ｃａｎ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ， ｗｈｉｌｅ ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｔｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｔｉｍｅ ． 【 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ 】 Ｎｏｎ －ｉｍｍｕｎｅ ； Ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ； Ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ； Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏ －ａｒｒａｙ Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ ： Ｐｒｏｊｅｃｔ Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ （２０１４ Ａ０２０２１３０２０ ）
Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏ ｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏ －ａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｎｏｎ －ｉｍｍｕｎ ｅ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ Ｚｈａｎｇ Ｚｈｉｑｉａｎｇ倡 ， Ｃｈｅｎ Ｂａｏｊｉａｎｇ ， Ｌｉｎ Ｓｈａｏｂｉｎ ， Ｃｈｅｎ Ｘｉａｏｄａｎ ， Ｊｉａｎｇ Ｗｅｉｙｉｎｇ （ 倡 Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ， Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ， Ｓｕｎ Ｙａｔ －Ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ， Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５ １ ００ ８０ ， Ｃｈｉｎａ ） Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｓ ａｕｔｈｏｒ ： Ｊｉａｎｇ Ｗｅｉｙｉｎｇ ．Ｅ －ｍａｉｌ ： ｊｉａｎｇｗｙ ＠ ｍａｉｌ ．ｓｙｓｕ ．ｅｄｕ ．ｃｎ 【 Ａｂｓｔｒａｃｔ 】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ ａｎｄ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｖａｒｉａｔｉｏｎ （ ＣＮＶ ） ｉｎ ｎｏｎ －ｉｍｍｕｎｅ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ， ａｎｄ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏ －ａｒｒａｙ ａｎａｌｙｓｉｓ （ ＣＭＡ ） ｉｎ ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｎｏｎ －ｉｍｍｕｎｅ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒｔｙ －ｓｉｘ ｃａｓｅｓ ｗｈｏ ｗｅｒｅ ｄｉａｇ－ ｎｏｓｅｄ ｂｙ ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ ａｓ Ｓｃｈｒｉｄｄｅ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｗｅｒｅ ｃｈｏｓｅｎ ．Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｊｕｄ － ｇｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｔｅｒｎａｌ ａｎｄ ｆｅｔａｌ Ｒｈ ｂｌｏｏｄ ｔｙｐｅ ， ａｎｔｉ －Ｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ， ＡＢＯ ｂｌｏｏｄ ｔｙｐｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｒｅｌａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ．Ｗｅ ａｌｓｏ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｆｅｔｕｓｅｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ ａｎｄ ＣＮＶ ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｈｅｉｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄａｔａ ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｗｎｔｙ －ｆｉｖｅ （ ５４畅３５ ％ ） ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ ａｎｄ ＣＮＶ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ＣＭＡ ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ７ （ １５畅２２ ％ ） ｃａｓｅｓ ｏｆ Ｘ ｍｏｎｏｍｅｒ （ ４５ ， ＸＯ ） ， ３ （ ６畅５２ ％ ） ｃａｓｅｓ ｏｆ Ｔｒｉｓｏｍｙ ２１ ， ２ （ ４畅３５ ％ ） ｃａｓｅｓ ｏｆ Ｔｒｉｓｏｍｙ １８ ， １ （ ２畅１７ ％ ） ｃａｓｅｓ ｏｆ ＸＸＸ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ （ ４７ ， ＸＸＸ ） ａｎｄ １２ （ ２６畅０９ ％ ） ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｍｉｃｒｏ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｒ ｍｉｃｒｏ ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｃａｕｓｅｓ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ｎｏｎ －ｉｍｍｕｎｅ ｈｙｄｒｏｐｓ ｆｅｔａｌｉｓ ．Ａｍｏｎｇ