花生叶片DNA快速提取方法的优化

合集下载

一种植物叶片DNA简化快速提取方法[发明专利]

专利名称：一种植物叶片DNA简化快速提取方法
专利类型：发明专利
发明人：许向阳,赵婷婷,姜景彬,张贺,陈秀玲,李景富,王傲雪申请号：CN201611197864.2
申请日：20161222
公开号：CN106754879A
公开日：
20170531
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种植物叶片DNA简化快速提取方法，其步骤如下：一、将鲜嫩的植物叶片置于离心管中；二、取石英砂于装有叶片样本的离心管中，加入NaOH溶液，用灭过菌的1000μl移液器枪头直接进行研磨，磨至无明显叶块为止，盖好管盖并用封口膜封口，以防止沸水浴时管盖被蒸汽顶开；三、将研磨后封好的离心管置于沸水浴中；四、将离心管置于离心机中常温离心；五、吸取上清液，加入到新的离心管中，同时添加Tris‑cl缓冲液。

本发明的方法对实验室条件要求非常低，所用仪器、试剂极其简单，且操作简便，效果好，适用于番茄、黄瓜叶片的快速提取，尤其适用于不同样品的大规模提取。

申请人：东北农业大学
地址：150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号
国籍：CN
代理机构：哈尔滨市伟晨专利代理事务所(普通合伙)
代理人：荣玲
更多信息请下载全文后查看。

植物叶片DNA提取步骤

植物叶片DNA提取方案
CTAB 法
基本步骤如下：①取鲜样0．2 g 左右置研钵中，加2％不溶性PVP、液氮研磨至粉末状，转入2 mL 离心管；②加入0．7 mL 65℃预热的CTAB 提取液，混匀，65℃水浴30 min；③加入等体积酚／氯仿／异戊醇（25∶24∶1），混匀，室温10 000 r／min离心10 min；④取上清液，重复步骤③1～2 次；⑤取上清液，加1／2 体积的5 mol／L NaCl，加2／3体积的异丙醇，置－20℃冰箱2 h，沉淀DNA；4℃、10 000 r ／ min 离心10min；⑥弃上清，用70％乙醇溶液洗沉淀2 次，风干，用50 μL TE溶解；⑦加入无DNase 的RNase 至终浓度为10 μg／μL，37℃保温30 min，－20℃保存备用。

(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；
(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中-20℃放置0．5h，12000rpm，离心10min，去上清液；(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；）
2%CTAB提取液：100 mmol／L Tris－HCl（pH8.0），1.4 mol／L NaCl，20 g／L CTAB，20 mmol／L EDTA，1％β－巯基乙醇（用前加）。

花生DNA提取方法比较

花生DNA提取方法比较梁雪莲;郑奕雄;陈晓玲;曾锦姬【期刊名称】《生物技术》【年(卷),期】2007(17)1【摘要】目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。

方法:采用SDS法、改进SDS 法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.Fw,略小于SDS的60.3,但其A260/A280平均值为1.81,比SDS的1.55更接近标准要求。

结论:综合考虑CTAB法是提取花生DNA的最佳方法,可提取到较高质量的DNA,符合分子检测要求;虽然改良CTAB 法也相对好于SDS法,但由于步骤增加反而加剧DNA降解。

【总页数】4页(P41-44)【关键词】花生;叶片DNA;SDS法;改进SDS法;CTAB法;改进CTAB法【作者】梁雪莲;郑奕雄;陈晓玲;曾锦姬【作者单位】仲恺农业技术学院【正文语种】中文【中图分类】Q781【相关文献】1.农杆菌介导花生的遗传转化研究Ⅱ.花生基因组DNA提取方法的改良与鉴定 [J], 单世华;张海平;李春娟;庄伟建2.五种DNA提取方法对酸奶及菌粉中益生菌DNA提取效果比较 [J], 肖其胜;杨捷琳;丁卓平;何宇平3.几种DNA提取方法对红树植物秋茄叶片DNA提取效果的比较 [J], 仇建标;丁文勇;陈少波4.五种DNA提取方法对鱼加工制品DNA提取效果的比较 [J], 李进波;盛婧;李想;潘良文;吕蓉;杨捷琳5.DNA提取方法对一串红不同部位DNA提取的比较 [J], 侯艳霞;汤浩茹;张勇;罗娅;董晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

植物叶片DNA提取步骤

植物叶片DNA提取步骤1.样品准备：首先，选择新鲜、健康的植物叶片作为DNA提取的样品。

尽量避免使用受伤、病变或已枯萎的叶片。

同时，准备一些冰盒和冷藏离心机，以便稍后的步骤中将样品保持低温。

2.细胞破碎：将准备好的叶片样品放入液氮中快速冷冻，以阻止酶的活性和DNA降解。

随后，使用液氮马达磨碎样品，使细胞破碎并释放DNA。

也可以用杵和研钵来研磨样品。

研磨过程中可以加入一些液氮以保持低温。

3.DNA溶解：将破碎的样品转移到一个离心管中，并加入DNA溶解缓冲液。

这个缓冲液通常包含盐类、螯合剂和酶，以帮助去除细胞内的蛋白质和其他杂质。

将混合液在4°C下孵育一段时间，使DNA从细胞中溶解出来。

4.蛋白质沉淀：将溶解的样品通过离心将细胞残渣和大部分蛋白质沉淀到管底。

用一个小孔穿刺器将上清液吸走，注意不要吸入底部的沉淀物。

也可以将上清液转移到另一个清洁离心管中。

5.DNA纯化：将上清液中的DNA加入等体积的异丙醇中，轻轻混合数次，以沉淀DNA。

异丙醇可以使DNA从溶液中分离出来。

然后使用离心将DNA沉淀物沉积到离心管的底部。

将上清液去除，注意不要干扰沉积的DNA。

接下来，使用70%乙醇洗涤沉淀的DNA沉淀物，以去除任何残留的盐或蛋白质。

离心去除乙醇，然后使用无菌纯水重新溶解DNA。

6.DNA的储存：将纯化好的DNA溶液转移到一个经过消毒的离心管中，并存放在低温的冰箱或冷冻柜中。

DNA的保存温度一般为-20°C或更低才能保持其稳定性。

可以在提取的DNA上进行测序、PCR或其他遗传学实验。

总结：植物叶片DNA提取步骤包括样品准备、细胞破碎、DNA溶解和纯化。

样品准备需要选择新鲜健康的叶片，而细胞破碎则使用液氮或研磨来释放DNA。

DNA溶解时需要使用缓冲液帮助溶解，而蛋白质沉淀和DNA纯化则用于去除杂质。

最后，DNA可以在低温下保存并用于后续实验。

通过这些步骤，可以从植物叶片中高效地提取到DNA，并用于分子生物学研究。

叶片提取DNA细则

2.1 取一元硬币大小嫩叶，放入2ml的离心管，放入钢珠，置于液氮中，直至液氮止沸，
置于样品研磨仪30s 50HZ粉碎重复2次；
2.2 加入900ulDNA提取液（CTAB），漩涡混匀（约10s）后。

65℃水浴30min，间隔10min
用力颠倒混匀数次；
2.3 加入800ml的氯仿：异戊醇（24:1），上下颠倒混匀至不分层（手动60rpm，5min），
12000rpm离心10min。

2.4 吸取上清液转移到另一2ml离心管中【根据需要去除RN；加入2ul RNAse 酶（10mg/ml），
混匀后37℃水浴30min】，重复2.3步骤。

2.5 吸取上清液转移至另一2ml离心管中，加入600ul 预冷的异丙醇（-20℃）缓慢摇动约
30次，静置5min，絮状DNA成团析出。

2.6 用剪口枪头吸取DNA，转移至盛有1ml的70%乙醇的离心管中，洗涤两次（手动60rpm，
1min），无水乙醇再洗涤一次（1-2小时，如需要，可隔夜）。

2.7 倒掉无水乙醇，离心管侧翻放置，静置约2-3h，晾干DNA，加入200ul 超纯水或TE
溶液（浓度约为200ng/ul），手动摇动后，放置冰箱上层（4℃左右），待充分溶解后备用。

四种提取花生DNA的方法

氯化钠法：取3mL 精练棉子油, 加入 3 mL 正己烷,加入3mLN aCl( 1. 4 m ol # L- 1) , 继续于旋转搅拌器上振荡混合1h ; 120 00 r # min- 1离心20 m in, 使有机相和水相分离, 小心取出下层水相; 加入与水相溶液等体积的异丙醇, 轻缓颠倒混匀, 室温放置40 min后, 1 2000 r /min- 1离心20 m i n , 弃上清液, 保留沉淀; 待沉淀稍微干燥后用 1 mL T E 溶解沉淀, 加入 1 mL 异丙醇, 轻缓颠倒混匀, 室温放置10 min，后, 1 2000 r # m in- 1离心20min , 弃上清液, 保留沉淀; 待沉淀稍微干燥后加入60 L L T E, 充分溶解沉淀, 2 min 过后generay biotech 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型)GK2041 50次( 仅进行纯化部分) , 最后将离心获得的溶液( 经核酸蛋白浓度检测仪检测浓度) 取5微升进行琼脂糖凝胶电泳, 同时可作为PCR 反应的模板[ 5 - 6]。

建议一个P CR 反应使用1微升DN A 。

纯化部分：1．从琼脂糖凝胶中切下含有目的片段的凝胶，估计重量或精确称量重量。

2．每100mg 琼脂糖凝胶加入100μl Binding Solution ，于50～60℃水浴3～5min，期间每2～3min 间断轻微颠倒混匀，直至胶块完全融化。

注：为操作方便，可统一加入400μl Binding Solution。

3．将上述混合液转移至套有2ml 收集管的吸附柱GC-3u中，室温放置2min，6,000rpm 室温离心1min，取出吸附柱GC-3u，并倒掉收集管中废液。

4．将将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，加入500µl WASolution，于12,000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。

5．将吸附柱GC-3u 重新放回收集管中，加入500μl WashSolution，于12,000rpm，室温离心1min，倒掉收集管中废液。

花生DNA快速提取方法及应用

收稿日期：２０１９－０７－２４基金项目：国家自然科学基金项目（Ｕ１７０４２３２）；河南省产业技术体系（Ｓ２０１２－０５－Ｇ０３）作者简介：李柯（１９９５—），男，河南南阳人，硕士研究生。通讯作者：殷冬梅（１９７２—），女，河南南阳人，博士，教授，主要从事花生遗传育种工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｎｄｍ＠１２６．ｃｏｍ
关键词：花生；ＤＮＡ快速提取；碱裂解法中图分类号：Ｓ５６５．２文献标识号：Ａ文章编号：１００１－４９４２（２０１９）０９－００６８－０５
ＡＲａｐｉｄＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｏｆＰｅａｎｕｔＤＮＡａｎｄＩｔｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ＬｉＫｅ，ＺｈａｏＫｕｎｋｕｎ，ＮｉｎｇＬｏｎｇｌｏｎｇ，ＭａＱｉａｎ，ＬｉＺｈｏｎｇｆｅｎｇ，ＭａＸｉｎｇｌｉ，ＺｈａｎｇＸｉｎｇｇｕｏ，ＹｉｎＤｏｎｇｍｅｉ
ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅａｎｕｔ；ＲａｐｉｄＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；Ａｌｋａｌｉｎｅｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ
花生是世界上主要油料作物之一，其出油率远远高于油菜、大豆、芝麻、向日葵等其他油料作物。在我国油料生产中，花生种植面积仅次于油菜，而单产和总产居第一位。随着植物分子研究的进一步发展，可通过分子标记选择育种、大规模杂交后代单株基因型鉴定等方式获得高蛋白、高油酸、抗病抗逆、适产的花生品种［１］。分子标记辅助选择技术能够快速对目标性状进行筛选，而植物基因组ＤＮＡ的提取是该方法的基础［２］。一般实验室提取ＤＮＡ的方法有ＣＴＡＢ法［３］、ＳＬＳ
山东农业科学２０１９，５１（９）：６８～７２ＤＯＩ：１０．１４０８３／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－４９４２．２０１９．０９．０１０
ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ

一种花生叶片DNA的高效提取方法[发明专利]

专利名称：一种花生叶片DNA的高效提取方法
专利类型：发明专利
发明人：陈伟刚,黄莉,姜慧芳,罗怀勇,陈玉宁,周小静,刘念,雷永
申请号：CN201711328951.1
申请日：20171213
公开号：CN107828783A
公开日：
20180323
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属于农作物技术领域，具体涉及一种花生叶片DNA的高效提取方法。

所述提取方法包括：收集花生叶片样品；向花生叶片样品中分两步加入CTAB溶液，磨样；将磨碎后的花生叶片样品放入水浴锅中水浴一段时间；然后使用氯仿/异戊醇溶液进行第一次抽提；再使用酚/氯仿/异戊醇溶液进行第二次抽提；抽提结束后，取上清液，沉淀DNA，洗涤后保存。

本发明可在常温条件下高效地提取花生叶片DNA，尤其适合数目较大的材料的DNA提取，能够利用较小的花费、较短的时间完成大量DNA的批量提取，且提取所得DNA的质量与DNA试剂盒提取效果基本一致。

本发明所述提取方法操作简单，相比试剂盒费用降低一半以上。

申请人：中国农业科学院油料作物研究所
地址：430062 湖北省武汉市武昌区徐东二路2号
国籍：CN
代理机构：湖北武汉永嘉专利代理有限公司
代理人：徐晓琴
更多信息请下载全文后查看。

利用花生子叶快速获得转基因花生的方法及其应用[发明专利]

专利名称：利用花生子叶快速获得转基因花生的方法及其应用专利类型：发明专利
发明人：王继华,梁炫强,温世杰,洪彦彬,刘南松
申请号：CN201611141379.3
申请日：20161212
公开号：CN106755071A
公开日：
20170531
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了利用花生子叶快速获得转基因花生的方法，包括以下步骤：1)取对数生长期的农杆菌，重悬、得到转化菌液；2)取成熟的花生种子，萌发0‑5天，将子叶纵切为两半，切掉胚轴顶端的胚芽，得到转化受体；3)将转化受体浸泡在转化菌液中，侵染20‑50分钟，接着取出转化受体，置于吸水纸上，暗培养3‑4天；4)将转化受体冲洗干净，进行选择培养，得到花生幼苗；5)将花生幼苗继续培养至得到花生植株，对花生植株进行鉴定，即可确定转基因植株。

本发明还公开了该方法在制备转基因花生中的应用。

本发明的方法取材容易、操作简单、节约时间和成本，且转化效率高，适用于大规模转基因花生的研制。

申请人：广东省农业科学院作物研究所
地址：510640 广东省广州市天河区五山路金颖西二街18号
国籍：CN
代理机构：广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙)
更多信息请下载全文后查看。

花生叶片DNA快速提取方法的优化

花生叶片DNA快速提取方法的优化作者：王蕾赵新涛许梦琦等来源：《山东农业科学》2014年第07期摘要：以花生幼叶为试材，对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。

结果表明，与其他3种改良方法比较，改良TPS法具有不需液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点，提取的DNA可用于花生SSR分析。

关键词：花生；基因组DNA；提取方法；幼叶中图分类号：S565.201文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）07-0011-04AbstractWith the young leaves of peanut as experiment material， four different DNA extraction methods， the high-throughput DNA extraction method， the simple SDS method， TPS method and TENP method， were compared and optimized. The results showed that， compared with the other improved methods， the improved TPS method had the advantages of grinding samples with no liquid nitrogen， faster extraction rate， fewer kinds of reagent， lower cost， rapider DNA solution rate and better DNA quality. The DNA extracted through improved TPS method could be used for SSR analysis of peanut.Key wordsPeanut （Arachis hypogaea L.）；Genomic DNA；Extraction method；Young leavesDNA是遗传信息的载体，DNA的提取是分子生物学研究的基础。

植物叶片基因组DNA快速提取方法

植物叶片基因组DNA快速提取方法迟婧;耿丽丽;高继国;束长龙;张杰【摘要】为了满足分子生物学研究中大量植株基因需要PCR检测的需求,建立了一种无需研磨、无需有机试剂抽提的快速提取植物叶片基因组DNA的方法.通过比较基因组DNA的浓度及PCR检测结果,获得了最佳提取条件,即约50 mg叶片加入150 μL含1％β-巯基乙醇的TE提取液,快速破碎1 min.破碎后的样品4℃13 500×g离心1 min,上清于-20 ℃冷冻后室温融解,4℃、13 500×g离心1 min,离心后收集的上清溶液即可用于PCR检测.整个提取过程仅需10-12 min,具有样品用量小、操作简单、廉价、高效等优点.使用此方法提取的烟草、水稻、大豆、玉米、油菜和花生的基因组DNA均可用于PCR扩增,并可成功扩增长度为3 244 bp 的基因片段.此方法提取的基因组DNA也可用于对未知基因的扩增,获得4条新的花生actin基因序列.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2014(000)009【总页数】7页(P51-57)【关键词】基因组DNA;快速提取;细胞破碎法;PCR扩增【作者】迟婧;耿丽丽;高继国;束长龙;张杰【作者单位】东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193;东北农业大学生命科学学院,哈尔滨150030;中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室,北京100193【正文语种】中文近10余年来，随着分子生物学的飞速发展，DNA高通量测序技术的完善，多种农作物已完成全基因组测序，极大地推动了植物功能基因组学、转录组学研究，使得分子生物学研究进入全新的阶段。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

ｗｅｒｋｉｎｄｓｏｆｒｅａｇｅｎｔ，ｌｏｗｅｒｃｏｓｔ，ｒａｐｉｄｅｒＤＮＡｓｏｌｕｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｂｅｔｔｅｒＤＮＡｑｕａｌｉｔｙ．ＴｈｅＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈｉｍｐｒｏｖｅｄＴＰＳｍｅｔｈｏｄｃｏｕｌｄｂｅｕｓｅｄｆｏｒＳＳＲａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｅａｎｕｔ．
ＡｂｓｔｒａｃｔＷｉｔｈｔｈｅｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓｏｆｐｅａｎｕｔａｓｅｘｐｅｉｍｅｒｎｔｍａｔｅｉａｒｌ，ｆｏｕｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈ－
取方法进行比较和优化。结果表明，与其他３种改良方法比较，改良ＴＰＳ法具有不需液氮磨样、提取速度快、
试剂种类少、成本低、ＤＮＡ溶解速度快、质量较好的优点，提取的ＤＮＡ可用于花生ＳＳＲ分析。
关键词：花生；基因组ＤＮＡ；提取方法；幼叶中图分类号：￥５６５．２０１文献标识号：Ａ文章编号：１００１ — ４９４２（２０１４）０７— ００１１ — ０４
（１．ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＣｏｌｌｅｇｅ，Ｑｉ￣ｇａａｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６０４２，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈａｎｄｏｎｇＰｅａｎｔｕ
ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＲａｐｉｄＤＮＡＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｒｏｍＰｅａｎｕｔＬｅａｖｅｓ
ＷａｎｇＬｅｉ，ＺｈａｏＸｉｎｔａｏ，ＸｕＭｅｎｇｑｉ，ＳｕＦｅｎｇ，ＲｅｎＹａｈ，ＬｉＳｈｕａｎｇｌｉｎｇ，ＳｈｉＹａｎｍａｏ，ＹｕａｎＭｅｉ，ＷａｎｇＣｈｕａｎｔａｎｇ
山东农业科学
２０１４，４６（７）：１１～１４
ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｉｒｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
花生叶片ＤＮＡ快速提取方法的优化
王蕾，赵新涛，许梦琦，宿烽，任艳，李双铃，石延茂，袁美，王传堂
（１．青岛科技大学化工学院，山东青岛２６６０４２；
２．山东省花生研究所／农业部花生生物学与遗传育种重点幼叶为试材，对高通量ＤＮＡ提取法、ＳＤＳ简易法、ＴＰＳ法以及ＴＥＮＰ法４种不同的ＤＮＡ提
ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ￣ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｅａｎｔｕＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＣ．ｅｎｅｔ￣Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，ＭｉｎｉｓｔｙｒｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６１００，Ｃｈｉｎａ）
ｐｒｏｖｅｄＴＰＳｍｅｔｈｏｄｈａｄｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｇｒｉｎｄｉｎｇｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｎｏｌｉｑｕｉｄｎｉｔｒｏｇｅｎ，ｆａｓｔｅｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅ，ｆｏ－
ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｅａｎｕｔ（ＡｒａｃｈｉｓｈｙｐｏｇａｅａＬ．）；ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ；Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ；Ｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓ
ｏｄｓ，ｔｈｅｈｉｇｈ —ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｓｉｍｐｌｅＳＤＳｍｅｔｈｏｄ，ＴＰＳｍｅｔｈｏｄａｎｄＴＥＮＰｍｅｔｈｏｄ，ｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｔｈｅｒｉｍｐｒｏｖｅｄｍｅｔｈｏｄｓ．ｔｈｅｉｍ—