具有蛋白酶体β7亚基功能的棉铃虫HaProβ7基因的克隆与序列结构及表达研究

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棉铃虫载脂蛋白受体基因克隆及转录分析

棉铃虫载脂蛋白受体基因克隆及转录分析
刘香亚;杨蕊弘;张晶;彭英传;肖海军;张万娜
【期刊名称】《植物保护》
【年(卷),期】2023(49)1
【摘要】载脂蛋白受体(lipophorin receptor, LpR)在昆虫体内脂质转运中发挥重要作用。

为了明确棉铃虫载脂蛋白受体基因在其卵巢发育及饥饿胁迫中的功能,本研究克隆了棉铃虫HaLpR基因的cDNA序列(GenBank登录号KU355886.1),全长3 117 bp,开放阅读框为2 643 bp,编码880个氨基酸;其氨基酸序列包含典型的低密度脂蛋白受体结构域,与其他鳞翅目昆虫的LpR相似度>80%。

荧光定量PCR 检测结果显示,HaLpR在雌蛾的卵巢和脂肪体组织中相对转录水平最高;在雌蛾卵子发生期均有转录,在雌蛾羽化后3 d表达量达到最高峰;饥饿处理会抑制HaLpR在雌蛾卵巢和脂肪体中的转录。

研究结果有助于解析HaLpR参与棉铃虫卵巢发育过程中的脂质转运以及应对饥饿胁迫的作用。

【总页数】9页(P213-221)
【作者】刘香亚;杨蕊弘;张晶;彭英传;肖海军;张万娜
【作者单位】江西农业大学;北京林业大学
【正文语种】中文
【中图分类】Q963
【相关文献】
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中华蜜蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因全长转录本鉴定及分析

第52卷第3期2024年3月西北农林科技大学学报(自然科学版)J o u r n a l o f N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y(N a t .S c i .E d .)V o l .52N o .3M a r .2024网络出版时间:2023-09-04 14:29 D O I :10.13207/j .c n k i .jn w a f u .2024.03.001网络出版地址:h t t ps ://l i n k .c n k i .n e t /u r l i d /61.1390.S .20230831.1424.010中华蜜蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因全长转录本鉴定及分析[收稿日期] 2022-12-14[基金项目] 国家自然科学基金面上项目(32172792);国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目(C A R S -44-K X J 7);福建农林大学硕士生导师团队项目;福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)科研扶持项目;福建省省级大学生创新创业训练计划项目(202310389027,X 202310389084) [作者简介] 郭思佳(1998-),女,四川什邡人,在读硕士,主要从事蜜蜂分子生物学研究㊂E -m a i l :g u o s i j i a 1998@163.c o m [通信作者] 付中民(1972-),男,河北唐山人,副教授,主要从事蜜蜂科学研究㊂E -m a i l :z m f @f a f u .e d u .c n郭睿(1987-),男,安徽六安人,副教授,主要从事昆虫-病原互作研究㊂E -m a i l :r u i gu o @f a f u .e d u .c n 郭思佳1,张凯遥1,荆欣1,高旭泽1,冯佩林1,邹培缘1,张浩宇1,陈大福1,2,郭睿1,2,付中民1,2(1福建农林大学动物科学学院(蜂学学院),福建福州350002;2福建省蜂疗研究所,福建福州350002)[摘要] ʌ目的ɔ系统鉴定和分析中华蜜蜂(A pi s c e r a n a c e r a n a )吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本,为深入开展相关基因和剪接体的功能研究奠定基础㊂ʌ方法ɔ基于前期已获得的高质量中华蜜蜂纳米孔长读段测序数据,通过B l a s t 工具将全长转录本比对N r 数据库筛选出吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本㊂利用g f f c o m p a r e 软件将全长转录本与东方蜜蜂(A pi s c e r a n a )参考基因组上注释的转录本进行比较,鉴定未注释的新基因和新转录本㊂利用T A P I S p i p e l i n e 预测和分析吞噬与包囊作用相关基因的可变多聚腺苷酸化(a l t e r n a t i v e p o l y a d e n yl a t i o n ,A P A )位点,并通过T B t o o l s 软件鉴定A P A 位点上游的基序(m o t i f )㊂使用A s t a l a v i s t a 软件鉴定可变剪接(a l t e r n a t i v e s p l i c i n g ,A S )事件,并通过I G V 浏览器进行结构可视化㊂通过R T -P C R 验证A S 事件的真实性㊂ʌ结果ɔ共鉴定到中华蜜蜂吞噬与包囊作用相关的基因66个和全长转录本395条,发掘出东方蜜蜂参考基因组未注释的2个新基因和303条新转录本㊂对参考基因组已注释的34个基因进行了结构优化,分别延伸了18个基因的5'端和12个基因的3'端,同时延长了4个基因的5'端和3'端㊂共鉴定到含有1个及以上A P A 位点的吞噬与包囊作用相关基因47个,其中多于5个A P A 位点的基因最多,为32个㊂在A P A 位点上游鉴定到多个基序,一致性序列为:G R B G C N K S D A A C A A Y T R B -G C B M R N G G B Y A Y T A YW C N VWN G G ㊂共鉴定到吞噬与包囊作用相关基因的A S 事件296次,其中包括131次可变3'端剪接(a l t e r n a t i v e 3's pl i c e s i t e ,A 3S S )㊁85次内含子保留(i n t r o n r e t e n t i o n ,I R )㊁70次可变5'端剪接(a l t e r n a t i v e 5's p l i c e s i t e ,A 5S S )和10次外显子跳跃(e x o n s k i p p i n g,E S )㊂R T -P C R 结果显示,扩增的目的片段大小符合预期,证实了随机选择的2次A S 事件的真实性㊂ʌ结论ɔ系统鉴定了中华蜜蜂吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本以及A S 事件和A P A 位点,优化了东方蜜蜂参考基因组注释的吞噬与包囊作用相关基因的结构㊂[关键词] 中华蜜蜂;吞噬作用;包囊作用;全长转录本;纳米孔测序;可变剪接;可变多聚腺苷酸化[中图分类号] S 895.137[文献标志码] A[文章编号] 1671-9387(2024)03-0001-10I d e n t i f i c a t i o n a n d a n a l y s i s o f f u l l -l e n g t h t r a n s c r i p t s o f ge n e s r e l a t i v e t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A pi s c e r a n a c e r a n a G U O S i j i a 1,Z H A N G K a i y a o 1,J I N G X i n 1,G A O X u z e 1,F E N G P e i l i n 1,Z O U P e i yu a n 1,Z H A N G H a o y u 1,C H E N D a f u 1,2,G U O R u i 1,2,F U Z h o n gm i n 1,2(1C o l l e g e o f A n i m a l S c i e n c e s (C o l l e g e o f B e e S c i e n c e ),F u j i a n A g r i c u l t u r e a n d F o r e s t r y U n i v e r s i t y ,F u z h o u ,F u ji a n 350002,C h i n a ;2A p i t h e r a p y R e s e a r c h I n s t i t u t e o f F u j i a n P r o v i n c e ,F u z h o u ,F u ji a n 350002,C h i n a )A b s t r a c t :ʌO b j e c t i v e ɔS y s t e m a t i c i d e n t i f i c a t i o n a n d i n v e s t i g a t i o n o f g e n e s a n d f u l l -l e n g t h t r a n s c r i pt sa s s o c i a t e d w i t h p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A p i s c e r a n a c e r a n a w e r e c o n d u c t e d,a i m i n g t o p r o v i d eb a-s i s f o r f u r t h e r f u nc t i o n a l s t ud y o n re l a t e d g e n e s a n d i s of o r m s.ʌM e t h o dɔB a s e d o n p r e v i o u s l yg a i n e dhi g h-q u a l i t y N a n o p o r e l o n g r e a d s e q u e n c i n g d a t a f r o m A p i s c e r a n a c e r a n a,t h e m a p p i n g o f f u l l-l e n g t h t r a n-s c r i p t s t o N r d a t a b a s e w a s c o n d u c t e d b y B l a s t t o o l t o i d e n t i f y f u l l-l e n g t h t r a n s c r i p t s r e l a t i v e t o p h a g o c y t o-s i s a n d c a p s u l a t i o n.T h e f u l l-l e n g t h t r a n s c r i p t s w e r e c o m p a r e d w i t h t h o s e a n n o t a t e d o n r e f e r e n c e g e n o m e u s i n g t h e g f f c o m p a r e s o f t w a r e t o i d e n t i f y u n a n n o t a t e d n o v e l g e n e s a n d f u l l-l e n g t h t r a n s c r i p t s.P r e d i c t i o n a n d a n a l y s i s o f a l t e r n a t i v e p o l y a d e n y l a t i o n(A P A)s i t e s w e r e c o n d u c t e d w i t h T A P I S p i p e l i n e,f o l l o w e d b y i d e n t i f i c a t i o n o f m o t i f s u p s t r e a m o f A P A s i t e s b y T B t o o l s s o f t w a r e.A s t a l a v i s t a s o f t w a r e w a s e m p l o y e d t o i d e n t i f y a l t e r n a t i v e s p l i c i n g(A S)e v e n t s f o l l o w e d b y s t r u c t u r a l v i s u a l i z a t i o n b y I G V b r o w s e r.R T-P C R w a s p e r f o r m e d t o v a l i d a t e t h e a u t h e n t i c i t y o f A S e v e n t s.ʌR e s u l tɔA t o t a l o f66g e n e s a n d395f u l l-l e n g t h t r a n-s c r i p t s r e l e v a n t t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A p i s c e r a n a c e r a n a w e r e d i s c o v e r e d,i n c l u d i n g2n e w g e n e s a n d303n e w t r a n s c r i p t s u n a n n o t a t e d o n t h e r e f e r e n c e g e n o m e o f A p i s c e r a n a.T h e s t r u c t u r e o f34 a n n o t a t e d g e n e s o f t h e r e f e r e n c e g e n o m e w a s o p t i m i z e d,a m o n g w h i c h5'e n d s o f18g e n e s a n d3'e n d s o f12 g e n e s w e r e e x t e n d e d,a n d5'e n d s a n d3'e n d s o f4g e n e s w e r e p r o l o n g e d.A d d i t i o n a l l y,47g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n w e r e i d e n t i f i e d t o c o n t a i n o n e o r m o r e A P A s i t e s.T h e n u m b e r o f g e n e s w i t h m o r e t h a n5A P A s i t e s w a s32.M u l t i p l e m o t i f s w e r e i d e n t i f i e d i n u p s t r e a m o f A P A s i t e s,a n d t h e c o n s i s t-e n t s e q u e n c e w a s G R B G C N K S D A A C A A Y T R B G C B MR N G G B Y A Y T A YW C N VWN G G.I n t o t a l,296A S e v e n t s w e r e i d e n 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o n;f u l l-l e n g t h t r a n s c r i p t s;N a n o p o r e s e q u e n-c i n g;a l t e r n a t i v e s p l i c i n g;a l t e r n a t i v e p o l y a d e n y l a t i o n蜜蜂是自然界最重要的授粉昆虫,在生态平衡和粮食安全方面发挥举足轻重的作用㊂中华蜜蜂(A p i s c e r a n a c e r a n a),简称中蜂,是东方蜜蜂(A p i s c e r a n a)的指名亚种,也是我国养蜂生产中使用的主要蜂种之一,经过长期的适应性进化已高度适应我国地理环境,具有重要的生态和经济价值[1]㊂近年来,以牛津纳米孔(N a n o p o r e)长读段测序技术为代表的第三代测序技术不断革新㊁突飞猛进,在组装染色体级别基因组和揭示转录组复杂性等方面应用广泛㊂由于具有超长读长的显著优势,牛津纳米孔测序技术已成功应用于可变剪接体(i s o-f o r m)㊁可变剪切(a l t e r n a t i v e s p l i c i n g,A S)和可变多聚腺苷酸化(a l t e r n a t i v e p o l y a d e n y l a t i o n,A P A)位点等的精确鉴定和分析[2-3]㊂目前,基于牛津纳米孔测序技术的全长转录组研究已见诸于橄榄果蝇(B a c t r o c e r a o l e a e)[4]㊁亚洲飞蝗(L o c u s t a m i g r a t o-r i a)[5]和椰蛀犀金龟(O r y c t e s r h i n o c e r o s)[6]等昆虫中㊂东方蜜蜂的全长转录组研究报道迄今仅有2例,L i u等[7]对长白山东方蜜蜂越冬期抗寒性的全长转录本进行了分析,确定了5941个完整的O R F 序列;蔡宗兵等[8]在中华蜜蜂中肠中鉴定到265个与细胞色素P450相关的全长转录本㊂此前,本课题组利用牛津纳米孔测序技术对蜜蜂的2种真菌病原蜜蜂球囊菌(A s c o s p h a e r a a p i s)和东方蜜蜂微孢子虫(N o s e m a c e r a n a e)进行了较为系统的全长转录组研究[9-14],但中蜂的全长转录组研究总体上仍较为滞后㊂作为无脊椎动物,蜜蜂等昆虫缺乏获得性免疫,但拥有包括细胞免疫和体液免疫在内的天然免疫系统㊂当侵入昆虫血淋巴的病原体被宿主细胞识别后,宿主的细胞免疫随即被激活,进而合成与分泌抗菌肽,抵御病原侵染[15]㊂吞噬和包囊作用是昆虫的2种重要细胞免疫反应,吞噬能直接杀死真菌孢子和外源小分子,而包囊能抵御如寄生虫等无法被吞噬的入侵者[16]㊂W a n g等[17]研究发现,棉铃虫(H e l i c o v e r p a a r m i g e r a)20E-H a E c R-H a U S P复合物刺激血淋巴中H a C T L1基因的表达,进而提高2西北农林科技大学学报(自然科学版)第52卷H a C T L1蛋白的合成与分泌,并促进细胞吞噬和包囊作用,抵抗中华卵索线虫(O v o m e r m i s s i n e n s i s)的侵袭㊂在果蝇(D r o s o p h i l a)中,TM9S F4基因突变可引起吞噬与包囊作用缺失,导致果蝇对革兰氏阴性菌更加敏感[18]㊂P a r k等[19]利用二代测序技术组装和注释了东方蜜蜂的参考基因组,但由于二代测序产生的读段较短,故该版本参考基因组仅组装到重叠群(c o n t i g)水平,东方蜜蜂参考基因组仍需要进一步完善㊂目前,人们对中蜂吞噬与包囊作用的认识非常有限,对其相关基因和全长转录组缺乏深入的研究㊂前期研究中,本课题组已利用牛津纳米孔测序技术对中华蜜蜂工蜂幼虫肠道组织进行了测序,获得了高质量的长读段数据[8]㊂在此基础上,本研究对中华蜜蜂吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本进行了系统鉴定,对东方蜜蜂参考基因组已注释的吞噬与包囊作用相关基因进行结构优化,进而发掘和分析吞噬与包囊作用相关基因的A P A位点和A S事件,并对A S事件进行分子验证,以期丰富中华蜜蜂吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本的相关信息,为深入开展相关基因和剪接体的功能研究奠定基础㊂1材料与方法1.1细胞吞噬与包囊作用相关基因与全长转录本的筛选与分析本课题组前期已完成中蜂幼虫4,5和6日龄肠道样品(A c4组㊁A c5组和A c6组)制备㊁R N A提取㊁c D N A建库及牛津纳米孔测序㊂A c4㊁A c5和A c6组测序结果分别获得了7338627,7003419和7434233条原始读段,其N50分别为1276,1306和1404b p,平均读长分别为1126,1126和1166 b p,最大长度分别为16628,12808和14359b p,质量值均达到Q12[8]㊂高质量的长读段测序数据可用于本研究中中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本的鉴定及分析㊂使用B l a s t工具(参数为默认设置)将鉴定到的所有全长转录本序列比对到G O(h t t p://g e n e o n t o l o g y.o r g/)㊁K E G G(h t t p s:// w w w.k e g g.j p/)和N r(h t t p s://f t p.n c b i.n l m.n i h.g o v/b l a s t/d b/F A S T A/)数据库,再根据注释信息筛选细胞吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本㊂1.2东方蜜蜂参考基因组中已注释细胞吞噬与包囊作用相关基因的结构优化按照本课题组已建立的技术流程[12,20],利用g f f c o m p a r e软件(参数为默认设置)将本研究中鉴定到的细胞吞噬与包囊作用相关全长转录本与中蜂参考基因组(A C S N U-2.0)上已注释的转录本进行比较,以发现未注释的新基因和转录本,并对已注释基因进行结构优化㊂如果在原有基因边界之外的区域有比对读段(m a p p e d r e a d s)支持,则将基因的非翻译区向上㊁下游延伸,以修正基因的边界㊂1.3细胞吞噬与包囊作用相关基因的A P A位点鉴定与分析参照杜宇等[11]报道的方法,利用T A P I S p i p e-l i n e[21]鉴定细胞吞噬与包囊作用相关基因的A P A 位点,参数设置为:-n o r c㊁-m e m e-m i n w6㊁-m e m e-m a x w6㊁-s p a m o-s k i p㊁-f i m o-s k i p㊂通过T B t o o l s软件[22]对细胞吞噬与包囊作用相关基因A P A位点上游50b p的序列特征进行分析,以鉴定基序(m o-t i f)㊂1.4细胞吞噬与包囊作用相关基因的可变剪接分析参照陈华枝等[13]和杜宇等[11]报道的方法,使用A s t a l a v i s t a软件[23]鉴定中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S事件类型,其中包括互斥外显子(m u t u a l l y e x c l u s i v e e x o n,M E E)㊁内含子保留(i n-t r o n r e t e n t i o n,I R)㊁外显子跳跃(e x o n s k i p p i n g, E S)㊁可变3'端剪接(a l t e r n a t i v e3's p l i c e s i t e,A3S S)和可变5'端剪接(a l t e r n a t i v e5's p l i c e s i t e,A5S S)㊂参数为默认设置㊂根据预测结果统计以上可变剪接类型数量㊂1.5细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S事件验证中蜂幼虫取自福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)蜜蜂保护课题组的实验蜂群㊂参照本课题组已建立的技术流程[24-26],从蜂群中提取巢脾,在实验室中将2日龄幼虫移至干净的48孔培养板,放入恒温恒湿箱,在温度为35ħ㊁相对湿度(R H)为90%的条件下饲养,分别剖取4,5和6日龄幼虫肠道组织,液氮速冻后迅速转移到-80ħ超低温冰箱保存,备用㊂为验证细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S事件准确性,以β-a c t i n为内参基因,随机选择2种A S 类型(A3S S㊁I R)的1个基因进行R T-P C R验证㊂根据上述基因的核酸序列设计跨剪接位点的特异性引物,交由生工生物(上海)公司合成(表1)㊂以肌动蛋白基因β-a c t i n(L O C107999330)作为内参基因,将上述制备的4,5和6日龄幼虫肠道的R N A等物3第3期郭思佳,等:中华蜜蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因全长转录本鉴定及分析质的量混合后进行反转录,获得c D N A ㊂以得到的c D N A 作为模板进行P C R 扩增,反应体系和程序参照蔡宗兵等[8]的报道进行㊂P C R 产物经3%琼脂糖凝胶电泳后使用核酸凝胶成像仪进行检测和拍照㊂表1 本研究中使用的引物序列T a b l e 1 S e q u e n c e s o f p r i m e r s u s e d i n t h i s s t u d yA S 类型T y pe of A S 基因或基因I DG e n e o r g e n e I D预测的转录本号P r e d i c t e d t r a n s c r i pt n u m b e r 序列S e qu e n c e I RL O C 107999286O N T.6127.13(444b p ),O N T.6127.3(341b p)F :5'-C T C A C G G A A C T A C C A C G G -3'R :5'-G G G A T A T T C G C C A C A A C A -3'A 3S S L O C 107999764O N T.6364.6(362b p ),O N T.6364.2(425b p)F :5'-A G A A A G A G C A T T A G G A G A -3'R :5'-G G A G T A C G T T G A A T A G G A -3'-β-a c t i n -F :5'-T T A T A TG C C A A C A C T G T C C T T T -3'R :5'-A G A A T T G A T C C A C C A A T C C A -3'注:括号中的数据为片段长度㊂N o t e :D a t a i n t h e b r a c k e t s i s t h e l e n g t h o f t r a n s c r i pt .2 结果与分析2.1 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因和全长转录本的鉴定与分析试验共鉴定到吞噬相关的基因65个和全长转录本391条,包囊作用相关的基因1个和全长转录本4条,其中包括东方蜜蜂参考基因组上未注释的2个新基因和303条新转录本㊂对鉴定到的基因进行K E G G 和G O 注释,结果有62个基因注释到22条K E G G 通路(图1);有65个基因注释到53个G O 条目,其中P 值排序前20的条目见图2㊂图中数据为注释到的基因数及其占比㊂图2同D i g i t s i n d i c a t e n u m b e r s o f g e n e s a n n o t a t e d a n d i t s r a t i o .F i g.2i s t h e s a m e 图1 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的K E G G 注释F i g .1 K EG G a n n o t a t i o n s o f g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A pi s c e r a n a c e r a n a 4西北农林科技大学学报(自然科学版)第52卷图2 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的G O 注释F i g .2G O a n n o t a t i o n s o f g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l e i n A pi s c e r a n a c e r a n a 2.2 东方蜜蜂参考基因组已注释细胞吞噬与包囊作用相关基因的结构优化试验共对东方蜜蜂参考基因组上已注释的34个细胞吞噬与包囊作用相关基因的结构进行了优化,其中正链结构优化的基因为17个,负链结构优化的基因为17个;5'端延长的基因有18个,延长长度介于4~5512b p;3'端延长的基因有12个,延长长度介于1~3218b p;3'和5'端均延长的基因有4个,分别为L O C 107999172,L O C 107999330,L O C 108000752和L O C 108003556(表2)㊂表2 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因结构优化的详细信息T a b l e 2 D e t a i l e d i n f o r m a t i o n o f s t r u c t u r a l o p t i m i z a t i o n o f g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A pi s c e r a n a c e r a n a 基因I DG e n e I D参考序列R e f e r e n c e s e qu e n c e 优化前的起止位置S t a r t a n d e n d s i t e s b e f o r e o pt i m i z a t i o n 优化后的起止位置S t a r t a n d e n d s i t e s a f t e r o pt i m i z a t i o n 正负链P o s i t i v e o r n e ga t i v e s t r a n d 末端E n d L O C 107998143NW _016019219.11777187-17784171771675-1778417+5'L O C 108003298NW _016019863.197472-9977891999-99778-5'L O C 107995660NW _016017456.11776644-18069261774455-1806926+5'L O C 107999172NW _016019319.1419590-429628417412-429628+5'L O C 107997445NW _016019153.11089494-11037821087610-1103782-5'L O C 107999159NW _016019319.117703-2478016575-24780-5'L O C 107994640NW _016018544.15265-71014277-7101-5'L O C 107999790NW _016019364.180049-8323779245-83237-5'L O C 107994136NW _016018344.11816913-18226661816182-1822666-5'L O C 107999764NW _016019364.1946296-958611945624-958611-5'L O C 108000406NW _016019441.1709872-713105709245-713105-5'L O C 107997632NW _016019175.11062418-10727961061901-1072796-5'L O C 108000577NW _016019442.1960650-965211960161-965211-5'5第3期郭思佳,等:中华蜜蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因全长转录本鉴定及分析表2(续) T a b l e 2(c o n t i n u e d)基因I DG e n e I D参考序列R e f e r e n c e s e qu e n c e 优化前的起止位置S t a r t a n d e n d s i t e s b e f o r e o pt i m i z a t i o n 优化后的起止位置S t a r t a n d e n d s i t e s a f t e r o pt i m i z a t i o n 正负链P o s i t i v e o r n e ga t i v e s t r a n d 末端E n d L O C 107999330NW _016019330.11372267-13770341371781-1377034-5'L O C 108000587NW _016019442.1569024-569997568540-569997-5'L O C 108000752NW _016017512.1181972-183084181594-183084-5'L O C 107998213NW _016019219.12093759-21004742093552-2100474-5'L O C 107998677NW _016019275.1760522-765147760336-765147-5'L O C 107999232NW _016019330.1492630-495090492481-495090-5'L O C 108001305NW _016019552.1187553-189571187438-189571-5'L O C 107995080NW _016017456.1516106-518939516101-518939+5'L O C 108003556NW _016017567.12875991-28786182875987-2878618+5'L O C 107999330NW _016019330.11371781-13770331371781-1377034-3'L O C 107992565NW _016017856.1183783-185914183783-185924+3'L O C 108001195NW _016017512.1514991-517027514991-517058+3'L O C 108000752NW _016017512.1181594-182906181594-183084-3'L O C 107998372NW _016019231.11386200-13883801386200-1388790+3'L O C 107995099NW _016018567.1136406-140802136406-141304+3'L O C 107993924NW _016018256.1253448-258337253448-258848+3'L O C 107997332NW _016017457.1590209-593951590209-594488+3'L O C 108003264NW _016017556.1192600-196182192600-196785+3'L O C 107992702NW _016017899.1 211-1820211-2563+3'L O C 107999172NW _016019319.1417412-428815417412-429628+3'L O C 108000484NW _016019441.14376457-43802124376457-4381188+3'L O C 108003556NW _016017567.12875987-28772962875987-2878618+3'L O C 108002524NW _016017455.1845010-847931845010-849556+3'L O C 122719477NW _016017767.1310646-314815310646-318033+3'L O C 107995086NW _016018567.1848331-849310848331-849899+3'2.3 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的A P A位点鉴定与分析试验共鉴定到含有1个及以上A P A 位点的细胞吞噬与包囊作用相关基因47个(图3),其中多于5个A P A 位点的基因最多,为32个;含有1个A P A 位点的基因次之,为6个;含有2个和3个A P A 位点的基因均为4个;含有4个A P A 位点的基因为1个㊂此外,在细胞吞噬与包囊作用相关基因的A P A 位点上游鉴定到多个基序,一致性序列为:G R B G C N K S D A A C A A Y T R B G C B M R N G G B Y -A Y T A YW C N VWN G G (图4)㊂图3 不同数量A P A 位点中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的分布F i g.3 D i s t r i b u t i o n o f d i f f e r e n t n u m b e r s o f A P A s i t e s o f g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l e i n A pi s c e r a n a c e r a na 图4 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的一致性基序F i g .4 M o t i f s o f g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c y t o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A pi s c e r a n a c e r a n a 6西北农林科技大学学报(自然科学版)第52卷2.4 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S 事件鉴定与分析试验共鉴定到细胞吞噬与包囊作用相关基因的296次A S 事件,其中数量最多的类型是可变3'端剪接(A 3S S ,131次),其次为内含子保留(I R ,85次)和可变5'端剪接(A 5S S ,70次),数量最少的类型为外显子跳跃(E S ,10次)(图5)㊂部分细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S 事件详细信息见表3㊂表3 细胞吞噬与包囊作用相关基因的可变剪接事件(A S)详细信息(仅展示6个)T a b l e 3 D e t a i l i n f o r m a t i o n o f a l t e r n a t i v e s p l i c i n g e v e n t s o c c u r r e d i n p h a g o c yt o s i s a n d c a p s u l a t i o n r e l e v a n t g e n e s (s i x d i s p l a y e d o n l y)基因I DG e n e I D转录本I DT r a n s c r i pt I D A S 事件类型A S e v e n t t y pe 参考序列R e f e r e n c e s e q u e n c e 链属S t r a n d t y pe 区域R e gi o n L O C 107999286O N T.6127.13,O N T.6127.3I RNW _016019330.1C 3148146-3148035L O C 107999764O N T.6364.6,O N T.6364.2A 3S S NW _016019364.1C 949340-949306L O C 107999286O N T.6127.7,O N T.6127.2E SNW _016019330.1C3172740-3172667L O C 107995660O N T.309.1,O N T.309.2A 5S S NW _016017456.1W 1780668-1780704L O C 107995099O N T.3315.1,O N T.3315.3A 3S S NW _016018567.1W 137912-137926L O C 107992565O N T.1750.1,O N T.1750.2I R NW _016017856.1W183906-184992注:C 和W 分别代表负义链和正义链㊂N o t e :C a n d W r e p r e s e n t n o n s e n s e s t r a n d a n d s e n s e s t r a n d ,r e s p e c t i v e l y.图5 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S 事件类型F i g .5 T y p e s o f A S e v e n t s i n g e n e s r e l a t e d t o p h a g o c yt o s i s a n d c a p s u l a t i o n i n A pi s c e r a n a c e r a n a 2.5 中蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因的A S 事件验证随机选择2种A S 事件类型进行R T -P C R 验证,结果(图6)显示,L O C 107999764基因可检测到2条转录本,大小分别约为425和362b p ,与基于测序数据预测出的O N T.6364.2和O N T 6364.6的大小(表1)一致;L O C 107999286基因可检测到2条转录本,大小分别约为444和341b p,与基于测序数据预测出的O N T.6127.3和O N T.6127.13的大小(表1)一致㊂上述结果表明,本研究鉴定到的A S 事件真实可靠㊂A ,C .A 3S S 和I R 的可变剪接事件类型示意图,方框表示外显子,直线表示内含子,箭头表示转录方向;B ,D.L O C 107999764和L O C 107999286扩增产物的琼脂糖凝胶电泳A a n d C s h o w t y p e s o f a l t e r n a t i v e s p l i c i n g e v e n t s o c c u r r e d i n A 3S S a n d I R ,r e c t a n g l e s r e p r e s e n t e x o n s ,a n d b l a c k l i n e s r e pr e s e n t i n t r o n s ,a r r o w i n d i c a t e d i r e c t i o n o f t r a n s c r i p t i o n ;B a n d D s h o w a g a r o s e g e l e l e c t r o p h o r e s i s f o r a m pl i f i e d pr o d u c t s f r o m L O C 107999764a n d L O C 107999286图6 中蜂2个基因可变剪接事件的P C R 验证F i g .6 P C R v a l i d a t i o n o f a l t e r n a t i v e s p l i c i n g e v e n t s o c c u r r e d i n t w o g e n e s i n A pi s c e r a n a c e r a n a 7第3期郭思佳,等:中华蜜蜂细胞吞噬与包囊作用相关基因全长转录本鉴定及分析3讨论此前,P a r k等[19]利用二代测序技术组装和注释了东方蜜蜂的参考基因组(A C S N U-2.0),该版本的基因组大小约为238M b,共包含10651个编码基因,其中注释到吞噬作用的基因和转录本数目分别为95个和182条,注释到包囊作用的基因和转录本数目分别为1个和1条㊂基于已获得的高质量牛津纳米孔测序数据,本研究共鉴定到中蜂吞噬作用相关的基因65个和全长转录本391条,包囊作用相关的基因1个和全长转录本4条,其中包括参考基因组上未注释的新基因2个和新转录本303条㊂这为持续深入开展中蜂吞噬与包囊作用相关基因和i s o-f o r m的研究提供了宝贵的材料㊂U T R主要通过顺式调节元件和R N A结合蛋白(或小R N A反式作用因子)之间的动态相互作用来调节特定的m R N A的代谢和翻译[27]㊂3'U T R 参与m i R N A或以蛋白质为基础的m R N A的降解机制,而5'U T R影响m R N A的翻译效率[28]㊂本研究共对东方蜜蜂参考基因组上已注释的34个吞噬与包囊作用相关基因结构进行优化,延长了18个基因的5'U T R(延长长度介于4~5512b p)和12个基因的3'U T R(延长长度介于1~3218b p),同时延长了4个基因的5'U T R和3'U T R㊂这为进一步开展上述中蜂吞噬与包囊作用相关基因表达调控的深入研究提供了重要基础㊂A P A通过产生编码序列或3'U T R不同的异构体,从而调节目标R N A的功能㊁稳定性㊁定位和翻译效率,促进转录组的复杂性[29]㊂哺乳动物基因组中有50%~80%的基因发生A S和A P A,进而产生数量众多的剪接异构体[30];在人(H o m o s a p i e n s)中,至少有70%的基因含有A P A位点[31-32];在小鼠(M u s m u s c u l u s)中,32%的表达基因经历A P A[33];在水稻(O r y z a s a t i v a)中,约48%的基因含有A P A 位点[34];在小麦(T r i t i c u m a e s t i v u m)中,有31%的基因含有A P A位点[35];在拟南芥(A r a b i d o p s i s t h a l i a n a)中,超过60%的基因含有A P A位点[36]㊂本研究鉴定到中蜂吞噬与包囊作用相关的66个基因,其中有47(约71.2%)个基因含有1个及以上的A P A位点,表明中蜂吞噬与包囊作用相关的基因多数发生A P A㊂其中,多于5个A P A位点的基因最多,这与他人对热带爪蟾(X e n o p u s t r o p i c a l i s)[37]和蜜蜂球囊菌[11]等物种的研究报道一致㊂但在高粱[38]和草地贪夜蛾(S p o d o p t e r a f r u g i p e r d a)[39]等物种中,含2个A P A位点的基因最为丰富㊂上述结果表明,不同物种中,A P A位点数的分布规律存在差异㊂此外,在吞噬与包囊作用相关基因的A P A 位点上游鉴定到多个基序,一致性序列为:G RB G C-N K S D A AC A A Y T R B G C B M R N G G B Y A Y T A YW-C N VWN G G㊂人类基因的A P A位点上游存在1个经典m o t i f(A A U A A A),该基序同样存在于果蝇基因A P A位点上游[40]㊂M a等[35]在小麦基因的A P A位点上游鉴定到多个基序,其中出现频率最高的是A A U A A A㊁A U A U A U和U A U A U A㊂玉米(Z e a m a y s)基因的A P A位点上游出现频率前3位的基序为:A A U A A A㊁A U A U A U和U A U A U A[41]㊂本课题组在东方蜜蜂微孢子虫基因的A P A位点上游发现3个基序:A A U A A A㊁U G A U G C和G C G A C G[13],在蜜蜂球囊菌基因的A P A位点上游鉴定到4个基序:A U G A U A A㊁C A U G A A C㊁G U U C A A U和U C A U C A U[42]㊂以上结果表明,A P A上游基序具有一定的种属特异性㊂W a n g等[30]研究发现,哺乳动物基因进化过程中聚腺苷酸化位点(p o l y a d e n y l a t i o n s i t e s,P A S)选择对A P A施加进化压力的基因特征包括基因年龄㊁基因表达模式和基因功能㊂本研究鉴定到的基序与其他物种中A P A位点上游的基序均不相同,推测可能是由于高分化细胞一般倾向于使用远端P A S,导致具有较长3'U T R的转录本表达,而生长较快的细胞则倾向于使用近端P A S,产生较短的3'U T R,从而导致产生的转录本具有潜在的高表达水平[43]㊂A S 在基因的功能多样性中扮演着重要的角色,由A S 产生的蛋白质异构体在酶活性㊁定位或稳定性等方面存在差异,从而影响细胞的活动[44]㊂本研究共鉴定到吞噬与包囊作用相关基因的296次A S事件,说明中蜂吞噬与包囊作用相关基因广泛发生A S㊂其中,最丰富的A S事件类型是A3S S(131次),其次是I R(85次),数量最少的为E S(10次)㊂在硝酸盐胁迫条件下,大豆(G l y c i n e m a x L.)根系中R I 和A3S S是最常见的A S类型,其中A3S S产生的剪接异构体的相对表达量在不同硝酸盐条件差异显著[45]㊂L e v e s q u e等[46]报告了第一个关于癌症中A3S S使用的全基因组研究,强调了乳腺癌中数百个不同剪接的事件,表明A3S S在乳腺癌整体剪接网络中具有重要作用㊂I R和A3S S主要涉及调节前体m R N A产生不同的成熟剪接体,调节细胞中基因的表达,然后影响编码蛋白的功能[47]㊂本研究通过R T-P C R对随机选择2种A S事件类型进行验8西北农林科技大学学报(自然科学版)第52卷证,结果显示L O C107999764和L O C107999286均能扩增出2条转录本,大小与基于测序数据的预测结果一致,表明中蜂吞噬与包囊作用相关基因的A S 事件真实可靠㊂[参考文献][1]曾志将.养蜂学[M].北京:中国农业出版社,2017.Z e n g Z J.A p i c u l t u r e[M].B e i j i n g:C h i n a A g r i c u l t u r e P r e s s, 2017.[2] D e a m e r D,A k e s o n M,B r a n t o n D.T h r e e d e c a d e s o f n a n o p o r es e q u e n c i n g[J].N a t u r e B i o t e c h n o l o g y,2016,34(5):518-524.[3] W a n g Y,Z h a o Y,B o l l a s A,e t a l.N a n o p o r e s e q u e n c i n g t e c h n o-l o g 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r a:S c a r a b a e i d a e)b a s e d o n l o n g-r e a d n a n o p o r e s e q u e n c i n g[J].P e e r J,2021,9:e10552.[7] L i u N N,R e n Z Y,R e n Q D,e t a l.F u l l l e n g t h t r a n s c r i p t o m e sa n a l y s i s o f c o l d-r e s i s t a n c e o f A p i s c e r a n a i n C h a n gb a i M o u n-t a i n d u r i n g o v e r w i n t e r i n g p e r i o d[J].G e n e,2022,830:146503.[8]蔡宗兵,王紫馨,吴鹰,等.中华蜜蜂细胞色素P450相关基因和全长转录本的鉴定及分析[J].昆虫学报,2023,66(1):11-18.C a i Z B,W a n g Z X,W u Y,e t a l.I d e n t i f i c a t i o n a n d a n a l y s i s o fg e n e s a n d f u l l-l e n g t h t r a n s c r i p t s r e l a t e d t o c y t o c h r o m e P450i nA p i s c e r a n a c e r a n a[J].A c t a E n t o m o l o g i c a S i n i c a,2023,66(1):11-18.[9]隆琦,余岢骏,吴鹰,等.蜜蜂球囊菌菌丝和孢子中毒力因子相关全长转录本的鉴定及分析[J].应用昆虫学报,2021,58(5):1073-1082.L o n g Q,Y u K J,W u Y,e t a l.I d e n t i f i c a t i o n a n d a n a l y s i s o f v i-r u l e n c e f a c t o r-r e l a t e d f u l l-l e n g t h t r a n s c r i p t s i 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非生物胁迫诱导的棉花酵母双杂交文库构建及GhJAZ1互作蛋白筛选

核农学报2023，37（11）：2158~2165Journal of Nuclear Agricultural Sciences非生物胁迫诱导的棉花酵母双杂交文库构建及GhJAZ1互作蛋白筛选蔡肖李兴河王海涛刘存敬唐丽媛张素君张建宏*（河北省农林科学院棉花研究所/农业农村部黄淮海半干旱区生物学与遗传育种重点实验室/国家棉花改良中心河北分中心，河北石家庄050051）摘要：非生物胁迫导致棉花生长发育受到抑制，严重影响棉花的产量和品质。

为了深入探究棉花非生物逆境响应的分子作用机制并鉴定GhJAZ1的互作蛋白，本研究以陆地棉标准系TM-1为材料，采用Gateway重组技术构建了非生物胁迫诱导的陆地棉酵母双杂交cDNA文库，获得的初级文库总克隆数为1.2×107 CFU，次级文库总克隆数为1.6×107 CFU，重组阳性率100%，酵母文库滴度为5.0×107 cells·mL-1，酵母克隆平均插入片段>1 000 bp，符合建库标准，可用于后续酵母双杂交筛选。

以GhJAZ1为诱饵，构建pGBKT7-GhJAZ1诱饵蛋白表达载体，经毒性检测及自激活活性检测，明确了诱饵质粒在酵母系统中无毒性和自激活活性，可直接用于酵母文库筛选。

利用酵母双杂交筛选构建的非生物胁迫诱导的酵母cDNA文库，得到72个初筛阳性克隆，经测序、序列比对和酵母回转验证，获得11个与GhJAZ1相互作用的候选蛋白。

选取其中4个候选蛋白，利用酵母双杂交进一步确认了GhJAZ1与候选蛋白的相互作用关系。

本研究结果为深入分析棉花非生物胁迫响应的调控网络奠定了良好的基础，为解析GhJAZ1低温应答分子机理提供了重要参考。

关键词：棉花；互作蛋白；酵母双杂交；非生物胁迫；GhJAZ1DOI：10.11869/j.issn.1000‑8551.2023.11.2158JAZ（Jasmonate ZIM-domain）蛋白作为E3泛素连接蛋白降解复合体SCF COI1的靶蛋白，是茉莉素（jasmonic acid，JA）信号转导途径中重要的转录抑制因子之一［1-2］。

棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及在大肠杆菌中表达

棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因克隆及在大肠杆菌中表达刘相国;杨恭;邱并生;田波【期刊名称】《微生物学报》【年(卷),期】2000(040)004【摘要】用PCR技术从棉铃虫颗粒体病毒基因组中扩增得到增效蛋白基因DNA 序列.PCR产物酶切后克隆至pBluescript质粒中,核苷酸序列测定表明,有8个核苷酸、5个氨基酸与Genbank发表的序列不同.继而构建了表达质粒pET-30a-En,诱导后经SDS-PAGE和Western blot检测,表明获得了增效蛋白基因在大肠杆菌BL21(DE3)中包涵体形式的特异表达.生物测定结果表明,初步纯化的重组增效蛋白具有明显的增效活性,可提高棉铃虫核多角体病毒对3龄幼虫致死率31.7%-34.1%.重组增效蛋白的获得对研究其增效机理及构建新型杀虫剂提供了条件.【总页数】5页(P379-383)【作者】刘相国;杨恭;邱并生;田波【作者单位】中国科学院微生物所分子病毒学开放实验室北京 100080;中国科学院微生物所分子病毒学开放实验室北京 100080;中国科学院微生物所分子病毒学开放实验室北京 100080;中国科学院微生物所分子病毒学开放实验室北京 100080【正文语种】中文【中图分类】Q936【相关文献】1.棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.6kb片段的表达 [J], 胡蓉;孟小林;徐进平;王健;鲁伟2.棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因2.1kb片段在大肠杆菌中的表达 [J], 欧洋;孟小林;徐进平3.棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白基因5'端截短片段的表达及增效活性测定 [J], 刘相国;杨恭;邱并生;张克勤;田波4.乳糖作为棉铃虫颗粒体病毒增效蛋白表达诱导剂的可行性研究 [J], 董琳茜;张克勤;邱并生5.粉纹夜蛾颗粒体病毒全长增效基因在大肠杆菌中的表达 [J], 袁哲明;孟小林;刘树生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

棉铃虫鞣化激素β亚基参与脂肪组织免疫的相关功能基因表达模式

诸多激素及其受体参与的一系列信号通路协同下
，其中&化激素作通路中的
员之
一，还参与免疫等其它功能［1-2］o对棉铃虫
&化激素0亚基(co - 0)及其表达的同聚体激
素进行研究,为研究其参与幼虫生长发育提供理
论基础，且对降低
免疫及抗性、有效控制害
虫，寻找新靶标基因
意义。【前人研究
进展】研究发现，亚基(up -)与0亚基组成的
(河南农业大学植物保护学D/省部共建小J +米作物学国家O点实验S, TU 459002)
摘要：【目的】开究棉铃虫&化激素0亚基参与脂肪组织免疫的相关功能基因表达模式。【方法】］用多肽
激素体外处理与活体RNAt验证，将的&化激素B亚基同聚体重组蛋白，体外处理棉铃虫幼虫脂肪体组
织，分别处理2、2. 5、1和3 h,及体内注射&化激素B亚基dsRNA ,72 h后取样，通过qRT-PCR检测棉铃虫幼
&化激素异源二聚
与其受体G蛋白偶联
受体Richeis特异结合,迅速激活环腺昔/蛋白激
酶 A ( cyclle aLenosine mononhosphate/protein klnase A, cAMP/PKA)信号通路,PKA进一步激活下游关键基因，参与昆虫生长发育宀4。2个亚
基也可在体内形成a亚基或0亚基同源二聚
候是以Rickets .
受体结合，某些组织中
似乎不是通过连接Rickets起作用的，该2种同源
二聚能是
发现的新的受体来调控抗菌
肽表达的4］ o【本研究切入点】刚蜕皮的棉铃虫
表皮是柔软的（在表皮硬化和黑色素化、，并
且
受到伤害和感染。此时可能微生物

棉铃虫磷脂酰乙醇胺结合蛋白的克隆及表达分析

（２．５和５ｍｇ－ｇ）在６ｈ就能降低ＨａＰＥＢＰ的表达量，其ｍＲＮＡ含量随着时间的延长逐渐增加；而高浓度（１０和
１５ｍｇ·ｇ）在１２ｈ才会降低ＨａＰＥＢＰ的表达量，其ｍＲＮＡ含量随着时间的延长先下降后上升。【结论】克隆分析了，， Nhomakorabea，
（１ＣｏｌＩｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ８３００４６；２１ｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐＶａｒｉｅｔｙＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ
ＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｕｒｕｍｑｉ８３００９１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ｔｈｅｏｂｊｅｃｔｉｖｅｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｉｓｔｏｃｌｏｎｅａｎｄａｎａｌｙｚｅｐｈｏｓｐｈａｔｉｄ￣ｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ（ＰＥＢＰ）
ｇｅｎｅｆｒｏｍＨｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａ，ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｔｅｍｐｏｒａｌａｎｄｓｐａｔｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅｉｎＨａｒｍｉｇｅｒａ，ａｎｄｔｅｓｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ
氨基酸序列和蛋白结构进行分析。将ＨａＰＥＢＰ的ＯＲＦ序列连接至ｐＥＴ３２ａ载体并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ
诱导后检测目的蛋白的表达形式，并通过镍柱的亲和层析纯化融合蛋白。最后通过实时荧光定量ＰＣＲ检测棉铃
虫幼虫不同时期和６龄幼虫不同组织中ＨａＰＥＢＰ的表达规律，以及２一十三烷酮处理棉铃虫６龄幼虫后中肠内

棉铃虫鞣化激素基因克隆及分子特性分析

Calliphora erythrocephala颈部结扎,结果发现其胸
部和腹部表皮不能正常黑化，Fraenkel和Hsian （1965）随后将导致这一现象的&化因子命名为& 化激素（Bursicon,burs）［0］。除昆虫外，有关&化激
素在甲壳类动物刀、蛛形纲［/和棘皮动物中也有报
道［4o昆虫在幼（若）虫各龄期及变态期均需蜕去
482 bp,编码159个氨基酸残基，预测该蛋白质分子量为17.7 kDy该基因在卵期第3 d、l龄幼虫第1 d、3 ~5
龄幼虫第1 <1、2和3龄末蜕皮期（31\1和4M）、蛹期第2 d、第3 d和第7 d表达量相对较高。0亚基（GenBank
登录号:AHM2247473. 1）cDNA片段长777 bp,开放阅读框420 bp,编码139个氨基酸残基，预测该蛋白质分子
收稿日期（Received）：2219 -11 -04 基金项目：旦家重点研发计划"黄淮海夏玉米化肥农药减施技术集成研究与示范"（2215YFD0220600））；河南农业大学校创新项目
（KJCX2087A18）;国家自然科学基金（J1601564）;中科院昆虫发育与进化重点实验室开放课题（2029DP17321425 - IDEB - KF
新疆农业科学 2020,57(4) ：589 -599 Xinjiang Agricultural Sciences
doi ： 12.6044/j. inc. 1021 -4330. 2020.04.021
棉铃虫辣化激素基因克隆及分子特性分析
马星宇，嵇玉洁，薛玉莹，杜孟芳，魏纪珍，尹新明，刘晓光,安世恒
590
57卷
旧表皮，形成新表皮，最终形成完整的外骨骼。此

棉铃虫Gq蛋白α亚基基因的克隆及组织特异性表达

棉铃虫Gq蛋白α亚基基因的克隆及组织特异性表达苏宏华;王桂荣;吴孔明;郭予元【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2006(039)004【摘要】[目的]了解棉铃虫体内Gqα的组织特异性表达情况.[方法]利用RACE技术获得了Gqα全长基因,利用半定量RT-PCR研究了该基因的时空表达情况.[结果]从棉铃虫Helicoverpa armigera触角中克隆了一条全长1 101bp的Gqα cDNA 序列,命名为GqαHarm;阅读框全长1 062 bp,编码353个氨基酸残基.GqαHarm与已报道的昆虫Gq蛋白α亚基同源性在90%以上,与近缘种甘蓝夜蛾Mamestra brassicae Gqα的同源性高达96.88%,与家蚕Bombyx mori Gqα的同源性高达97.73%.半定量RT-PCR研究表明,GqαHarm在棉铃虫雌雄成虫触角中表达,在头、胸、腹、足和翅中也有表达,并且表达量差异不显著;此外,在喙、下颚须和下唇须中也有表达;在卵、幼虫、蛹和成虫体内也都有表达;在卵中的表达量最高,而在成虫中的表达量最低,在幼虫和蛹的前、中、后期的表达量差异不大.[结论]研究表明GqαHarm是一种在棉铃虫体内普遍存在的蛋白.【总页数】7页(P734-740)【作者】苏宏华;王桂荣;吴孔明;郭予元【作者单位】中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094;中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094;中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094;中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】S4【相关文献】1.烟夜蛾感觉神经元膜蛋白基因的克隆、序列分析与组织特异性表达 [J], 罗梅浩;蔡永萍;赵艳艳;王甜甜;郭线茹;原国辉2.棉铃虫信息素结合蛋白2 cDNA的克隆、表达与组织特异性表达 [J], 张帅;张永军;苏宏华;高希武;郭予元3.七鳃鳗棕榈酰蛋白硫酯酶1的基因克隆、系统进化及组织特异性表达分析 [J], 李庆伟;赵春晖;齐冬青;王丹;徐玮;曹瀛;刘欣4.棉铃虫嗅觉受体基因的克隆及组织特异性表达 [J], 王桂荣;吴孔明;苏宏华;郭予元5.草莓多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因(PGIP)的克隆及组织特异性表达 [J], 罗娅;汤浩茹;张勇;侯艳霞;蒋豪;张杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

棉铃虫羧酸醋酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析

棉铃虫羧酸醋酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析刘小民;李杰;郭巍;张霞;李新娜【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2011(044)004【摘要】[目的]克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础.[方法]制备抗血清,对棉铃虫(Helicoverpa armigera(Hübner))中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,得到编码棉铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆,利用生物信息学软件和网站进行序列分析,构建原核表达载体进行表达,并以α-醋酸蔡醋溶液为底物进行活性测定.[结果]测序分析表明,羧酸酯酶基因hc3(GenBank登录号:GU119888)全长2 896 bp,编码795个氨基酸.羧酸酯酶HC3的等电点pI为3.94,活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser204,Glu331,His444;第545-773位包含大量高度重复的Gly,Asp、Glu(GDE区域)构成亲水区.该基因在大肠杆菌BL21中成功表达约100 kD的HC3蛋白,检测表达的羧酸酯酶活性为0.32 mmol/100μL酶液.[结论]成功克隆、表达了棉铃虫羧酸酯酶蛋白HC3,并发现GDE亲水结构域.为进一步了解羧酸酯酶的三维结构及其水解作用并设计新型杀虫剂提供了可能.【总页数】8页(P730-737)【作者】刘小民;李杰;郭巍;张霞;李新娜【作者单位】河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,河北,保定,071000;河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,河北,保定,071000;河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,河北,保定,071000;河北农业大学生命科学学院,河北,保定,071000;河北省生物研究所,石家庄,050051;河北农业大学植物保护学院/河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心,河北,保定,071000【正文语种】中文【相关文献】1.香蕉细菌性软腐病菌细胞壁降解酶pelD、pelE基因的克隆表达及活性分析 [J], 任小平;蒲小明;沈会芳;张景欣;林壁润2.大豆蚜羧酸酯酶基因AgCarE的克隆、表达及活性分析 [J], 杨帅;王玲;赵奎军;韩岚岚3.葡萄乙醛脱氢酶VvALDH10A9基因的克隆、表达及酶活性分析 [J], 邢启凯;燕继晔;张玮;刘梅;富春元;李兴红4.棉蚜羧酸酯酶同工酶cDNA片段的基因克隆与序列分析 [J], 李飞;韩召军;王荫长5.金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因的克隆、表达及其生物活性分析 [J], 郭海勇;赵雪;朱小雨;赵研彤;林依丹;施爽;李铄;计银铎;宋勤叶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

棉铃虫蛋白酶体β5基因Habeta5的克隆与序列分析

棉铃虫蛋白酶体β5基因Habeta5的克隆与序列分析王更先;姜振;孔令斐;徐丽;司马杨虎;徐世清【期刊名称】《农业科学与技术（英文版）》【年(卷),期】2008(009)006【摘要】[目的]克隆棉铃虫（Helicoverpa Armigera）克隆蛋白酶体β5基因的分子生物技术，该研究旨在为进一步研究棉铃虫蛋白酶体β5基因的功能提供依据。

[方法]从棉铃虫中肠中提取总RNA。

通过使用CDNA末端（RACE）技术的快速扩增来克隆HABETA5基因的全长cDNA，然后进行序列分析。

[结果]成功克隆和分离的全长cDNA序列，命名为Habeta5。

它的长度为947bp，含有ORF （843bp）和编码的280个氨基酸残基，预测质量为30.87kd和9.60的等电点（pi）。

在推导的氨基酸序列中，蛋白酶体β5亚基结构域位于74至261℃〜261st氨基酸残基之间。

它对其他昆虫如果蝇黑素转渣有超过62％的身份。

蛋白酶体β5亚基保守区彼此非常相似。

邻居加入方法的分子演化表明Habeta5与物种的其他蛋白酶体β5亚基同源。

[结论]序列对准表明克隆片段是蛋白酶体β5亚基基因（GenBank登录号：FJ358434）。

【总页数】5页(P27-30,145)【作者】王更先;姜振;孔令斐;徐丽;司马杨虎;徐世清【作者单位】苏州大学现代丝绸国家工程实验室,苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学现代丝绸国家工程实验室,苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学现代丝绸国家工程实验室,苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学现代丝绸国家工程实验室,苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学现代丝绸国家工程实验室,苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州,215123;苏州大学现代丝绸国家工程实验室,苏州大学基础医学与生物科学学院,江苏苏州,215123【正文语种】中文【中图分类】S4因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡β-防御素7的克隆及表达

鸡β-防御素7的克隆及表达易道生;魏晓东;缪永建;陈燕飞【摘要】A pairs of primers used in polymerase chain reaction (PCR) was designed following the NM_001001194 from GenBank to amplify the beta defensin 7 gene of chicken. The total RNA was isolated from spinal cord cells of chicken,and the first cDNA strand was obtained by approach of reverse transcription PCR. The products of PCR were linked with T plasmid vectors,and then transformed into Escherichia coli(E. Coli) DH5αstrain cells subsequently. Expressional plasmid vector,pET32a-gal7,was reconstructed with restriction endonuclease Hind Ⅲ and BamH I. Recombinant plasmid vector,pET32a-gal7,was induced with Isopropyl-β-D-Thiogalacto Pyranoside (IPTG) in E. Coli DE3 strain cells to produce recombinant Gal7 protein. The results showed that the cloned cDNA sequence of beta defensin 7 gene of chicken was comprised of 132 nucleotide acid residues,and encoded the beta defensin 7 with 44 amino acids and predicted molecular weight 4923.81Da. The identity to NM_001001194 is 99%. The recombinant peptides had strong antibacterial activity against staphylococcus aureus in vitro.%以NCBI已登录的鸡β-防御素7(登录号:NM_001001194)为模板,设计特异性引物,扩增鸡β-防御素7基因,目的基因与pET32a载体相连,构建表达质粒并导入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达和抗菌试验.结果表明,PCR扩增的目的片段,经测序证明与鸡β-防御素7基因NM_001001194序列同源性达99%,经IPTG诱导表达的重组蛋白与预期大小相符.平板抑菌试验结果表明,该重组多肽对金黄色葡萄球菌有较强的抗菌活性.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2018(045)002【总页数】5页(P130-134)【关键词】β-防御素;克隆;原核表达;基因重组【作者】易道生;魏晓东;缪永建;陈燕飞【作者单位】韶关学院英东生命科学学院,广东韶关 512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关 512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关 512005;韶关学院英东生命科学学院,广东韶关 512005【正文语种】中文【中图分类】S813.3;Q786抗菌肽是具有抗菌、抗病毒作用的小分子多肽，防御素是一类重要的抗菌肽，抗菌肽广泛存在于动物、植物和微生物中，哺乳动物防御素包括α-防御素、β-防御素和θ-防御素三亚类［1-2］。

棉铃虫β-actin基因的克隆、表达及多克隆抗体制备

棉铃虫β-actin基因的克隆、表达及多克隆抗体制备黄丽娜;程婷婷;王新绘;魏原杰;赵洁;李金耀;刘小宁【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2015(000)012【摘要】As one of the important internal controls,β-actin plays an crucial role in maintaining cell structure, cell movement, and cell division of physiological activity. It is one of the widely used internal controls in the detection of gene transcription and protein level. In this study,β-actin gene was cloned from cotton bollworm.Bioinformatics analysis showed that the open reading frame ofβ-actin was 1 131 bp, encoding 376 amino acids, the theoretical molecular weight was 41.77 kD, and isoelectric point was 5.16. The similarity of amino acid between theβ-actin of cotton bollworm and one of other species was 98%-99%, while 99% similarity withBombyx mori. Analysi s ofβ-actin antigenic determinant sites from cotton bollworm andMus musculus indicated that their homology was 70.63%. Concurrently,β-actin protein from prokaryotic expression of the gene was purified, and Western blot analysis showed that the expression was correct. The purified protein was used to immunize ICR mouse 4 times, the titer of mouse antiserumβ-actin reached 388 800 by ELISA assay. Moreover, the antiserum was able to specifically bind with the total protein of the cotton bollworm.%克隆获得了棉铃虫β-actin基因，生物信息学分析表明，基因序列长1131 bp，编码376个氨基酸，理论分子量为41.77 kD，理论等电点5.16。

β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的克隆与表达

β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的克隆与表达
王广慧;张明;魏群
【期刊名称】《北京师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】2005(41)4
【摘要】为研究重组β琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其生物活性,根据GeneBank中β琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体PQE30中,测序结果证明合成基因序列正确,未改变读码框.然后将此表达载体转入E.coliM15中进行诱导表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测其相对分子质量并鉴定其生物活性.结果表明:其相对分子质量约为5.0×104,与预期相符,具有生物活性.
【总页数】5页(P415-419)
【关键词】β-琼脂糖酶(AgaA7);基因重组;蛋白表达;生物活性
【作者】王广慧;张明;魏群
【作者单位】北京师范大学生命科学学院;吉林农业科学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q785
【相关文献】
1.几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因克隆微生物表达和抑菌效果研究 [J], 刘玲玲;张金文;王旺田;陈正华
2.β-琼脂糖酶(AgaA7)在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究 [J], 王广慧
3.牛瘤胃宏基因组文库来源的新型木聚糖酶基因的克隆、表达及酶学性质 [J], 姚健;陈庆隆;钟国祥;马吉平;桂伦
4.草酸青霉外切葡聚糖酶基因(cbh1)克隆及其在毕赤酵母中的表达和重组外切葡聚糖酶特性分析 [J], 赵萱;顿宝庆;顾金刚;王智;田谷;许修宏;路明;李桂英
5.几丁质酶基因和β-1.3-葡聚糖酶基因的克隆及双价基因在枯草芽胞杆菌B-908中的表达 [J], 王益民;唐文华
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棉酚诱导的棉铃虫P450 GIP的分离鉴定和功能研究的开题报告

棉酚诱导的棉铃虫P450 GIP的分离鉴定和功能研究的开题报告一、研究背景棉铃虫是棉花的重要害虫之一，它能够对棉花造成严重的损害，降低棉花的产量和质量。

目前，对棉铃虫的防治主要采用化学手段，如杀虫剂等。

然而，长期的使用会导致虫害抗性的出现，并且对环境和人体健康也存在危害。

因此，寻找一种新的、具有高效和环保作用的防治方法具有重要意义。

棉酚是一种植物次生代谢产物，它在棉花和一些其他植物中广泛存在。

研究表明，棉酚能够诱导棉铃虫体内的某些代谢酶发生变化，从而影响其生命活动。

其中，P450 GIP是棉铃虫中重要的一种P450代谢酶。

因此，分离鉴定和功能研究棉酚诱导的棉铃虫P450 GIP具有重要意义，可以为制定新的防治策略提供理论基础。

二、研究内容和目标本研究将分离鉴定棉酚诱导的棉铃虫P450 GIP基因序列，并对其进行功能研究，以揭示其在棉铃虫代谢中的作用。

具体研究内容和目标包括：1.通过RT-PCR构建棉铃虫P450 GIP cDNA文库；2.对棉铃虫P450 GIP基因进行克隆和序列分析；3.利用qRT-PCR技术分析棉酚对P450 GIP基因的表达调控作用；4.利用RNAi技术研究P450 GIP基因的功能。

三、研究方法1.棉铃虫P450 GIP基因的克隆与序列分析：通过RT-PCR构建棉铃虫P450 GIP cDNA文库，利用PCR技术对其进行克隆和序列分析，包括测序、序列比对和进化树构建等。

2.棉酚对P450 GIP基因的表达调控：利用qRT-PCR技术对棉铃虫不同发育阶段和不同棉酚浓度下P450 GIP基因的表达水平进行分析，以揭示棉酚对P450 GIP基因的表达调控作用。

3.棉铃虫P450 GIP基因的功能研究：利用RNAi技术对P450 GIP基因进行干扰，观察其对棉铃虫生长发育和代谢活动的影响。

四、研究意义和预期成果本研究将探究棉酚诱导的棉铃虫P450 GIP在棉铃虫代谢中的作用机制，为开发新的、环保的棉铃虫防治策略提供理论基础和技术支持。

组织蛋白酶B在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性研究

组织蛋白酶B在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性研究杨晓梅;侯立静;董杜鹃;王金星;赵小凡
【期刊名称】《山东大学学报：理学版》
【年(卷),期】2005(40)5
【摘要】运用原位水解电泳、免疫印迹和免疫组织化学等方法系统研究了组织蛋白酶B(HCB)在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性变化规律.研究显示,HCB的表达和活性随着胚胎发育的进行逐渐下降;整个幼虫阶段都没有HCB的表达和活性;整个蛹和成虫阶段虽然都有HCB的表达,但HCB的活性只能在发育晚期的蛹和成虫组织中检测到.这些现象表明,HCB的表达和活化属于翻译后控制,同时与棉铃虫的个体发育和组织分化有着密切的关系.
【总页数】6页(P119-124)
【关键词】组织蛋白酶B;棉铃虫;个体发育;酶活性
【作者】杨晓梅;侯立静;董杜鹃;王金星;赵小凡
【作者单位】山东大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q556.9
【相关文献】
1.泥蚶(Tegillarca granosa)个体发育过程中同工酶基因表达与调控的研究 [J], 苏秀榕;吕振明;李太武;林志华;柴雪良
2.白鲢个体发育过程中同工酶基因的表达与调控研究 [J], 吴力钊;王祖熊
3.棉铃虫组织蛋白酶B酶原在大肠杆菌中的表达及纯化 [J], 杜欣军;邵红莲;邵丁丁;赵小凡;王金星
4.棉铃虫组织蛋白酶B酶原在毕赤酵母中的表达 [J], 董杜鹃;扈进冬;张新昌;李子劲;王金星;赵小凡
5.棉铃虫组织蛋白酶B在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定 [J], 邵红莲;赵小凡;董杜鹃;扈进冬;邵丁丁;杨晓梅;王金星
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棉铃虫组织蛋白酶B多克隆抗体制备及鉴定

棉铃虫组织蛋白酶B多克隆抗体制备及鉴定安晓萌;邵红莲;杜欣军;赵小凡;王金星【期刊名称】《昆虫知识》【年(卷),期】2004(41)2【摘要】介绍了用重组的棉铃虫组织蛋白酶B(HCB)制备兔多克隆抗体的方法。

用已经克隆得到的pGEX 4T 1 HCB重组质粒转化的大肠杆菌 (Escherichiacoli)BL2 1菌株进行诱导表达 ,获得融合表达的包涵体产物。

经过变性、复性等方法处理包涵体 ,获得可溶性融合蛋白。

用凝血酶裂解融合蛋白 ,再经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化目的蛋白HCB ,用做抗原免疫家兔。

产生的抗血清经硫酸铵沉淀 ,最后得到了抗棉铃虫组织蛋白酶B的多克隆抗体。

用间接酶联免疫吸附测定法测得该抗体对重组表达的组织蛋白酶B和棉铃虫体内的组织蛋白酶B的效价分别为1∶5 1 2 0 0和1∶2 5 60 0。

通过免疫印迹检测证明此抗体不仅可以识别重组表达的棉铃虫组织蛋白B ,而且可以识别棉铃虫卵巢匀浆液中的棉铃虫组织蛋白酶B。

【总页数】5页(P132-136)【关键词】棉铃虫;组织蛋白酶B;多克隆抗体;制备;鉴定;免疫印迹;重组表达【作者】安晓萌;邵红莲;杜欣军;赵小凡;王金星【作者单位】山东大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】S435.622.3【相关文献】1.棉铃虫类肌钙蛋白多克隆抗体的制备与鉴定 [J], 尼加提·迪里木拉提;赵洁;艾新宇;刘小宁2.建鲤组织蛋白酶L的原核表达、纯化鉴定及多克隆抗体的制备 [J], 李树红;陈志光;李冉;李新;李松;陈秀华;蒋然然;李美良;马璐阳3.棉铃虫Hsp70的多克隆抗体制备及鉴定 [J], 陈伟;李玉娟;洪敏晶;林月霞;施静雯;罗利琼;覃富健4.棉铃虫激活增强子结合蛋白AP-4基因的原核表达、多克隆抗体制备、表达谱分析及功能鉴定 [J], 王婷婷;索倩;孙晓燕;马跃敏;刘凯于;彭建新;彭蓉5.抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 杨晓梅;侯立静;康翠洁;邵红莲;张新昌;杜欣军;王金星;赵小凡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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质进行降解＿。在真核生物中，４］最普遍的蛋白酶体形式
是２Ｓ蛋白酶体，６包含１２个０Ｓ核心颗粒和２１个９ｓ调节颗粒。所有的２０Ｓ核心颗粒都是由４个堆积的七元环所组成，个外环由７２种不同的亚基组成，内环２个由７种不同的亚基组成ｌ。ａ和亚基在结构上具有５］
害虫，可危害多种果树和蔬菜。人们在遗传及分子水平
上对其进行了广泛而又着有成效的研究。该试验以果
果蝇Ｐｏ２基因属于显性温敏性致死突变基因ｒｓ１ｆ
第一作者简介：王更先（９１）男，１８一，山东汶上人，士，博现从事分子
泛素（ｉｉｎＵ）Ｕｂｕｉ，Ｂ依赖和非ＵｑｔＢ依赖２种途径对蛋白
的甘氨酸（ｌｉｅＧ）变为精氨酸（ｒｎｎ，造成Ｇｙｎ，突ｃＡｇｉｅＲ）的。这个突变体的表型为突变杂合体在２＇］９Ｃ饲养，会
造成腹部组织细胞增值降 ℃饲养正常生长发育。当温在５度大于等于２ ℃时，２突变双杂合体会在幼虫早期死亡。
遗传与基因工程的教学与研究工作。Ｅｍｉｇｎｘｎａｇｓ－ａ：ｅｇｉｗｎ＠ｉｌａ —
ｎａ．ｃｏ。ｎ
蝇Ｐ０ｒｓ１为质询序列，利用ＲＣＡＥ技术获得了棉铃虫蛋白酶体亚基的全长ｃＮＤＡ序列，并分析了其核苷酸和氨基酸序列及基因表达谱，为进一步研究该基因在棉
含１８６ｂ个４ｐ的完整开放读码框（Ｒ）列，码蛋白质为２１个氨基酸残基，测分子量ＯＦ序编８预
３．７ｋ等电点为８０。Ｈａｒｆ蛋白质在４￣２９氨基酸残基位置为蛋白酶体亚基的保００Ｄ，．４Ｐｏ７ｌ０２守区域。Ｃｕｔｌ进行多序列比对发现，Ｐｏ７编码蛋白质与果蝇等昆虫蚤白酶体具有ｌｓａＷＨａｒｉｆ６以上的同源性，白酶体的保守区域高度一致。邻近（Ｊ法分子进化分析也显示，３蛋Ｎ）
通讯作者：世清（９３）男，士，徐１６一，博教授，现从事分子遗传及发育
・
生物技术・
北方园艺ｅＯ４：８１Ｏ（）３４ｌＺ１～２
具有蛋白酶体亚基功能的棉铃虫Ｈａｒ／基因的克隆与序列结构及表达研究Ｐｏ７？
王更先，司马杨虎。，张升祥。，徐世清
（．１苏州大学现代丝绸国家工程实验室，苏州大学基础医学与生物科学学院，苏苏州２５２；．江１１３２邯郸学院生物科学系，北邯郸０６０河５０５
遗传学和生物化学证据表明，该表型是由于突变影响到了蛋白酶体的功能所造成的［１。据报道可以在活的生
物体内利用显性温敏性致死突变的性质来操纵蛋白酶
同源性，其中亚基为结构性蛋白，』而９亚基则发挥主要
的催化作用ｌ。在昆虫领域特别是果蝇，＿６］人们对蛋白酶体的结构及功能进行了深入的研究，目前已证明蛋白酶体在蛋白质质量控制、细胞凋亡、热休克应答、缺氧型免疫应答、配子形成和转录因子调控等生理方面起着重要
Ｈａｒｆ编码蛋白质与其它生物蛋白酶体进化上同源。基因表达谱分析结果表明，ｐｏｑＰｏ７Ｈａｒｉｆ在体壁、中肠和生殖腺中表达量较高，头部表达量最少。在
关键词：棉铃虫；白酶体；蛋克隆；Ｐｏ７Ｈａｒｆ基因；ＡＣｌＲＥ
（ｍｉａｔｅｅａｕｅｓｎｉｖｔａｍｕａｔ，）因Ｄｏｎｎｍｐｒｔｒ－ｅｓｉｅｌｈｌｔｎｓＤＩ，ｔｔｅＳ
此通常被称为ＤＳ，由于蛋白酶体亚基第１０位Ｔ７是７
真核生物、细菌和古细菌中普遍存在＿。它主要通过１～
３山东农业大学林学院，．山东泰安２１１７０８）
摘
要：以棉铃虫中肠总ＲＡ为模板，Ｎ利用快速扩增ｃＮＤＡ末端（ＡＥ技术克隆了棉铃虫ＲＣ）
蛋白酶体亚基基因的ｃＮＤＡ序列，并对所得基因进行了序列分析。结果表明：棉铃虫蛋白酶体亚基基因的ｃＮＤＡ序列亚基全长１０７ｂ，名为ＨａｒｆＧｅｅａｋ登陆号：Ｊ７９２，０ｐ命Ｐｏ７（ｎＢｎｌＦ３８０）包
中图分类号：３．２．文献标识码：文章编号：０－００（００２一Ｏ３ —０Ｓ４５６２３Ａ１１０９２１）４１８５０
蛋白酶体是一种具有多种蛋白水解功能的大分子复合物，在细胞内蛋白质的降解过程中起重要作用，在
的作用。
体的功能，同时改变温度也会影响生物体的存活。这为害虫防治提供了一个很好的思路。在这方面目前已创建了ＵＳＰｏ２１ＵＳＰｏ２等转基因系统＿引。Ａ－ｒｓ６和Ａ－ｒｓ１１ｆ１ ¨
棉铃虫（ｌｏｅｐｒＨｅｃｖｒａａｍ＠ｅａ是一种世界性农业ｉｒ）