核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应用_何亚琴

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， 减少病毒经输血传播发生率 ， 大大提高了输血
和血液制品的安全。本站作为卫生部指定首批 15 所 NAT 检 试点采供血机构之一， 自 2010 年 4 月开始对采集的无偿 测， HCV 和 HIV 的 NAT 检测， 献血者血液进行 HBV、 现报道如 下。 1 1. 1 材料与方法 标本来源与处理 2010 年 4 月 ～ 2011 年 3 月本站共收
HBsAg、 HCV、 HIV ELISA 检测均为阴性的合格血 检测， 抗抗-
2011 ， Vol． 24 ， No． 07 中国输血杂志 2011 年 07 月第 24 卷第 07 期 Chin J Blood Transfusion July，
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液共 51 991 份。 ELISA 单项阳性 98 份， 其中 HBsAg 单项阳 HCV 单项阳性 57 份， HIV 单项阳性 20 份。 抗抗性 21 份， 2. 2 核酸检测结果 对血清学检测为阴性的 51 991 份合格 血液进行核酸检测， 有 53 例核酸检测阳性 （ 罗氏诊断 血筛 HCV 和 HBV 3 项联合检测， 试剂是 HIV、 尚不能区分具体项 CT 值为 目） 。其中 1 例混检三联检测 HBV / HCV / HIV 核酸， 31. 6 ， CT 值为 28. 5 ； 血 拆分三联检测 HBV / HCV / HIV 核酸， HCV、 HIV、 TP 均为阴性。 站传染因子 HBsAg、 抗抗抗2. 3 确认试验 将 53 份核酸检测阳性标本送至卫生部临 43 例 HBV 检中心确认， 其中 9 例为 HBV / HCV / HIV 阴性， DNA 阳性， 2 例 HCV RNA 及 HBV DNA 阳性， 1 例 HIV RNA 阳性（ 表 1 ） 。 2. 4 追踪研究结果 对上述 1 名怀疑感染 HIV 的献血者， 在献血后 d 20 和 d 35 用样本的再次混样模式三联合检测 HBV、 HCV、 HIV 核酸， CT 值为 21. 1 ， ELISA 检测发现 HIV 2 次检测转阳、 梅毒也转阳。 根据 WB 确证试验的结果， 该献 无带型， 为阴性； 献血后 d 20 标本带型为 血者献血日标本， gp160 p24 ； d35 标 本 带 型 为 gp160 gp120 p66 p55 gp41 p31 p24 p17 ， 1 抗体阳性， 为 HIV证实为 HIV 感染者。 2． 5 ELISA 单项阳性确认结果 98 份 ELISA 单项阳性 \ 核 酸检测阴性． 具体结果为 HBsAg 单项阳性 21 份， 确认阳性 2 19 份阴性。抗HCV 单项阳性 57 份， 份， 确认阳性 8 份， 不确 32 份 阴 性。 抗HIV 单 项 阳 性 20 份， 定 17 份， 确认全为阴 性。 3 讨论 Probe / 目前应用 于 血 液 筛 查 的 NAT 技 术 主 要 有 GenChiron 公司的转录依赖扩增技术 （ TMA ） 和罗氏诊断公司的
HBV、 HCV 和 HIV 的输血传播一直是国内外输血安全 领域最关注的热点之一 。 虽然通过对血液进行输血相关病 毒的抗原或抗体的检测 ， 使输血传播疾病的发生率明显降 但输血传播疾病仍时有发生 低， 期” 病毒感染
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。其中， 90% 以上 HBV 和
HIV 的传播风险及 75% 以上 HCV 的传播风险来自于 “窗口 。 现有的 ELISA 法还不能检测出处于血清 “窗口期” 转换前的 病毒感染。而近年来发展的高度敏感 、 特 “窗口期 ” 异的核酸扩增技术（ NAT） 可以将上述病毒的检测 明显缩短
DOI:10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2011.07.016
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2011 ， Vol． 24 ， No． 07 中国输ood Transfusion July，
· 血站核酸检测专题 ·
核酸检测技术在常州地区献血筛查中的应用
5 ］ COBAS Taqman 方法［4， 。我们采用后者从 ELISA 检测合格
关系， 故认为 2 种方法的检测结果有互补之效 ， 而不是简单 NAT 技术用于献血者血液筛查可以提高输血 的重复。总之， 安全系数， 保护献血者资源， 保证用血安全， 降低输血所引发 的疾病传播的可能性。 表1
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 CAPCTM （ IU / ml） HBV 208 HBV 29. 7 HBV 38. 5 HBV 43 HCV ＜ 15 HBV 22 HBV 25. 1 HBV 32. 6 HBV 40 HBV 43. 1 HBV 445 HBV ＜ 10 600 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HCV ＜ 15 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 12 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HBV ＜ 20 HIV 1000 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性
集无偿献血者标本 53 041 人份。 所有固定捐血点配备水平 离心机， 采血结束后立即由采血人员完成对每位献血者 4 管 标本的留取： 分离胶促凝真空采血管 （ 1 管 5 ml ） 用于酶免 4 ALT 检测； 带分离胶 EDTAK2 抗 凝 真 空 采 血 管 （ 1 管 5 项、 ml、 1 管 8 ml） 用于核酸检测； EDTAK2 抗凝真空采血管 （ 1 管 5 ml ） 用于血型检测； 同时记录采集日期、 样品编码等信 息。所有标本均在 2 h 内经过离心后保存于 2 ～ 8℃ 的冰箱。 流动采血点在 2 ～ 3 h 内取回站部， 全天至少 3 次， 与检测中 心交接后离心保存， 在 24 h 内进行血清学筛查和 NAT 检测。 1. 2 试剂与仪器 HBsAg ELISA 检测试剂 （ 上海科华生物 201003061 、 201006032 、 批号： 200911021 、 工程股份有限公司， 201011031 ； 英 科 新 创 科 技 有 限 公 司， 批 号： 2009095113 、 2009115116 、 2010025103 、 2010065107 、 2010075110 、 2010095114 ） 、 HCV ELISA 检测试剂 （ 上海科华生物工程 抗200910031 、 200912031 、 批 号： 200907047 、 股 份 有 限 公 司， 201002021 、 201007011 、 201012011 ； 英科新创科技有限公司 ， 批 号： 2009095820 、2009125826 、2010035805 、2010065812 、 2010075814 、 2010105821 ） 、 HIV1 /2 ELISA 检 测 试 剂 （ 北 抗-
病毒载量实验及乙肝两对半结果
何亚琴 摘要：目的 张建伟 杨爱龙 濮云峰 庄华（ 常州市中心血站， 江苏 常州 213003 ） 采用罗氏诊断 cobas s 201 系统
评估核酸检测技术（ NAT） 应用于献血者血液筛查必要性 。方法
HCV 和 HBV 三项联合 对 2010 年 4 月 ～ 2011 年 3 月的血站常规 EIA 检测合格献血者的 53 041 人份标本进行 HIV、 筛查， 并对 NAT 筛查阳性的标本做确证试验 。 结果 53 041 人份血液标本中， HBsAg、 HCV、 经过血清学检测， 抗NAT 系统应用于献 HIV ELISA 检测均为阴性的合格血液共 51 991 份。其中， NAT 共检出阳性 53 例， 抗阳性检出率为 0. 1% ， 分项确 “窗口期 ” ， 证实验怀疑其中 1 例血液标本处于 HIV 病毒 追踪检测证实其 HIV 呈阳性。 结论 关键词：核酸检测（ NAT） ； HIV； HBV； HCV； 血液筛查； 血液安全 中图分类号：R446. 6 Q52 文献标识码：A 549X（ 2011 ） 07056003 文章编号：1004京 万 泰 生 物 药 业 股 份 有 限 公 司 ，批 号： H20090904 、 H20091105 、 H20100302 ； 上海科华生物工程股份有限公司 ， 批 201007031 、 201012011 ； 英 科 新 创，批 号： 号： 201005011 、 2009096615 、 2009126620 、 2010026604 、 2010066609 、 2010076612 、 2010116615 ） 。HBV、 HCV 和 HIV 核酸的提取试 M13841 、 剂和 检 测 试 剂 （ 罗 氏 诊 断 公 司， 批 号： M12236 、 N00829 、 N03426 、 N00883 、 N12813 ） 。 cobas s 201 全自动核酸 COBAS 提取、 扩增检测系统： Hamilton STAR 全自动混样仪、 Ampilprep 核酸提取仪及 COBAS Taqmen Analyzer 核酸扩增 检测仪（ 罗氏诊断公司 ） 。 Freedom evoclinical 全自动加样仪 （ TECAN 公司） ； FAME 酶免分析仪 （ Hamilton 公司 ） ； 低速离 心机（ KCD 公司） ； MPR 1410R 冰箱（ SANYO 公司） 。 1. 3 检测流程 当日完成 2 遍 ELISA （ 国产试剂 ） 检测， 次 日上午 NAT 检测和 ELISA 复查同时进行。 酶免阴性、 单阳 复查标本随机混合后用 NAT 法检测， 酶免双阳标本做单标 本检测。 1. 4 标本混合（ pooling） 和检测 每个一级混样池 （ pool ） 包 每个标本取 167 μl 血浆至一级混样 含 6 个无偿献血者标本， 池， 全自动混样仪加样。 一级混样池标本采用 COBAS Taqsceen MPX 检测试剂， 在全自动核酸提取仪中应用 MGP 磁珠 HCV、 分离技术提取核酸， 核酸扩增检测仪扩增检测 HBV、 HIV 靶序列， 在 PDM 服务器（ 罗氏诊断 cobas s 201 系统自带 的服务器 ） 中 自 动 判 读 结 果。 每 组 检 测 均 设 置 质 控 对 照 （ HBV / HCV / HIV1O / HIV1M / HIV 2 ） 。每个一级混样池均 IC） 。阳性一级混样池拆分为 6 个 含内对照（ internal control， 组， 组成该一级混样池的原始标本做单标本检测 ， 单标本检 测阳性判定为 NAT 阳性， 单标本检测阴性判定为 NAT 阴性。 1. 5 NAT 阳性标本的确证 将 NAT 检测显示阳性的标本 HCV RNA 和 HIV RNA 的 送至卫生部临检中心作 HBV DNA、 分项确证。 2 2. 1 结果 血清学检测结果 53 041 人份血液标本中， 经血清学 HBV 和 HCV 等检测的 “窗口期” ， 血者血液筛查有助于缩短输血性 HIV、 提高血液及输血安全。