HIV核酸检测技术及应用

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HIV病毒核酸检测——标本保存

HIV病毒核酸检测——标本保存

HIV病毒核酸检测——标本保存1. 概述HIV病毒核酸检测是一种常用的检测方法,用于确定个体是否感染了HIV病毒。

在进行这项检测时,标本的保存非常重要,以确保准确性和可重复性。

2. 标本类型常用的HIV病毒核酸检测标本类型包括血液、唾液、尿液和白带/前列腺液等。

每种标本类型在采集和保存过程中都有特定的要求。

3. 标本采集与保存3.1 血液标本- 采集血液标本时应严格按照无菌操作规范进行,避免任何污染。

- 血液标本需尽快送至实验室进行HIV病毒核酸检测。

- 如果无法立即送达实验室,应将血液标本保存在低温(2-8摄氏度)条件下,避免冷冻。

3.2 唾液标本- 唾液标本采集时,应避免进食、喝水或进行口腔卫生操作。

- 采集足够的唾液,确保足够的样本量。

- 唾液标本在采集后应立即送至实验室进行处理。

3.3 尿液标本- 采集尿液标本时应保持尿液的无菌状态,避免污染。

- 标本采集后应尽快送至实验室,以确保样本的可靠性。

3.4 白带/前列腺液标本- 在采集白带/前列腺液标本时,需要特别注意避免其他物质的污染。

- 采集后的标本应保持无菌状态,并在尽快时间内送至实验室。

4. 标本保存时间- 不同的检测方法对标本保存时间有不同的要求,请根据实验室指导或专业人士建议确定保存时间。

- 在标本保存期间,应妥善保存标本以防止损坏或污染。

5. 标本运输- 在标本运输过程中,需要遵循一定的操作规范,以确保安全性和准确性。

- 使用合适的运输,并在运输过程中避免温度过高或过低。

6. 结论HIV病毒核酸检测标本的采集和保存对于确保检测结果的准确性和可靠性至关重要。

在进行标本采集和保存时,请严格按照相关操作规范和实验室指导进行,以确保最佳的检测效果。

HIV不同病程分子生物学检测

HIV不同病程分子生物学检测

HIV不同病程分子生物学检测及结果解读1310115117 刘航齐一、HIV核酸检测HIV核酸检测有定性和定量两类,前者用于HIV感染的辅助诊断,后者常用于监测HIV感染者病程进展和抗病毒治疗效果。

1. PCR检测法(多聚酶链反应)PCR就是利用DNA聚合酶复制DNA的特性,把生物体内的半保留增殖DNA的过程在体外实验条件下完成。

传统的PCR技术比较简便、快捷,但是容易导致“污染”,出现假阳性结果. 另外,HIV基因多样性,没有一套引物可覆盖所有HIV序列,使检测敏感性受到限制。

从而限制了PCR临床诊断HIV。

不同病株存在遗传变异性,进行PCR扩增时应选择病毒基因组中的高度保守序列区设计引物。

当核酸检测阳性,应重复采集样品进行复测,复测结果呈核酸阳性反应则判断为核酸阳性,复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果,需进一步随访检测。

HIV核酸检测阴性,只报告本次试验结果阴性。

2. 刷状DNA检测法刷状DNA检测法是定量检测血浆中HIV-1型RNA的一种方法。

该技术基于分支DNA信号扩大系统,是人工合成的带有侧链DNA片段,在每条链上都可以标记可被激活的标记物。

通过发光强度来定量,发光强度与HIV-RNA含量呈比例。

3. 核酸序列扩增系统核酸序列扩增系统又称自主序列复制系列或再生长序列复制技术,是以RT-PCR为基础,但它无需将逆转录和PCR扩增分作两部进行,将靶核酸RT-DNA 扩增和信号放大扩增。

4. 基因芯片技术基因芯片技术是20 世纪90 年代末发展起来的新技术,是在厘米见方的固相载体上,将基因以微点阵的形式排列,应用核酸杂交的原理来检测未知基因,具有操作简单、自动化程度高、检测靶分子种类多、成本低、结果客观性强等特点基因表达、肿瘤诊断、遗传病诊断、基因分型等诸多领域得到广泛应用。

对于抗HIV逆转录酶和蛋白酶药物的耐药性分析、型检测结果较好,但对非B亚型的耐药性检测存在漏检和错检。

二、HIIV抗体的确证目前我国HIV抗体确证实验采用的方法是免疫印迹法,也就是westen blotting实验,简称WB。

艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范

艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范

艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范1 范围本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测(病毒载量)的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准,适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。

2 核酸检测的意义核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测。

2.1 感染诊断2.1.1 作为补充试验:用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定;对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。

对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者,也可进行核酸检测,结合临床综合判断。

2.1.2 急性期诊断:对近期有明确流行病学史的个体,包括患有性病或有性病史,有同性和异性性接触不安全性行为,有共用注射器吸毒史,有医源性暴露史,有职业暴露史,HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣,HIV/AIDS 母亲所生子女等,如抗体筛查试验无反应,可通过核酸检测判定是否为急性期感染。

核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。

2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿,不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。

18个月龄以上儿童诊断与成人相同。

2.2 血液筛查:对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测,可及时发现窗口期感染,降低输血的“残余危险度”,减少二代传播。

2.3 抗病毒治疗效果监测HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物治疗后,定期进行HIV-1病毒载量检测,可判断抗病毒药物治疗的疗效。

病毒载量结果动态分析,对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。

一般启动抗病毒治疗6个月后应进行病毒载量检测,以监测治疗效果,每年应检测一次。

治疗前进行检测可了解病人的病毒载量基线,有助于评价治疗后效果。

如适时重复检测病毒载量,没有低于检测限,需要考虑治疗是否失败。

HIV检测技术的现状及进展

HIV检测技术的现状及进展

HIV检测技术的现状及进展HIV病毒引发艾滋病的一种严重传染病。

早发现HIV病毒是预防和控制艾滋病最有效的措施,随着生物检测技术的发展,HIV检测技术有了巨大的发展,且诊断的正确性和可靠性大大提高。

本文就来HIV检测的现状及进展综述如下。

1检测技术1.1HIV抗体检测酶联免疫吸附法(ELISA)ELISA是HIV抗体检测常用方法之一[1]。

ELISA试剂在经历到第4代,也就是我们现在所用的抗原抗体联合检测试剂,第4代检测试剂检测窗口期明显缩短。

ELISA法目前仍然是最常用的筛查试验。

明胶颗粒凝集试验(PA)PA是一种快速、简便的筛查试验,适合对少量标本的检测,但灵敏度和准确度不如ELISA法。

金标快速反应试验用于快速检测HIV抗体。

特点:出结果快,特异性好,快速简便,适用于应急检测以及边远地区检测。

免疫印迹试验被称为HIV抗体检测的“金标准”,它通过电泳把蛋白带分离开来,再把不同蛋白转移到醋酸纤维素膜上,每一条醋酸纤维素薄膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原[2]。

免疫层析/渗滤实验是近年迅速发展起来检测方法[3]。

特异性好,敏感度也较高,适宜于偏远地区临床用血检测。

免疫荧光试验(IFA)此法操作简便,敏感性及特异性较ELISA法高,但对某些血清非特异性荧光难以去除,仪器价格昂贵,结果判断主观性强。

无创性HIV抗体检测[4] 适用于人体体液检测HIV。

这些体液的收集避免静脉穿刺,优点是标本来源是无创的,易被接受,尤其是采血困难的人群,缺点是不适合大量样品的同时检测。

1.2非HIV抗体检测核酸检测包括PCR和RT-PCR,可分为定性检测和定量检测两大类。

①定性检测 HIV核酸定性检测常用PCR,检测前病毒DNA序列,RT-PCR检测血浆中HIV的RNA。

是HIV感染早期检测手段之一。

②定量检测HIV核酸检测即病毒载量测定,一般以拷贝数来表示。

病毒载量测定主要用于评估HIV感染的进程、监测抗病毒治疗效果以及HIV感染早期的辅助诊断[5]。

艾滋病核酸检测

艾滋病核酸检测

艾滋病核酸检测艾滋病核酸检测艾滋病核酸检测,直击艾滋病病毒的RNA结构,检测血液中是否存在病毒核酸,诊断有无病原体感染。

采用PCR技术,使用分子生物学实验室通用的扩增试剂和自行研究开发设计的复合引物,覆盖常见的HIV毒株,具有很高的灵敏度。

使用二次扩增的套式PCR扩增方法,提高检测的特异性,降低假阳性的概率。

核酸检测将艾滋病病毒的检测窗口期缩短至11天,并且核酸检测这项技术目前可将乙肝、丙肝病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天缩短到25天、59天。

艾滋病核酸检测技术1、HIV基因结构HIV基因组由两条单链RNA组成,每个RNA基因组约为9.7k,在RNA5′端有一帽结构(m7G5ppp5′GmpNp),3′端有poly(A)尾巴。

HIV的主要基因结构和组合形式与其他反转录病毒相同,均由5′末端长重复(long terminal repeat,LTR)、结构蛋白编码区(gag)、蛋白酶编码区(pro)、具有多种酶活性的蛋白编码区(pol)、外膜蛋白(env)和3′末端的长重复LTR区组成。

2、核酸的提取方法核酸提取均采用磁珠法。

1)磁珠提取的原理:将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸,并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。

2)步骤:裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱3)优点:a.磁珠提取特异性高,受标本因素影响小,灵敏度高b.易于实现自动化4)缺点:a.成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动)。

b.完全手工工作,工作量太大。

3、应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测技术根据HIV-1 gag.pol和env基因序列设计了套式聚合酶链反应(nesled polymerasechain reaction,nPCR)引物。

将外周血单个核细胞裂解液先用外侧引物扩增,其产物再经内侧引物扩增,直接走凝胶电泳判定结果。

nPCR 的敏感性。

较常规PCR高100~1000倍,可检测到0.5fg质粒DNA和50μ1HIV-1感染者外周血样中的HIV基因。

研究 HIV 核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒(HIV-1) 检测中的应用价值及对总精密度

研究 HIV 核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒(HIV-1) 检测中的应用价值及对总精密度

研究 HIV 核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒(HIV-1)检测中的应用价值及对总精密度、检测限的影响摘要】目的:研究HIV核酸即时检测分子诊断技术在人类免疫缺陷病毒(HIV-1)检测中的应用价值及对总精密度、检测限的影响。

方法:取2019年1月~2020年1月期间检验科收集的临床检测样本60例,均采用传统PCR技术和Xpert HIV-1即时核酸检测,比较两种技术的应用价值。

结果:Xpert HIV-1即时核酸检测符合率更高,抗干扰能力更强,对总精密度、检测限的影响更小,差异有统计学意义(P<0.05)。

结论:人类免疫缺陷病毒(HIV-1)检测中应用HIV核酸即时检测分子诊断技术效果显著,可有效提高总精密度,值得临床推广。

【关键词】HIV核酸即时检测分子诊断技术;HIV-1检测;总精密度;检测限【Abstract 】 objective: to study the value of real-time detection of HIV NUCLEIC ACID in the detection of human immunodeficiency virus (HIV-1) and its effect on the total precision and detection limit. Methods: A total of 60 clinical samples were collected from Jan. 2019 to Jan. 2020. All samples were detected by PCR and Xpert,and the application value of the two techniques was compared. Results: XPERT had higher coincidence rate, stronger anti-interference ability, less influence on total precision and detection limit (p < 0.05) . CONCLUSION: immediate detection of HIV NUCLEIC ACID in human immunodeficiency virus (HIV-1) detection by molecular diagnostic technology is effective, can effectively improve the total precision, worthyof clinical promotion.[ keywords ] HIV nucleic acid real-time detection molecular diagnostic technology; HIV-1 detection; Total Precision; detection limitHIV核酸检测是艾滋病检测的重要补充手段,在婴儿的早期诊断和辨别窗口期感染有着重要作用[1]。

hiv 临床检测技术进展及应用

hiv 临床检测技术进展及应用

hiv 临床检测技术进展及应用HIV临床检测技术进展及应用HIV(Human Immunodeficiency Virus,人类免疫缺陷病毒)是一种危害人类健康的病毒,它会导致艾滋病(AIDS)的发生。

随着科学技术的不断进步,HIV的临床检测技术也在不断更新和完善,为准确检测HIV感染提供了更好的手段。

本文将就HIV临床检测技术的进展及应用进行探讨。

一、传统的HIV检测技术传统的HIV检测技术包括酶联免疫吸附法(ELISA)和西方印迹法(Western Blot)。

ELISA是最常用的HIV抗体检测方法,通过检测患者血清中是否存在HIV抗体来判断是否感染HIV。

而Western Blot则是用于确证ELISA检测结果的一种辅助检测方法,能够识别和鉴定特定蛋白质。

然而,传统的HIV检测技术存在着一定的缺陷,比如需要多次检测来确诊、耗时长、误差率高等。

因此,科研人员们一直在努力寻找更加准确、快速、便捷的HIV检测技术。

二、新型HIV检测技术近年来,随着生物技术的不断发展,新型的HIV检测技术不断涌现。

其中,核酸检测技术被认为是目前HIV检测的一项重要突破。

核酸检测技术指的是利用PCR(Polymerase Chain Reaction)等方法检测HIV病毒核酸,从而实现早期感染的准确诊断。

此外,流式细胞术(Flow Cytometry)也被广泛运用于HIV检测领域。

流式细胞术能够对血液样本中的细胞进行高通量、高灵敏度的检测,可以更快速地筛查出HIV感染者。

三、HIV检测技术的应用新型的HIV检测技术不仅提高了HIV感染的检测准确率和速度,也为HIV病毒的治疗和控制提供了更好的手段。

通过及时检测和诊断,可以让感染者尽早接受到抗病毒治疗,延缓疾病进展,提高生活质量。

此外,HIV检测技术的进步也为HIV预防工作提供了重要支持。

通过对易感染人群的定期检测,可以及早发现HIV感染者,采取有效措施阻断病毒传播链,有效降低HIV在人群中的传播风险。

HIV核酸检测

HIV核酸检测

HIV核酸检测核酸检测HIV核酸检测随着生物技术的发展,核酸检测得到了人们越来越多的重视,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比P24抗原检测方法更灵敏。

简单的说就是病毒感染人体后,一般情况下可通过一系列检测被发现,而最早能被检测到的是病毒核酸。

现有的酶联免疫等血清学检测方法检测的是抗原或抗体,而核酸检测技术检测的是病毒核酸,所以能更早地发现病毒感染。

HIV核酸检测将艾滋病病毒的检测“窗口期缩短至11天,并且核酸检测这项技术目前可将乙肝、丙肝病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天缩短到25天、59天。

血液安全由此可得到更好保障。

方法及程序HIV核酸定性检测1.1 方法和试剂1.1.1 方法(1)检测方法为商品化试剂盒和实验室自建方法,商品化试剂应严格按说明书操作。

下面介绍的方法是实验室自建方法,供参考。

(2)检测血浆或血清样品使用逆转录PCR(RT-PCR)方法,建议第一轮PCR扩增使用RT-PCR一步法;检测血细胞或组织样品使用PCR方法。

一般使用扩增两轮的套式PCR方法。

(3)设立阳性、阴性及空白对照。

阳性对照为与待测样品同质、含有目的基因的样品;阴性对照为与待测样品同质、不含有目的基因的样品。

阳性和阴性对照样品应与待检样品处理程序一致。

阴性对照的设置数量应根据实验样品的数量设置在不同的位置。

1.1.2 试剂(1)PCR引物:一般使用扩增HIV gag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。

进行RNA逆转录时可使用下游特异性引物或随机引物。

引物设计可参考文献或自行设计,应尽量涵盖常见的HIV流行毒株,也可使用兼并性引物。

(2)主要试剂:包括核酸提取纯化、逆转录、PCR所需的试剂。

使用商品化核酸提取纯化试剂、逆转录酶反应试剂和PCR扩增试剂。

(3)抗污染试剂:实验室自建检测方法可使用抗污染试剂,参考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。

1.2 扩增目的基因片段1.2.1 样品的采集和处理1.2.2 核酸提取可使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。

艾滋病病的PCR检测技术

艾滋病病的PCR检测技术

艾滋病病的PCR检测技术PCR(Polymerase Chain Reaction)是一种常用的分子生物学技术,在艾滋病病毒的检测中起着重要作用。

本文将介绍艾滋病病毒的PCR检测技术以及其在诊断、病毒量测定和研究中的应用。

一、PCR检测技术简介PCR是由美国生物化学家基里尔·穆利斯(Kary Mullis)于1983年发明的一种体外扩增DNA的方法。

它通过模拟DNA在体内复制的过程,能够对少量DNA进行放大,从而便于检测和分析。

二、艾滋病病毒的PCR检测技术艾滋病病毒的PCR检测主要包括两个方面:一是检测病毒的核酸,在感染早期和晚期均可检测到;二是检测病毒的基因型,有助于了解病毒的分类和毒株差异。

1. 检测病毒核酸PCR技术可以通过特异性引物和酶来扩增病毒核酸,并通过凝胶电泳等方法进行检测。

该方法具有高度敏感性和特异性,可以检测到非常低浓度的艾滋病病毒。

2. 检测病毒基因型PCR技术可以通过特定的引物和扩增条件来扩增不同基因型的艾滋病病毒,例如HIV-1和HIV-2。

通过PCR扩增产物的序列分析,可以确定不同基因型的遗传特征和抗药性。

三、PCR技术在艾滋病病毒诊断中的应用PCR技术在艾滋病病毒的诊断中有以下几个方面的应用:1. 早期感染检测艾滋病病毒感染初期,体内的病毒数量较少,无法通过传统的抗体检测方法进行诊断。

而PCR技术则可以在感染后的数天内检测到病毒核酸,从而早期发现感染者。

2. 感染源追踪通过PCR技术检测病毒核酸,并进行基因型分析,可以追踪艾滋病病毒的感染源,了解传播途径和病毒变异情况,从而制定相应的预防和控制策略。

3. 抗病毒治疗监测艾滋病病毒的抗病毒治疗需要监测病毒的荷载量,即病毒在体内的含量。

PCR技术可以对病毒核酸进行定量检测,从而监测治疗效果,并调整治疗方案。

四、PCR技术在艾滋病病毒研究中的应用PCR技术在艾滋病病毒的研究中有以下几个方面的应用:1. 病毒变异研究通过PCR技术扩增不同基因型的艾滋病病毒,并进行序列分析,可以研究病毒的变异情况和进化规律,为疫苗研发和治疗策略提供理论支持。

HIV实验室检测方法和步骤

HIV实验室检测方法和步骤

HIV实验室检测方法和步骤HIV,也称为人类免疫缺陷病毒,是一种能导致艾滋病的病毒。

HIV实验室检测方法和步骤被广泛应用于检测感染HIV的个体。

以下是一般情况下使用的实验室检测方法和步骤的详细说明。

1.预处理和登记在进行HIV实验室检测之前,需要对样本进行预处理和登记。

预处理包括标识样本的相关信息,如样本编号和患者信息。

这些信息对于结果记录和跟踪是至关重要的。

此外,还需检查样本的适应性和完整性。

2.血液样本采集3.血清分离采集到的血液样本需要进行血清分离。

这可以通过离心来分离血液的不同成分,例如血红蛋白和血清。

离心速度和时间需要根据实验室设备和协议进行调整。

4.酶联免疫吸附测定法(ELISA)最常用的HIV实验室检测方法是酶联免疫吸附测定法(ELISA)。

这种方法使用特定的抗体来检测血液中特定的抗原。

根据ELISA方法的不同,可检测HIV抗原或抗体。

实验室技术人员将患者血清样本加入到已包含HIV相关抗原或抗体的试剂盘中,然后根据试剂盘的建议操作,包括孵育时间、温度和洗涤步骤。

任何与接触抗原或抗体反应的特异性颜色改变,都可作为阳性结果。

否则,结果被视为阴性。

5.确认试验在进行HIV检测的初步结果后,通常会进行一个或多个确认试验。

确认试验的目的是统一确定检测结果的可靠性。

常用的确认试验包括HIV免疫荧光试验(IFA)和西方印迹法(Western blot)。

这些试验通过检测血清中的HIV特异性抗体,以确保先前的结果的准确性。

6.分子检测有时,为了获得更加可靠和敏感的结果,实验室会使用分子检测方法,例如聚合酶链式反应(PCR)。

PCR可以检测和放大病毒的基因或核酸,以确定HIV感染的存在和病毒的数量。

7.结果解读和记录HIV实验室检测结束后,实验室技术人员需要解读并记录结果。

阳性结果意味着存在HIV感染,而阴性结果则表示未检测到HIV感染。

针对不同的检测方法和样本类型,结果的解释可能有所不同。

因此,在结果解读和记录时,实验室人员需要严密遵循实验室的标准操作规程(SOP)。

三种检测艾滋病方法

三种检测艾滋病方法

三种检测艾滋病方法艾滋病,一个令人闻之色变的名词。

它是一种由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的严重传染病,会逐渐破坏人体的免疫系统,导致各种严重的感染和肿瘤,威胁生命健康。

对于艾滋病的检测,是发现和控制这一疾病的重要手段。

下面,我们就来了解一下三种常见的检测艾滋病的方法。

第一种检测方法是抗体检测。

当人体感染 HIV 后,免疫系统会产生相应的抗体来对抗病毒。

抗体检测就是通过检测血液、唾液或尿液中是否存在 HIV 抗体来判断是否感染。

血液抗体检测是最常用的方法之一。

一般在发生可能感染 HIV 的行为(如不安全的性行为、共用注射器等)后的几周至三个月内进行。

检测时,医务人员会抽取少量血液样本,送到实验室进行检测。

如果检测结果为阳性,通常还需要进行进一步的确证试验。

确证试验阳性,才能确诊感染了 HIV。

唾液抗体检测相对方便,可自行在家操作。

使用专门的检测试剂盒,采集口腔内的唾液样本,然后按照说明书进行操作和判读结果。

但需要注意的是,唾液检测的准确性可能略低于血液检测,尤其是在感染初期。

尿液抗体检测也是一种非侵入性的检测方法,但目前应用相对较少。

抗体检测的优点是操作相对简单、成本较低,适用于大规模筛查。

但它也有一定的局限性,比如在感染后的“窗口期”内,可能检测不出抗体,导致假阴性结果。

第二种检测方法是核酸检测。

核酸检测直接检测血液中的 HIV 病毒核酸(RNA 或 DNA),能够更早地发现感染。

核酸检测的窗口期比抗体检测短,一般在感染后的 1-2 周内就可能检测出病毒。

这对于早期诊断和及时干预非常重要,特别是对于职业暴露(如医护人员被 HIV 污染的器械刺伤)等情况。

这种检测方法通常在专业的实验室进行,技术要求较高,费用也相对较贵。

但它的准确性很高,能够为临床诊断提供可靠的依据。

第三种检测方法是抗原检测。

HIV 感染人体后,会产生一种叫做p24 抗原的蛋白质。

抗原检测就是通过检测血液中是否存在这种抗原,来判断是否感染 HIV。

HIV实验室检测技术

HIV实验室检测技术

HIV实验室检测技术
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操作方法
• 实验准备:试验开始前将试剂和样品放置在 室温(18~23℃), 按实验室SOP做好试剂准 备。
• 备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血 清后,严格按试剂盒说明书以及质控和安全 防护要求进行筛查检测.
1/3/2021
HIV实验室检测技术
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注意事项
• ELISA 是目前公认的抗-HIV 较佳的筛选方 法,但在实际工作中,ELISA抗-HIV的检测 受诸多因素影响。
艾滋病期:保持和发展AIDS早期症状,出现多种机 会性感染,神经细胞和功能损伤的表现,易发生 多种肿瘤
* AIDS的病程通常2年
1/3/2021
HIV实验室检测技术
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关于检测抗-HIV的残余危险度
含义:在目前条件下,筛查后仍具感染性的机率 称为残余危险度。
影响因素: * 窗口期和检测时机的选择问题 * 实验室质控 * 个别人免疫功能低下,对HIV无反应 * 试剂质量和保存问题 * 是否在有效期内使用 * 试验操作错误:标本或结果登记的差错、仪器校准否、 错误的操作
第4代试剂
• 从理论上来讲,这种试剂是很完美的,但其 敏感度和特异度尚需通过大量的临床评估加 以确认。在初筛诊断试剂上还发展了特异的 HIV IgA,用作围产期儿童诊断,敏感度达 93.1%,特异度在1月龄以上的婴儿可达 100%。此外,在对抗HIV IgM的诊断也正在 积极研究,并取得了可喜的成绩,无形中可 缩短窗口期7—10天。
B
± ±或 + 再次采样,做确证实验
C
±-
报告抗-HIV阴性
D
- 不必复检 报告抗-HIV阴性
1/3/2021
HIV实验室检测技术

艾滋病的检验方法及选择

艾滋病的检验方法及选择

1. HIV病毒的分离与培养(该方法用于科学研究,一般不用于临床诊断)
HIV病毒只感染CD4+的T淋巴细胞,并且还要求淋巴细胞处于增殖状态,只有在特定的实验室条件下才能有效地分离和增殖HIV病毒。

并且要求HIV病毒培养要在生物安全三级实验室进行。

2. HIV病毒的核酸检测(一般用于急性期的检测)
最常用的是HIV-RNA定量测定方法,用于检测HIV感染者血浆中病毒的量,称为HIV 病毒载量测定。

目前有三种方法:反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)和分支信号放大系统(bDNA)等。

3. HIV病毒的抗原检测(一般只能用于HIV 感染早期的临床检测)
HIV-P24抗原出现时间较HIV抗体出现的时间更早,因此HIV-P24抗原检测可以用于对HIV早期感染的诊断,在进行HIV抗体检测时,同时进行HIV-P24抗原的检测可以减少假阴性。

除此之外,HIV-P24抗原检测也可以用于体外HIV在细胞培养液中浓度的测定和体外药物实验的效果评价等方面。

4. HIV感染的抗体检测(是诊断HIV感染最常用的方法)
血清学方法进行抗体检测是目前诊断HIV感染的主要检测方法,包括初筛实验和确诊试验。

初筛试验最常用的方法是酶联免疫吸附实验(ELISA),确诊试验用免疫印迹法。

一般用ELISA初筛试验阳性的标本,要进一步用免疫印迹法来确诊后,才能做出最终的诊断结果。

艾滋病病的抗体检测技术

艾滋病病的抗体检测技术

艾滋病病的抗体检测技术艾滋病的抗体检测技术艾滋病是一种严重的传染病,由人体免疫缺陷病毒(HIV)引起。

为了及早发现和诊断HIV感染,抗体检测技术被广泛应用。

本文将介绍艾滋病的抗体检测技术。

一、ELISA检测技术酶联免疫吸附测定(ELISA)是最常用的艾滋病抗体检测技术之一。

该技术通过检测人体产生的特定抗体来判断是否感染了HIV。

ELISA测试通常包含两个步骤:首先,将被测试的血液样本与HIV抗原结合;然后,通过添加酶标记的抗体来检测是否形成了抗原-抗体复合物。

ELISA技术的优点是简单、快速、灵敏,但结果可能存在假阳性和假阴性的情况。

二、免疫层析试纸检测技术免疫层析试纸是一种简单、便捷的艾滋病抗体检测方法。

该技术通常以尿液或血液为样本,通过试纸上的抗体与被测样本中的HIV特异性抗体相互作用,从而读取结果。

免疫层析试纸检测技术运行时间短,结果易于解读,适用于快速筛查,但其灵敏度和特异性较ELISA技术稍低。

三、核酸检测技术核酸检测技术是一种直接检测HIV核酸的方法,可以早期发现感染者。

PCR(聚合酶链式反应)是最常用的核酸检测技术之一,它能够扩增HIV核酸的特定片段。

PCR方法的灵敏度高,可在感染后的早期阶段检测到HIV,但需要复杂的实验室设备和技术,并且成本较高。

四、抗原检测技术抗原检测技术是一种直接检测HIV抗原的方法。

抗原检测通常结合核酸检测,以提高诊断的准确性。

抗原检测技术通过检测患者体液中的HIV抗原来确定感染情况。

此技术的灵敏度高,且能够捕捉到感染的早期,但需详细的实验室操作和设备。

综上所述,艾滋病的抗体检测技术提供了快速、准确的检测手段,对于早期发现和干预HIV感染具有重要意义。

ELISA、免疫层析试纸、核酸检测和抗原检测等技术的应用不断完善,为我们提供了有效的工具来控制和防治艾滋病。

然而,需要注意的是,不同的技术在灵敏度、特异性和成本等方面存在差异,使用时应根据具体情况选择合适的技术。

HIV核酸检测技术及应用

HIV核酸检测技术及应用

常用的病毒载量检测方法
主要核酸扩增和信号放大扩增两种方法 Q (,生物梅里埃) (,罗氏) m2000(,雅培) 440 (西门子) 国内:凯杰(匹基),科华,达安、东北
制药、万泰 丽珠、科华等
血浆样本
病毒载量分析仪
扩增技术 ( ,核酸序列依赖性扩增法)
引物1 延伸
逆转录酶 H和 引物 2延伸 逆转录酶 T7 聚合酶
初筛+复检+
补充试验(核酸试验)
定性检测试剂盒
试剂:必须是经国家食品药品监督管理总局注册批 准、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。全球 目前正式用于临床诊断1 急性期感染的核酸检测试 剂比较少 公司生产的 1 核酸定性试剂盒 公司生产的M2000 1 定性检测试剂盒 公司生产的® ® ® 1 2.0
核酸检测在新版规范主要内容
u 新增补充试验的概念,补充试验包括抗体确证试验和核 酸试验(定性和定量试验)
u 新增核酸检测流程,对复检结果有反应的情况,增加了 可以选择核酸诊断的策略;对于抗体确证结果不确定和 疑似急性期感染的样品建议采用1 核酸试验。
u 修改了艾滋病感染产妇所生儿童感染早期感染检测流程
感染的自然史
急性感染期 无症状期 艾滋病期
感染后标志物变化时间
Reactivity
HIV RNA
p24 Ag
IgM AntiHIV
IgG Anti-HIV
012345678
Weeks post-infection
核酸检测的意义
耐药性 艾滋的“元凶”
核酸
缩短窗口期
指导治疗
病程 自然史
核酸检测的意义
核酸检测技术及应用
目录
核酸简介 核酸检测意义 核酸检测技术现状与发展 核酸检测质量控制 核酸检测流程(新规范) 核酸检测实例应用

艾滋病检测方法

艾滋病检测方法

艾滋病检测方法
艾滋病检测方法包括:
1. HIV抗体检测:这是最常用和常规的艾滋病检测方法。

通过血液样本检测人体内是否存在HIV抗体来判断是否感染艾滋病病毒。

这种检测方法的结果通常在一个工作日内出来。

2. 口腔快速检测:这种检测方法采集口腔黏膜上的细胞样本进行检测,通常只需等待20分钟即可得到结果。

口腔快速检测的优势在于无需采血,便于操作。

3. 家庭自测:这是一种便利的艾滋病检测方法,可以在家中进行。

这种测试通常使用唾液样本进行,通过测试盒上的指示线来判断是否感染HIV病毒。

然而,家庭自测结果可能不够准确,若有阳性结果,应再进行确认性实验。

4. PCR检测:该方法使用聚合酶链反应技术来检测艾滋病病毒的核酸。

PCR检测能提供早期感染的准确结果,但相对成本较高,一般用于特定情况下或疑难病例的诊断。

需要注意的是,艾滋病检测结果应在正规医疗机构进行解读和咨询,以便获得准确的诊断和适当的咨询建议。

hiv感染实验室检测

hiv感染实验室检测
⑧灵敏度高(可达ng甚至fg水平,理论上能检出单个病毒基因),
特异性好、快速、简捷。
定量NASBA技术:
是由一对引物引导的,连续均一的体外特异核苷酸序列的 等温扩增的酶促反应过程。 优点:操作十分简单,只需将制备好的模板直接加到反应体
系中,恒温41℃培育1.5~2小时,即可将模板扩增109倍。 NASBA 反 应 体 系 包 括 AMV 反 转 录 酶 、 RNA 酶 H 、
through, FT)
免疫层析 (Immunochromatograpy, lateral
flow, IF)
快速检测试剂的应用
目前在国内批准注册的国外进口试剂有:Determine HIV1/2(ABBOTT,雅培)、Instant CHEK-HIV1+2 (EY)、麦美华、中新科炬
一般10-30min内出结果。 2003年国内已有产品被SFDA批准。有金豪、万泰、
②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测;
③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前,病毒感染的诊断主 要依靠NAT,适用于早期诊断;
④可对病毒进行定量检测,有助于疗效监测; ⑤可对病毒基因进行基因分型,比血清分型更有价值; ⑥通过对病毒耐药基因的检测,可预测或发现病毒的耐药性;
⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断;
预约检测后咨询时间。
危险因素评估
1.性行为:具体的性活动方式、性伴数量、性活动频度、 使用安全套的情况和性伴感染的可能性。特别要注意某 些高危行为,如多性伴关系,无保护性交或肛交,性病 史。 2.吸毒行为:吸毒方式、注射器具消毒、共用注射器等。
3.其他接触血液的行为: 输血或血制品史,有无采供血(浆)史、器官移植史或 者被血液污染器具刺伤、纹身、穿耳等等;
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The COBAS® AmpliPrep/COBAS® TaqMan® HIV-1 Qualitative Test, v2.0
Dual-PCR target Assay design
gag: • Targeted in previous Roche HIV-1 tests • Large sequence database from Roche’s Global
修改了艾滋病感染产妇所生儿童HIV感染早期感染检测流 程
初筛+复检+
补充试验(核酸试验)
HIV定性检测试剂盒
试剂:必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、 在有效期内的试剂。严格按说明书操作。全球目前正式 用于临床诊断HIV-1 急性期感染的核酸检测试剂比较少
Gen-Probe 公司生产的Aptima HIV-1 RNA 核酸定性 试剂盒
结果判读与报告
用于治疗效果和病程监测:检测值小于试剂盒线性范围下限,报告低于检测限, 检测值大于等于试剂盒线性范围下限,按照检测值报告。
用于HIV-1感染的诊断: ➢ 检测值>5000 CPs/ml(或IUs/ml),报告检测值; ➢ 检测值≤5000 CPs/ml(或IUs/ml),尽快再次严格按核酸检测的要求采样检测,
HIV RNA
HIV前病毒DNAHIV生活周期图
HIV感染的自然史
急性感染期 无症状期 艾滋病期
HIV感染后标志物变化时间
Reactivity
HIV RNA
p24 Ag
IgM AntiHIV
IgG Anti-HIV
012345678
Weeks post-infection
HIV核酸检测的意义
HIV病毒载量(Viral Load) 指体内复制的病毒的数量,反映体液
(一般是血浆)中HIV病毒的含量
1987年John首次提出病毒载量(viral load)的概念,体内复制的病毒的 数量是不能直接测量的,一般用血浆中HIV RNA的拷贝数代表HIV的病毒
载量。
是HIV核酸的定量检测,一般以血浆 HIV RNA的拷贝数/ml表示
电泳鉴定或测序
HIV-1的基因组结构
~9.2kb 结构蛋白
酶类
衣壳蛋白
In-house普通PCR诊断方法
检测设计:分别针对HIV gag、env和pol的三个独立 PCR检测体系,并另外设立1个检测内参(β-actin)的 检测体系(国家艾滋病参比实验室)
阳性:扩增出人β-actin,HIV-1 gag 、env和pol基因中扩增出2个及以上 基因片段 阴性:扩增出人β球蛋白基因,HIV-1 gag 、env和pol 3个基因都没有扩 增出来 不确定:人β球蛋白基因未扩增出预期的片段或HIV-1 gag 、env和pol 3 个基因只扩增出一个
➢高自动化可自动完成包括加样、核酸提取与纯化、PCR试剂配制与分配等扩增前的所有操作
➢采磁棒转移技术,有效避免气溶胶污染
➢中文自主操作界面,方便快捷
达安基因HIV病毒载量核酸检测系统
•DA3200
•HIV-1核酸定量检测试剂盒 •全自动核酸提取仪 •国产化!全自动!
PANTHER系统——TMA(转录介导的等温扩增)
HIV核酸检测技术
分为HIV定性和HIV定量检测两大类: ➢HIV定性检测:HIV核酸(RNA和前病毒DNA) 的检测 ➢HIV定量检测:又称HIV病毒载量检测 (Viral load),主要用于抗病毒治疗患者 的疗效评价,也可用于补充试验(新规范)
HIV核酸定性检测
IN-HOUSE(文献报道) Roche Amplicor HIV-1 DNA PCR, v1.5试剂盒(已
200000
Deltan Rn Deltan Rn
50000
100000
0
0
1020ຫໍສະໝຸດ 304050
60
Cycle Number
HIV核酸阴性
0
0
10
20
30
40
50
60
Cycle Number
HIV核酸阳性
罗氏HIV-1 Qual Test
基于COBAS® AmpliPrep® / COBAS® TaqMan 48平台, 用于HIV-1 RNA和前病毒DNA的定性诊断,检测样本类 型包括抗凝全血、血浆、血清、干血斑或干浆斑等
HIV核酸定量检测
——适用范围
(1)监测抗病毒药物治疗效果。抗病毒药物治疗前后,定期病 毒载量分析和监测,结合CD4+T淋巴细胞计数,有助于抗病毒药 物治疗方案的确定和修改。 (2)监测疾病进展。定期检测HIV-1病毒载量,有助于监测感染 者和病人的病程变化,结合CD4+T淋巴细胞计数,为抗病毒药物 治疗提供病毒学依据。 (3)诊断急性HIV-1感染。针对HIV-1抗体筛查阴性、近期有流 行病学史的个体,或确证结果不确定,核酸定量检测可用于诊断 HIV-1急性期感染。 (4)确定HIV-1感染。针对HIV-1抗体筛查阳性或确证结果不确 定的个体,结合流行病、和临床病史和CD4+T淋巴细胞计数等, 使用核酸定量检测帮助确定HIV-1感染。
报告检测值,结果>5000 CPs/ml(或IUs/ml),报告检测值,结果仍≤5000 CPs/ml,则需充分结合流行病学史、临床病史、CD4+T淋巴细胞计数和HIV-1 抗体随访检测结果等进行综合判断 ➢ 检测值低于最低检测限不能排除HIV-1感染。 (注:目前国内外没有商品化的HIV-2核酸检测试剂;由于核酸定量检测方法 获得的低病毒检测值可能是核酸污染所致的结果,根据国内外的相关数据和报 道,建议用5000 CPs/ml作为判断结果的阈值,两次定量检测有助于准确判断结 果)。
COBAS® AmpliPrep® / COBAS® TaqMan48® 系统
TaqMan水解探针技术
引物
h
Q
R
引物
完整探针: 报告基团 (R) 的 荧光被淬灭基团(Q)抑制
Q R
探针被5’-外切核酸酶切掉
h
Q R
报告基团的荧光发射
R = 报告基团 Q = 淬灭基团
雅培HIV-1病毒载量仪
m2000全自动实时荧光定量 PCR系统
简易的工作流程:“上样”直接到“结果”,3.5小时 得到第一个样本结果,每分钟一个结果,12个小时500 个样本
核酸检测在新版规范主要内容
新增补充试验的概念,补充试验包括抗体确证试验和核 酸试验(定性和定量试验)
新增核酸检测流程,对复检结果有反应的情况,增加了 可以选择核酸诊断的策略;对于HIV抗体确证结果不确定 和疑似急性期感染的样品建议采用HIV-1 核酸试验。
逆转录酶
逆转录酶
RNase H 和 引物 2延伸
逆转录酶
T7 RNA 聚合酶
引物 2
逆相 RNA 扩增物
AMV-RT (鸟肉瘤病毒逆转录酶):延伸形成RNA-DNA 杂交 链 RNase H:降解杂交链中的RNA T7-RNA聚合:转录形成的RNA转录产物
T7 RNA聚合 酶
“分子信标” 杂 交
COBAS® AmpliPrep® / COBAS® TaqMan48
耐药性 艾滋病的“元凶”
HIV核酸
缩短窗口期
指导治疗
病程 自然史
HIV核酸检测的意义
HIV-1感染诊断
✓ 婴儿感染早期诊断(小于18月龄) ✓ HIV-1感染补充试验及急性期和晚期感染者的诊断
治疗效果监测 通常在治疗一个月后病毒载量降低0.5log以上才
被认为临床治疗有效,六个月后应降到小于检测限 病程监控及预测 耐药性监测
HIV核酸检测技术及应用
目录
HIV核酸简介 HIV核酸检测意义 HIV核酸检测技术现状与发展 HIV核酸检测质量控制 HIV核酸检测流程(新规范) HIV核酸检测实例应用
HIV病毒
病毒颗粒:呈球形,直径100-120nm 病毒衣壳:呈20面体立体对称 病毒核心:由RNA(两条ssRNA)、核衣壳蛋白、逆转录酶、核糖核酸酶及整合酶所组成
•HIV-1病毒载量自动化检测平 台(96通量)
•已认证用于干血斑病毒载量检 测
•婴儿HIV-1核酸检测试剂盒
•用于实验室in-house方法的自 动化核酸提取
•此平台同时有HBV病毒载量, HCV病毒载量及分型,HPV高 危分型,MTB检测,CT/NG检 测等试剂盒
bDNA (Bayer versantTM)
“套式”PCR
5’ gag
第一轮PCR 产物
pol
env
3’
AAAAAA
Reverse primer 1 Forward primer 1
Reverse primer 2 Forward primer 2
第二轮PCR 产物
优点: 增加敏感性/特异性 缺点: 增加扩增偏差机会
需要增加操作过程 容易增加污染机会
surveillance program • Not a drug target today
LTR: • Targeted in Roche MPx blood screening test • Not a drug target today
检测总核酸(DNA/RNA)
检测结果示例
阴性 阳性
HIV核酸定量检测
琼脂糖凝胶电泳
β-actin gag env pol
In-house 荧光PCR
国内外文献报道以HIV RNA或前病毒DNA作为 检测目标,选择LTR、gag、pol等基因作为靶基 因,建立荧光PCR检测方法
A
200000
FAM CY5
B
400000
FAM CY5
150000
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