流式细胞术的质量控制
(完整版)精准检验对流式细胞术的发展和质量控制要求
精准检验对流式细胞术发展和质量控制需求盛慧明2016年11月11日一、流式细胞术发展历史和现状二、流式细胞术的最新进展三、BEAMing技术四、流式细胞术的质量控制一、流式细胞术发展历史和现状二、流式细胞术的最新进展三、BEAMing技术四、流式细胞术的质量控制一、流式细胞术发展历史和现状流式细胞术Flow Cytometry现代流式细胞仪产生于上世纪六七十年代，源于对细胞进行分选，所以最早是Fluorescence-activated cell sorting ，FACS；最早的omic 经过近四十年的发展和完善，今天的流式细胞仪已经十分成熟并不断推陈出新，广泛运用于从基础研究到临床实践的各个方面；是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌，小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术；流式细胞术技术平台涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域，在各学科中发挥着重要的作用。
流式细胞术完成FCM计数的主要历程◆1930年,Casperrsson 和Thorell 开始致力于细胞的计数;◆1934年,Moldaven 是世界上最早通过光电仪记录细胞数量;◆1940年,Coons 提出用结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白;◆1953年,Croslannd Taylor 应用分层鞘流原理,奠定了流式细胞术的液流技术基础;◆1956年,Coulter 生产了Coulter细胞颗粒计数器;◆1953年,Parker 和Hutcheon 描述一种全血细胞计数器装置,成为流式细胞仪的雏形;◆1967年, Holm 等设计了汞弧光灯激发荧光染色的细胞，再由光电设备计数的装置;◆1973年, Steinkmp设计了利用激光激发双色荧光色素标记的细胞，达到计数和分选的装置.流式细胞术完成数据采集和分析技术整合◆1965年，Kamentsky开拓性的提出两大设想：:(1) 用分光光度计定量细胞成分; (2)结合测量值对细胞进行分类;◆1969年,Van Dilla 和美国的Los Alamos小组研制出液流束、光路轴、检测系统光轴三者相互正交的第一台流式细胞计数器；◆1972年, Herzenberg研制出一个细胞分选器的改进型,能够检测出经荧光标记抗体染色的细胞的较弱的荧光信号;◆1973年，与Stanford University合作开发世界上第一台商用流式细胞仪FACSI.Kamentsky Herzenberg流式细胞仪的基本构造流式细胞采用的抗体常用荧光素：•FITC,激发光488nm 发射光525nm；•PE,激发光488nm 发射光575nm;•PE-Cy5,激发光488nm 发射光667nm;•PE-Cy7,激发光488nm 发射光767nm。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制一、引言流式细胞术是一种重要的细胞分析技术，可以用于细胞计数、细胞表型分析和细胞排序等。
在进行流式细胞术之前，进行质量控制是非常重要的，以确保实验的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术的质量控制方法。
二、仪器校准⒈流式细胞仪校准●清洁流式细胞仪的样品室，并检查激光器和光路系统是否正常工作。
●使用粒子标准物质检查细胞仪的散射、荧光和时间参数的准确性。
●清洗和校准流式细胞仪的液体系统，确保流速和样本量的准确控制。
⒉样品准备●均匀悬浮细胞样本，避免细胞团聚和沉积。
可通过离心和重新悬浮样本来实现。
●使用质量可靠的细胞染色方法，确保染色的准确性和一致性。
●调整样本的浓度，以避免过度聚焦和细胞过于稀疏而损失信号。
三、质量控制指标⒈样本纯度的质量控制●使用合适的负对照和正对照来评估染色的纯度。
例如，使用未染色细胞作为负对照，使用已知阳性标记的细胞作为正对照。
●定期检查染色结果的一致性，确保负对照细胞没有阳性标记，正对照细胞有预期的阳性标记。
⒉流式细胞仪性能的质量控制●定期检查流式细胞仪的性能参数，包括散射灵敏度、荧光检测灵敏度和时间分辨率。
●使用校准颗粒检验流速的准确性和一致性。
●根据实验需要，使用合适的质检颗粒进行分辨率和强度的调整。
四、数据分析和结果解释⒈数据质量控制●检查数据文件的完整性，确保数据文件包含所有需要的参数和样本。
●清除实验过程中的噪声信号和非特异性染色的细胞。
●根据预设的阈值和门控策略进行数据清洗和筛选。
⒉数据解释和结果报告●根据实验的目的和结果，选择合适的数据可视化方法，如频率直方图、散点图或密度图等。
●在报告中注明样本总数、阳性细胞比例、细胞亚群的比例等相关指标。
●提供结果的解释和分析，例如细胞表型的变化趋势、不同实验组间的比较等。
五、附件附件1、样本染色方案附件2、流式细胞仪校准记录表附件3、数据分析结果表格六、法律名词及注释⒈ IRB：Institutional Review Board，即伦理审查委员会，负责审查人体试验和研究项目的合法性和伦理性问题。
流式细胞术中免疫荧光染色的质量控制
流式细胞术中免疫荧光染色的质量控制摘要】流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等基础医学和临床医学的研究中，并提供了成熟的临床常规检测项目。
流式细胞术广泛用于临床常规检验中，为保证检验结果的可靠性，提高准确度和室间结果的可比性，流式细胞术质量控制越来越受到重视。
【关键词】流式细胞术；免疫荧光染色；质量控制【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2016）15-0026-02流式细胞术已广泛用于临床常规检验中，为保证检验结果的可靠性，提高准确度和室间结果的可比性，流式细胞术质量控制越来越受到重视。
流式细胞术常规测定由一系列繁琐的步骤组成，大体可分为样本采集和处理、免疫荧光染色、流式细胞仪检测、数据分析及结果报告解释，做好这些步骤中每一环节的工作可以确保室内质量控制（IQc）和室间质量控制（EQA）顺利达标。
现对免疫荧光染色的质量控制方法进行分析如下。
1.单克隆抗体和荧光素流式细胞术免疫荧光染色分析所用的荧光探针来源于两方面：一是荧光素标记的单克隆抗体或探针，二是单纯的荧光素。
1.1 单克隆抗体的选择用于流式细胞术测定的单克隆抗体可分为两类，即直标抗体和纯抗体，前者指单克隆抗体与荧光素已按比例连接，不需要二次染色即可直接用于流式细胞仪测定，这类抗体产生的非特异性结合较少，适于临床常规检测[1]。
纯抗体是指抗体本身不连接有荧光素，需要在标本制备过程中对抗体进行荧光素标记，又称间接染色，间接染色容易产生较多的非特异性荧光信号，可用于研究，但不建议临床常规使用，除非抗体是明确标志的体外诊断（IVD）试剂或分析特异性（ASR）试剂。
1.2 抗体组合的原则有些情况下，一种荧光抗体的单一免疫荧光染色(单染色法)不能满足临床检测的要求，往往需要两种或以上荧光抗体组合染色进行双色或多色分析。
如在进行T4或T8淋巴细胞亚群分析时，不能采用单一的荧光素标记的CD4或CD8抗体进行荧光染色，必须将二者与CD3抗体进行组合染色，才能准确通过CD3+CD4+CD8-和CD3+CD4-CD8+组合抗体检测到的细胞群来分析T4和T8细胞亚群。
流式细胞术质量控制
流式细胞术质量控制2010-01-08 14:04:03流式细胞术（flow cytometry,FCM）越来越广泛的应用在临床检验中。
由于临床检验本身的性质，它要求临床检验的管理者和操作人员必须把好常规操作已经结果分析的质量关。
同时还必须懂得如何判断分是在控还是失控。
作为临床检验工作，其工作的质量标准就是使检验的结果最佳地符合病人有无病变的实际情况。
在临床检验中分为分析前、分析中、分析后的质量控制。
分析前的质量控制主要内容是标本采集、保存和传送等；分析中的质量控制即实验操作过程的控制；分析后的质量控制主要是对数据结果的处理，对检验结果的可信度评价和及时将报告送给临床并听取反馈意见。
为此，从临床医师开出化验单，，直至拿到检验报告的整个过程都在质量控制的范畴之中，即所谓全程质量控制。
它包括质量保证、质量控制和质量评估。
质量保证，指围绕所有的步骤，监测和评估实验室规章制度与操作流程的效力。
主要利用质量控制和质量评估。
质量控制指建立一套完善的实验室监控方法，保证结果的可靠性，提高准确度、精密度、重复性和室间结果的可比性。
对于一个实验，应建立一套包括各种可变因素（仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等）的操作规程。
质量评估是由一个区域性的、国家的或国际性的机构，组织通过一系列的方法来比较实验室内或不同实验室之间的结果而建立的一套评价系统。
其主要目的是建立室间和仪器设备之间的可比性。
当一个标准品或参考标准存在时，质量评估通常被称为熟练度测试。
因此，严格的质量控制是先进的临床检验分析技术真正发挥作用的保证。
FCM作为一项先进的检测技术，对质量控制自然也不例外。
目前，FCM应用于临床检验的项目主要集中在几个方面：1，免疫表型分析，包括外周血淋巴细胞表型分析、白血病/淋巴瘤免疫分型、血小板膜糖蛋白分析、HLA-B27检测、阵发性血红蛋白尿（PNH）的检测等等。
2，细胞DNA、RNA检测及细胞周期分析，包括DNA倍体检测、细胞周期分析、网织红细胞检测、网织血小板检测等等。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制介绍:流式细胞术是一种广泛应用于生物学研究中的实验技术。
它利用机器读取细胞表面或细胞内的特定标记以获得细胞的详细信息。
在进行流式细胞术之前，需要进行一系列的质量控制步骤来确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术中的质量控制步骤。
⒈样本制备和处理⑴样本收集和保存●确保样本采集时的准确性和一致性，尽量避免引起细胞损伤或死亡的因素。
●根据所选择的荧光探针或抗体，选择合适的保存液保存样本，并按照推荐的存储温度和时间进行保存。
⑵细胞处理●避免细胞在处理过程中受到机械或酶的损伤。
选择适当的细胞处理方法（如胶凝、裂解或染色）。
⒉样本质量控制⑴细胞数目和浓度●使用细胞计数仪或显微镜对观察区域内的细胞进行计数，并计算细胞的浓度。
⑵细胞活性●使用细胞活性染料（如细胞渗透性染料）检测细胞的活性。
确保细胞在实验过程中保持完整和活跃。
⑶细胞纯度●利用细胞表面标记物或细胞核染色物进行细胞表型分析，以检测细胞样品中的污染物。
⑷细胞均一性●对样本进行混合和搅拌，确保细胞在整个样本中均匀分布。
⒊仪器校准和控制⑴流式细胞仪校准●使用流式细胞仪提供的校准粒子进行仪器校准，包括流速、散射光校准和荧光信号校准等。
⑵仪器控制●使用流式细胞仪的软件设置合适的参数，如触发门、荧光通道选择和数据采集速率。
⒋数据分析和解释⑴数据收集●使用流式细胞仪采集样本数据，并确保数据的完整性和正确性。
⑵数据分析●使用专业的数据分析软件对采集到的数据进行分析和解释。
⑶数据报告●根据实验需求和要求，使用适当的图形、表格和文本来呈现数据结果。
附件：⒈样本收集和保存记录表⒉样本质量控制记录表⒊仪器校准记录表法律名词及注释：⒈样本：指用于流式细胞术的生物样本，如细胞悬液或洗涤液。
⒉流式细胞仪：一种用于分析和计数细胞的仪器，透过仪器对细胞进行流式测量。
⒊标记物：用于识别和分析特定细胞类型或分子的抗体或染料。
⒋数据分析软件：用于处理流式细胞术数据并图形和数据表的计算机程序。
流式细胞术质量控
一、流式细胞术常规项目操作流程二、样本采集和处理些？荧光染色的两种方法意义和注意事项是什么？三、免疫荧光染色3．单克隆抗体的质量控制IVD抗体和ASR试剂，是临床常规项目的首选抗体，性能参数符合临床常规检测要求，已经对两种抗体的特异性、灵敏度、精密度、适用范围进行了验证。
对于商品化质控物可以帮助监测部分单抗的检测效率，如淋系系列抗体、免疫表型分析、CD4绝对计数、CD34绝对计数、细胞绝对荧光强度、阳性表达、可以作为CD55和CD59抗体的阳性对照和室内质控物。
对于自做阳性或阴性质控物，监测单克隆抗体的质量。
因为有些抗原在正常或异常细胞上表达是已知的，如健康人红细胞和中性粒细胞膜上CD55和CD59，在正常人中是阳性表达，可作为阳性对照和室内质控物。
（二）荧光染色方法1．细胞膜免疫荧光染色大多数免疫表型分析是针对细胞膜表面抗原进行免疫荧光染色分析，即细胞膜免疫荧光染色。
正确使用红细胞裂解液和淋巴细胞分离液的目的，保证细胞膜表面抗原活性不被破坏；防止细胞内抗原对膜表面抗原检测的干扰。
注意事项：红细胞裂解或分离后至少洗涤1次；减少红细胞碎片、血小板、血浆蛋白和淋巴细胞分离液对检测的干扰；进行绝对计数抗原表达量时，不能洗涤红细胞裂解液，因不能改变初始细胞浓度。
2．细胞内免疫荧光染色细胞内免疫荧光染色是采用荧光素或荧光抗体对细胞内抗原进行免疫标记和分析的方法。
他的意义在于诊断疾病和判断预后；细胞内髓性过氧化物酶（MPO）、CD3和CD79a的表达帮助白血病免疫分型。
细胞内染色的关键之处，是使细胞膜通透增强但不影响细胞骨架的完整性；细胞膜通透增强后抗体或核酸染料可以进入细胞内与细胞内抗原进行免疫标记；确保固定和透膜的步骤不影响抗原与相应抗体的结合力或核酸与染料的结合。
细胞内免疫荧光染色的破膜剂有皂角素和70％冷乙醇，皂角素最常用最稳定。
70％冷乙醇用于PI与细胞内DNA结合分析细胞倍体和周期时相。
需要注意的是，细胞内染色与细胞活性检测不能同时进行；当荧光染料分子的颗粒足够小时，细胞内染色不需要破膜也可以进行，活细胞染料DAPI、TO和AO等对细胞内核酸染色。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术（Flow cytometry）是一种广泛应用于生物学和医学研究中的细胞分析技术。
它通过利用光传感器和激光来检测细胞悬浮液中的细胞数量、大小、形态和表面标记物等信息，从而实现对细胞的分析和分类。
为了保障流式细胞术的准确性和可重复性，质量控制是非常重要的。
样本制备的质量控制在进行流式细胞术之前，样本制备是流式细胞术质量控制的第一步。
样本质量对于结果的准确性和可重复性至关重要。
以下是一些常见的样本制备质量控制步骤：细胞样品准备细胞浓度的准确计数：使用细胞计数仪准确计数细胞数目，以确保每个样本含有足够数量的细胞进行分析。
细胞的适当处理：根据不同实验要求，对细胞进行适当的处理，如洗涤、培养基的选择等，以确保细胞状态的一致性。
样品标记物的质量控制标记物的选择：根据实验需要，选择合适的标记物，并确保其特异性、亲和力和荧光强度等符合要求。
样品标记物的浓度和时间：对于标记物的浓度和反应时间进行优化，避免过高或过低的浓度导致信号失真或信号强度不足。
流式细胞仪的质量控制流式细胞仪作为流式细胞术的核心仪器，其性能的稳定和准确也是流式细胞术质量控制的关键。
以下是常见的流式细胞仪质量控制步骤：光谱校正与补偿荧光信号校正：使用校正颗粒进行荧光信号校正，校正光谱重叠和荧光强度的变化，以提高结果的准确性。
荧光信号补偿：通过对不同通道之间的荧光信号进行补偿，避免荧光信号之间的交叉干扰，确保结果的准确性。
流速标定流速标定：使用标定颗粒进行流速标定，保证流速的准确性，以便对细胞进行准确的定位和计数。
指标质量控制正质量控制：使用已知正样本进行实验，确保仪器的稳定性和结果的准确性。
负质量控制：使用未标记的负样本进行实验，排除背景信号和非特异性结合，保证结果的准确性。
识别和排除异物：通过故障检查和核查流式细胞术结果，识别和排除可能存在的污染源和异常情况。
数据分析的质量控制流式细胞术之后，对数据的准确分析和解读也是质量控制的重要环节。
流式细胞仪质量控制及常见问题处理-薛向军
移液 抗体 溶解/固定
II 仪器设置
IV 样品分析
分析窗口 补偿
门的纯度和回收率 准确性和精确度 可靠性核查
标本及标本处理的质控
•第一，标本的种类及外观 •第二，单细胞悬液的获取 •第三，抗凝剂的选择 •第四，样本的保存 •第五，去除红细胞的方法 •第六，细胞与抗体的比例 •第七，细胞活性的鉴定
数据的获取和分析
•第一，细胞获取数量
•第二，阈值的设立通道和大小 •第三，分析区域 •第三，其它有用的参数，如平均荧光强度，荧光强度中位 数，CV，细胞浓度等
可靠性的核实
T SUM: %CD3+4+ + %CD3+8+ = %CD3 ± 5% T 细胞的平行测定 2% LYMPHOSUM: CD3+ + CD19+ + NK = 100% ± 5% 荧光微球的流速（样本内质控）
在质控方面移液的影响经常被忽略
单平台绝对记数法要求精确和准确的测定 , 推荐使用反向加样
法, 要定期检查移液枪的精确度和准确性.
精确
准确
精确和准确
“Ringing phone syndrome”
Site A
“Change of operator syndrome”
Site B
“Stepper pipette syndrome”
系统性能参数----荧光线性
将不同荧光强度的微球混合，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微 球说明书提供的各个峰的MEFL荧光分子数，以及分析得到的各个峰的平 均荧光强度，做的线性回归。
Log Amplifier Linearity Verification 3
流式细胞术质量控
流式细胞术质量控预览说明:预览图片所展示的格式为文档的源格式展示,下载源文件没有水印,内容可编辑和复制一、流式细胞术常规项目操作流程二、样本采集和处理些？荧光染色的两种方法意义和注意事项是什么？三、免疫荧光染色3．单克隆抗体的质量控制IVD抗体和ASR试剂，是临床常规项目的首选抗体，性能参数符合临床常规检测要求，已经对两种抗体的特异性、灵敏度、精密度、适用范围进行了验证。
对于商品化质控物可以帮助监测部分单抗的检测效率，如淋系系列抗体、免疫表型分析、CD4绝对计数、CD34绝对计数、细胞绝对荧光强度、阳性表达、可以作为CD55和CD59抗体的阳性对照和室内质控物。
对于自做阳性或阴性质控物，监测单克隆抗体的质量。
因为有些抗原在正常或异常细胞上表达是已知的，如健康人红细胞和中性粒细胞膜上CD55和CD59，在正常人中是阳性表达，可作为阳性对照和室内质控物。
（二）荧光染色方法1．细胞膜免疫荧光染色大多数免疫表型分析是针对细胞膜表面抗原进行免疫荧光染色分析，即细胞膜免疫荧光染色。
正确使用红细胞裂解液和淋巴细胞分离液的目的，保证细胞膜表面抗原活性不被破坏；防止细胞内抗原对膜表面抗原检测的干扰。
注意事项：红细胞裂解或分离后至少洗涤1次；减少红细胞碎片、血小板、血浆蛋白和淋巴细胞分离液对检测的干扰；进行绝对计数抗原表达量时，不能洗涤红细胞裂解液，因不能改变初始细胞浓度。
2．细胞内免疫荧光染色细胞内免疫荧光染色是采用荧光素或荧光抗体对细胞内抗原进行免疫标记和分析的方法。
他的意义在于诊断疾病和判断预后；细胞内髓性过氧化物酶（MPO）、CD3和CD79a的表达帮助白血病免疫分型。
细胞内染色的关键之处，是使细胞膜通透增强但不影响细胞骨架的完整性；细胞膜通透增强后抗体或核酸染料可以进入细胞内与细胞内抗原进行免疫标记；确保固定和透膜的步骤不影响抗原与相应抗体的结合力或核酸与染料的结合。
细胞内免疫荧光染色的破膜剂有皂角素和70％冷乙醇，皂角素最常用最稳定。
流式细胞术实验技巧及数据分析
流式细胞术实验技巧及数据分析一、实验技巧1.细胞样本的准备在进行流式细胞术之前，首先需要准备好细胞样本。
对于悬浮细胞，可以通过离心分离获得单细胞悬浮液；对于贴壁细胞，需要利用胰酶等方法将细胞从培养皿上剥离。
样本的细胞浓度需要适当调整，以保证在实验过程中细胞数目在仪器检测范围内。
2.细胞标记与染色3.样本的处理与染色控制为了减少噪音和误差，需要进行相应的样本处理和染色控制。
常用的处理包括细胞固定、膜破裂和核酸溶解等。
另外，对照组的设置也非常重要，包括负对照、单标对照和血细胞淋巴细胞控制等，以校正仪器和标记的相关性。
4.流式细胞仪的设置与操作流式细胞仪是进行流式细胞术的关键仪器，需要正确设置和操作。
首先，要校准仪器的激发光源、滤光片和检测器等参数，以确保获得准确的荧光信号。
其次，要根据标记物的激发光和发射光波长选择合适的检测通道。
最后，通过检测标记物阳性细胞的信号强度和分布，调整仪器的敏感度和流速，以获得符合实验要求的数据。
二、数据分析1.数据获取与记录在流式细胞术实验结束后，需要用相应的软件（如FlowJo、CellQuest等）获取和记录仪器所产生的原始数据。
这些数据包括细胞整体的荧光信号和散点图等。
2.质量控制与后处理对于数据质量的控制，首先需要排除掉背景信号。
通过设置负对照，根据荧光信号的阈值来确定阳性细胞的比例。
另外，还需要剔除激活的、死亡的和颗粒干扰的细胞等。
3.数据可视化通过制作直方图、散点图和轮廓图等，可以直观地展示细胞的其中一种特定特征（如表达一些蛋白质、细胞周期等）在整个细胞群体中的分布情况。
从图形中可以得出相应的统计结果，并可以进一步比较不同样本之间的差异。
4.数据统计与分析对于一些研究问题，需要计算不同细胞亚群的百分比、中位数、平均值和标准差等。
此外，还可以利用双参数散点图，通过计算相关系数（如Pearson相关系数）来分析两个特征之间的相关性。
总结：流式细胞术作为一种快速、高通量和灵敏的细胞分析技术，对于研究细胞标记物的表达和功能等提供了有力的手段。
流式细胞仪检测技术与质量控制-文档资料
流式细胞仪检测技术与质量控制流式细胞仪检验技术（FCM），即流式细胞术，是以流式细胞仪作为检测手段，以免疫荧光技术作为主要标记方法的一门先进的分析技术。
该方法用免疫磁珠作为载体，在同一微孔内进行反应，利用流式细胞仪检测杂交信号和区分探针的种类。
本技术使用的免疫磁珠具有一定的特性，磁珠可利用颜色进行标识[1]。
当免疫磁珠上两种颜色混合的比例不同时，经流式细胞仪检测后即可区分定义为不同种类的免疫磁珠，目前两种颜色的组合在流式细胞仪上最多可区分成为100种不同的免疫磁珠。
1 材料与方法1.1 标本收集收集近3年本院治疗的30例患者，对30例患者行流式细胞仪检测，30例受检者中，男性患者16例，女性患者14例，最大年龄60岁，最小年龄17岁，患者平均年龄39岁。
2 检测方法2.1 采用特定的免疫磁珠作为载体，将已知序列特异性探针（SSO）固定在免疫磁珠上，每一种特异性探针固定在已知颜色比例的免疫磁珠上。
由于免疫磁珠上颜色比例的不同，在流式细胞仪红色激光束下可进行区分，根据事先设计的标记情况，通过流式细胞仪检测后可确认特定颜色比例免疫磁珠上携带的特异性探针的种类，从而达到将探针区分的目的。
2.2利用标记的特异性引物对目的DNA进行扩增，将PCR扩增产物与免疫磁珠上的序列特异性探针（SSO）在同一孔内进行特异性杂交，再加入荧光显色剂，然后利用流式细胞仪绿色激光束检测杂交信号，红色激光束区分探针的种类，利用软件分析杂交结果得出样本HLA基因型别。
3 方法学评价该方法与PCR-SSO有相似的地方，但是技术上有重大的突破。
本方法灵敏度非常高，在96孔微板上可进行大规模的检测，实现了所有探针的杂交于液相条件下在同一个孔内进行，而且采用免疫磁珠作为载体，具有快速、简便、可靠的优点，平均每个孔在流式细胞仪上检测的时间不到30s。
目前已有商品化的试剂供应，同时该技术也广泛应用于其他方面（如传染病指标等）的检测和研究。
4 讨论流式细胞术常规测定由一系列繁琐的步骤组成，大体可分为样本采集和处理、免疫荧光染色、流式细胞仪检测、数据分析及结果报告解释，做好这些步骤中每一环节的工作可以确保室内质量控制（1Qc）和室间质量控制（EQA）顺利达标。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制1、引言1.1 背景1.2 目的1.3 范围2、流式细胞术概述2.1 原理2.2 流程2.2.1 样本准备2.2.2 样本标记2.2.3 流式细胞仪设置2.2.4 数据采集2.2.5 数据分析3、质量控制流程3.1 样本质量控制3.1.1 样本准备的要求3.1.2 样本处理的注意事项 3.2 仪器质量控制3.2.1 日常仪器维护3.2.2 校准珠的使用3.3 标记质量控制3.3.1 阴性对照样本的选取 3.3.2 正性对照样本的选取 3.3.3 标记反应的优化3.4 数据质量控制3.4.1 检查数据完整性3.4.2 数据质量评估3.4.3 数据异常处理4、质量控制指标4.1 样本接受率4.2 样本处理成功率4.3 仪器运行状况4.4 标记反应效果4.5 数据完整性4.6 数据准确性5、质量控制记录5.1 样本质量控制记录5.2 仪器质量控制记录5.3 标记质量控制记录5.4 数据质量控制记录6、附件附件1、样本准备要求清单附件2、仪器维护流程图附件3、标记质量控制对照表附件4、数据质量评估标准注释:法律名词及其注释1、流式细胞术：一种利用流式细胞仪对细胞进行分析和排序的技术。
2、质量控制：指采取一系列措施，确保流式细胞术过程中的样本、仪器、标记和数据的质量达到一定要求。
3、样本准备要求清单：包括对样本的收集、保存、处理等要求的清单。
4、仪器维护流程图：说明日常仪器维护的步骤和方法的流程图。
5、标记质量控制对照表：记录每次标记实验中所选用的阴性对照样本、正性对照样本和标记条件的表格。
6、数据质量评估标准：用于评估数据质量的标准，包括数据完整性、数据准确性等指标。
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流式细胞仪检测技术与质量控制-文档资料
流式细胞仪检测技术与质量控制-文档资料介绍流式细胞仪是一种常见的生物学实验仪器，可用于快速分析、定量和分选单个细胞。
它以极高的灵敏性和精度，使其成为现代生命科学中最重要的工具之一。
流式细胞仪的应用范围非常广，包括细胞免疫学、药理学、细胞周期分析、基因表达分析等等。
本文档旨在介绍流式细胞仪的基本工作原理、检测技术和质量控制方法。
工作原理流式细胞仪通过吸收、散射和荧光等特定光学信号来检测和分析细胞。
它的核心组成部分是荧光染料和激发光源，荧光染料可以与特定的细胞分子结合，形成能够发射荧光的复合物，激发光源可以激活荧光染料的荧光信号。
当样品通过流式细胞仪时，细胞和细胞复合物被单独地呈现在流体中，并且被一个聚光镜系列扫描，采集特定的光学信号。
通过分析该信号，流式细胞仪可以确定每个单一细胞的荧光特性。
检测技术荧光检测流式细胞仪常用的检测方法是荧光检测。
它需要将荧光染料与特定的细胞分子结合，形成能够发射荧光的复合物。
流式细胞仪将样品置于聚光镜下，激发光源激活荧光染料的荧光信号，然后通过聚光镜采集荧光信号。
荧光检测既可以用来鉴定单个表面标记物，也可以用于检测内部标记。
散射检测散射检测是流式细胞仪的另一种找出单个细胞的方式。
散射检测基于细胞对激光束的散射表现，散射强度既可以用来区分不同类型的细胞，也可以用于估计细胞的大小、形状和结构。
生物素-亲合素检测生物素-亲合素检测是流式细胞仪常用的一种检测方法。
生物素-亲合素检测通过不同的化学偶联对荧光染料进行标记，使得检测定量更加精确。
质量控制流式细胞仪的检测结果受多种因素的影响，因此需要严格的质量控制程序来保证检测结果的准确性和可靠性。
质量控制程序包括实验前的设备校准和实验后的数据分析。
设备校准设备校准是流式细胞仪保证检测结果准确性和可靠性的关键。
光学器件需要定期校准，以确保检测的性能和准确性。
每个荧光探针必须进行校准，以确保正确的基线水平和探针强度。
数据分析数据分析是流式细胞仪质量控制的另一关键步骤。
流式细胞术应用中的质量控制(徐翀)
流式细胞术应用中的质量控制徐 翀上海市临床检验中心Leonard A. Herzenberg荣获2006年京都奖（Kyoto Prize ）1.荧光抗体识别细胞表达的抗原2.荧光染料3.荧光标记核酸探针杂交4.微球捕获技术检测可溶性分子流式细胞术的技术应用原理FCM 在临床医学领域中的应用（国内）Ø淋巴细胞亚群、造血干细胞及其他免疫细胞检测Ø血液/淋巴系统肿瘤免疫分型和微小残留监测Ø红细胞疾病检测Ø细胞周期和DNA 倍体分析Ø液相多重蛋白定量FCM 在临床医学领域中的应用（欧洲）Accreditation of flow cytometry in Europe. Cytometry Part B. 2013; 84B: 135-142ICCS, CLSI/ICSH 标准和指南类别国外国内法规性文件，未具体涉及到流式检测方法Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988. (CLIA’ 88, 1988, 2003)《医疗机构临床实验室管理办法》，2006，中华人民共和国卫生部涉及流式检测方法通用标准或规则，未涉及具体检测项目Validation of Cell-based Fluorescence Assays:Practice Guidelines from the ICSH and ICCS, 2013; Canadian Guidelines for flow cytometric immunophenotyping. 2001《流式细胞术临床应用的建议》，2013，中华医学会检验医学分会/卫生部临床检验中心/中华检验医学杂志编辑委员会涉及流式具体检测项目免疫细胞计数：Guideline for Flow Cytometric Immunophenotyping , 1993, NIAID-DAIDS; CLSI H42-A2-2007;白血病/淋巴瘤：Revised guideline onimmunophenotyping in acute leukaemias and chronic lymphoproliferative disorders. 2002, BCSH;CLSI H43-A2-2007;Guidelines on the use of multicolour flow cytometry in the diagnosis of haematological neoplasms. 2014, BCSH红细胞：ICSH H44-A2-2010；Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by flow cytometry.CLSI H52-A2-2014《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》，WS/T 360-2011，中华人民共和国卫生部《四色流式细胞术用于急性白血病免疫分型的中国专家共识（2015版）》, 中国免疫学会血液免疫分会临床流式细胞术学组Validation of Cell-based Fluorescence Assays: PracticeGuidelines from the ICSH and ICCSØRationale and Aims (pages 282-285)ØPre-Analytic (pages 286-290)ØAnalytic (pages 291-308)ØPost-Analytic (pages 309-314)ØAssay Performance Criteria (pages 315-323)全面质量管理Ø分析前质量控制按照时间顺序，从临床医生开出医嘱开始，到分析检验程序时终止的步骤，包括检验申请、患者的准备、原始样品的采集、运送到实验室并在实验室进行传输。
流式细胞术的质量控制
⑷ DNA二倍体标准不稳定，Schutter等发现用新鲜正 常组织的二倍体细胞或者用其他生物细胞 DNA含量 (例如，鸡红细胞，鳟鱼血细胞等)作为石蜡包埋组 织细胞DNA含量的标准不适用，石蜡包埋组织比新 鲜组织细胞DNA荧光强度低，且样品间的荧光强度 不稳定，解决DNA二倍体标准不稳定的办法，可将 正常组织与肿瘤组织作为一个内标的二倍体标准参 照，可减少DNA倍体分析的误差，对存档中的石蜡 包埋组织材料，可以采用正常组织石蜡包埋标本， 作为一个外参的二倍体标准，但要求采用的外参二 倍体样品和肿瘤样品中加入内标准样品(例如鸡血细 胞等)。
流式细胞术的质量控 制和影响因素
河北省肿瘤研究所 左连富
一、标本的采集和固定方法的质量控制
标本采集是十分重要的环节，在标本的采集过程， 需注意： ①手术切除的新鲜标本或活检针吸标本取材时，要 避免出血坏死组织。 ②标本采集后要及时固定或深低温保存，以免组织 发生自溶，DNA降解，而造成测试结果的误差。 ③固定剂要采用对组织细胞穿透性强的浓度。
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在组织脱蜡的过程中，一定将蜡脱净，残留的石 蜡可，影响酶的消化活性，检查是否将蜡脱净的 方法是弃去二甲苯(Hedley强调用Histoclear，即 组织清洗剂代替二甲苯脱蜡，效果更好)，加入 100%乙醇，如果无絮状物浮起，示蜡已脱净 梯度酒精(100% 70% 50%)水化要充分,使组织还 原到与新鲜组织相似的状态。 消化酶液要掌握适当的浓度、pH值、温度等，不 造成酶的活性降低为宜，消化时间很重要，时间 短细胞消化不下来，时间长，消化下来的细胞又 被破坏，在制备石蜡包埋单细胞时，常规使用 0.5%胃蛋白酶PH 1.5。
二、单细胞悬液制备的质量控制
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流式细胞术的质量控制流式细胞术是一种在液流中快速检测和分析细胞特性的技术，广泛应用于医学、生物技术、免疫学等领域。
然而，要确保实验结果的准确性和可靠性，必须实施严格的质量控制措施。
本文将探讨流式细胞术的质量控制。
1、样本制备的质量控制样本制备是流式细胞术的关键步骤之一，包括细胞样本的收集、处理和标记。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）样本的收集和保存：应尽可能缩短样本采集到分析的时间，避免细胞状态的改变。
对于血液样本，应使用肝素抗凝，避免细胞聚集。
（2）细胞的分离和洗涤：应根据实验需求，采用合适的分离方法（如密度梯度离心法、贴壁培养法等）对细胞进行分离。
在洗涤过程中，应使用无菌、无内毒素的缓冲液洗涤细胞，去除杂质和死细胞。
（3）抗体标记：选择高质量的抗体，并遵循制造商的建议进行标记。
应避免抗体非特异性结合，确保标记的特异性和敏感性。
2、仪器设备的质量控制流式细胞仪是流式细胞术的核心设备。
为确保实验结果的准确性，应对仪器进行定期校准和维护。
具体措施包括：（1）校准激光功率：定期使用标准样本对激光功率进行校准，确保光路准直，提高光散射数据的准确性。
（2）清洗流动室：定期清洗流动室，防止样品残留物堵塞喷嘴，影响流速稳定性。
（3）校准光电倍增管：使用标准样本校准光电倍增管，确保光电倍增管输出的线性范围。
3、数据分析的质量控制数据分析是流式细胞术的关键步骤之一，包括数据的获取、处理和解析。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）数据获取：设置合适的参数和门控，确保获取最佳的数据。
（2）数据预处理：去除噪声和无效数据，进行数据归一化处理，提高数据质量。
（3）数据分析：选择合适的数据分析方法（如聚类分析、主成分分析等），对数据进行深入挖掘。
同时，应使用多个对照样本，评估实验结果的可靠性和稳定性。
4、实验室环境的质量控制实验室环境对流式细胞术的结果也有重要影响。
为确保实验结果的准确性，应采取以下措施：（1）温度控制：保持实验室温度稳定，避免温度波动对细胞状态的影响。
（2）湿度控制：保持实验室湿度稳定，避免湿度波动对仪器性能的影响。
（3）清洁卫生：保持实验室清洁卫生，定期进行消毒和清洁，防止细菌和病毒的污染。
5、质量管理体系的建立与持续改进为确保流式细胞术的质量控制的有效性，应建立完善的质量管理体系，并持续改进。
具体措施包括：（1）制定操作规程和标准操作流程：明确各项操作的步骤和标准操作流程，确保实验过程的规范性和一致性。
（2）培训技术人员：对技术人员进行定期培训，提高技术人员的专业素养和操作技能。
同时，应定期组织技术交流活动，分享经验和最佳实践。
（3）建立质量记录：对实验过程和质量检查结果进行详细记录，以便追踪和评估实验结果的可信度。
应根据质量检查结果对存在的问题进行分析和改进。
（4）定期审计和评估：定期对实验室进行审计和评估，检查质量控制的实施情况和有效性。
应根据审计和评估结果对质量管理体系进行调整和完善。
流式细胞术的质量控制流式细胞术是一种在液流中快速检测和分析细胞特性的技术，广泛应用于医学、生物技术、免疫学等领域。
然而，要确保实验结果的准确性和可靠性，必须实施严格的质量控制措施。
本文将探讨流式细胞术的质量控制。
1、样本制备的质量控制样本制备是流式细胞术的关键步骤之一，包括细胞样本的收集、处理和标记。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）样本的收集和保存：应尽可能缩短样本采集到分析的时间，避免细胞状态的改变。
对于血液样本，应使用肝素抗凝，避免细胞聚集。
（2）细胞的分离和洗涤：应根据实验需求，采用合适的分离方法（如密度梯度离心法、贴壁培养法等）对细胞进行分离。
在洗涤过程中，应使用无菌、无内毒素的缓冲液洗涤细胞，去除杂质和死细胞。
（3）抗体标记：选择高质量的抗体，并遵循制造商的建议进行标记。
应避免抗体非特异性结合，确保标记的特异性和敏感性。
2、仪器设备的质量控制流式细胞仪是流式细胞术的核心设备。
为确保实验结果的准确性，应对仪器进行定期校准和维护。
具体措施包括：（1）校准激光功率：定期使用标准样本对激光功率进行校准，确保光路准直，提高光散射数据的准确性。
（2）清洗流动室：定期清洗流动室，防止样品残留物堵塞喷嘴，影响流速稳定性。
（3）校准光电倍增管：使用标准样本校准光电倍增管，确保光电倍增管输出的线性范围。
3、数据分析的质量控制数据分析是流式细胞术的关键步骤之一，包括数据的获取、处理和解析。
在此过程中，应遵循标准化操作流程，并注意以下几点：（1）数据获取：设置合适的参数和门控，确保获取最佳的数据。
（2）数据预处理：去除噪声和无效数据，进行数据归一化处理，提高数据质量。
（3）数据分析：选择合适的数据分析方法（如聚类分析、主成分分析等），对数据进行深入挖掘。
同时，应使用多个对照样本，评估实验结果的可靠性和稳定性。
4、实验室环境的质量控制实验室环境对流式细胞术的结果也有重要影响。
为确保实验结果的准确性，应采取以下措施：（1）温度控制：保持实验室温度稳定，避免温度波动对细胞状态的影响。
（2）湿度控制：保持实验室湿度稳定，避免湿度波动对仪器性能的影响。
（3）清洁卫生：保持实验室清洁卫生，定期进行消毒和清洁，防止细菌和病毒的污染。
5、质量管理体系的建立与持续改进为确保流式细胞术的质量控制的有效性，应建立完善的质量管理体系，并持续改进。
具体措施包括：（1）制定操作规程和标准操作流程：明确各项操作的步骤和标准操作流程，确保实验过程的规范性和一致性。
（2）培训技术人员：对技术人员进行定期培训，提高技术人员的专业素养和操作技能。
同时，应定期组织技术交流活动，分享经验和最佳实践。
（3）建立质量记录：对实验过程和质量检查结果进行详细记录，以便追踪和评估实验结果的可信度。
应根据质量检查结果对存在的问题进行分析和改进。
（4）定期审计和评估：定期对实验室进行审计和评估，检查质量控制的实施情况和有效性。
应根据审计和评估结果对质量管理体系进行调整和完善。
监理质量控制高原寒冷地区施工质量控制一、引言在高原寒冷地区的施工过程中，监理质量控制具有极其重要的地位。
由于高原寒冷地区的特殊环境，施工难度大，技术要求高，因此，对施工质量控制的要求也相应提高。
本文将探讨如何在高原寒冷地区进行有效的施工质量控制，以确保工程的顺利进行和最终的成功完成。
二、监理质量控制的重要性监理质量控制是工程建设过程中不可或缺的一环，特别是在高原寒冷地区。
通过有效的监理质量控制，可以确保施工过程符合设计要求和相关标准，提高工程质量，防止因质量问题导致的工程延误或安全事故。
此外，监理质量控制还能促进施工技术的改进和工程管理水平的提升，提高企业的竞争力。
三、高原寒冷地区施工质量控制策略1、严格审查施工方案：在施工前，应对施工方案进行详细审查，确保其符合高原寒冷地区的特殊环境要求。
对于可能出现的问题，如冻土施工、保温保湿等，应制定相应的应对措施。
2、强化材料质量控制：材料质量是工程质量的基础，应严格把关。
对进场的材料进行严格检查，确保其符合设计要求和相关标准。
特别是对于保温、防水等关键材料，应进行专项检测。
3、加强施工现场监控：在施工过程中，应加强现场监控，对每个环节、每个步骤进行质量检查和验收。
一旦发现质量问题，及时进行处理和整改。
4、注重人员培训和管理：人是施工的主体，应注重对施工人员的培训和管理。
加强技能培训，提高施工人员的专业素质和技术水平。
同时，加强人员管理，确保人员配备充足，避免因人员不足导致的工程质量问题。
5、引入先进技术和设备：针对高原寒冷地区的特殊环境，应引入先进的施工技术和设备，提高施工效率和质量。
例如，采用保温效果好、施工简便的保温材料和技术，以及适应冻土地区施工的特殊设备等。
6、建立完善的质量管理体系：建立完善的质量管理体系是高原寒冷地区施工质量控制的重要保障。
通过建立各项质量管理制度和规范操作流程，明确各级人员的职责和权限，形成高效、有序的质量管理机制。
同时，应加强质量管理的监督和考核，对出现的质量问题进行严肃处理，以示警醒。
7、合理安排施工工期和进度：在高原寒冷地区施工，受气候条件的影响较大，因此应合理安排施工工期和进度。
根据气候特点，合理安排人员和设备进场时间，避免因气候原因导致的停工和延误。
同时，应天气预报，做好极端天气条件下的应急预案。
8、加强与设计单位和业主的沟通：监理单位应加强与设计单位和业主的沟通与协调，确保对施工过程中的质量问题有充分的理解和共识。
对于设计单位提出的要求和业主的意见和建议，应及时反馈并积极落实到实际工作中。
四、结论监理质量控制高原寒冷地区施工质量控制是一项复杂而重要的任务。
通过严格审查施工方案、强化材料质量控制、加强施工现场监控、注重人员培训和管理、引入先进技术和设备、建立完善的质量管理体系、合理安排施工工期和进度以及加强与设计单位和业主的沟通等措施，可以实现有效的施工质量控制。
只有这样，我们才能确保高原寒冷地区的工程建设项目能够按时、按质地完成，实现工程效益和社会效益的双赢。
热式质量流量计的设计热式质量流量计是一种广泛应用于化工、石油、食品等领域的测量仪器，它通过测量气体或液体的流量来反映生产过程中的物质交换量。
本文将介绍热式质量流量计的设计，包括其应用领域、基本原理、特点与优势、设计流程以及优化方法。
在热式质量流量计的设计中，其基本原理是利用加热元件对被测介质进行加热，通过测量加热后的介质流量来推算质量流量。
当介质流经加热元件时，加热元件的温度会发生变化，而这个温度变化与介质的质量流量成正比。
因此，通过测量加热元件的温度变化就可以知道介质的质量流量。
热式质量流量计的结构一般包括加热元件、温度传感器和信号处理电路三部分。
加热元件用于对被测介质进行加热；温度传感器则用于测量加热元件的温度变化；信号处理电路则将温度传感器的信号转化为质量流量信号输出。
在设计热式质量流量计时，需要考虑以下步骤：1、确定测量范围和测量精度。
根据实际应用需求，选择适合的测量范围和测量精度，以确保测量结果的准确性和可靠性。
2、选择合适的加热元件和温度传感器。
加热元件和温度传感器的选择需要考虑测量介质的性质、温度和压力等参数，以确保测量结果的准确性和可靠性。
3、设计信号处理电路。
信号处理电路需要将温度传感器的信号转化为质量流量信号输出，同时需要对信号进行滤波和放大等处理，以减小误差和提高测量精度。
4、进行样机制作和测试。
根据设计要求制作样机，并进行测试和校准，以确保测量结果的准确性和可靠性。
在进行热式质量流量计的设计时，还可以采取以下优化方法来提高测量精度和应对现场恶劣环境：1、采用高精度温度传感器和信号处理电路。
采用高精度温度传感器和信号处理电路可以减小误差和提高测量精度，同时可以降低对现场干扰的敏感性。