BD FACSCalibur流式细胞仪培训手册

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BDFACSCalibur流式细胞仪简明操作规程

BD FACSCalibur流式细胞仪简明操作规程一．开机程序1.把稳压器电源开关设到ON。

2.打开储液箱，把黑色开关开到TANK CHANGE位置，鞘液桶加满鞘液，倒空废液桶，把黑色开关开到Pressurize位置。

3.将FACSCalibur右侧下面的绿色按钮按开。

4.打开电脑。

二．仪器条件设定1.点击“苹果”菜单项下的CELLQuest，建立一个新视窗。

2.点击“Acquire”菜单下的“Parameter description”建立自己的文件夹，保留在屏幕上。

3.点击“Acquire”菜单下的“Connect to Cytometer”联机，这时出现“Acquisiton Control”对话框，保留在屏幕上。

4.点击“Cytometer”菜单下的“Detectors/Amps”、“Threshold”、“Compensation”三个对话框，保留在屏幕上。

5.点击“Cytometer”菜单下的“Instrument settings”，出现对话框，点击对话框中“open”，选择自己的实验条件后，点击“set”，然后点击“Done”6.加上对照样本，样品支撑架置于中位，用LO 流速RUN，点击AcqusiotionControl 对话框的Acquire，观察样品的散射光和荧光参数是否合适，调节“Detectors/Amps”对话框的相关参数，直到各个参数都合适为止。

7.点击”Acqusiotion Control”对话框的“Setup”，开始测试样品。

当所有样品分析完毕，即换上双蒸水，并将流式细胞仪置于“STANDBY”状态，以保护激光管。

三．关机程序1.测试完毕样品后，从File中选择Quit, 退出软件，点击“Special”菜单项下的“Shutdown”关机。

2.试管中加入3 ml Clean液，将样品支撑架置于旁位清洗外管，以外管吸入1ml Clean液，将样品支撑架置于中位，用HI流速RUN5分钟清洗内管，。

流式细胞仪培训手册(完成版)_图文

流式细胞仪培训手册序论学习仪器的最好方法是操作仪器,然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。

本书介绍了流式细胞仪的基本知识,并从不同角度详尽阐述了各种台式机(FACScanTM , FACSortTM , FACSCaliburTM ,和 BD LSR与大型机(FACS VantageTM, FACSVantageTM SE, 和 FACStarPLUSTM 之间的不同。

阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。

目录第 1章综述…………………………………………………………………… 4 第 2章液流系统………………………………………………………………第 3章散射光信号及荧光信号………………………………………………3.1 散射光信号………………………………………………………3.2 荧光信号…………………………………………………………3.3 荧光补偿第 4章光电系统………………………………………………………………4.1 光平台……………………………………………………………4.2 光学滤片………………………………………………………4.3 信号探测器……………………………………………………4.4 阈值………………………………………………………………第 5章数据分析………………………………………………………………5.1 数据采集及显示…………………………………………………5.2 设门………………………………………………………………5.3 细胞亚群的数据分析…………………………………………5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析………………………………5.5 CellQuest软件使用……………………………………………5.6 MutiSet 软件使用………………………………………………5.7 Simultest 软件使用……………………………………………5.8 B27软件使用…………………………………………………5.9 WinMDI软件使用…………………………………………5.10 FACSPress软件使用…………………………………………5.11 System II软件使用…………………………………………5.12 MultiCycle软件使用…………………………………………5.13 Modfit使件使用……………………………………………第 6章流式基本检测项目6.1淋巴细胞亚群检测 (双色、三色、四色,三种软件分析6.2 B27的检测………………………………………………………6.3 血小板抗体检测………………………………………………6.4 网织血小板及红细胞分析……………………………………6.5 干细胞检测……………………………………………………6.6 DNA倍体分析……………………………………………………6.7 凋亡检测…………………………………………………………第 7章分选6.1 分选………………………………………………………………第 8章激光器及光路校正……………………………………………………7.1 激光器的工作原理………………………………………………7.2 光路校正…………………………………………………………第 9章答案………………………………………………………………第一章综述流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术,通常指细胞通过激光束时在液流中的特性,即粒子的大小,密度或是内部结构,以及相对的荧光强度。

Get清风BDFACSCalibur流式细胞仪培训手册

BD-FACSCalibur流式细胞仪培训手册BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook二、开机、关机标准操作2.1 FACS Calibur 开机1. 开启细胞仪电源。

2. 开启其它周边配备电源，如打印机及MO机。

3. 开启计算机。

4. 确认鞘流液筒有八分满的FACSFlow，确实旋紧(鞘液筒容量为4L)。

5. 将废液倒掉，并在废液筒中参加200ml 家用漂白水(废液筒容量为4L)。

6. 将减压阀方向调在加压〔Pressurize〕位置。

7. 排除液流管路与过滤器中的气泡。

8. 取下样品管，执行PRIME 功能两次。

9. 使用1ml PBS，HIGH RUN 两分钟。

10. 可开始分析样品。

2.2 FACS Calibur 关机关机前必要动作：清洗进样管和外套管，防止进样管堵塞、或有染料残留。

1. 将样品支持架左移，取2 mlFACSClean〔10%Bleach〕上样品，让仪器的真空系统抽取约 1 ml 的液体。

2. 将样品支持架回正，按HI RUN，然后让FACSClean 清洗管路10分钟。

3. 按Standby，取下样品管，执行PRIME功能两次。

4. 取2 ml dH2O，重复上述步骤1-3。

5. 注意最后只留约1 ml dH2O 在试管中。

6. 按STANDBY 五分钟，使风扇冷却雷射后，关闭细胞仪〔必要动作，以保护雷射光源。

〕7. 倒掉废液，并回填200 ml漂白水。

8. 将减压阀放在「VENT 漏气」位置。

将鞘流液筒充填至八分满。

9. 退出软件“File〞→“Quit〞(如有对话选项，选择“Don‘t save〞)。

确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。

10. 关闭计算机。

“Special〞→“Shutdown〞。

三、上机分析流程建议首次试机防止进行大量试验，仅需准备以下样品。

〔1〕Negative Control〔不加任何抗体〕。

BD FACSCalibur流式细胞仪操作规范

BDFACSCa1ibUr流式细胞仪操作规范
1、目的
规范操作，正确使用仪器，保证检验结果准确无误。

2、适用范围
CD4+T淋巴细胞计数
3、职责
1.1科室负责人：负责监督仪器的使用和维护。

1.2操作人员：按规范操作，搞好日常维护，做好使用记录。

3.3保管人员：负责仪器定期维护，保养。

4、操作程序
4.1检查鞘液桶，确认鞘液充满状态，盖紧黑盖，管路畅通，无扭曲
4.2检查废液桶，确认废液桶充满40OnII漂白剂，管路畅通，无扭曲
4.3打开流式细胞仪
4.4打开电脑
4.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡
4.6做prime4.7等待机器预热5-10分钟后可开始实验。

BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程

BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BDFACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。

适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。

责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。

保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。

科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。

内容：1.每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。

1.4打开电脑。

1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

1.6做Prime。

1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。

2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。

2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。

2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。

2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。

2.6退出所有应用软件，关闭电脑。

2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。

3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。

3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。

3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。

3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。

3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。

BD Calibur流式细胞分析仪工作指南

流式细胞分析仪(BD Calibur)工作指南暨南大学生物医药研究院：周玉英2012年06月第一章流式细胞仪管理使用守则1. 优先权原则：本流式细胞分析分选仪器由暨南大学“211”重点学科“生物技术与生物工程药物”学科组所用并使用，故在同一时间段内：● 本校优先于外校使用；● 学科组优先于外单位使用；● 学科组内各单位使用优先权采用轮流制，相关单位优先权周可优先使用。

2. 专人使用原则：● 流式细胞分析仪（Calibur）必须由已培训合格的的实验技术老师或学生严格按照操作规程进行操作。

● 对于流式分选仪Influx，只能由培训合格的课题组负责老师操作，严禁学生操作。

● 课题组负责老师或学生需定期接受培训，培训后合格后若两个月之内未使用仪器，必须再次培训合格后才可使用流式仪。

3. 预约原则：● 请与操作老师沟通后至少提前一天预约，预约时先提交有导师签字的预约表，再由管理人员统一在网上预约。

●不能按预约时间使用流式时，至少提前一天取消预约，否则将正常收费。

●不接受提前超过2周以上的预约。

4. 做好使用登记：仪器使用完毕后，切记进行仪器使用记录登记，管理人员会核对是否与预约记录的一致性。

5. 随时保持清洁：●进入流式房请更换拖鞋，离开流式房时，请将拖鞋放回鞋柜内。

●禁止随手乱放杂物（如一次性手套、塑胶手套，用完的样品等）。

●走前请带走制造的垃圾（包括细胞垃圾、耗材垃圾和生理盐水瓶等）。

●实验老师在课题组的优先权周实验老每周二、周五下午清洁流式房卫生，包括清洁地面、桌面、倒掉除湿机水箱中的水。

7. 刻录数据：刻录数据只能用一次性的CD盘或DVD盘，严禁用自备U盘或可擦写光盘进行数据刻录。

8. 安全使用原则：● 必须严格按照培训时的流式使用规程操作仪器，严禁违规操作。

● 对有毒或者有污染的样品需提前对操作老师说明，严禁随处乱放有毒、有污染的样品。

● 仪器使用完毕后，离开房间时，一定要锁好门窗，包括流式房门和725房间的玻璃门。

FACSCalibur流式细胞仪中文操作手册

5. 上樣區：上樣區是樣本管的上樣位置。它包括三個部分，一個是進樣針 Sample Injection Tube，將樣本輸入流動室，還有就是支撐架 Tube Support Arm、和液滴存留系統 Droplet Containment System。進樣針：是一根不鏽鋼管，將細胞從樣本針中吸入流動室。進樣管外有一套管，是液滴保留系統的一部分。支撐架：用於支撐樣本管、並負責啟動液滴存留系統。支撐架有三個位置：位於樣本管之下的中位，樣本管左側或右側。液滴存留系統：系統由支撐架、真空幫浦和外套管組成。當支撐架位於左側或右側位置時，真空幫浦就會啟動，將液體從外管吸入廢液桶內。上樣時，須注意將支撐架位於中位，以避免過多樣品被抽吸到廢液筒內（當支撐架位於中位，真空幫浦停止工作）。更換樣品時，讓儀器保持 RUN 的模式，使得進樣針可以反沖；切換到 STANDBY 模式前，確保液路已沖洗徹底以免碎片沈積到流動室中。
FACS101 Handbook Pro
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4. 從 Acquire 功能表中選擇 Connect to Cytometer，建立儀器和電腦之間通訊。此時會出現 Browser 方框。將之移至適當位置。
5. 從工具板中點擊散點圖圖示。在實驗文件的空白區點擊，拖曳對角線至適當大小，然後放開滑鼠。此時應可以在右方看到 Inspector：Dot Plot 對話框。
FACS101 Handbook Pro
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6. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Duplicate 功能，可複製一個同樣大小的散點圖，完成後可將重製圖移至原圖右方。
7. 從螢幕上方 Edit 功能表中選擇 Select All 功能，文件中所有圖譜的四角會出現黑色方塊，表示被選取。可在出現之 Inspector：2 Objects 方框中將 Plot Type 改成 Acquisition。 8. 因應實驗需求來修改所有圖譜中顯示之參數。第一圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FSC-H 1024、SSC-H 1024；第二圖 X 和 Y 軸參數分別設為 FL1-H 1024、FL2-H 1024。修改動作為輕擊圖譜，並在出現之 Inspector 方框依需要選擇。 FSC：細胞大小 SSC：細胞顆粒性 FL1：FITC 綠色螢光 FL2：PE 橙色螢光 FL3：PerCP 紅色螢光儀器設定注意：實驗數據品質，取決於最適化儀器設定。儀器設定文件不能在數據收取後再更改，研究人員必須在第一次就使用正確的儀器設定。儀器設定（Instrument settings），含偵測器電壓（Detector/ Amps），閾值（Threshold），螢光補償（Compensation）等儀器條件的組合。一般而言，儀器設定的順序為 Detector/Amps -- Threshold -- Compensation。

bdfacscalibur流式细胞仪培训手册

BD FACSCalibur流式细胞仪FACS101 Handbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。

如希望进一步了解流式细胞技术应用，请至本公司网站订阅FACSinformation电子报。

如需要本课程手册，欢迎至本公司网站下载。

如需要免疫荧光染色方法，请至本公司网站下载。

一、BD FACSCalibur基本结构仪器本体：1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。

2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例FSC Diode 只收488 nm波长散射光SSC PMT 只收488 nm波长散射光FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545 nm）FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606 nm）FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）3. 仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。

流速控制：LO：样品流速：12 l /minMED：样品流速：35 l /minHI: 样品流速：60 l /min功能控制：RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。

（正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。

）STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。

PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。

PRIME 结束，仪器恢复STANDBY状态。

4. 储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。

可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。

请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。

鞘液筒：位于抽屉左侧，容积4升。

FACSCalibur操作手册

FACS Calibur 操作手册一、构造1.电源：在仪器的左侧下方2.仪器的面板：在仪器前方面板的右下方有3个流速控制键（LO/MED/HI）及3个功能控制键（RUN/STANDBY/PRIME）（下图4.1）。

a:流速控制：LO: 样品流速12ul/minMED: 样品流速35ul/minHI: 样品流速60ul/minb:功能控制：RUN：绿色时表示样品开始输入，黄色表示仪器不正常。

STANDBY：无样品或者预热时的位置，此时激光管的功率会下降，可延长其寿命。

PRIME：自动冲洗进样针，一个反冲的过程，通常在进样针有堵塞现象的时候启用。

c: 鞘液桶与废液桶：位于仪器正面下方的储液箱内。

3.样品的输入区在仪器的中部:上样针、样品支架（下图4.3 ）。

4.数据处理系统：苹果机CELLQUEST软件。

二、模板的建立：若在桌面MODLE中没有你所需要的模板，则重新建立一个，具体的步骤入下：1.双击打开CELLQUEST软件，2.点击Acquire>> Acquire Descripton, 打开Acquire Descripton对话框，点击chang按钮建立数据存放的路径，以及文件的名称。

根据样品所标记的荧光染料选择合适的接收通道，FACS Calibur有3个接收通道。

2008年6月升级为4通道，增加633nm的激光器，可检测APC、CY5等荧光素。

3.然后在对话框的右侧对应的通道位置写上荧光素的名称。

4.在工具栏中选择散点图工具，其横坐标FSC-H，纵坐标为SSC-H。

5.在工具栏中点击所选的图形类型，拉动鼠标成图，然后点击X或者Y轴的名称，更改坐标轴的名称。

6.根据你的实验对照样品设定gate，在工具栏中选择gate的不同形状，将在图形中集中得成团细胞选中。

同时设定Marker线，点击工具栏中的横线或者正方形椭圆等，在直方图中我们使用横线作标记，散点图中选择十字或者其他正方形椭圆以及不规则图形作为标记。

BD FACSCalibur流式细胞仪说明书

The BD FACSCalibur™ platform offers a unique modular approach to flow cytometry and allows users to perform both cell analysis and cell sorting in an innovative single bench-top system. Designed with multicolor application support in mind, the BD FACSCalibur flow cytometer provides flexibility to support a wide variety of research and clinical applications.Engineered to meet evolving clinical and research requirements, the user-friendly BD FACSCalibur system can be easily upgraded to address emerging automation or sorting requirements in a laboratory. Walkway automation can be achieved by the BD FACS™ Loader option that handles tube-based assays or the BD™ High Throughput Sampler that handles assays in 96 or 384-well microtiter plates.* In addition, the BD FACSCalibur system can be upgraded to support cell sorting to allow for the isolation of a population of interest.*Built-in modularity and simple upgrades make the BD FACSCalibur an excellent long-term investment for today’s cost conscious laboratories.The BD FACSCalibur system is compact and easy to use. It is complemented by a broad suite of intuitive software solutions to streamline analysis for a wide range of applications, including enumeration of lymphocyte subsets, stem cells, residual white blood cells, reticulocytes, DNA analysis,* immune function studies,* bead based immunoassays,* and multiplexed analysis of signal transduction* and phosphorylation targets.*Enabling fast, easy, and accurate results forroutine applications with a versatile, modulardesign has made the BD FACSCalibur theautomated benchtop cytometer of choicefor cell analysis in research and clinicallaboratories worldwide.*Some options and applications are for Research Use Only.Rare-event analysis A growing number of flow cytometry–based assays depend on rare-event detection. For example, in the characterization of subpopulations of stem cells, millions of cells are analyzed to achieve a statistically significant sampling of the subset of interest.Advanced applications like this require a flow cytometer capableof high-speed analysis. The BD FACSCalibur system features amultiparameter triggering system that allows a user to acceleratethe analysis by electronically eliminating events from onboardprocessing.A R egion R3 defines basophils and region R4 defines CD123+ DCs(0.14% of total).B Region R5 defines CD11c + DCs (0.21% of total).A B CD123 PE 1010101010A n t i –H L A -D R P e r C P Gated on R1 and R2R4R3a CD11c APC Gated on R1 and R2R5b 4R E S U L T SDual-laser design for multicolor analysisThe BD FACSCalibur dual-laser design provides the flexibility and sensitivity needed for multicolor analysis. Two lasers, an air-cooled argon laser and a red diode laser, are spatially separated for high sensitivity, minimal compensation, and maximum flexibility in fluorochrome selection. This maximizes the information obtained from limited samples and increases the cost-effectiveness of each assay.A fully integrated multiparameter system, the BD FACSCalibur system ensures objective and reproducible results, which are vital to today’s laboratories.Unique easy-to-use sorting technology (optional)The BD FACSCalibur cell sorting option allows users to identify and isolate a population of interest. Sorting on the BD FACSCalibur system occurs in a completely enclosed, aerosol-free environment for enhanced safety, which is especially important when processing biohazardous samples. The sorting process is designed to be straightforward. After the population of interest is gated, simply click “Acquire” to begin the sort. After the sample is acquired and cells pass through the laser, a unique catcher tube mechanism moves in and out of the sample core stream at a rate of roughly 300 times per second to capture designated cells and direct them to a collection tube or to an optional cell concentrator module for further processing. (The BD FACSCalibur cell sorting and cell concentrator options are for Research Use Only)BD FACSCalibur sorting mechanism5 BD FACSCalibur optical benchP R O D U C T I V I T YFlexibility for sample introductionand enhanced productivityBD FACS Loader optionThe BD FACS Loader option available for theBD FACSCalibur system provides walkaway automationfor routine applications. Featuring a removable 40-tubecarousel, onboard mixing, and BD™ Worklist Managersoftware, the BD FACS Loader option offers superiorflexibility to efficiently address the workflow demandsof the busy laboratory.BD High Throughput Sampler (HTS) optionThe BD High Throughput Sampler (HTS) option providesflexible, easy-to-use automation. For those who prefer towork with multiwell plates, BD Biosciences offers the firstwalkaway sample introduction device for 96- and 384-well plates. The HTS option allows users to rapidly acquiresamples with the BD FACSCalibur flow cytometer in amicrotiter plate. As a modular option for new or existingBD FACSCalibur flow cytometers, the HTS option is designedto speed through a variety of microtiter plates in less than15 minutes* and support a wide range of applicationsincluding the BD™ Cytometric Bead Array assay. The HTSoption supports 96 U-, V-, and flat-bottom plates as well as384-well microtiter plates.BD™ Plate Manager software allows you to createcustomized delivery protocols to be used repeatedlywith user-defined mixing, wash, and analysis parameters.(The BD High Throughput Sampler option and BD PlateManager are for Research Use Only)Efficient residual white blood cell enumerationThe BD Leucocount™ system is the first automated, IVD-cleared product for monitoring leucoreduced blood products. Together with BD Trucount™ tubes andBD Leucocount process controls, the BD Leucocount system provides excellent accuracy, precision, and linearity. For high-throughput walkaway capability, the BD FACS Loader can also be added to your base BD FACSCalibur system.BD Leucocount kitThe BD Leucocount system provides excellentaccuracy, precision, and linearity at clinicallysignificant levels of detection for RBC (red) andplatelet (blue) samples.10001001010.1MeanObservedLeucocountWBC/µL0.1Expected WBC/µL1101001000<5×106<1×106Decision PointArea6* B ased on a 2-second sample acquisition.100101102103104100101102103104C D 4-P ECD3-FITCD A T A M A N A GE M E N T Delivering results with a powerful, easy-to-use data management system The BD FACSCalibur system is appreciated for its user-friendly design, high sample throughput, improved workflow management through automation, and simple yet sophisticated software applications that enhance routine analyses.While performing any of a wide range of supported applications, the BD FACSCalibur system provides the tools to obtain results quickly, easily, and accurately.The ease-of-use of the BD FACSCalibur system is enhancedby the BD FACStation™ data management system thathas become one of the most popular, user-friendly datamanagement systems in flow cytometry. The BD FACStationsystem automates many software functions and delivershigh-performance acquisition and analysis tools for creatingplots, gating, statistical analysis, and reporting.The BD FACStation workstation takes advantage of theintuitive Mac® environment by using simple pull-downmenus and icons. It performs all the computing tasks requiredfor fast, accurate results including instrument setup, as wellas data collection, analysis, and management.A comprehensive quality assurance systemBD Biosciences offers a complete family of productsdesigned to ensure the highest quality clinical results fromthe BD FACSCalibur system. BD FACSComp™ software,in conjunction with BD Calibrite™ beads, provides acomprehensive system to set up the instrument, assesssensitivity, and set compensation for immunofluorescenceapplications. For clinical applications, BD Biosciences offersa wide variety of cellular controls to verify performancefor immunophenotyping, reticulocyte analysis, stem cellenumeration, and rWBC applications.DNA Analysis The BD FACSCalibur system works together with BD DNA analysisquality control products to eliminate many of the variables asso-ciated with ploidy and cell-cycle analysis. The instrument’s opticaland fluidic design ensures that high-resolution DNA ploidy andS-phase determinations are easy to achieve. Electronic doubletdiscrimination, using the area and width of the fluorescence pulse,allows for the removal of artifacts—doublets and aggregates—from the analysis. High-resolution electronics and linearity ensureaccurate results. To ensure optimal performance, BD DNA QCproducts, including fixed cells and fluorescent particles, can beused for setup, verification of the doublet discrimination module,and monitoring daily operation. (BD DNA Analysis products are forResearch Use Only)DNA analysisPulse processing is a powerful tool used in the discrimination of doublets for optimal DNA analysis.0200400600800100002004006008001000FL2-Width R1F L 2-A r e a 02004006008001000060120180240300FL2-Area C o u n t s 8BD Cytometric Bead Array assaysThe BD FACSCalibur flow cytometer can beused to acquire data from BD CytometricBead Array (CBA) multiplexed assays.These assays are powerful, flexible toolsthat simultaneously quantify multiplecytokine, chemokine, immunoglobulin, or cell signaling targets from a single sample. Choose from preconfigured kits for maximum convenience in screening routine panels of Th1/Th2 or inflammatory cytokines and chemokines, or build your own multiplex assay using the open and configurable BD CBA Flex Set format.For all of their power, BD CBA assays are fast and remarkably easy to use. Pre-optimized protocols and one-step detection reagents minimize hands-on time and maximize reproducibility. (BD Cytometric Bead Array assays are for Research Use Only)A B C DE F Beads Wash Detector antibodiesSample N I RRedAnalyze by flow cytometry Concentration M F IConcentration (pg/mL)9BDIS HLA-B27 Laboratory Report000CD3/CD16+56/CD45/CD19 TruCMulti-tube QCBDIS MultiSET™ Lab ReportCD3/CD8/CD45/CD4 TruCS E R V I C E A N D S U P P O R T Service and SupportBD Biosciences instruments and reagents are backed by a world-class service and supportorganization with unmatched flow cytometry experience.For over twenty-five years, BD has actively worked with researchers to develop tools that help improve workflow, ease of use, and performance. This in-depth knowledge and experience is available to customers through comprehensive training, application and technical support, and expertfield service.TrainingHeld at BD training centers worldwide, BD Biosciencesflow cytometry training courses combine theory and hands-on practice to provide participants with the skills and experience they need to take full advantage of the capabilities of their instrument.Technical applications supportBD Biosciences technical applications support specialistsare available to provide field- or phone-based assistance and advice. Expert in a diverse array of topics, BD technical application specialists are well equipped to address customer needs in both instrument and applications support.Field service engineersBD Biosciences field service engineers are located acrossthe world. When instrument installation or service is required, a BD Biosciences technical field service engineer can be dispatched to your site. On-site service and maintenance agreements are available to provide long-term support.10Asia Pacific BD Singapore Tel 65.6861.0633Fax 65.6860.1593Australia/New Zealand Australia Toll Free: 1800 656 100Tel 61.2.8875.7000Fax 61.2.8875.7200*************New Zealand Toll Free: 0800 572.468 Tel 64.9.574.2468Fax 64.9.574.2469*************United States BD Biosciences Customer/Technical Service Toll Free 877.232.8995Bioimaging Systems Fax 301.340.9775Discovery Labware Fax 978.901.7490Immunocytometry Systems Fax 800.325.9637Pharmingen Fax 800.325.9637Japan Nippon Becton Dickinson Toll Free 0120.8555.90Tel 81.24.593.5405Fax 81.24.593.5761Latin America/Caribbean BD Biosciences Toll Free 0800.771.7157Tel 55.11.5185.9995Fax 55.11.5185.9895*************************Europe BD Biosciences Tel 32.2.400.98.95Fax 32.2.401.70.94**************************.com Canada BD Biosciences Toll Free 888.259.0187Tel 905.542.8028Fax 888.229.9918*************Regional Offices /officesBD BiosciencesErembodegem-Dorp 869320 ErembodegemBelgiumTel.: (32) 2 400 98 95Fax: (32) 2 401 70 94**************************.com/euX23-309004EUROPE BD flow cytometers are Class I (1) laser products.© 2009 Becton, Dickinson and Company. 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BD-FACSCalibur流式细胞仪操作手册

BD FACSCalibur流式细胞仪一、BD FACSCalibur基本结构1.1仪器本体：1. 电源开关：在BD FACSCalibur仪器右侧下方，先启动仪器本体，再打开计算机。

2. 光学系统：BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射以BD FACSCalibur 基本型为例➢FSC Diode 只收488 nm波长散射光➢SSC PMT 只收488 nm波长散射光➢FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围（波长515-545 nm）➢FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围（波长564-606 nm）➢FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围（波长 >650 nm）3. 仪器面板：仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。

流速控制：LO：样品流速：12 l /minMED：样品流速：35 l /minHI: 样品流速：60 l /min功能控制：•RUN：此时上样管加压，使细胞悬液从进样针进入流动室。

（正常显示绿色；黄色时表示仪器不正常，请检查是否失压。

）•STANDBY：无样品或暖机时之正常位置，此时鞘液停止流动，雷射功率自动降低。

•PRIME：去除流动室中的气泡，流动室施以反向压力，将液流从流动室冲入样品管，持续一定时间后，以鞘液回注满流动室。

PRIME 结束，仪器恢复STANDBY状态。

4. 储液箱抽屉：在主机左下方之储液箱抽屉。

可向前拉开，内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter，及空气滤网 Air filter。

请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。

•鞘液筒：位于抽屉左侧，容积4升。

装八分满鞘液筒，仪器可以运行大约 3小时。

筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。

鞘液筒盖上有金属环扣，保证鞘液筒密闭。

•废液筒：位于抽屉右侧，容积4升。

筒上装有液面感应器，废液盛满时，仪器软件上会有显示。

BD FACSCalibur中文操作手册CellQuest软件

BD FACSCalibur中文操作手册CellQuest软件BD FACSCalibur 中文培训手册第五章 CellQuest 软件学习本章后应能够:, 用CellQuest 从流式细胞仪获取3色或4色样本, 用CellQuest 从流式细胞仪分析3色或4色样本, 将统计结果输出为电子表格, 应用Region(区)和 Gate(门)生成统计, 获取和分析3色免洗绝对记数样本5.1 概述CellQuest是从流式细胞仪上进行获取和分析数据的通用软件。

CellQuest软件功能强大且灵活，并与Macintosh 的多任务环境完全兼容。

也可通过CellQuest 调节仪器条件，设定获取最佳条件并可将其储存。

5.1.1 获取即收集并储存流式细胞仪上数据的过程。

在获取前，需用您的样本来优化仪器的条件。

5.1.2 分析将获取的数据进行进一步分析。

在分析时，将读取数据文件，然后可画Region(区)、设置marker (标尺)和进行统计。

在CellQuest中，可画单参数直方图、双参数点图、密度图和等高图。

5.1.3 从获取到分析在CellQuest中，从获取到分析的功能允许在数据获取结束后可从获取图转换到分析图。

刚刚获取的数据及在获取时限定的格式出现在图中，如region, marker,color 等。

5.2 工具板工具栏可用来画图、 region, marker和文字等。

点击选择。

5.2.1 工具板按钮(见图1)736308509.doc Page 5 - 1BD FACSCalibur 中文培训手册1. 等高图:点击，可画等高图，可自定义图的大小。

2. 选择:点击，可选择一个或多个目标，进行改大小或移动。

3. 3 维图:点击，可画3维图，可自定义图的大小。

4. 直方图:点击，可画直方图，可自定义图的大小。

5. 密度图:点击，可画密度图，可自定义图的大小。

6. 点图:点击，可画点图，可自定义图的大小。

流式细胞仪操作指南手册BD_FACSCalibur中文培训手册

目录第一章流式细胞仪简介 (1)1.1 流式细胞术发展史 (1)1.2 流式细胞仪构造和工作原理 (2)1.2.1 概述 (2)1.2.2 流式细胞仪构造 (2)1.3 流式细胞仪的主要技术指标 (10)第二章 FACSCalibur 的日常操作 (12)2.1 FACSCalibur系统 (12)2.2 FACSCalibur开机程序 (15)2.3 FACSCalibur关机程序 (16)2.4 FACSCalibur的维护与保养 (17)2.4.1 FACSCalibur的每月维护 (17)2.4.2 FACSCalibur的定期维护 (18)2.5 常见故障排除 (20)第三章 FACSComp软件 (22)3.1 FACSComp简介 (22)3.1.1 FACSComp运行条件 (22)3.1.2 FACSComp的文件类型 (23)3.2 FACSComp的功能 (24)3.2.1 光电倍增管（PMT）电压的调节 (24)3.2.2 荧光补偿的调节 (24)3.2.3 灵敏度的测试 (24)3.2.4 时间延迟的校准（对于双激光，配有FL4 PMT） (25)3.2.5 HLA-B27的校准 (25)3.2.6 LeucoCOUNT (25)3.2.7 优化 (25)3.3 FACSComp的运行 (25)3.3.1 CaliBRITE Beads的准备 (25)3.3.2 软件环境的设置 (26)3.3.3 Beads的检测 (26)3.3.4 Optimization (28)第四章 FACStation 数据管理系统 (30)4.1 FACStation 数据管理系统组成 (30)4.2 FACStation文件组成 (31)4.2.1 如何建立文件夹 (31)4.2.2 FACStation文件的类型 (31)4.2.3 如何管理文件 (32)4.3 实用的Macintosh OS X功能 (34)4.3.1 菜单栏 (35)4.3.2 Dock (37)4.3.3 查找窗口 (37)4.3.4 键盘快捷键 (38)4.4 如何设置模版 (39)4.5 实验练习：如何将ModFit LT的别名添加到Dock菜单下 (40)4.6 可选性存储装置 (40)4.6.1 可选性存储装置的基本工作原则 (40)4.6.2 光驱的维护 (41)4.6.3 光盘的维护 (41)第五章 CellQuest Pro软件 (42)5.1 概述 (42)5.1.1 获取(Acquisition） (42)5.1.2 分析(Analysis) (42)5.1.3 从获取到分析(Acquisition Analysis) (42)5.2 工具栏 (42)5.3 CellQuest Pro 的文件 (43)5.3.1 FCS数据文件 (43)5.3.2 实验文件 (44)5.3.3 仪器条件文件 (44)5.3.4 统计文件 (44)5.4 CellQuest Pro 的仪器控制 (44)5.4.1 探测器 (45)5.4.2 放大器 (45)5.4.3 阈值 (46)5.4.4 补偿 (46)5.6.1 质控－运行FACSComp (48)5.6.2 优化 (50)5.6.3 调出储存的由FACSComp 生成的仪器条件 (52)5.6.4 调节FSC/SSC探测器（电压）及FSC阈值 (53)5.6.5 设置淋巴细胞Region (53)5.6.6 调节FL1、FL2、FL3的探测器（电压） (53)5.6.7 调节荧光补偿 (55)5.7 实验练习：3色/4色预获取 (55)5.7.1 设置Acquisition & Storage 窗口 (56)5.7.2 设置Parameter Description (57)5.7.3 编辑Reagent Panel (58)5.8 实验练习：数据获取 (59)5.9 储存、恢复仪器设置 (60)5.9.1 储存仪器设置 (60)5.9.2 恢复仪器设置 (60)5.10 储存实验模板文件 (60)5.11 练习：数据分析 (60)5.11.1 画Region (61)5.11.2 限定象限marker (61)5.11.3 分析四色 (63)5.11.4 批分析其余数据 (63)5.11.5 分析数据 (64)5.11.6 将分析文件以模板形式保存 (64)5.11.7 创建文具簿（stationery pad） (64)5.11.8 将统计改为电子表格 (65)5.12 Regions 和Gating（画门） (65)5.12.1 设置Region (65)5.12.2 改变Region (65)5.12.3 用Region 统计来分析数据 (66)5.12.4 门 (66)5.12.5 多色门 (66)5.12.6 组合门 (67)5.12.7 在直方图上使用组合门分析 (68)收集系统6.1.2 分选模式 (70)6.2 分选窗口 (71)6.2.1 Sort Setup (71)6.2.2 Sort Counters (72)6.3 准备收集管 (72)6.4 分选 (73)6.4.1 清洗分选管线 (73)6.4.2 准备 (73)6.4.3 收集分选前数据 (74)6.4.4 分选条件设置 (74)6.4.5 分选目的细胞 (74)6.4.6 清洗分选管路 (75)6.4.7 浓缩样本 (76)6.5 检验分选纯度 (76)6.6 分选问题讨论 (77)6.7 FACSCalibur无菌分选 (79)6.8 分选细胞浓缩系统 (80)6.8.1 系统简介 (80)6.8.2 细胞培养基嵌入物和滤膜的制备 (81)6.8.3 确定气压参数 (82)6.8.4 如何用细胞浓缩系统进行分选 (82)6.8.5 分选浓缩细胞 (84)6.8.6 从分选管路中回收细胞 (84)6.8.7 回收细胞做进一步分析 (85)6.8.8 清洗分选管路 (85)6.8.9 清洗浓缩器 (85)第七章 DNA分析 (87)7.1 概述 (87)7.2 细胞周期 (87)7.3 DNA检测的常用术语 (87)7.3.1 Coefficient of Variation（CV）：变异系数 (87)7.4.1 分辨率（CV） (88)7.4.2 线性度 (88)7.4.3 碎片 (88)7.4.4 细胞双粘体 (89)7.5 DNA质量控制（DNA QC Particles） (89)7.5.1 样本制备 (89)7.5.2 上机检测 (89)7.5.3 常见错误排除 (90)7.6 用CellQuest Pro软件获取DNA 数据 (91)7.6.1 样本制备 (91)7.6.2 用CellQuest Pro软件上机获取数据 (92)7.6.3 质量控制 (95)7.7 用ModFit 软件分析DNA数据 (95)7.7.1 运用ModFit 进行自动分析 (96)7.7.2 运用ModFit 进行手动分析 (96)7.7.3 运用ModFIT进行同步化分析 (98)7.7.4 运用ModFIT 进行增殖分析 (98)第八章 HLA-B27分析 (99)8.1 检测HLA-B27的意义 (99)8.2 HLA-B27的检测方法 (99)8.2.1 传统方法 (99)8.2.2 流式细胞术 (100)8.2.3 试剂盒介绍 (100)8.2.4 实验原理 (100)8.2.5 样本的收集和准备 (101)8.2.6 流式检测 (102)8.3 质量控制 (110)附录1：组织相容性抗原和疾病的关系 (111)附录2：强直性脊柱炎——一个常见但易被忽略的疾病 (112)第九章 MultiSET软件 (113)9.1 简介 (113)软件内容9.4.1 MultiSET界面功能分区 (116)9.4.2 MultiSET命令菜单 (116)9.4.3 MultiSET实验报告 (117)9.4.4 MultiSET运行程序 (117)9.5 利用Multiset软件的Tools和Preferences (126)9.6 Control Panels (绝对计数质控) (128)9.7 MultiSET画门及Attractor方案 (128)9.8 注意事项及常见问题处理 (129)第十章练习题 (135)10.1 补偿 (135)10.2 流式简介 (135)10.3 CellQuest 获取与分析 (136)10.4 分选 (139)第一章流式细胞仪简介1.1 流式细胞术发展史纵观历史，几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景、不同科研领域的科学家的心血。

BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程

适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。

责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。

保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。

科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。

1.4打开电脑。

1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

1.6做Prime。

1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。

2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。

2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。

2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。

2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。

2.6退出所有应用软件，关闭电脑。

2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。

3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。

3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。

3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。

3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。

3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。

BD FACSCalibur流式细胞仪培训手册

BD ＦAＣSＣalibur流式细胞仪FＡＣS1０1 Hａｎdbook本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。

如希望进一步了解流式细胞技术应用,请至本公司网站订阅FACSinfｏｒｍatioｎ电子报。

如需要本课程手册,欢迎至本公司网站下载。

如需要免疫荧光染色方法,请至本公司网站下载。

一、BD FＡCＳCａｌibｕr基本结构1、1仪器本体:１。

电源开关:在BD FAＣSCalｉｂｕｒ仪器右侧下方,先启动仪器本体,再打开计算机。

2。

光学系统:BD FＡCＳＣａｌibur基本配有一支波长4８8 ｎm 得氩离子雷射以BD FACSCａｌｉｂｕｒ基本型为例➢ＦSC Diode 只收48８ nｍ波长散射光➢SSCＰMT 只收488 nm波长散射光➢ＦL１PMＴ荧光光谱峰值落在绿色范围(波长51５—545 nｍ)➢FＬ2PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围(波长564—60６ｎm)➢ＦＬ3 ＰＭT 荧光光谱峰值落在深红色范围(波长>６5０nm)3. 仪器面板:仪器前方面板得右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。

流速控制:ＬO: 样品流速:12 μl/mｉnＭEＤ:样品流速:35 μl /ｍiｎHI: 样品流速:6０μl /ｍｉn功能控制:•ＲUN:此时上样管加压,使细胞悬液从进样针进入流动室。

(正常显示绿色;黄色时表示仪器不正常,请检查就是否失压、)•STAＮDBＹ:ﻩ无样品或暖机时之正常位置,此时鞘液停止流动,雷射功率自动降低、•ＰRIME:去除流动室中得气泡,流动室施以反向压力,将液流从流动室冲入样品管,持续一定时间后,以鞘液回注满流动室。

ＰRＩME结束,仪器恢复STAＮDBY状态。

4、储液箱抽屉:在主机左下方之储液箱抽屉。

可向前拉开,内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter,及空气滤网 Aiｒｆiｌter、请注意气路减压阀VENTＴOGGLE之位置、•鞘液筒:位于抽屉左侧,容积4升、装八分满鞘液筒,仪器可以运行大约３小时。

流式细胞仪培训手册(完成版)【范本模板】

流式细胞仪培训手册序论学习仪器的最好方法是操作仪器，然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。

本书介绍了流式细胞仪的基本知识，并从不同角度详尽阐述了各种台式机（FACScanTM,FACSortTM，FACSCaliburTM，和BD LSR）与大型机(FACS VantageTM,FACSVantageTM SE，和FACStarPLUSTM)之间的不同。

阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。

目录第1章综述 (4)第2章液流系统………………………………………………………………第3章散射光信号及荧光信号………………………………………………3.1 散射光信号………………………………………………………3.2 荧光信号…………………………………………………………3.3 荧光补偿第4章光电系统………………………………………………………………4。

1 光平台……………………………………………………………4.2 光学滤片………………………………………………………4.3 信号探测器……………………………………………………4。

4 阈值………………………………………………………………第5章数据分析………………………………………………………………5。

1 数据采集及显示…………………………………………………5.2 设门………………………………………………………………5.3 细胞亚群的数据分析…………………………………………5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析………………………………5.5 CellQuest软件使用……………………………………………5。

6 MutiSet软件使用………………………………………………5.7 Simultest软件使用……………………………………………5.8 B27软件使用…………………………………………………5.9 WinMDI软件使用…………………………………………5。