急性毒性试验设计
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1实验动物健康成年小鼠2实验器材灌胃针注射器吸管容量瓶烧杯滴管电子天平动物体重秤外科剪刀镊子3实验试剂丙烯腈苦味酸酒精饱和液伊红染液1物种和品系对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理方便实验操作易于获得繁殖生育力强数量较大能够保障品系纯化价格低廉
急性毒性试验设计
组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h 之内多次接触外源化学物后，在短 期内所发生的毒性效应，包括致死 效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
实验动物的标记
染色法
编号方法：小鼠头部为1号，顺时 针编号，用苦味酸编个位数，用 伊红编十位数。
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
剂量选择及分组
剂量选择
广泛查阅文献资料，估计毒性中值 预试，求出待测化学物0 %~100 %或
左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂 直体位，腹部面向操作。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿， 沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索， 一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强 行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物 立即死亡。
容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物 体重秤、外科剪刀、镊子 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和 液、伊红染液
实验方法
1、实验动物的选择 2、剂量设计及随机化分组 3、受试物的配制 4、染毒途径的选择 5、毒性反应的观察与LD50的计算 6、急性毒性的评价
一、 实验动物选择
等容量稀释法
将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位 体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物 配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、 10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。
染毒途径的选择
经消化道染毒：经口灌胃法 采用专用小鼠灌胃针。
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～ 1.5，
b—最低全致死剂量量， a—最高不致死剂量， n—设计的组数。 分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之 一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可 能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组； 组数过少，不能较精确求出LD50。
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
受试物的配制方法 （2）受试化学物的稀释 等浓度稀释法： 等容量稀释法：
等浓度稀释法
将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单 位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受 试物的试验剂量分别为100、200、400和 800mg/kg，受试物配制成10 mg/ml，每组动物 每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8 ml。
察、化验检查和病理学检查
当口服剂量大于5g/kg或注射剂量大于 2g/kg时，不产生急性毒性或死亡，则不 必准确的测定LD50
急性毒性评价
外源化学物相对毒性分级标准
急性毒性分级（WHO）
谢谢！
（1）受试化学物的量取： 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。
称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重， 定容，计算浓度mg/ml，备用。
吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入 容量瓶中，用溶剂加至刻度。
吸量法，计算公式为：X＝ A ·V
式中：
d×1000
LD50 log1[X m i( p 0.5)]
当不含0%和100%死亡率时，用下式计算LD50：
LD50 log 1[X m i(
p 3 Pm Pn )] 4
pq
S x50 i
n
以上各式中：i—组距，即相邻两组剂量对数剂量之差
Xm—最大剂量对数 P—各剂量组死亡率 Pm—最高死亡率 q—各组剂量存活率，q=1-
10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂 量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。
1、物种和品系
对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠பைடு நூலகம்小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
3、实验动物的一般要求
动物数量：动
物6组，1-5组为 实验组，6组为 蒸馏水对照组
性别：雌雄各半
年龄：成年动物
生理与健康状况：
未产未孕者、健康 动物
实验动物的预检
实验动物的给药 前禁食处理。
健康动物标志
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
观察指标
中毒症状：确定靶器官 ① 行动：不安定、多动、发声； ② 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失 调、姿态异常； ③ 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、 排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。
死亡和死亡时间 病理学检查及其他指标
LD50的计算（改良寇氏法）
当急性毒性试验的最大剂量死亡率为100%，最小剂量的 死亡率为0%；各组动物数相等；各剂量组的组距等比或剂 量对数等差时，用下述基本公式计算LD50：
Pn—最低死亡率 ∑p—各剂量组死亡率之和
n—各组动物数
p
LD50的局限性
消耗动物量大 获得的信息有限 动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、
血液学和其它化验检查所提供的毒性信息 有许多因素影响LD50值的测定，实际上测得
的LD50是近似值
注意
急性毒性试验不等于LD50测定 可用少量动物测定ALD，并进行临床观
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7
9 12
二1 5
8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
受试物的配制方法
以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
丙烯腈经口急性毒性试验设计
实验目的
评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死 量LD50，并根据LD50进行急性毒性分级，
掌握实验动物随机分组的方法和经口灌 胃的技术。
观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验 提供依据；为毒理学机制研究提供线索。
器材与试剂
1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。
急性毒性试验设计
组员：程旺、高思杰、后若兰 高阳、陈刚
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h 之内多次接触外源化学物后，在短 期内所发生的毒性效应，包括致死 效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。
实验动物的标记
染色法
编号方法：小鼠头部为1号，顺时 针编号，用苦味酸编个位数，用 伊红编十位数。
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
剂量选择及分组
剂量选择
广泛查阅文献资料，估计毒性中值 预试，求出待测化学物0 %~100 %或
左手抓住动物双耳后至背部的皮肤，将动物固定成垂 直体位，腹部面向操作。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避牙齿， 沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索， 一旦感觉阻力消失，即深人至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强 行插入，以免穿破食，甚至误入气管，导致动物 立即死亡。
容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物 体重秤、外科剪刀、镊子 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和 液、伊红染液
实验方法
1、实验动物的选择 2、剂量设计及随机化分组 3、受试物的配制 4、染毒途径的选择 5、毒性反应的观察与LD50的计算 6、急性毒性的评价
一、 实验动物选择
等容量稀释法
将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位 体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物 配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、 10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。
染毒途径的选择
经消化道染毒：经口灌胃法 采用专用小鼠灌胃针。
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～ 1.5，
b—最低全致死剂量量， a—最高不致死剂量， n—设计的组数。 分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之 一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可 能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组； 组数过少，不能较精确求出LD50。
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度（ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
受试物的配制方法 （2）受试化学物的稀释 等浓度稀释法： 等容量稀释法：
等浓度稀释法
将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单 位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受 试物的试验剂量分别为100、200、400和 800mg/kg，受试物配制成10 mg/ml，每组动物 每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8 ml。
察、化验检查和病理学检查
当口服剂量大于5g/kg或注射剂量大于 2g/kg时，不产生急性毒性或死亡，则不 必准确的测定LD50
急性毒性评价
外源化学物相对毒性分级标准
急性毒性分级（WHO）
谢谢！
（1）受试化学物的量取： 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。
称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称重， 定容，计算浓度mg/ml，备用。
吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，加入 容量瓶中，用溶剂加至刻度。
吸量法，计算公式为：X＝ A ·V
式中：
d×1000
LD50 log1[X m i( p 0.5)]
当不含0%和100%死亡率时，用下式计算LD50：
LD50 log 1[X m i(
p 3 Pm Pn )] 4
pq
S x50 i
n
以上各式中：i—组距，即相邻两组剂量对数剂量之差
Xm—最大剂量对数 P—各剂量组死亡率 Pm—最高死亡率 q—各组剂量存活率，q=1-
10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂 量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围， 即确定受试动物全部致死的最小剂量（b） 和全部不致死的最大剂量（a），即求出 待测化学物0 %~100 %的大致致死剂 量范围，然后在这个剂量范围内按几何 级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。 进行正式实验。
1、物种和品系
对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠பைடு நூலகம்小鼠 豚鼠 兔 犬 猫
成年年龄（周） 3 2 2 3~4 3~4 3~4
体重（克） 150 15 250 1.5kg 7~15kg 1kg
寿命（年） 2~3 2~3 6~8 4~9 15~20 10~12
3、实验动物的一般要求
动物数量：动
物6组，1-5组为 实验组，6组为 蒸馏水对照组
性别：雌雄各半
年龄：成年动物
生理与健康状况：
未产未孕者、健康 动物
实验动物的预检
实验动物的给药 前禁食处理。
健康动物标志
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
观察指标
中毒症状：确定靶器官 ① 行动：不安定、多动、发声； ② 神经系统反应：举尾、振颤、痉挛、运动失 调、姿态异常； ③ 自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、 排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸。
死亡和死亡时间 病理学检查及其他指标
LD50的计算（改良寇氏法）
当急性毒性试验的最大剂量死亡率为100%，最小剂量的 死亡率为0%；各组动物数相等；各剂量组的组距等比或剂 量对数等差时，用下述基本公式计算LD50：
Pn—最低死亡率 ∑p—各剂量组死亡率之和
n—各组动物数
p
LD50的局限性
消耗动物量大 获得的信息有限 动物死亡和观察的症状不足以反应生理学、
血液学和其它化验检查所提供的毒性信息 有许多因素影响LD50值的测定，实际上测得
的LD50是近似值
注意
急性毒性试验不等于LD50测定 可用少量动物测定ALD，并进行临床观
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7
9 12
二1 5
8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
受试物的配制方法
以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2 所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
丙烯腈经口急性毒性试验设计
实验目的
评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死 量LD50，并根据LD50进行急性毒性分级，
掌握实验动物随机分组的方法和经口灌 胃的技术。
观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验 提供依据；为毒理学机制研究提供线索。
器材与试剂
1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。