细胞工程第六章
细胞工程习题总结及参考答案
一．思考题1. 为什么要严格保持细胞工程操作环境和物品的无菌？答：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。
培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。
2. 配制培养基时，为什么要先配制母液？答：1.方便配置其他培养基；2.保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取第三章一．思考题1. 胚状体与合子胚有何异同？答：异：体细胞胚又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。
子胚是指由植物的雌雄配子融合形成的合子继而发育形成的胚，经过受精作用。
同：都含有一整套遗传信息,都可以发育成新一代生物个体.二．练习一、单选题1、植物组织培养是建立在___理论基础上的。
(B)A进化论 B植物细胞全能性C基因决定论 D细胞多样性2、植物组织培养的培养基不含___。
(C)A含N物质 B碳源 C血清 D生长素3、过滤除菌适用对象___。
(D)A玻璃器皿 B塑料器皿 C金属器皿D易被高温破坏的材料如抗生素、激素等试剂4、将___重新转移到成分相同的新鲜培养基上生长的过程称为继代培养。
(B)A外殖体 B愈伤组织 C 生根苗 D 幼苗5、下列植物细胞全能性最高的是（A）A. 形成层细胞B. 韧皮部细胞C. 木质部细胞D. 叶肉细胞6、植物组织培养过程中的脱分化是指（C）A. 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B. 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C. 植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D. 取植物的枝芽培育成一株新植物的过程三、判断题•1、非胚性愈伤组织与胚性愈伤组织具有同样的再生能力（×）•2、一个细胞由分生状态转变为成熟状态的过程，叫脱分化。
（×）•3、所有的植物培养材料都必须高压灭菌锅灭菌121℃、15分钟。
细胞工程知识点陈永勤
第一章植物组织培养简介1.细胞工程（Cell Engineering）：在体外对生物的细胞进行生长与分化的调控、遗传重组与改良，使其生产出人类所需要的产品。
2.细胞全能性假说是开展植物组织培养研究的理论基础；验证细胞全能性假说是开展植物组织培养研究的动力。
3.细胞分裂素与生长素的浓度比值决定着愈伤组织根或芽的形成。
细胞分裂素/生长素的比值：高：形成芽；低：形成根；相当：愈伤组织增殖，但不分化。
4.植物组织培养在植物性状改良上的应用:①.胚培养可克服远源杂交不孕的困难；②.花药（花粉）培养可大大缩短育种年限；③.原生质体融合技术可克服有性杂交不亲和，创造远源杂种、甚至新的物种；④.单细胞培养技术可用于突变体的筛选。
第二章植物组织培养的设施1.培养室所需要的设备：①.培养架:培养架的设计既要考虑充分利用培养室的空间，也要考虑取放材料方便。
②.加温/降温设备：空调③.光照和控光设备。
分为光培养室和暗培养室。
光培养室常用日光灯照明，并安置控制光照时间的自动开关。
2.瓶盖、瓶塞、或者封口膜的透气性能对材料的培养有显著影响，透气性能不好的，容器中湿度高（饱和），容易导致植物材料出现玻璃化（生理病态，植物材料呈水渍状，深绿色，刚脆，无继续培养的价值）第三章植物组织培养基1.培养基的重要性:1)植物材料生长的营养来源；2)调节植物材料生长与分化的主要途径。
2.培养基的组成：①.水：要求纯净。
应用蒸馏水、去离子水，而不用自来水。
②.无机营养成分：植物生长发育需要有16种必需元素：大量元素：C, H, O, N, P, K, Ca, Mg, S；微量元素：Fe, Cl, Cu, Mo, B, Zn, Mn。
不同培养基的无机盐（特别是大量元素）的浓度差异很大。
③.有机营养：有机营养（有机成分）：维生素和氨基酸的总称。
常用：肌醇、烟酸、维生素B6、维生素B1和甘氨酸等。
其它维生素：维生素M（叶酸）、维生素B2（核黄素）、泛酸钙等。
细胞工程智慧树知到答案章节测试2023年济宁医学院
第一章测试1.下列哪个不是细胞工程的研究对象?（）。
A:酵母B:动植物细胞核C:原生质体D:动物胚胎答案:A2.下列哪项不是细胞工程的特点?（）。
A:理论性B:前沿性C:应用性D:争议性答案:A3.下列哪项不是细胞工程发展经历的阶段?（）。
A:诞生期B:探索期C:缓慢发展期D:快速发展期答案:C4.1907年，从蝌蚪脊索中分离出神经嵴组织，并在淋巴液中成功培养几周，开创了组织培养的先河的是生物学家（）。
A:HaberlandtB:KohlerC:RouxD:Harrison答案:D5.克隆动物是属于（）。
A:组织与器官修复技术B:新品种培育技术C:生物制品生产技术D:动植物快速繁殖技术答案:D第二章测试1.下列细胞工程实验室设置的原则有误的是（）。
A:要求严格保持无菌环境B:实验室一般应建在通风效果较好的位置C:细胞工程实验室应具有无菌操作、培养与观察、制备、清洗与消毒、储藏等功能D:无菌操作室应划分为更衣间、缓冲间与操作间答案:B2.植物细胞工程与动物细胞工程实验室设置最大的区别为（）。
A:无菌环境要求的严格程度B:温度的控制要求C:光照时间与强度的控制要求D:墙面及地面设施的要求答案:C3.下列哪个设置属于细胞工程实验所必须的？（）。
A:超净台B:荧光定量PCR仪C:超速离心机D:酶标仪答案:A4.下列动物细胞常放置在下列哪种仪器中进行培养?（）。
A:电热干燥箱B:光照培养箱C:恒温震荡培养箱D:二氧化碳培养箱答案:A5.埃博拉病毒是一种能够引起人类和灵长类动物产生埃博拉出血热的烈性传染病病毒，死亡率高达50%-90%之间。
目前对埃博拉病毒病尚无特效治疗方法，根据实验室生物安全标准，埃博拉病毒的研究需要在下列哪种级别的实验室开展？（）A:P4实验室B:P1实验室C:P3实验室D:P2实验室答案:A6.下列对细胞工程实验室的生物安全要求说法正确的是？（）。
A:实验使用的器皿需采用专门的高压消毒袋盛放，并在清洗前先进行高压消毒B:所有操作均采用专门的器械吸取，不能口吸C:着专门实验服D:操作前后要消毒答案:BCD7.实验中常常将动物细胞置入-20度冰箱中长期储藏。
细胞工程 第一章 细胞工程简介
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• 1998年2月，英国宣布克隆出牛犊“杰弗逊”； • 1998年7月，日籍科学家成功地得到3代克隆小鼠，这 是首次用克隆动物克隆出动物； • 2001年1月，美国克隆恒河猴成功，命名为“泰特 拉”，这意味着克隆人不存在技术障碍； • 2002年3月，美国科学家克隆成功猫； • 2005年4月，韩国克隆出狗“首努比”(Snuppy)， 2008年9月4日通过双亲克隆狗生产狗宝宝，证明克隆 狗有繁殖能力。”
生物技术相关的行业涵盖了许多行业。
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Cell engineering
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Cell e指应用细胞生物学和分子生物学的方法，
通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平
或细胞器水平上，按人们的意愿来改变细胞
内的遗传物质并使之增殖，以获得新型生物
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细胞工程是一个非常年轻富有活力的 学科。在它诞生的100多年时间里，细胞 工程技术已经成为世界经济中最具活力的 支柱性产业，产生了巨大的经济效益和社 会影响。随着生命科学的不断深入，细胞 工程技术会得到更快的发展，在解决人类 的资源与环境等重大问题上大要作为。
无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器，
洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外 灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素
细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，
CO2培养箱，磁力搅拌器，培养基，血清
细胞工程知识点及重点难点总结
第一章绪论1、细胞工程的概念，广义的细胞工程，狭义的细胞工程,⏹细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法,通过类似于工程学的步骤,在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或一定细胞产品的一门综合性科学技术。
⏹广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。
2、细胞工程的研究内容（研究生物类型,实验操作对象）⏹根据研究生物类型不同，细胞工程可分为动物细胞工程、植物细胞工程、微生物细胞工程。
⏹动物细胞工程包括：细胞培养技术（包括组织培养、器官培养）；细胞融合技术;胚胎工程技术 (核移植、胚胎分割等)；克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。
⏹植物细胞工程包括:植物组织、器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。
3、细胞工程的重要应用（植物、动物）⏹植物细胞工程的应用：脱毒和快速繁殖细胞工程育种：利用培养变异，筛选优良突变体利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性利用细胞融合技术,克服远缘杂交不亲和性倍性育种离体种质保存细胞培养生产有用物质⏹动物细胞工程的应用动物细胞培养生产医药产品（单克隆抗体）新品种培育试管动物与婴儿组织工程珍稀动物资源的保存与保护第二章细胞工程基础1、细胞分化：个体细胞发育过程中，后代细胞在形态、结构和生理功能上发生差异的过程。
2、发育潜能：指细胞分化能力的强弱。
3、细胞全能性：指细胞具有发育成完整个体的潜能.4、细胞多能性：指随着胚胎发育,有的体细胞失去全能性，具有分化出多种组织的潜能.5、去分化：又称脱分化，指某些条件下分化细胞不稳定，又回到未分化状态的这一过程6、愈伤组织:脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。
愈伤组织的种类胚性愈伤组织（Embryonenic callus）:表面光滑、组织结构紧凑、细胞小、再生力强。
细胞工程课件 第六章 植物细胞培养
第六章植物细胞培养技术第一节植物细胞培养简介一、概念：培养彼此分离的细胞、使之生长、增殖。
二、类型：1、固体培养(solid culture)：在固体培养基中培养细胞，也称静止培养。
优缺点:1）细胞被固定、不能移动，可以跟踪单细胞生长；2）所得到的细胞团均由单细胞形成，遗传成分和生理特性一致；3）细胞生长速度较慢；4）单细胞分裂后形成细胞团，不能长期、连续、大规模培养细胞。
2. 液体培养（liquid culture）：在运动的液体培养基中培养细胞。
又称悬浮细胞培养（suspension cell culture）。
液体培养又有2种形式：成批培养(batch culture)：在一个封闭体系中培养细胞，一个培养周期结束后，细胞被转移到新的容器中继续培养。
连续培养(continuous culture)：在一个容器（或者系统）中连续不断的培养细胞。
连续培养悬浮细胞培养的优缺点1）细胞生长速度快；2）可以长期、连续、大规模培养细胞；3）不能跟踪单细胞的分裂和生长过程。
三、细胞培养的应用1. 进行细胞生物学研究：筛选细胞、获得均匀一致的细胞作为试验材料；研究细胞生长、分裂：单细胞培养可以连续观察和记录（摄像）细胞的生长和分裂全过程。
如某个或某种类型的植物细胞是怎样生长、分裂和分化的？化学物质（激素等）或物理因素（重力、压力）等是怎样影响这些过程的？细胞培养证明了植物细胞全能性2. 筛选和培育植物变异体：人们总是希望获得具有某些抗性的品种，如抗病、抗虫、抗盐碱、抗铝、抗除草剂等。
（1）从自然变异的植株中进行选择：自然变异率低、机会小，工作量大，效率低。
（2）杂交育种：可以把抗性基因转移到需要改良的品种中，但时间长（3）诱变植物（种子或芽）：工作量大γ射线；甲基磺酸乙酯（EMS）EMS诱导的草坪草矮化突变体WTMutant2（4）细胞培养：特别适合抗（耐）性育种，效率高。
抗耐盐、碱、除草剂、旱先诱变细胞，再将细胞培养在有选择压力的培养皿中，具有抗性的细胞就可以分裂，诱导其形成完整植株，即可获得真正的抗性变异体。
安立国第二版动物细胞工程思考题参考答案
哺乳动物的克隆方法：胚胎干细胞核移植、胚胎细胞核移植、胎儿成纤维细胞核移植、体细胞核移植。
第一章绪论课后习题答案1. 动物细胞工程主要有哪些内容？这些技术有何用途？答：1. 组织和细胞培养技术2. 细胞融合与单克隆抗体技术3. 细胞核移植技术4. 胚胎工程技术5. 干细胞技术6. 转基因技术7. 染色体工程细胞工程的应用有：A. 单克隆抗体的应用：疾病诊断与治疗、微量大分子物资的检测、贵重生物活性物的分离与提纯、特殊疾病治疗、与药物交联治疗疾病；B. 转基因技术的应用：建立疾病的动物模型、品种改良和抗病育种、“乳腺生物发应器”、基因代替治疗、异种器官移植、基因功能研究；C. 细胞与组织替代治疗；D. 治疗人类不孕症；E. 优良品种繁育；F. 生产转基因家畜；G. 保护濒危动物。
2.追踪动物细胞工程研究与应用的最新进展，并预测其发展趋势。
第二章细胞培养1、体外培养细胞有哪些类型？其生长特点有什么区别？答：体外培养的细胞根据其生长方式，主要分为贴壁生长型细胞和悬浮生长型细胞。
离体细胞必须贴附于底物上才能生长的细胞称为贴壁生长型细胞。
有机体的绝大部分细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长。
动物细胞培养中，大多数细胞必须贴附在固相表面才能生长，当细胞布满表面后即停止生长。
从生长表面脱落进入液体得细胞通常不再生长而逐渐退化，这种细胞称为单层附壁细胞。
贴壁生长的细胞在活体体内时，形态各异，而体外培养状态下则在形态上比较单一而失去其在体内时原有的特征。
按照培养细胞的形态，主要可分为以下几类：成纤维细胞型、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞；少数细胞类型在体外培养时不需要附着于底物而于悬浮状态下即可生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，如血液白细胞、淋巴组织细胞、某些肿瘤细胞、杂交瘤细胞、转化细胞等，这些细胞在悬浮中生长良好，可以是单个细胞或为细小的细胞团，观察使细胞呈圆形。
由于悬浮生长于培养液中，因此其生存空间大，具有能够提供繁殖大量细胞、传代方便、易于收获细胞等优点，易于大规模生产，便于过程的控制。
细胞工程练习题及答案
细胞工程练习题及答案《细胞工程》练习题第一章细胞工程简介1、什么叫细胞工程？细胞工程（Cell engineering）是指以细胞为对象，应用生命科学理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。
2、简述细胞工程的应用？①动植物快速繁殖。
主要是指采用细胞工程技术实现优良动植物的快速繁殖以及濒危物种的保护。
主要技术包括：试管植物、人工种子、试管动物、克隆动物等。
②细胞重组与新品种培育。
主要是指在细胞、细胞器、染色体、细胞核或组织水平上进行遗传性状改良或培育出生物新品种。
③细胞工程生物制品。
利用动植物细胞、组织培养或者转基因动植物生物反应器生产生物制品是现代细胞工程的一个代表性领域，主要包括食品、药物、生物能源等。
④细胞疗法与组织修复。
干细胞是当今生命科学最前沿领域，有望给现代医学带来一场革命。
利用培养的细胞或者离体再造的组织修复受损细胞与组织或器官的技术，属于细胞工程最新发展领域之一。
3、细胞工程与其它学科的关系第五章植物人工繁殖一、名词解释细胞全能性(totipotency)：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体生长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。
细胞脱分化（Dedifferentiation）：脱分化又称去分化，是指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程，即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。
细胞再分化（Redifferentiation）：是指在离体条件下，无序生长的脱分化的细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。
细胞再分化过程事实上是基因选择性表达与修饰的人工调控过程。
植物组织培养（Planttissue culture）：是将植物器官、组织、细胞或原生质体等外植体材料无菌条件下培养在人工培养基上，在适当条件下诱发长成完整植株的一种技术。
细胞工程 第六章 胚胎工程
3体外受精
体外受精（in vitro fertilization，IVF）就是将 哺乳动物卵母细胞从母体取出，在体外进行精 卵结合的过程。 主要包括：成熟或未成熟的卵母细胞获得、体 外培养系统的建立、处理附睾内和射出精子、 使精卵结合——受精、受精卵的体内或体外培 养（in vitro culture，IVC）、移植妊娠和产仔 由于体外受精在实验室进行，所以得到的动物 或人称为“试管动物”或“试管婴儿”。
嵌合体chimera是指在同一个体中由于基因型不同的细胞或组织互相接触且各自独自并存的状态发育早期如卵裂球甚至受精卵所形成的嵌合体称为原发性嵌合体而把在发育的较晚期如胚层已经分化或器官开始形成后通过组织移植或嫁接等方法所形成的部分组织或器官的嵌合称为次生性嵌合体1901年spemann最早开始进行动物嵌合体的研究他进行了蛙嵌合个体的培育其目的是为了研究两栖类动物的发育机制
过程
获得获能的精子和成熟的卵母细 胞后，应在塑料平皿底部，用已 经处理获能的精子浮游液5μl精子 浮游液，注入小滴中，将成熟培 养后的卵母细胞，或自体内手术 冲出的卵母细胞，以BO液冲洗， 用微吸管吸10个卵母细胞与少量 BO液注入精子浮游液小滴中。在 CO2培养箱中培养7小时后再经微 量吸管自小滴中用BO液多次冲洗 以洗去多余的精子。然后移入发 育培养液（TCM－199＋10％ FCS）继续培养。
2)同期发情
胚胎移植时，供体胚胎必须与受体子宫内膜发 育状态高度同步化，才能获得好效果，这个过 程称为同期发情（oestrus ynchronization）， 包括自然同期发情和人工同期发情。 自然同期发情即不经任何药物处理，依靠动物 自身的性周期规律，选择处于适当时期的母畜 作为受体。 实际操作中，多用性激素进行人工同期发情。 以小鼠为例，将自然排卵或人工超排的小鼠与 结扎输精管的公鼠交配，造成假孕。子宫移植 时，一般选用假孕2.5天的母鼠。
《细胞工程》课程说明书
[4] http://61.187.179.69/ec2006/C217/kcms-1.htm
四、教学信息
教学目标
通过本课程的学习使学生掌握细胞工程的基本操作技术、原理及研究对象的特点，为从事生物学相关领域的研究奠定良好的基础。
扩展专题2:科研论文介绍-研读及撰写（2学时）
第17周
课程总结、扩展与答疑（2学时）
答疑
教学方法
与手段
通过教材进行基本内容讲授，多媒体辅助，小组讨论等教学手段相结合。
学习方法
课上听讲，要点分析，分组讨论，课堂小结，课后复习、浏览教学网站、去开放实验室实践。
五、实践教学（独立设课另安排）
六、成绩考核
平时成绩
思考与作业练习见课件
第3周
第3章植物组织与器官培养（4学时）
3.1植物组织培养（2学时）
3.2植物胚胎培养
3.3毛状根培养（2学时）
思考与作业练习见课件
第4周
第4章人工种子与植物脱毒（2学时）
4.1人工种子
4.2植物脱毒
第5周
第5章植物细胞培养与次级代谢产物制备（2学时）
第6章原生质体培养与诱变（2学时）
第6周
第7章细胞融合与体细胞杂交（4学时）
7.1细胞融合（2学时）
第7周
7.2体细胞杂交（2学时）
第8章多倍体与单倍பைடு நூலகம்植物（4学时）
8.1多倍体植物（2学时）
思考与作业练习见课件
第8周
8.2单倍体与纯合二倍体植物（2学时）
视频文献拓展等参考课件
第9周
劳动周
第10周
第9章植物离体受精（2学时）
6细胞工程(安利国)第六章考试重点
胚胎工程1、胚胎发育的基本过程包括：生殖细胞的发生、受精、卵裂、囊胚、原肠胚、中胚层及体腔形成、胚层分化等主要阶段。
2、体外受精技术主要包括：精子的采集与体外获能、卵子的回收及成熟培养、卵子与精子的体外受精、受精卵的体外发育、试管胚胎的移植等环节。
3、胚胎移植技术：指良种母畜配种后，从其体内取出受精卵或早期胚胎，移植到同种生理状态相同的母畜体内继续发育成为新个体的技术。
4、胚胎分割技术：指将一枚胚胎用显微手术的方法分割成几份，经体内或体外培养，然后移植人受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。
5、常用的胚胎分割技术有：显微针分割法、显微刀分割法、酶软化透明带后显微分割法及徒手分割法、酶消化去透明带后分割法。
6、胚胎的低温冷冻保存技术主要包括：常规冷冻法、一步冷冻法、玻璃化法。
7、发育分为个体发育和系统发育。
8、受精：精子和卵子融合形成受精卵的过程。
9、精子的获能现象：直接排出的精子不能使卵受精，必须在生殖道中停留一段时间后才具备受精能力，这一现象即为精子的获能现象。
卵泡液、输卵管分泌物、血清、房水等多种液体都可以使精子获能。
10、卵黄相对多的一端称为植物极，另一端称为动物极。
11、卵母细胞与卵泡细胞构成卵泡，根据其发育程度可分为：原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡。
P10012、卵裂分为：完全卵裂、不完全卵裂。
13、卵裂的结果是分裂球形成中空的球状胚，称为囊胚。
囊胚中间的腔称为囊胚腔，囊胚壁的细胞层称为囊胚层。
14、原肠胚的形成方式主要有内陷、内移、分层、内转、外包等。
在中胚层之间形成的腔称为真体腔。
15、发育包括5种主要的机制：细胞分裂、细胞分化、模式形成、形态发生、生长。
16、诱导：在发育中来自一群细胞的信号能影响到相接触的另部分细胞的发育的现象。
17、有些动物早期胚胎的细胞并没有决定，每一个细胞都能够产生一个完整的胚胎，细胞的分化潜能远远大于它的正常命运，称为调整型。
18、模式形成：是胚胎细胸通过建立空间与时间的活动模式，从而使结构得到高度有序的发育过程。
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细胞工程第六章
3、用于临床治疗 目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造
血障碍症患者体内进行治疗的报道。 4、用于药物效应的检测
检测的药物具有组织特异性时，可选用相应的细 胞，如检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗 癌药物可选用癌细胞。
药品、食品添加剂等对机体的毒性及其产生不 良影响的安全性调查，细胞培养技术为其提供了最 简易而又可靠的方法。
细胞工程第六章
二、在临床医学上的应用 1、用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断
用羊膜穿刺技术获得胎儿细胞，培养后进行染色 体分析，诊断胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型。 2、用于癌症的早期诊断和预防
细胞工程第六章
二、动物细胞大规模培养的方法和操作方式 （一）动物细胞大规模培养的方法
◆灌注小室培养法
细胞工程第六章
3． 、培养液的发展 天然培养基(胎汁、血浆和血清) 人工合成培养基（需添加血清）
无血清细胞培养基（用激素、生长因子替代血清）
细胞工程第六章
第三节 动物细胞培养的应用
一、在生物学领域基础研究中的应用 1、在细胞生物学上的应用
研究动物的正常或病理细胞的形态、结构、生长 发育、细胞营养、代谢以及病变等微观过程。 2、在遗传学上的应用
内取出的组织用机械或消化的方法 分散成单细胞悬液，然后放在类似 于体内生存环境的体外环境中，进 行孵育培养，使其生存、生长并维 持其结构与功能的方法。
细胞工程第六章
二、动物细胞培养的优缺点 1、动物细胞培养具有一系列优点： ①可简化细胞的生长环境。
细胞培养技术使得在细胞存活的基础上独立研究 细胞生命活动、逐项研究细胞生存条件和细胞功能 成为可能。 ②能够方便地控制实验因素。
的差异。组织和细胞离体之后，独立生存在培养 环境中，缺乏在体内时的血液供应和神经体液调 节作用，其生物学行为与体内生长时相比会发生 某些变化。
细胞工程第六章
第二节 动物细胞培养发展史
一、动物细胞培养技术的创立 1907年，胚胎学家Harrison在无菌条件下，用盖
玻片悬滴培养法将蛙胚髓管部组织在体外培养了数 周，开创了动物组织和细胞培养的先河。
第六章 动物细胞培养生物制药
细胞工程第六章
第一节动物细胞培养的基本概念及其优缺点 第二节 动物细胞培养发展史 第三节 动物细胞培养的应用 第四节 动物细胞的大规模培养
第五节 动物细胞生物反应器
细胞工程第六章
第一节 动物ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ胞培养的基本概念及其优缺点
一、动物细胞培养的概念 动物细胞培养是指将动物活体体
研究某种实验因素对细胞的生物学作用，只需在 培养液中有针对性地加入或者删除这种成分即可。
细胞工程第六章
③易于观测实验结果。 利用细胞培养技术研究细胞的生命活动规律，可以
很方便地采用各种实验技术和方法来观察、检测和 记录。 ④可供研究的细胞种类极其广泛。 ⑤可同时提供大量均一性较好的细胞群，降低实验 成本。
一、动物细胞大规模培养概述 （一）动物细胞大规模培养技术的概念
指在人工条件（除满足培养过程必需的营养要求 外，还要进行pH和溶解氧的最佳控制）下，在细胞 生物反应器中高密度大量培养动物细胞用于生产生 物制品的技术。
细胞工程第六章
生物制品生产中适合工业化生产的细胞株有： CHO（Chinese hamster ovary cell）：从中国仓鼠 卵巢分离的细胞，亚二倍体 ，有多种突变株，贴壁 生长，也可以悬浮培养，对剪切力和渗透压改变有 较高的忍受能力 。
除进行染色体分析外，还可结合细胞融合技术进 行杂交育种。
细胞工程第六章
3、在胚胎学上的应用
通过体外培养卵母细胞，进行体外受精、胚胎分 割和移植，已应用于家畜的繁殖生产中。
4、在病毒学上的应用
许多致畸、致癌物质加入动物细
培养细胞为病毒的增胞殖培提养供液了后场，培所养。细胞会发生染 5、在药理学领域的应用 色体结构和数目的变异。
细胞工程第六章
⑥能够进行大规模生物制品的生产。 目前，利用动物细胞大规模培养技术所生产的生物
产品包括酶、单克隆抗体以及多种疫苗等生物制品 或者基因工程产品。
细胞工程第六章
2、动物细胞培养的缺点： ①体外培养的动物细胞对营养的要求较高。 ②动物细胞生长缓慢，对环境条件要求严格。 ③体外培养的细胞与体内生长的细胞存在或多或少
细胞工程第六章
三、在动物育种上的应用 新品种的培育可大大缩短育种进程，且更加经
济有效。胚胎干细胞的研究成果和克隆羊多莉的 问世为动物遗传育种开辟了一条新途径。 四、在生物制品生产上的应用
用动物细胞可生产的生物制品有各类疫苗、干 扰素、激素、酶、生长因子、病毒杀虫剂、单克隆 抗体等。
细胞工程第六章
第四节 动物细胞的大规模培养
细胞工程第六章
（二）动物细胞大规模培养技术的应用
1、生产疫苗 目前，通过动物细胞大规模培养已实现商业化的
疫苗产品有口蹄疫疫苗、狂犬病疫苗、牛白血病病 毒疫苗、脊髓灰质炎病毒疫苗、乙型肝炎疫苗、巨 细胞病毒疫苗等。
2、生产干扰素 3、生产多肽和蛋白质类药物 4、生产人源化单克隆抗体
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（三）动物细胞大规模培养的一般工艺流程 1 —组织块；2—组织块碎片； 3—消化；4—离心；5—原代培 养；6一传代培养；7一液氮罐 保存细胞；8—复苏培养；9— 扩大培养；10—大规模生物反 应器培养
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二、动物细胞培养技术的发展 1、培养器材的发展
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方便了更换培养液的操作，
2、培养方法的发培大展养大物降可低交了替污地染接的触概培率养液和气体 ◆双盖片悬滴培养法环境，利于细胞或组织成长
供新鲜培养液流入小室和旧培养液
◆旋转管培养的排方出法，从而使细胞生活在不断更新
的培养液中
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BHK 21细胞（Baby hamster kidney cell）：是1961 年英国从幼地鼠的肾脏分离的细胞。成纤维样，异 倍体。常用于增殖病毒制备疫苗和重组蛋白。
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Vero细胞（Vero cell）:是1962年日本从非洲绿猴肾 中分离的细胞。成上皮型，异倍体，贴壁型，是最 常用的大规模培养的动物细胞。