细胞生物学试验-显微镜
细胞生物学光学显微镜
2.光学显微镜技术有哪些新发展？它们各有哪些突出优点？为什么电子显微镜不能完全代替光学显微镜？.答：（1）光学显微镜技术的新发展光学显微镜技术在细胞学研究中发挥了重要作用，随着多种现代生物学技术与光镜技术的结合，使光学显微镜展现出了新的活力，也有了新的发展。
光学显微镜技术主要有普通复式光学显微镜技术、荧光显微镜技术、激光扫描共焦显微镜技术、相差和微分干涉显微镜技术、录像增差显微镜技术等。
（2）光学显微镜技术的优点普通复式光学显微镜使用简单，操作方便，可以配备多套仪器使用，如暗视野显微镜。
荧光显微镜是目前在光镜水平上对特异性蛋白质等生物大分子定性、定位的最有利工具。
激光扫描共焦显微镜成像清晰，分辨率高，可以通过光学切片观察较厚样品的内部结构。
相差和微分干涉显微镜不需要染色就可以观察活细胞甚至研究细胞核、线粒体等细胞器的动态，并且具有很强的立体感。
录像增差显微镜分辨率比普通光镜提高了一个数量级，而且可在高分辨率下研究活细胞。
光学显微镜的优点如下表所示：光学显微镜技术荧光显微镜主要特点样品进行荧光标记突出特点只有激发荧光可以成像激光扫描共焦显微镜光通过一个小孔或裂缝成像，只有焦平面的光成像图像比较清晰，分辨率提高1.4~1.7倍相差显微镜增加一个“相差板”，夸大样品密度相位差不需要染色，可观察活体微分干涉显微镜棱镜折射，增加样品密度的明暗区别增加反差，更具立体感暗视野显微镜倒置显微镜黑暗背景下利用散射光观察照射系统和物镜颠倒位置细胞及细胞器边缘轮廓清晰增加了集光器和载物台的距离，可放置培养皿观察录像增差显微镜计算机辅助微分干涉显微镜提高了分辨率，可观察颗粒的运动（3）电子显微镜不能完全代替光学显微镜的原因尽管电子显微镜具有分辨率高这一光学显微镜无法比拟的优越性，但光学显微镜在科研中的地位是不可取代的。
这可以从以下几个方面进行说明。
①细胞生物学是在显微、亚显微和分子三个结构层次上研究细胞的，在显微水平上研究细胞需用光学显微镜，在亚显微水平上研究细胞需用电子显微镜，因此二者是在细胞的不同显微水平上观察细胞结构的。
细胞生物学实验-显微镜使用及绘图
生物绘图方法
（4）求真实 须注意其科学性，精确性，不能任意臆造，加以美化，绘图 力求准确。先用HB铅笔起草，后用硬铅笔画出。 （5）用点线 图只用点和线表示。切不可涂黑，细胞壁用平行的双线表示， 线条要细而圆滑，粗细均匀，原生质体内的结构（如细胞质、 细胞核等）要用疏密的点表示，点要细圆，不拖尾巴。细胞 与其他细胞相连接处要画出一些来，以表示所画的细胞不是 孤立的。 （6）勤对照 与显微镜下实物对照，检查一下是否有无遗漏或错误. （7）做注释 用直线从各部分引出并注出名称。字最好在图右侧，字要端 正、大小一致、排列整齐。每个图的下方注明图的名称及所 用材料，例如“洋葱表皮细胞”、“小麦颖果纵切”等。
生物绘图要求
（1）形态结构要准确，比例要正确，要求真实感，立体感， 精美而美观。图中较暗部分用点表示 ,用点的稀疏稠密表示 黑暗程度，不能使用横线或者涂黑。 （2）图面要力求整洁，铅笔要保持尖锐，尽量少用橡皮。 （3）绘图大小要适宜，位置略偏左，右边留着注图。 （4）绘图的线条要光滑、匀称，点点要大小一致。 （5）绘图要完善，字体用正楷，大小要均匀，不能潦草。注 图线用直尺画出，间隔要均匀，且一般多向右边引出，图注 部分接近时可用折线，但注图线之间不能交叉，图注要尽量 排列整齐。 （6）绘图完成后在绘图纸上方要写明实验名称、班级、姓名、 时间，在图的下方注明图名及放大倍数。
生物绘图方法
（1）看清楚 把正常的、一般的结构与偶然的、人为的一些结构区分开， 然后选择那些有代表性的典型的部位进行绘图。 （2）定位置 先确定要画的图在实验报告纸上的位置和大小，力求布局 合理、美观，不能任意的无计划的画图，否则位置不适当 或偏在一角、或过大过小，影响注字和说明。考虑在左侧 一边留一定边缘，以备装订之用。 （3）定大小 一般尽可能的把图画大些。如果是细胞图，为了清楚表明 细胞内部结构，所画细胞不宜过多，1～2个即可，但每个 细胞的各个部分按同比例适当放大，如画轮廓图或图解图， 也不一定把全部切面（如根茎的横切面图）画出，根据需 要画出1/2～1/8即可。
细胞生物学实验指导书
实验一普通光学显微镜的结构及其使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的工作原理，掌握光学显微镜的使用方法。
2、熟悉光学显微镜细胞的形态与结构。
二、实验用品普通光学显微镜、生物制片标本、擦镜纸。
三、实验原理和方法1、普通光学显微镜的构造从构造上，主要分三部分：①光学放大系统，为两组玻璃透镜：目镜和物镜；②照明系统：光源、折光镜和聚光镜，有时另加各种滤光片以控制光的波长范围；③机械和支架系统：主要保证光学系统的准确配制和灵活调控。
显微镜的质量主要取决于物镜，物镜是显微镜最主要的光学部件。
物镜的种类很多。
2、显微镜的能力显微镜的能力是质量和性能的标志。
能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等，其中最重要的是分辨率。
物镜分辨力是指分辨被检样品微细结构的能力。
通常以能清晰地分辨两个物体点的最短距离来表示。
其公式如下：R=0.61λ/N.A.R：分辨率（两点的最短距离）λ：照明光线波长N.A.：物镜数值孔径分辨率以分辨两个点的最短距离表示，R值愈小，分辨能力愈大。
物镜的分辨率与照明光线的波长成反比，与物镜的数值孔径成正比。
3、显微镜的使用①聚光器的调节②光阑的调节③工作距离④油镜的使用4、观察标本注意观察下列结构：①细胞核及核仁：不同细胞的核及核仁――蚕豆根尖切片、兔肝切片（Unna试剂染色）多核及多核仁现象――蛙卵切片、肌肉切片染色体――蚕豆根尖切片、玉米花粉母细胞切片（Giemsa,地衣红或洋红染色）。
②中心体：蝗虫精巢切片（巴西木素染色）。
③线粒体：蚕豆根尖切片、兔肝切片。
④高尔基体：兔肝切片、蚕豆根尖切片（硝酸银或四氧化锇染色）。
四、实验结果简述显微镜的主要结构和操作要领；绘制细胞显微结构图。
实验二线粒体和液泡系的超活染色与观察一、实验目的1、观察植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
2、学习一些细胞器的超活染色技术。
二、实验原理活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
医学细胞生物学实验指导
普通生物学实验指导供医学八年制使用华中科技大学生命与技术学院实验教学中心目录实验一显微镜的结构及使用方法 (2)实验二动物细胞形态结构的观察 (5)实验三细胞器的光镜切片观察 (7)实验四动物细胞培养 (9)实验五 ABO血型鉴定与交叉配血 (16)实验六血涂片的制作与读片 (19)实验七细胞有丝分裂标本的制备与形态观察 (23)实验八蝗虫精巢减数分裂压片标本的制备与观察 (27)实验九人外周血染色体制备 (30)实验十正常人非显带染色体的核型分析 (32)实验一显微镜的结构及使用方法一、实验目的1. 学习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
2. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
3. 了解几种特殊光学显微镜的工作原理及其使用光学显微镜的使用( 一) 显微镜的结构及使用方法光学显微镜，简称光镜(microscope) ，是生物医学研究及临床工作中常用的仪器，每个学生都必须熟悉它的结构和性能，掌握其使用方法。
1 ．光学显微镜的主要构造显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分( 图1-1) 。
(1) 机械部分①镜座：亦称镜脚，是显微镜的基座，用以支持整个显微镜。
②镜柱：是镜座向上直立的短柱，用以支持其他部分。
③镜臂：是镜柱向上弯曲的部分，适于手握。
有些显微镜镜柱与镜臂之间有倾斜关节。
④镜筒：连在镜臂前方的镜筒部分，一般长度为16 cm 。
有直筒和斜筒两种，前者镜筒上下可调节，后者镜筒是固定的⑤调节器：是装在镜臂上的大小两种螺旋，转动时可使镜台升降或使镜筒上下移动以调节焦距。
粗调节器( 粗螺旋) 转动时可使镜台或镜筒在垂直方向以较快速度和较大距离进行上下升降，调节物镜与标本的距离。
通常在低倍镜下，先用粗调节器找到物像。
细调节器( 细螺旋) 形状较小，通常在粗调节器的下方或外侧，转动时可使镜台或镜筒缓慢地上下移动，以精细调节焦距，得到清晰的物像。
⑥旋转器( 镜头转换器) ：装在镜筒的下端，呈盘状，下面有3 ～4个物镜孔供装置不同放⑦载物台( 镜台) ：用以放玻片样本，中间有一通光圆孔，称为镜台孔，由此孔可透入集光器传入的光线。
细胞生物学实验显微镜的使用和细胞观察
细胞生物学实验显微镜的使用和细胞观察在细胞生物学研究中，显微镜是一种必不可少的工具。
通过显微镜的使用，科学家们可以观察和研究细胞的结构和功能，而且显微镜的技术也不断地发展和提升，使得细胞观察的分辨率和准确性更高。
本文将探讨细胞生物学实验中显微镜的使用以及细胞观察的相关内容。
一、显微镜的种类和使用方法显微镜有多种不同类型，常见的有光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜是最常用的显微镜，它使用可见光来观察样本。
光学显微镜可以分为单镜头显微镜和复合显微镜，其中复合显微镜是最常见的。
电子显微镜则使用电子束来观察样本，其分为透射电子显微镜和扫描电子显微镜。
在使用显微镜之前，我们需要做一些准备工作。
首先，我们需要调整显微镜的放大倍数和焦距，以便获得清晰的观察图像。
其次，我们需要将样本放在玻片上，通常是在一滴水中加入少量样本，并用盖玻片覆盖。
然后，将玻片放在显微镜的载物台上。
接下来，可以通过旋转镜片或调节焦距来使观察图像变得清晰，并通过调节光源的亮度来改变样品的照明。
二、细胞观察通过显微镜的使用，我们可以对细胞的外观、结构和功能进行观察和研究。
以下是一些可以通过显微镜观察到的细胞特征：1. 细胞形状：细胞的形状多样，可以是圆形、椭圆形、长条形等等。
不同类型的细胞形状有助于我们区分不同种类的细胞。
2. 细胞核：绝大多数细胞都含有细胞核，细胞核内含有细胞的遗传物质DNA，并且控制着细胞的生命活动。
3. 细胞器：显微镜可以观察到细胞的一些重要的内部结构，如线粒体、内质网、高尔基体等。
这些细胞器在细胞的功能中起着重要的作用。
4. 细胞膜：细胞膜是细胞的外层包裹物，它控制着细胞内外物质的交换和运输。
除了观察细胞的结构外，通过显微镜还可以进行一些更深入的实验，如观察细胞的生长过程、细胞的分裂过程等。
这些实验可以帮助我们更好地了解细胞的生命周期和功能。
综上所述，显微镜在细胞生物学实验中是一项不可或缺的工具。
通过显微镜，我们可以观察和研究细胞的结构和功能，从而深入理解细胞的生命活动。
细胞生物学实验材料
实验一荧光显微镜的原理和使用实验二叶绿体的分离与荧光观察实验三线粒体的活体染色与观察实验四细胞膜的通透性实验五 DNA的细胞化学——Feulgen反应实验六植物染色体标本的制备和观察实验七细胞计数实验八植物细胞骨架的光学显微镜观察实验九植物原生质体的分离和活性鉴定实验十环境因素诱变染色体改组的观察实验一荧光显微镜的原理和使用一、实验目的了解荧光显微镜的构造及其维护方法；掌握荧光显微镜的使用方法和使用中的注意事项。
二、实验原理荧光显微镜是选择由高压汞灯或类似光源发出一定波长的激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，观察细胞某种特异成分的分布状态的显微镜。
与普通光学显微镜一样，荧光显微镜也有物镜、目镜、调焦装置、光源、聚光器、载物台、镜身等组成部分。
所不同的是，荧光显微镜增加了激发光源和滤片系统，它投射到样品上的是特定波长的激发光而不是普通的可见光。
在激发光的作用下，样品中的荧光物质产生图1荧光显微镜发射光（即荧光）。
因此，荧光显微镜观察到的是样品中能产生荧光的部分所呈现的荧光映象，普通光学显微镜则是整个样品的可见光透射和折射影像。
某些物质在—定短波长的光（如紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。
若停止供能荧光现象立即停止。
有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。
有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。
因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。
三、实验用品荧光显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、解剖刀、0.01%吖啶橙染色液（acridine orange）、蒸馏水、水葫芦叶片四、实验内容与方法（一）荧光显微镜的构造1、基本装置荧光显微镜的基本装置是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、二向色镜和阻断滤片等）的基础上组成的。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验一、显微镜的结构与使用方法一、实验目的1.认识显微镜的构造2.学会独立操作显微镜二、仪器和材料显微镜、擦镜纸、装片三、实验内容1.学生按编号把自己的显微镜取出，放在试验台上，在教师的指导下熟悉显微镜各部分的构造及用途，然后进行操作练习。
先用低倍镜进行对光联系，使视野明亮而均匀。
如果使用双筒目镜，还应学习目镜间距的调节。
在转换高倍物镜观察，此时应注意它的视野亮度与低倍物镜有无区别？并思考通过哪几种方法调节使得高倍物镜的视野达到要求的亮度。
2.取已制备好的装片进行观察：按低倍镜使用步骤和方法进行操作练习。
注意要使观察到的像向前移动时，玻片标本应向那个方向移动？欲使观察到的像向右移动时，拨片标本应向那个方向移动？3.观察制备好切片：细胞核、中心体、胞间连丝、有丝分裂、减数分裂、高尔基体等。
4.观察完毕后，按正规要求取下玻片，把显微镜收好。
四、作业绘制2-3中细胞结构实验二、Feulgen反应显示DNA（一）实验目的1．掌握临时制片法。
2．熟悉Feulgen反应的原理及操作步骤。
3．观察细胞中DNA的分布。
（二）实验原理Feulgen在1924年发明一种对DNA特异的组织化学染色反应，故称Feulgen反应。
DNA经酸（1mol/L HCl）水解后，DNA分子中的嘌呤和脱氧核糖连接的配糖键被打开，脱氧核糖的一端释放出醛基，并在原位与Schiff试剂反应形成特异性的紫红色产物。
该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。
并且在一定的浓度范围内，对550~570nm光波的吸收值与DNA 含量成正比关系，既符合化学计量学关系。
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。
对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应。
细胞生物学实验技术一
(2)脱水
定义：借助某些化学溶剂置换组织内水分的过程 常用的脱水剂：酒精
(3)包埋
定义：将组织块包入包埋剂使组织硬化的过程。 常用的包埋剂：液体石蜡、树脂
(4)切片
1-10 μm
（5）染色
采用某些化学物质特异性或选择性地与细 胞内的某些成分相互作用，从而原位显示 细胞某种成分或结构的方法
A 选择性染色
观察组织的表面三维结构
冰冻断裂电镜-观察生物膜结构
A 冰冻组织( N2) B 重金属喷镀(Pt) C 喷碳加固(C) - SEM D 复型 - TEM
冰冻蚀刻电镜-观察生物膜结构
A 冰冻组织( N2)
B 真空中升华
C 重金属喷镀(Pt) D 喷碳加固(C) - SEM E 复型 - TEM
负染电镜技术-观察纤维状\颗粒状成分
活体细胞观察
5.激光扫描共焦显微镜
（ Laser Scanning Confocal Microscope）
(1)原理
在显微镜基础上配置激光光源，扫描装置， 共轭聚焦装置和检测系统而形成的显微镜。
单色激光光源
光源后－照明针孔－点光源
检测器前－探测针孔 分层扫描 三维重建
共扼
（2）应用
A 细胞的三维重建
考马斯亮蓝 – 蛋白质 Brachet反应
hematoxylin-eosin
B 特异性染色
酶 + 底物
+ substrate
抗原 + 抗体
antigen
** *
* * *
antibody
酶标记 荧光标记
*
*
*
*
*
*
3.荧光显微镜技术
(1) 原理
细胞生物学试验篇
细胞生物学试验篇实验一细胞的形态观察及其大小测量【实验目的】1、通过对原核与真核各类形态细胞的光学显微镜观察，熟悉细胞的形态及其显微结构；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。
【实验用品】普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片等。
【实验材料】小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;洋葱。
【实验内容与方法】(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察（1）人肝细胞切片：在显微镜下认真观察肝细胞的形态构造。
注意肝细胞之间的界限、细胞的形状、细胞核的形状与数量、核仁的形状与数量、细胞质的形态构造与细胞质与细胞核染色的区别。
（2）鸡血细胞涂片的观察：注意观察血细胞的构成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。
2、植物细胞的观察（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞与叶肉细胞的基本结构。
（2）洋葱表皮细胞的形态观察：用镊子撕取洋葱表皮，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。
在显微镜下观察的形态与结构。
（二）细胞的大小与测量1、测微尺的使用目镜测微尺是一块圆形玻片，中心刻有一尺，长5～10mm，分成50～100格。
每格的实际长度因不一致物镜的放大率与不一致镜筒长度而异。
镜台测微尺是在一块载玻片中央，用树胶封固一圆形的测微尺，长1mm或者2mm，分成100格或者200格，每格的实际长度0.01mm(10μm)。
当用目镜测微尺来测量细胞的大小时，务必先用镜台测微尺核实目镜测微尺每一格的长度。
方法如下：(1)卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。
(2)将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。
调焦至能看清镜台测微尺的分度。
(3)小心移动镜台测微尺与转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线(如图所示)。
(4)记录两条重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数。
按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：0 1 2 3测定目镜测微尺每格实长的图解上尺：目镜测微尺；下尺：镜台测微尺镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数= —————————×10目镜测微尺的格数比如，图中镜台测微尺1格=目镜测微尺6格，代入公式得：目镜测微尺每格=1／6×10μm=1.66μm(5)取下镜台测微尺，换上需要测量的玻片标本，用目镜测微尺测量标本。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告实验目的：探究植物细胞与动物细胞在不同条件下的结构和功能差异。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 镜片- 显微镜- 植物叶片样本- 动物组织样本- 注射器或吸管- 0.9% NaCl生理盐水- 甘油或其他透明溶液2. 实验步骤：1. 取一片植物叶片，并在显微镜盖玻片上放上一滴生理盐水。
2. 将植物叶片放在生理盐水中，使用镊子轻轻剪碎叶片，使细胞释放。
3. 将显微镜盖玻片置于显微镜下，调节镜片使其聚焦在细胞上。
4. 观察细胞的结构，包括细胞壁、细胞膜、细胞核等。
5. 取一片动物组织，并在显微镜盖玻片上放上一滴甘油或其他透明溶液。
6. 使用镊子将动物组织放入溶液中，轻轻搅拌，使细胞释放。
7. 将显微镜盖玻片置于显微镜下，调节镜片使其聚焦在细胞上。
8. 观察细胞的结构，包括细胞膜、细胞核、线粒体等。
实验结果：通过观察植物细胞和动物细胞的实验，我们得出以下结论：1. 植物细胞具有细胞壁，而动物细胞没有。
细胞壁是植物细胞的一个重要特征，它能提供结构支持和保护细胞。
2. 细胞膜是植物和动物细胞共有的特征，它控制物质的进出，维持细胞内外环境的稳定。
3. 细胞核是细胞的控制中心，核内含有遗传物质DNA。
无论是植物细胞还是动物细胞，细胞核都是存在的。
4. 植物细胞内含有叶绿体，而动物细胞没有。
叶绿体是植物细胞中进行光合作用的重要器官，能够将阳光转化为化学能。
5. 动物细胞内含有线粒体，而植物细胞也存在但数量相对较少。
线粒体是动物细胞中的能量合成器官，能够产生细胞所需的能量供应。
实验结论：通过本实验，我们明确了植物细胞和动物细胞的结构和功能差异。
植物细胞具有细胞壁和叶绿体，能够进行光合作用，而动物细胞具有线粒体，能够进行代谢和产生能量。
另外，细胞膜和细胞核是所有细胞共有的结构，起着重要的生命活动调控作用。
实验意义：细胞是生命的基本单位，通过深入了解细胞的结构与功能差异，有助于我们更好地理解生物的生命活动和各种生物现象。
细胞生物学实验手册：细胞显微摄影
实验二十三细胞显微摄影
【实验目的】
了解生物显微摄影的基本原理和装置，以及照相暗室工作的基本过程。
【实验用品】
一、材料和标本人类染色体标本，其它染色的生物标本片。
二、器材和仪器显微镜、35毫米照像机、显微照明装置、自动曝光控制器、ASAl00黑白135胶卷、洗印和放大等成套的暗室设备。
三、试剂 D一72式普通显影液、SB-1式停影剂、F一5酸性定影液
【实验内容】
一、原理
生物显微摄影(Microphotography)是利用摄影装置来拍摄显微镜视野中所观察到的物像。
在生物医学方面，主要用于对正常细胞或病变细胞的显微形态学研究记录。
二、操作步骤
(一)拍摄前准备
1．光路合轴使光轴与光束处于同一轴线上。
2．柯勒氏照明使观察的视野获碍均匀而又充分的照明；防止杂散光对照相系统产生影响；使被摄物体不受热，影象清晰。
3．物镜与目镜合理组合依标本的不同和显微摄影要求，物镜与目镜的组合有一定规范，如：拍摄人类染色体影像，采用高分辨率的100倍油镜，配合10倍目镜，可获得良好分辨的理想放大影像。
4．调整视场光阑和孔径光阑使两者与所用物镜的数值孔径(N．A．镜口率)相等，所得的分辨力最高；视场光阑一旦调好，不要再动，而孔径光阑可随物镜数值孔径的更换，做相应的调整。
一般来说，把孔径光阑的大小调成等于相应该物镜孔径像的2／3为宜，尽管丧失了少许的分辨力，却能提高影像的反差、焦点深度和清晰度。
总之，上述作法是调整显微镜至最佳状态。
(二)拍摄程序。
细胞生物学研究方法
细胞由于体积小，一般需在显微镜下观察，显微镜一般分为光学显微镜与电子显微镜。
显微镜的放大倍数由目镜与物镜决定：放大倍数=物镜×目镜。
清晰与否由分辨率（指能够分辨出相邻两质点间的最小距离，距离越小，分辨率越高）决定。
一般来说，光镜分辨率为0.2微米，电镜分辨率为0.2纳米。
分辨率的限制因素为：入射光波长，介质折射率，物镜镜口角。
光学显微镜结构为：光学显微系统，光源，机械支撑系统，有些还有图像采集系统。
常见有三种：复式显微镜，相差显微镜以及荧光显微镜。
复式显微镜分为单筒显微镜，双筒显微镜。
复式光学显微镜较为简单，照明系统为可见光，光学系统为玻璃透镜（目镜，物镜以及聚光镜），另外还有机械与支架系统。
普通复式显微镜的缺点：由于光的干涉，衍射现象，光线通过样品时，两个相邻焦点的图像可能发生重叠，进而无法分辨，导致存在分辨极限。
相差显微镜是指利用光线的干涉，衍射特征，时相位差转变为振幅差，增强样品的明暗对比，从而观察无色透明样品的装置。
相差显微镜的特殊构件为相差板，环状光阑。
相差显微镜的特点：样品无需染色，可观察活细胞及细胞器动态。
荧光原理：荧光分子吸收入射光能量以后，电子由基态跃迁到激发态。
激发态电子不稳定，会自发跃迁回基态，并辐射荧光。
荧光显微镜原理：利用短波长电磁波为光源，激发样品辐射荧光，之后利用样品产生的自发荧光或诱发荧光，对细胞内特异性蛋白质进行定性与定位研究的装置。
荧光显微镜的优点：荧光显微镜主要用于定性，定位研究细胞内特异性蛋白质，可以观察活细胞。
缺点：无法排除来自样品焦平面以外的荧光，使得图像的反差与分辨率降低。
光学显微镜样品的制备：固定，包埋，切片，染色固定：目的是杀死细胞，稳定细胞成分，以便进一步处理和切片是不受破坏。
固定的方法时将样品浸泡于固定液中，是大分子交联从而保持在一定位置，常用固定液有甲醛，戊二醛。
包埋：目的是为切片做准备，增强细胞的机械支撑力，方法是将样品浸泡于介质中，使介质渗入整个样品。
细胞生物学-实验一 显微镜
8、几种特殊类型的光学显微镜 1）暗视野显微镜 dark field microscope
• 原理：丁达尔现象。照明
光线不直接进人物镜，只
有被标本反射和衍射的光 线斜向进入物镜，因而视
野的背景是黑的，物体的
边缘是亮的。 • 结构特点：具有环状光阑 和暗视场聚光器。
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暗视野显微镜的主要用途
• 观察活细胞的几何轮廓及其运动，如鞭毛、染色
了油浸物镜，至此普通光学显微镜技术基本成熟。
Bausch & Lomb Investigator microscope – circa 1893
•
1932年，荷兰籍德国人F. Zernike成功设计了相差显 微镜（phase contrast microscope)，并因此获1953年 诺贝尔物理奖。
• 3、制备鸭跖草叶片背表皮装片，并利用荧
光显微镜观察叶绿体的自发荧光；
• 4、练习相差、倒置显微镜的使用。
Cs atoms (red) on the GaAs surface (blue).
• Ernst Ruska，Gerd Binnig和Heinrich Rohrer分别因为发明电子显微镜和扫描隧 道显微镜而分享1986年的诺贝尔物理学奖。
显微镜的分类
按照明技术分 明视野显微镜 暗视野显微镜 荧光显微镜
细胞生物学与细胞工程实验的总体安排 （10-18周）
• 实验一 显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验
• 实验二 动物细胞培养液的配制与灭菌
• 实验三 动物细胞的组织块培养法 • 实验四 动物组织的消化及细胞冻存 • 实验五 细胞复苏及活力测定 • 实验六 细胞骨架的光镜观察 • 实验七 小鼠骨髓细胞染色体玻片标本的制作 • 实验八 细胞融合（与实验四合并） • 实验九 血涂片的制备及细胞大小的测量
大学生物学实验教案：细胞生物学的观察和实验操作
大学生物学实验教案：细胞生物学的观察和实验操作1. 实验简介本实验旨在通过观察和实践，让大学生对细胞生物学有更深入的了解。
实验将通过使用显微镜观察不同类型的细胞样本，并进行一些基本的实验操作，从而探究细胞结构和功能。
2. 实验器材和材料•显微镜及其配件（物镜、载玻片、盖玻片等）•细胞样本（动植物组织片、单细胞等）•高锰酸钾溶液•甘油•生理盐水•紫外线灯3. 实验步骤步骤1：制备样本载玻片1.准备干净的载玻片。
2.使用无菌注射器吸取少量生理盐水，并滴于载玻片中心。
步骤2：观察活细胞1.将采集到的活体细胞放置在准备好的载玻片上。
2.加盖并尽量避免形成气泡。
3.将载玻片放置在显微镜台上，使用低倍物镜进行初步观察。
4.切换至高倍物镜，并对细胞进行详细观察和记录。
步骤3：观察动植物组织片1.准备已染色或未染色的动植物组织片。
2.将组织片放置在载玻片上，并加盖。
3.将载玻片放置在显微镜台上，使用低倍物镜进行初步观察。
4.切换至高倍物镜，并对组织结构进行详细观察和记录。
步骤4：实验操作：渗透压的影响1.制备三个小瓶，分别标注为A、B和C。
2.在瓶A中加入生理盐水。
3.在瓶B中加入高浓度甘油溶液（可根据需要调整浓度）。
4.在瓶C中加入低浓度甘油溶液（可根据需要调整浓度）。
5.将离心后的红血球分别放置于三个瓶子中，记录下红血球的变化情况。
步骤5：实验操作：核酸染色1.准备一份含有DNA的细胞样本。
2.加入适量的缓冲液，混合均匀。
3.滴加一滴染色剂（如乙溴橙），轻轻晃动。
4.等待几分钟后，用载玻片将混合液取出，并使用盖玻片加盖。
5.使用荧光显微镜观察染色后的样本。
4. 实验结果与讨论在实验中，学生应记录观察到的细胞结构、细胞分裂、渗透压对红血球的影响等结果，并对所得数据进行分析和讨论。
他们可以比较不同类型细胞之间的差异，并与理论知识进行关联，从而深入理解细胞生物学的多个方面。
5. 安全注意事项•在实验过程中务必佩戴安全眼镜和实验手套。
细胞生物学实验讲稿 (1)
视频1.2 普通光学显微镜的结构及使用技巧同学们好！普通光学显微镜通常指照明光为可见场光源的显微镜。
它是细胞生物学教学和研究中最常用的显微镜。
充分了解其结构组成并熟练掌握其使用方法与技巧，有助于快速、准确和清晰地看到观察目标。
因此，本视频我们来学习普通光学显微镜的结构与使用技巧。
特别之处在于采用了“画线辅助调焦法”。
实验材料及用品有：尼康E100显微镜；细胞标本片；擦镜纸；记号笔；显微镜擦镜液。
普通光学显微镜的外观结构组成从上至下分别为：目镜；镜筒；镜臂；物镜转换器；不同放大倍数的物镜；载玻片固定夹；载物台；载物台移动旋钮；聚光镜；光圈；聚光镜升降杆；粗调焦旋钮；细调焦旋钮；光源开关；亮度旋钮；光源；镜座。
其使用操作环节主要有：接通电源并打开电源开关——清洁显微镜——调试显微镜——画“调焦辅助线”——放置细胞标本片——预调焦——标本调焦——放大观察。
详细操作过程：1、插电源。
2、打开电源开关。
3、清洁显微镜光学部分：用擦镜纸蘸取显微镜擦镜液擦拭清洁目镜、物镜、聚光镜等光学部分。
4、调试显微镜：先将10倍物镜旋入光路；将光圈开至最大；双眼看向两侧目镜；旋转亮度旋钮使亮度适可；双手开合两只目镜，至两只眼睛同时看见一个圆形视野，即目镜间距与两只眼睛适应。
5、画“调焦辅助线”：取细胞标本片，放在实验台上；用记号笔在盖玻片一侧的载玻片上画一道线。
6、放置细胞标本片：将细胞标本片平放在载物台上的载玻片固定夹之间。
7、预调焦：将“调焦辅助线”移入光路；先向外旋转粗调焦旋钮使载物台上升至最高点，再向内缓慢旋转粗调焦旋钮使载物台下降，直至看到“调焦辅助线”；微旋细调焦旋钮，使记号线清晰。
8、标本调焦：将细胞标本移入光路，向内微转细调焦旋钮使观察目标清晰可见。
9、放大观察：将40×物镜旋入光路；调大亮度，开大光圈，下降聚光器，微转细调焦旋钮使观察目标清晰。
注意事项不能直接在高倍镜下用粗调焦旋钮调焦，以免碰坏物镜镜片或压碎盖玻片。
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实验十扫描电子显微镜技术
一．教学目标：通过对扫描电镜的结构和成像原理的讲解, 了解扫描电镜的工作原理和结构；通过对电镜演示，观察电镜下细胞的超微结构，了解电镜的操
作方法及其在细胞生物学领域中的应用情况；掌握扫描电子显微镜生物
标本的制备方法。
二．重点
三．难点：扫描电子显微镜生物标本的制备方法。
四．授课方式与教学方法：讲解原理、电镜演示,学生观察电镜下细胞表面的超微结构。
五．教学内容:
扫描电镜的结构与成像原理
电子枪发射出的电子束被电磁透镜汇聚成极细的电子探针，在样品表面进行扫描，电子束可激发样品表面放出二次电子，再往探测器收集，被闪烁器转变成光信号，光信号经光电倍增管和放大器转变为电压信号，电压信号又控制荧光屏上电子束的强度。
样品不同部位上产生二次电子多或少的差异直接反映在荧光屏上相应部位亮或暗的差异，从而得到放大的立体感很强的图像。
实验方法（扫描电子显微镜生物标本的制备方法，以植物叶片制样为例进行讲解）
1、准备样品台：选择适用的样品台，用抛光膏和丙酮依次擦净。
2、取样：植物组织或动物组织。
3、样品清洗：0.1mol/L磷酸缓冲液(PH7.2)。
4、样品固定：3%戊二醛固定1小时以上。
5、脱水：乙醇逐级梯度脱水30% 50% 70% 80% 90% 无水乙醇（3次），每级15～30min。
６、置换乙醇：醋酸异戊酯与乙醇1：1混合液，浸泡10～20min，除去混合液，用纯醋酸异戊酯浸泡10～20min，适当摇动。
７、样品干燥：样品放入二氧化碳临界点干燥仪中，更换液体二氧化碳3次以除去醋酸异戊酯，进行二氧化碳临界点进行干燥。
８、粘贴样品：取出样品，用导电胶把样品粘贴在样品台上。
９、样品的导电处理：粘贴好的样品台放入离子溅射仪中进行镀金膜。
10、样品台放入扫描电子显微镜中，进行观察，数码拍照。
电镜的操作演示与示教
1.电镜操作的演示
2.学生轮流观察电镜下的细胞超微结构。
3.电镜照片的展示
挑选一批具有代表性的动植物细胞不同超微结构的电镜照片，供同学们观察和学习，以了解各种亚细胞结构的超微结构特征。
实验结果
人头发丝瓜花粉
结果讨论
要求学生比较光镜与电镜工作原理的区别。
六．课堂小结：
让学生比较电镜样品制备与光镜样品处理的区别，比较电镜下图象与光镜下图象的区别。