2020高考生物浙江专用大二轮复习讲义：专题八生物技术实践第17讲Word版含答案

第17讲微生物的利用与酶的应用

[考纲要求] 1.大肠杆菌的培养和分离。2.分离以尿素为氮源的微生物。3.果汁中的果胶和果胶酶。4.α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测。

1．培养基与微生物培养

提醒(1)LB固体培养基添加琼脂等凝固剂，用于单菌落的分离。

(2)全营养LB培养基与尿素固体培养基：①全营养LB培养基(含琼脂糖)是基础培养基；②尿素固体培养基：选择培养基(如以尿素作为唯一氮源的尿素培养基)和鉴别培养基(如尿素培养基中加入酚红)。(3)加入尿素前的固体培养基用高压蒸汽灭菌法灭菌，尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤。

2．灭菌与消毒的比较

3．微生物分离的两种常用方法的比较

提醒划线分离操作的注意事项

(1)每次划线之前及最后一次划线之后都需要灼烧接种环。

(2)灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。

(4)划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。

4．大肠杆菌的培养与分离操作

(1)原理

①接种在LB液体培养基中使其快速分裂增殖。

②将待检测微生物样品通过划线分离法或涂布分离法接种在LB固体培养基上，样品中的每一个细胞都可以生长繁殖形成单个菌落。

(2)流程

5．分离以尿素为氮源的微生物

(1)实验原理

①筛选以尿素为氮源的微生物，使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养。

②有些细菌合成的脲酶能通过降解尿素作为其生长的氮源。

③细菌合成脲酶能将尿素分解成氨，使培养基的碱性增强，pH升高，从而使加入酚红指示剂的培养基变红。

(2)操作步骤

提醒分离以尿素为氮源的微生物中的易错点

(1)误以为分离以尿素为氮源的微生物时，配制的培养基中加入酚红作为酸碱指示剂，加入琼脂作为凝固剂。应加入琼脂糖作为凝固剂。

(2)误以为降解尿素的反应中反应物只有尿素。降解尿素的反应中反应物除了尿素外还有水。

(3)误以为尿素灭菌采用高压蒸汽灭菌法。尿素遇高温会分解，所以其灭菌方法为G6玻璃砂漏斗过滤除菌。

6．探究酶活性最适条件和用量的实验设计

(1)探究影响果胶酶活性因素实验的分析

①实验原则：遵循单一变量原则、对照原则，严格控制变量，尽量减少无关变量的影响。

②实验原理：果胶酶活性受温度、pH或酶抑制剂的影响，在最适温度或pH时，其活性最高，果肉的出汁率、果汁的澄清度都与果胶酶的活性大小呈正相关。

(2)三个实验的变量分析

提醒关于果胶的两点说明

(1)果胶的作用：粘合细胞。

(2)果胶的鉴别方法：果胶不溶于乙醇，滴加95%的乙醇出现沉淀。

7．固定化酶的制作原理、方法及作用

(1)固定化酶的制作原理、方法

(2)α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测

1．微生物利用的正误判断

(1)从有机废水中分离能分解有机物的微生物时，接种后的培养皿需要放在光照培养箱中培养(×) 提示异养微生物不需要光照。

(2)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(√)

(3)每一次划线后都要将接种环灼烧(√)

(4)除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端(×)

提示除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端。

(5)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源(√)

(6)可分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低(×)

提示氨使培养基的酸碱度升高。

(7)划线分离操作简便，但涂布分离更容易得到单菌落(√)

(8)高压蒸汽灭菌法是进行各种无菌操作都需要进行的灭菌方法(×)

(9)利用LB液体培养基和LB固体培养基分别对微生物进行分离培养和扩大培养(×)

(10)进入无菌室，首先打开超净台上的紫外灯和过滤风，然后在酒精灯的火焰旁制备固体平面培养基