谷氨酰内切酶和果糖氨基酸氧化酶的原核表达及在糖化血红蛋白检测中的应用
谷氨酰内切酶的催化特性研究与应用进展
异性 ， 水 解多 肽链 中谷 氨 酸 和 （ ） 能 或 天冬 氨 酸 残 基 的 Ｏ羧 基 形成 的肽 键 ¨ ， ｔ Ｊ主要 来 自于 金 黄色 葡 萄 球 菌Ｖ ８菌 株 ， 又 称 为 金 黄 色 葡 萄 球 菌 Ｖ 故 ８蛋 白酶
（ ｔ ｈ ｌ ｏｃｓａ ｒｕＶ ｒｔ ｓ ） Ｇｕ ８或 Ｇ ｕＣ Ｓａ ｙｏ ｃｕ ｕｅｓ ８ ｐｏｅ ｅ 、 ｌＶ ｐ ｃ ａ ｌ－
链 霉 菌 （ ｔｐｏ ｙｅ ｇｉ ｕ ） Ｓｒ ｔ ｃｓ ｒ ｅｓ 的谷 氨 酰 内切 酶 由 １８ ｅ ｍ ｓ ８
菌 Ｉ］链 霉 菌和 放线 菌 Ｊ葡 萄球 菌属 中 的表皮 葡 ４、 、 萄 球菌 和 瓦 氏 葡 萄 球 菌 以 及 金 黄 色 葡 萄 球 菌 标 准菌 株 Ａ Ｃ ２９ ３和 Ａ Ｃ １６０ Ｌ也 可 获得 该 Ｔ Ｃ５２ Ｔ Ｃ ２０ ８ ｊ 酶 。Ｏ ｏ等 对其 分 子 结 构 、 物 学 特 性 进 行 了探 ｎ 生 讨， 并将 其应 用 于蛋 白质 肽谱 图分析 、 白质组 学 研 蛋
球 菌 Ａ Ｃ １６ ０得 到的蛋 白酶 相 对分 子 质 量 为 ３ Ｔ Ｃ ２０ ４
×１ Ｓｅｄｅ ０ ；ｖｎｓｎ等 藓 样 芽孢 杆 菌分 离 纯 化 的 。从
蛋 白酶 相 对分子 质量 则 为 ２ ． ６ ５×１ ０。
目前 ， 同来 源谷 氨酰 内切 酶 的获得 方法 相 似 ， 不 即选择 和金 黄 色葡 萄球 菌 Ｖ ８蛋 白酶 相 同或 部 分 相 同的基 因 ， 利用 分 子克 隆及 原核 表达 技术 ， 到具 有 得
氨 基酸 序列 结构 的计 算 机 模 型 技 术 ， 对 各 种 来 源 可 谷 氨酰 内切 酶 的基本 结 构进 行研 究 。 通 过 对 克 隆基 因 的核 苷 酸序 列 分 析 ， 黄 色 葡 金 萄球 菌 Ｖ ８蛋 白酶 的 完 整 氨 基 酸序 列 已经 清 楚 ， 其
TG酶的特点原理及使用工艺方法
T G酶的特点原理及使用工艺方法Document serial number【LGGKGB-LGG98YT-LGGT8CB-LGUT-TG酶的概念及其相关法律法规1、TG酶的概念谷氨酰胺转氨酶，简称TG。
微生物谷氨酰胺转胺酶在自然界中广泛存在于动物、植物和微生物中，它是一种酰基转移酶一种催化蛋白质间（或内）酰基转移反应,从而导致蛋白质(或多肽) 之间发生共价交联的酶，这种交联对蛋白质的性质、胶凝能力、热稳定性和持水力等有显着影响，从而改善蛋白质的结构和功能性质，赋予食品蛋白质以特有的质构和口感。
因此谷氨酰胺转氨酶在肉制品、水产品、豆制品、面制品、米制品和乳制品等食品加工业中得到了广泛的应用。
TG酶是由微生物发酵产生，能催化蛋白质氨基酸中赖氨酸和谷氨酸之间形成共价键的一种酶制剂。
TG 催化蛋白分子形成交联图解图1 TG 催化作用模型2、TG的来源最早是从动物豚鼠中提取的，有专一性。
缺点：无法工业化。
现今谷氨酰胺转氨酶是由微生物发酵得来。
优点：容易工业化、批量生产、提取容易，专一性不是特别强。
3、TG酶作用时间、温度、pH1）酶制剂催化食品加工过程中的各种化学反应，特点是用量少、催化效率高、专一性强。
酶的作用受温度、时间影响很大，温度高时相对需要的反应时间就会大大缩短，温度低时，反应速率比较低，甚至还会不反应。
TG 需要的作用时间和温度是由催化食品的加工工艺、食品最终想要表现出来的物理特性的改善来决定的。
2）TG酶的反应速率：TG酶参与反应2小时以后粘合强度没有显着提高，趋于平缓，所以一般在食品加工工业中，TG酶反应时间一般会控制在2-5小时。
2）TG酶在食品那个反应时间与温度关系：TG酶在催化蛋白质反应过程中，温度与时间成负相关系；反应温度高，则反应时间短，反之，温度越低，时间越长。
TG酶反应温度范围：0-65℃，最适温度：50-55℃，TG酶反应pH 范围：4-9，最适pH：6-74）产品特性：a)ph定性好：TG酶在PH值在4—9之间范围内具有很高的活性，ph值在6—9之间效果最好。
UNG酶用途
UNG酶用途UNG酶用途因PCR是一种极敏感的扩增技术，易受污染的影响。
小量的外源DNA 污染可以与目的模板一块被扩增。
当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染，这称之为残余污染；从其他样品中纯化的DNA 或克隆的DNA 也会是污染源。
卫生部已经明确规定，凡是用于临床检验的PCR试剂，都应该有UNG酶技术，以防止污染。
控制污染的方法主要有两种：1 、在PCR 实验过程中使用良好的实验步骤和实验环境减少残余污染：使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入eppendorf 管内；为PCR 样品配制和扩增后分析设计隔离的区域；在准备新反应前更换手套；总是使用不含有模板的阴性对照检测污染；使用预先混合的反应成分，而不是每个反应的每个试剂单独加入。
? 使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶-N- 糖基化酶或UNG酶）移除DNA 中的尿嘧啶，在PCR 反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶，这种产物对UNG 敏感，所有可以在PCR 前对新配制的反应用UNG 处理以破坏残余产物，杜绝污染。
UNG酶特征? 克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。
? 50ul 体系中，加入0.1U 的UNG 酶，能够消除10 7 带有dUTP 的、大于6 个碱基的双链DNA 污染。
? 反应条件：37-50 ℃，2 分钟；反应buffer 20mM Tris-HCl(PH8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT 。
dNTP中加入了dUTP,那么扩增产物dna里就有了dUTP，就把把产物里的T 全变成了U，如果你的PCR产物是用来做克隆，或者是用来做PCR模板之类的，UNG酶一般不能用。
但是一般做real time PCR，或者PCR产物只需要跑胶鉴定一下，这种情况下完全不影响。
TG酶的作用和使用
谷氨酰胺转氨酶又称转谷氨酰胺酶（TG酶）是由331个氨基组成的分子量约38000的具有活性中心的单体蛋白质，其可催化蛋白质多肽发生分子内和分子间发生共价交联，从而改善蛋白质的结构和功能，对蛋白质的性质如：发泡性，乳化性，乳化稳定性，热稳定性、保水性和凝胶能力等效果显著，进而改善食品的风味、口感、质地和外观等。
传统肉类加工工艺通常加入大量的盐和磷酸，以提高其持水力、连贯性和质地。
近期，少盐少磷酸的食物被广泛推广，但其质地和物理性质都不尽如人意。
TG酶可以替代部分通常肉制品加工中添加的品质改良剂-磷酸盐，生产低盐肉制品。
可应用于水产加工品、火腿、香肠、面类、豆腐等等。
TG酶在40～45℃、pH6-7的条件下，只需添加0.1-0.3%的量，即可达到明显的效果。
一、什么是TG? TG是采用现代生物工程技术研制开发出的一类用于生产新型蛋白食品的食品添加剂。
TG的主要功能因子为谷氨酰胺转胺酶(EC 2.3.2.13，简称TG)，不同系列产品的主要区别在于作为辅料的蛋白质种类和数量不同。
TG产品的主要成分：主要成分TG TG 0.5% 1% 蛋白质 99.5% 99%二、TG具有哪些功能 ? TG的主要功能因子是谷氨酰胺转胺酶。
这种酶广泛存在于人体、高级动物、植物和微生物中，能够催化蛋白质分子之间或之内的交联、蛋白质和氨基酸之间的连接以及蛋白质分子内谷氨酰胺残基的水解。
通过这些反应，可改善各种蛋白质的功能性质，如营养价值、质地结构、口感和贮存期等。
三、TG在食品加工中有哪些用途 ?改善食品质构。
它可以通过催化蛋白质分子之间发生的交联，改善蛋白质的许多重要性能。
如用该酶生产重组肉时，它不仅可将碎肉粘结在一起，还可以将各种非肉蛋白交联到肉蛋白上，明显改善肉制品的口感、风味、组织结构和营养。
提高蛋白质的营养价值。
它可将某些人体必需氨基酸(如赖氨酸)共价交联到蛋白质上，以防止美拉德反应对氨基酸的破坏，从而提高蛋白质的营养价值。
TG酶
TG在肉制品中的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ用
1.TG用于碎肉重组
原料肉→绞肉→真空滚揉（加入TG）→模具成型→6℃-10℃反应8小时→重组肉→后处理
效果：TG可将碎肉粘合为整块肉
2.TG用于低温乳化香肠
原料肉→斩拌（加入TG）→真空灌肠→煮制→冷却→包装→成品
效果：TG可改善提高香肠的弹性、质地、口味及风味
效果：提高收率；提高保水性等。
TG在面制品中的应用
TG在面条中的应用
小麦粉中加入TG→和面→静置（面团熟化）→复合→压延→（或面带熟化）→切条→面条
效果：
1.提高面制品品质，改善面团面筋网络结构，增强面团弹性和粘弹性，增加面团气体保持能力，使面包、面条体积更大，内相组织更均匀，减少挂面断条率，增加面条的咬劲和耐煮性。
过程也具有保护作用，以0.5%的谷朊粉添加效果较好。
海藻酸钠浓度为5.0%、戊二醛浓度为1.0%、酶浓度为20%、缓冲液pH值为7.0、在35℃条件下固定化效果最好。固定化酶的pH值稳定性、热稳定性都比游离酶显著提高。
效果：提高产品得率；替代稳定剂使用，提高产品粘度；提高凝胶强度，强烈晃动不分散、改善持水性、减少乳清析出率，降低成本；改善质地、口感、风味，提高市场价值等。
2.TG在干酪中的应用
原料奶→灭菌→冷却（0℃-25℃）→加入TG和凝乳酶→保温15—180 min→升温至25-60℃→保温15-180min→凝固和切块搅拌→加压成型→腌渍和成熟
2.改善面制品的口感，延缓面包、馒头的老化，使面条更滑爽、更劲道。
3.改善面制品的外观。
对于面条和面皮（饺子、馄饨），可使外观更光亮、整齐，并赋予透明的质感；在油炸面制品中，可减少气泡的产生，表面较光滑；对发酵面制品，延缓表面水分蒸发，使面包、馒头在较长时间内保持较好的湿润性，不易掉渣、掉屑。
【大号都在转】谷氨酰胺转氨酶（TG酶）及其在食品中的应用
【大号都在转】谷氨酰胺转氨酶（TG酶）及其在食品中的应用谷氨酰胺转胺酶又称转谷氨酰胺酶（简称TG），是一种催化酰基转移反应的转移酶，可催化其中的蛋白质分子之间发生交联，将蛋白质分子粘合起来。
其作用于各种底物蛋白质，如酪蛋白、大豆蛋白、谷蛋白、肌球蛋白等，通过交联反应，改善蛋白质的凝胶性、乳化性等功能特性。
可用于牛肉、猪肉、鸡肉等肉制品的粘合，改善其口感、风味、组织结构和营养，提高产品的附加值。
一．TG酶的基本功能与特性1谷氨酰胺转胺酶（TG）是一种能催化酰基转移的酶，它可使蛋白质分子间和分子内发生交联反应，使蛋白质分子量变大，形成强有力的凝胶，从而改变各种蛋白产品的弹性、保水性、黏结性等特性，并通过引入赖氨酸而提高蛋白质的营养效价。
其用于肉制品加工中，可改善各类食品的物性和粘合力，综合利用各种碎肉，提高产品的附加值。
2 TG酶作用特点和最适作用条件①良好的pH稳定性。
TG的最适作用pH为6.0，但在pH 5.0～8.0的范围内该酶都具有较高的活性。
②热稳定性强。
TG的最适温度在50℃左右，在45℃-55℃范围内都有较高的活性。
特别是在蛋白质食品体系中，该酶的热稳定性会显著提高，这一特性使其在一般的食品加工过程中，酶活不会迅速失活。
③TG在催化蛋白质反应过程中，温度（在保持酶活温度内）与时间成负相关关系：反应温度高，反应时间短；反之，温度越低时间越长。
不同类型食品的理化特性，决定反应过程中温度和时间的关系。
酶反应时间及温度对比图：温度4℃15℃20℃30℃40℃时间（h）过夜（约12h） 5 3.5 2 1二．TG酶在肉制品中的作用1肌肉的组成肉食中使用的部分称为肌肉，肌肉基本上分为条纹肌和平滑肌两类。
骨骼肌是条纹肌的一部分，它连接在骨骼上，能作为食用。
骨骼肌是由许多纤维束构成，而肌肉纤维又是由大量的肌原纤维组成。
肌原纤维的细微结构又分为肌动蛋白，肌原蛋白（即肌球蛋白）和肌钙蛋白。
2加热时蛋白质凝固加盐混拌之后，肌原纤维蛋白变成乳化状肉（如香肠碎肉），将乳化状肉加热，蛋白质即被胶体化。
化学与分子生物学模拟题库及答案
化学与分子生物学模拟题库及答案1、蛋白质变性后的下面哪个变化是不正确的?()A、蛋白的空间构象改变B、分子量不变C、次级键断裂D、一级结构发生改变答案：D:蛋白质变性是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象发生改变,从而导致其理化性质改变和生物活性丧失的现象。
但其一级结构不发生改变。
2、对哺乳类动物DNA复制的叙述,错误的是()。
A、RNA引物较小B、冈崎片段较小C、DNA聚合酶δ和α参与D、仅有一个复制起始点E、片段连接时由ATP供给能量答案：D:哺乳类动物(真核生物)DNA复制的起始点是多个。
3、细胞质膜上哪些脂类在信号转导中也起重要直接作用?()A、磷脂B、胆固醇C、胆固醇酯D、甘油一酯E、甘油三酯答案：A:细胞膜上的脂类可衍生出胞内第二信使,如磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PLC)可将磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)分解成为DAG和IP3。
4、关于脂蛋白的功能,下列哪一项描述是错误的?()A、载脂蛋白能稳定脂蛋白结构,促进其运输与代谢B、apoCⅡ能激活LPLC、apoB100能识别细胞膜上LDL受体D、apoE能被心肌细胞乳糜微粒识别E、apoAⅠ能激活LCAT活性答案：D:心肌细胞无识别乳糜微粒apoE的受体,apoE是被肝细胞膜受体(称LDL受体相关蛋白,LRP)识别结合的。
5、蛋白质生物合成中每生成一个肽键消耗的高能磷酸键数为()。
A、1个B、2个C、3个D、4个E、5个答案：D:在肽链延长阶段中,每生成一个肽键需从2分子GTP水解获能(进位和移位各l个)。
此外,氨基酸活化形成氨基酰-tRNA要消耗2个高能磷酸键,因此每生成l个肽键需消耗4个高能磷酸键。
6、直接针对目的DNA设计的筛选方法是()。
A、抗药标志筛选B、α互补筛选C、分子杂交D、免疫化学E、酶联免疫答案：C:AB两项,抗药标志筛选和α互补筛选是用于鉴定筛选重组体的方法。
DE 两项,免疫化学方法和酶联免疫方法的基本原理是基于抗原抗体反应,属于非直接筛选方法。
α酮戊二酸转氨基
α酮戊二酸转氨基α-酮戊二酸转氨酶（Alpha-ketoglutarate transaminase），简称α-KG转氨酶，又称谷氨酰酶（glutamate dehydrogenase），是一种重要的酶类，在多种生物体内起到关键的生物学功能。
在本文中，我们将从α-酮戊二酸转氨酶的结构、功能、调控机制等方面进行综合的阐述。
一、结构特点α-酮戊二酸转氨酶是一种酶类蛋白质，其基本结构包括酶的活性中心和辅助结构。
活性中心部分包括积酶共同酶活性中心和典型的叶酸（tetrahydrofolate, THF）共同酶活性中心。
积酶共同酶活性中心由共同酶和互补酶组成，互补酶可用于酶的辨识性质和催化性质。
典型的叶酸共同酶活性中心则对于酶的遮断需要具有特异性，其结构要求严格，对酶机理有重要影响。
而辅助结构则包括非活性质，即通常在酶基因中形成的非活性质，可起到辅助酶的功能。
二、功能调控1. 催化反应α-酮戊二酸转氨酶可催化α-酮戊二酸转变为谷氨酸，同时与谷氨酸的转化为α-酮戊二酸相互调控。
α-酮戊二酸转氨酶在能量代谢中扮演着关键的角色，参与琥珀酸途径和三羧酸循环中谷氨酸的代谢，并与谷氨酰胺、谷氨酸途径中的互补作用发挥一系列的生物学功能。
2. 能量代谢调控α-酮戊二酸转氨酶参与能量代谢调控的机理非常复杂，其催化过程受许多内外因素的调节。
在能量供应充足的情况下，由于氧化环节电子传递衰竭，无法继续进行氧化以供能。
此时，转氨酶活化，以积酶形式活化，进一步使氧化环节供能继续进行。
反之在能量供应不足的情况下，则积酶保持抑制状态，不活化转氨酶。
这样，α-酮戊二酸转氨酶可作为能量代谢的调控因子，使细胞的正常能量代谢得以进行。
3. 反应物浓度调控α-酮戊二酸转氨酶受到反应物浓度的调控也是非常重要的。
α-酮戊二酸的浓度增加，谷氨酸合成增加，反之则减少。
可见，α-酮戊二酸转氨酶对反应物浓度的敏感性非常高。
4. pH值和温度调控α-酮戊二酸转氨酶对pH值和温度非常敏感。
谷氨酰胺转胺酶(TG酶)的催化机理及对鱼糜凝胶特性的影响
谷氨酰胺转胺酶（TG酶）的催化机理及对鱼糜凝胶特性的影响摘要：TGase由于可以催化蛋白质分子之间的交联，而被广泛应用于鱼糜凝胶的改善和重组肉等食品中。
本文总结了TGase的催化剂机理是催化酰基转移反应、交联反应、脱氨基化反应以及分解谷氨酸胺的反应。
探讨TGase凝胶化温度、作用时间以及添加量对鱼糜凝胶特性和品质产生显著的影响，并对TGase的未发展方向提出展望。
关键词：谷氨酰胺转胺酶转酰基反应鱼糜凝胶 TGase添加量 TGase作用温度与时间谷氨酰胺转胺酶(Transglutaminase，E.C.2.3.2.13)简称TGase，是一种具有改善蛋白质组织，风味及货架期等功能性质的生物酶。
根据来源不同，一般把TGase 分为组织谷氨酰胺转氨酶(TissueTransglutaminase，tTG)和微生物谷氨酰胺转氨酶(Microbial Transglutaminase，MTG)。
1957年Clark等人[1]为了描述在豚鼠肝脏中观察到的转酰胺基作用，由此提出了转谷氨酰胺酶一词。
早期的研究主要集中在动物组织中的谷氨酰胺转胺酶，而在1989年Audo等从轮枝酶链菌中分离得到TGase之后，TG酶在大规模发酵生产和食品工业的应用研究迅速发展起来[2]。
TG酶一种球状单体蛋白、亲水性高、对热稳定，活性一般为22.6U/mg，等电点为8.9，分子量为38KDa，可以催化酰基转移反应。
通过催化蛋白质分子内或分子间发生交联、蛋白质和氨基酸之间连接、以及蛋白质分子内谷氨酰胺酰胺基的水解，使蛋白质形成凝胶，改善蛋白制品的弹性、粘合性、保水性，并通过引入赖氨酸而提高了蛋白质的营养效价。
大多数转谷氨酰胺酶需要Ca2+参与，但微生物TGase不需要Ca2+激活[2]。
通过快速原子轰击质子技术及对多肽链片段的降解, 对微生物菌株中TGase 的结构进行分析, 发现该酶的一级结构由331个氨基酸残基组成，二级结构中α-螺旋占21%，β-折叠占31%[3]。
ogt分子量
ogt分子量OGT分子量（O-GlcNAc Transferase）是一种酶，它在细胞内起着重要的调控作用。
本文将介绍OGT分子量的相关信息，包括其功能和调控机制。
OGT分子量是由OGT基因编码的酶，在细胞内起着关键的作用。
OGT酶通过将N-乙酰葡萄糖胺（N-acetylglucosamine，简称GlcNAc）转移至特定蛋白质上的丝氨酸或苏氨酸残基，从而调控这些蛋白质的功能和稳定性。
OGT分子量与许多重要的细胞过程密切相关，包括细胞周期调控、转录调控、信号转导和细胞凋亡等。
OGT分子量的功能主要通过两种方式实现。
首先，它通过糖基化修饰改变蛋白质的活性和亲和性。
例如，在转录调控中，OGT酶通过糖基化修饰转录因子，影响其结合DNA的能力，从而调控基因的表达。
其次，OGT分子量还能通过改变蛋白质的稳定性来调控细胞过程。
糖基化修饰可以影响蛋白质的折叠状态和降解速度，从而影响蛋白质的寿命。
OGT分子量的活性和稳定性受到多种因素的调控。
首先，OGT基因的表达受到转录调控的影响。
许多转录因子和信号通路能够调控OGT基因的表达水平，从而影响OGT酶的活性。
其次，OGT分子量的底物特异性也影响其功能。
不同的蛋白质可能具有不同的糖基化位点和亲和性，从而导致OGT酶对不同蛋白质的作用方式不同。
此外，OGT酶的翻译后修饰也可以调控其活性和稳定性。
磷酸化、乙酰化等修饰可以影响OGT酶的结构和功能。
除了上述调控机制外，最近的研究还发现OGT分子量的异常与多种疾病的发生和发展密切相关。
例如，OGT分子量的异常表达与糖尿病、癌症和神经系统疾病等疾病的发生有关。
这些研究结果表明，通过调控OGT分子量的活性和稳定性，有可能发展新的治疗策略来预防和治疗这些疾病。
OGT分子量是一种重要的酶，在细胞内起着关键的调控作用。
它通过糖基化修饰改变蛋白质的活性和稳定性，从而调控细胞过程。
OGT分子量的活性和稳定性受到多种因素的调控，包括基因表达、底物特异性和翻译后修饰等。
第十章 氨基酸及核苷酸的代谢
具有很强的专一性， 有特异的识别位点，通常具有 二重旋转对称性的回文序列
常用的DNA限制性内切酶的专一性
酶
辨认的序列和切口
说明
Alu I Bam H I Bgl I
‥ ‥A G C T ‥‥ ‥ ‥T C G A ‥ ‥
‥ ‥G G A T C C ‥‥ ‥ ‥C C T A G G ‥‥
‥ ‥A G A T C T ‥‥ ‥ ‥T C T A G A ‥‥
四核苷酸，平端切口 六核苷酸，粘端切口 六核苷酸，粘端切口
Eco R I Hind Ⅲ
‥ ‥G A A T T C ‥‥ ‥ ‥C T T A A G ‥‥
5
精氨酸
延胡索酸
4
精氨琥珀酸
谷氨酸
谷氨酸
2ATP+CO2+NH3+H2O
鸟氨酸 1 2ADP+Pi
氨甲酰磷酸 线
2
粒
体
瓜氨酸
AMP+PPi
3
ATP
瓜氨酸
基质
天冬氨酸
-酮戊二酸
草酰乙酸
谷氨酸
氨基酸
（二）α-酮酸的代谢转变
氨基酸碳骨架
葡萄糖
磷酸烯醇 式丙酮酸
丙氨酸 苏氨酸 甘氨酸 丝氨酸 半胱氨酸
丙酮酸
一、 核酸的酶促降解
核酸酶
核苷酸酶 核苷酸磷酸化酶
核酸
核苷酸
核苷 磷酸
碱基+戊糖
一、核 酸 酶
1、核酸酶的分类
（1）根据对底物的 专一性分为
光呼吸途径及其功能
/0G
植物学通报
G" 卷
型的 !"# 时， 启动交替途径以减少氨的损失。 （ /00!） 发现抑制甘氨酸脱羧酶 （ 123） 以 ! $ " $ " 乙醛酸代谢的交替途径 %&’()*+,-*. 等 后， 会诱导乙醛酸代谢的旁路反应， 即乙醛酸可以被氧化脱羧产生甲酸， 甲酸由 /"4甲酰四 氢叶酸合成酶 （ 5675 合成酶） 催化形成 /"4甲酰四氢叶酸， 然后经 8， /"4次甲基四氢叶酸环 的作用下转换成 8， 随后在 8， 水解酶 （ 393） /"4次甲基四氢叶酸， /"4亚甲基四氢叶酸脱氢 的作用 下 生 成 8， 最 后 在 :7;6 的 作 用 下 转 化 成 丝 氨 酸 酶 （279） /"4亚 甲 基 四 氢 叶 酸， 。 （<=>+-, !" #$ ， /000） （/0A!） 与 :B((*+.-CC* 和 D&+*E （/0A/） 认为， 乙醛酸在缺乏丝氨酸4乙醛酸转氨 ;?++’@ 等 或 :7;6 的突变体中起很重要的作用。在 %&’$!(# ’&#)*$*+ 中， 酶 （ :1<6） 123 的活性很低， 光呼吸的乙醛酸脱羧途径是光呼吸 3FG 释放的主要方式， 这条交替途径的主要优点是不 形成 H7I 。由于野生植物中的 H7I 可以被叶绿体中的谷氨酰胺有效地再同化， 而在谷氨 酰胺合成酶活性降低的大麦突变体中， 不能同化氨， 因此， 交替途径的启动可能是降低光 呼吸中 H7I 损失的机制 （7’?=C*+ !" #$ ， 。 /00J） 尽管如此， 交替途径仍具有其弊端： 其一， 在交替途径中， 胞质中的 5675 合成酶需要 使胞质中的 <6K 和 H<2 （ K） <6K， 279 反应需要 H<2K7， 7 的库减少。而正常的光呼吸途 径的线粒体中的 123 可以提供 <6K， 123 反应中形成的 H<27 可以进入到过氧化物体 中， 用于羟基丙酮酸的还原反应； 其二， 交替途径只有在乙醛酸和 7G FG 都分别没有被过氧 化物体中的转氨酶或过氧化氢酶迅速转化的条件下才能发生。然而， 大量的乙醛酸和 乙醛酸可以通过降低 +?)-=LB 活化状态而抑制光合作用。可 7G FG 的积累和释放是有害的， 以看出高等植物中正常的光呼吸途径， 与交替途径相比是进化的结果 （ <=>+-, !" #$ ， ， /000） 但交替途径在不能通过 123 M :7;6 途径将甘氨酸转化为丝氨酸的突变体中的作用显得 非常重要。 !#$ 丝氨酸向 $%磷酸甘油酸的转化 丝氨酸回到过氧化物体内， 在 在线粒体中， 甘氨酸通过 1234:7;6 途径生成丝氨酸， 羟基丙酮酸依靠 H<2K 羟基丙酮酸还原酶的作用转化 :1<6 的作用下转化成羟基丙酮酸， 成甘油酸， 甘油酸回到叶绿体， 在甘油酸激酶的作用下， 磷酸化生成 I4磷酸甘油酸 （ <=>+-, 。羟基丙酮酸还原酶是光呼吸途径中的一个关键酶， 由 ,-& 基因编码， 无论在 !" #$ ， /000） 强光和弱光下， 高浓度 3FG 都会抑制 ,-& 编码的 (NH< 积累， 但在强光下其抑制作用更明 显， 这表明， 受光调节的 ,-& 基因表达受环境 3FG 浓度的影响 （ O*+>BE- ’E, O*LP*+， 。 /00J） 丝氨酸向甘油酸转变过程中， 羟基丙酮酸的还原需要 H<27， 但胞质内的还原力， 是通过 而不是以 H<27 的形式直接进入。这是由于基质 苹果酸4草酰乙酸穿梭输入过氧化物体， 蛋白的高度 集 中 而 形 成 扩 散 限 制， 而且完整叶片叶肉细胞胞质内的苹果酸浓度约为 而分子量却比 H<27 低 G8 倍， 因此苹果酸通过过氧化物体基质的速度 H<27 的 / """ 倍， 另外， 叶片过氧化物体的膜孔蛋白的渗透性更有利于苹果酸和草 比 H<27 快约 I" """ 倍， 酰乙酸穿过， 而不利于 H<27 和 H<2 穿过， 必须依赖于苹果酸4草酰乙酸穿梭， 除了线粒 叶绿体也能够通过苹果酸4草酰乙酸穿梭输出光合作 体能通过 123 反应产生还原力外， 万方数据 用中产生的还原力 （<&*Q’>- !" #$ ， 。 /00A）
GGT酶法合成γ-谷氨酰半胱氨酸
GGT酶法合成γ-谷氨酰半胱氨酸韦光绪;唐毅;殷志敏【摘要】Gamma-glutamyl transpeptidase(GGT),which was cloned from the genome of E.coli K－12,was used as a catalyst to synthesis γ-glutamylcystine,with L-glutamine and cystine as the substrate. After the reduction reaction and γ-glutamylcysteine was synthesized. We studied the effects of reaction time,initial enzyme concentration,feed mode of L-glutamine on the enzymatic process and find that the maximal production of GGC would be 6.13 g/L and the conver-sion rate of L-glutamine would be 24.5 %,when the initial reaction conditions of 0.1 mol/L of L-glutamine,0.2 mol/L of cystine and 0.024 U/mL of GGT,and the reaction is carried out at pH 10.0 and 40 ℃ for 12 h.%以大肠杆菌K－12基因组中克隆表达的γ－谷氨酰转肽酶作为催化剂,L－谷氨酰胺和胱氨酸为底物合成γ－谷氨酰胱氨酸,经还原生成γ－谷氨酰半胱氨酸.考察反应时间、酶浓度、补料方式等可能对酶促反应过程产生影响的因素,在L－谷氨酰胺0.1 mol/L、胱氨酸0.2 mol/L、酶浓度0.024 U/mL及pH为10.0的条件下,40℃反应12 h,γ－谷氨酰半胱氨酸的最大浓度为6.13 g/L,L－谷氨酰胺的最大转化率为24.5 %.【期刊名称】《南京师大学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(041)002【总页数】6页(P78-82,88)【关键词】γ－谷氨酰转肽酶;γ－谷氨酰半胱氨酸;胱氨酸;酶法合成【作者】韦光绪;唐毅;殷志敏【作者单位】南京师范大学生命科学学院,生物化学与生物制品研究所,江苏省分子与医学生物技术重点实验室,江苏南京210023;南京师范大学生命科学学院,生物化学与生物制品研究所,江苏省分子与医学生物技术重点实验室,江苏南京210023;南京师范大学生命科学学院,生物化学与生物制品研究所,江苏省分子与医学生物技术重点实验室,江苏南京210023【正文语种】中文【中图分类】Q555.3还原型谷胱甘肽(GSH)由L-谷氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸组成,是最具生物学价值的小分子肽.作为组织中主要的非蛋白巯基化合物,GSH能够清除组织中的氧自由基,稳定含巯基的酶及降低细胞因子的氧化损伤[1].因此,谷胱甘肽的代谢和调节对细胞内的氧化还原极为重要[2].γ-谷氨酰半胱氨酸(GGC)作为体内合成谷胱甘肽(GSH)的中间产物,同时含有γ-谷氨酰基和巯基,其功能与GSH类似.研究表明GSH无法有效地进入细胞,且半胱氨酸在细胞外极易氧化成难溶的、具有毒性的胱氨酸,与直接提供GSH和半胱氨酸前药相比,GGC能够进入细胞利用胞内的谷胱甘肽合成酶直接合成GSH,对于提高细胞内GSH水平更为有效.因此,GGC在医药、食品及化妆品等领域具有广泛的应用前景[3].近年来GGC的生产方式主要为酵母菌发酵法、化学合成法和CCT催化合成法3种. 酵母发酵法一般以糖类为原料,发酵周期长、产物浓度低、提取困难[4-5];化学合成法以谷氨酸和半胱氨酸为原料经过侧链基团保护、缩合接肽、脱保护进行合成,步骤繁琐,耗能大且安全性低[6];由于GGT具有位点专一性强、不需要辅酶、不消耗ATP等特点,已被广泛应用于谷氨酰基化产品的生产. 2006年Wallace Bridge 等以谷氨酸乙酯和巯基乙醇还原的半胱氨酸为底物,利用GGT酶催化合成GGC,收率可以达到30 %左右,已基本实现了工业化[7].2008年吴明刚等报道了以谷氨酰胺和S-苄基半胱氨酸为底物,利用GGT酶催化合成S-苄基-γ-谷氨酰半胱氨酸(S-Bzl-GGC),再脱除苄基制备产物GGC,收率可以达到29 %左右[8].本工作利用在大肠杆菌Rosetta(DE3)中高效表达的GGT酶以L-谷氨酰胺和胱氨酸为底物催化反应,再通过二硫苏糖醇还原,两步反应得到终产物GGC,简化了GGC 合成的工艺流程.1 材料和方法1.1 主要材料大肠杆菌 E.coli K-12和Rosetta(DE3)由本实验室自行筛选和保藏;GGC标品,Sigma;Gln,实验室自制;胱氨酸,色谱纯,上海生工;二硫苏糖醇,上海生工;基因工程试剂盒,Axgeny;γ-GT检测试剂盒,南京建成;乙腈、甲醇等均为国产分析纯.1.2 GGT的重组表达在NCBI中查询大肠杆菌K-12的γ-谷氨酰转肽酶基因序列,根据目的基因序列设计引物并引入酶切位点:Kpn I 上游引物:GGGGTACCATGATAAAACCGACG;Xho I 下游引物:CCCTCGAGTTAGTACCCCGCCG.从大肠杆菌中克隆获得γ-谷氨酰转肽酶基因ggt,构建重组表达质粒pET32a(+)-ggt,并转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)中,以1∶100比例接种于1 L的LB培养基中,37 ℃、220 rpm发酵2 h～3 h,在菌体浓度OD 600大约为0.6～0.8左右时加入复配诱导剂,26 ℃、220 r/min发酵8 h诱导蛋白表达,超声破碎细胞得到粗酶液放入-80 ℃保存.1.3 重组GGT酶活力的测定方法GGT催化谷氨酰对硝基苯胺(γ-GpNA)中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸,生成对硝基苯胺,在405 nm有特征光吸收.1个活力单位(U)定义为每分钟催化γ-GpNA 水解生成1 μmol 对硝基苯胺所需的酶量,因此通过紫外分光光度计测定405 nm 光吸收增加速率来计算γ-GT酶活性[9].1.4 目的产物GGC浓度检测方法(1)产物的HPLC分析方法色谱柱为Agilent SB-C18,5 μm,4.6×250 mm;流动相为甲醇/水(含0.1%乙酸)=5/95;流速为0.6 mL/min;检测器为紫外检测器;检测波长为220 nm;进样量20 μL;柱温25 ℃.(2)待测样品的处理方法使用移液器吸100 μL发酵液置于1.5 mL离心管中,100 ℃加热3 min终止反应,加入300 μL 0.5 mol/L的二硫苏糖醇(DTT)摇匀,室温静置1 h～2 h.待充分还原后使用0.2 μm滤膜过滤,进行HPLC检测.1.5 重组GGT酶学性质的研究1.5.1 GGT最适反应温度配制底物溶液浓度均为0.1 mol/L,GGT酶浓度均为0.024 U/mL,分别在30 ℃、35 ℃、40 ℃、45 ℃、50 ℃、55 ℃下反应30 min,通过HPLC检测产物浓度,以测得的最大反应速率为100 %,推算出各温度下的相对酶活.1.5.2 GGT的热稳定性将GGT酶液分别在20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃和60 ℃水浴保温,每隔1h取出一组样品,进行酶活测定,以初始酶活为100 %.以相对酶活力为纵坐标,温度为横坐标.1.5.3 GGT最适反应pH值配制底物溶液浓度均为0.1 mol/L,GGT酶浓度均为0.024 U/mL,分别在pH为7.0、8.0、9.0、10.0、11.0下反应30 min,通过HPLC检测产物浓度,以测得的最大反应速率为100 %,推算出各pH下的相对酶活.1.6 GGT催化合成GGC的反应条件优化及表征1.6.1 反应时间对GGT催化合成GGC反应的影响采用100 mL的反应体系,将Gln和Cys-Cys溶解于水中,用氢氧化钠调pH至10.0,Gln浓度为 0.1 mol/L,Cys-Cys浓度为0.2 mol/L,加入GGT酶液使反应体系中酶的终浓度为0.024 U/mL,40 ℃,220 r/min 温控摇床反应,定时取样,通过HPLC 对产物浓度进行分析.1.6.2 GGT酶浓度对GGT催化合成GGC反应的影响采用100 mL的反应体系,将Gln和Cys-Cys溶解于水中,用氢氧化钠调pH 至10.0,Gln浓度为0.1 mol/L,Cys-Cys浓度为0.2 mol/L,加入酶液使反应体系中酶的终浓度分别为0.016 U/mL、0.024 U/mL、0.032 U/mL,40 ℃,220 r/min温控摇床反应,定时取样,通过HPLC对产物浓度进行分析.1.6.3 不同加料方式对GGT催化合成GGC反应的影响采用100 mL的反应体系,将Cys-Cys溶解于水中,用氢氧化钠调pH 至10.0,Cys-Cys浓度固定为 0.2 mol/L,加入酶液使反应体系中酶的终浓度为0.024 U/mL,配制1mol/L的Gln标准溶液,底物Gln的加入分别采用一次性加料、分两次加料、分4次加料、流加4种不同投料方式.2 结果与讨论2.1 GGT的克隆与表达2.1.1 ggt基因的克隆A.M:DNA分子量标准;1:ggt目的片段.B.重组质粒pET32a(+)-ggt图谱图1 ggt基因的克隆Fig.1 Cloning of ggt from E.coli K-12如图1A所示,从大肠杆菌K-12中克隆获得γ-谷氨酰转肽酶基因ggt全长约1 700 bp,引入Kpn I和Xho I酶切位点,以pET32a(+)为载体构建重组质粒pET32a(+)-ggt(图1-B).根据南京思普金生物公司提供的pET32a(+)的MCS 上下游序列,利用T7 promotor primer 和T7 teminator primer 作为测序引物,进行测序. 经南京思普金生物公司整菌测序结果表明,克隆的目的基因片段全长1 743 bp,与在NCBI 上BLAST 检索的E.coli K-12 ggt 基因编码序列同源性达100 %. 因此,可以确定ggt基因已经成功克隆到pET32a(+)载体中,且方向正确.2.1.2 GGT的诱导表达将重组菌以1%的接种量接入1 L的LB培养基中,设置摇床转速220 rpm,温度37 ℃,根据重组工程菌生长曲线(图2A)可以看出,4 h～10 h期间重组菌进入对数生长期,菌体进行快速繁殖,10 h后重组菌生长进入平台期,菌体量基本保持不变,因此在之后培养重组菌的时间控制在10 h 左右较为合适.菌株复配诱导8 h 后,收集超声波破壁,通过SDS-PAGE检测(图2B),重组GGT的分子量约为59 kDa,大亚基由365个氨基酸残基组成,分子量约为39 kDa,小亚基由190个氨基酸残基组成,分子量约为20 kDa. 利用全自动化学发光图像分析系统对条带灰度扫描分析,GGT蛋白表达量大约在37 %左右. 过γ-GT活性检测试剂盒检测重组GGT粗酶液酶活大约为0.8 U/mL,约是出发菌种E.coli K-12自身GGT酶活的14倍.A.重组工程菌生长曲线.B.M:蛋白分子量标准;1,2:空载E.coli/pET32a(+)全菌蛋白;3,4:诱导后E.coli/pET32a(+)-ggt全菌蛋白;5,6:诱导后的E.coli/pET32a(+)-ggt上清蛋白图2 GGT的诱导表达Fig.2 Inducing expression of GGT2.2 重组GGT酶学性质的研究2.2.1 GGT最适反应pH将重组GGT在不同pH条件下与底物反应后,测定各条件下的活力. 不同pH对重组GGT酶活力的影响如图3所示,重组GGT最适pH在10.0左右.2.2.2 GGT最适反应温度将重组GGT在不同温度条件下与底物反应后,测定各条件下的活力.从图4可知,在实验范围内,GGT酶催化反应速率随温度的变化均呈先上升后下降的趋势,最适反应温度为45 ℃左右.图3 pH对GGT酶活力的影响Fig.3 Effect of pH on recombinant GGT activity 图4 温度对GGT酶活力的影响Fig.4 Effect of temperature on recombinant GGT activity图5 重组GGT的热稳定性Fig.5 Thermal stability of recombinant GGT2.2.3 GGT热稳定性分析如图5所示,通过对重组GGT酶的热稳定性分析发现,当温度达到45 ℃以上时酶活下降迅速,而40 ℃时酶活相对稳定.因此,在之后的转肽实验中选择40 ℃作为反应温度.2.3 GGT催化合成GGC反应条件优化及产物表征2.3.1 反应时间的影响由图6可以看出,随着反应的进行产物浓度逐渐增加,当反应进行到12 h左右时,GGC浓度达到最大,约为6.13 g左右,底物转化率为24.5 %.随着反应时间的延长,产物浓度逐渐降低,这是由于反应体系中除了底物Gln外,产物谷氨酰胱氨酸也能作为谷氨酰供体,与GGT酶形成复合物.随后在酶的脱酰基化过程中,受体(Cys-Cys)分子的亲核攻击可释放酶分子,生成产物谷氨酰胱氨酸(转肽反应);同时水分子亦可以作为亲核试剂参与反应,生成谷氨酸,而谷氨酸不能作为谷氨酰基化反应的供体,因此该过程是不可逆的(水解反应)[10-11].在反应前期,Gln的浓度较大,GGT更倾向利用Gln作为供体,转肽反应占优势;随着反应的继续进行,Gln消耗以及产物的积累,GGT开始利用谷氨酰胱氨酸作为供体,产物水解速率不断上升.当转肽速率和水解速率相等时,产物积累速率为零,此时体系中产物浓度达到最大值,随着反应的进行,水解反应占据优势,产物浓度不断降低.图6 反应时间对GGT催化合成GGC反应的影响Fig.6 Effect of reaction time on GGC synthesis图7 酶浓度对GGT催化合成GGC反应的影响Fig.7 Effect of GGT concentration on GGC synthesis2.3.2 酶浓度的影响酶浓度对GGC合成的影响如图7所示,尽管3种体系中酶浓度不同,但产物最大浓度基本一致,均在6 g/L左右,只是产物积累速率不同.因此可以认为酶浓度变化可以改变产物积累速率,在酶浓度高的体系中转肽速率和水解速率同时也高,但两者反应的平衡点并未改变.但是酶浓度低的体系中反应平衡期较长,反应易于控制.A.一次性投料;B.分两次投料;C.分4次投料;D.流加式投料图8 投料方式对GGT催化合成GGC反应的影响Fig.8 Effect of Gln replenishment on GGC synthesis 2.3.3 投料方式的影响由图7可以看出,分批投料可以有效提高目标产物积累浓度,分两次投料(B)和分4次投料(C)的产物最大浓度比一次性投料(A)分别提高了0.52 g/L和1.21 g/L,效果比较明显.分析认为多次分批投料可以保证Gln浓度处于适当的水平,不仅可以保证谷氨酰基的供给有效降低水解速率,而且可以降低供体自转肽强度,有利于产物的积累.一次性投料(A)反应前期体系中Gln浓度过高,Gln会作为亲和试剂参与反应,生成Glu聚合物(自转肽反应),不利于产物积累.而采用流加式投料(D)并没有显著效果,可能是因为在反应前期酶活性较好,而Gln供给不足不利于产物积累.因此,可以得知想要实现产物的高收率必须要保持适当的Gln浓度,即同时降低自转反应肽速率和水解反应速率.2.3.4 产物GGC的HPLC-MS分析取0.1 mL反应液,99 ℃加热3 min中止反应,降低pH除去多余的胱氨酸,再加入0.2 mL二硫苏糖醇(0.5 mol/L),37 ℃水浴还原. 0.2 μm滤膜过滤,利用HPLC-MS 对发酵所得产物进行了鉴定,图9为GGC粗分离的色谱图,保留时间在4.9 min左右,纯度为67 %,与购自Sigma公司的GGC标准品对比可以初步认为产物为GGC. 图10为产物的质谱图,GGC的相对分子质量为250,从图中可以看到m/s 251.0为GGC的准分离子[M+H]+. 因此,可以确证所得产品是GGC.图9 产物GGC的HPLC分析Fig.9 HPLC analysis of GGC product图10 产物GGC的MS分析Fig.10 MS analysis of GGC product3 结论本实验以E·coli K-12克隆得到的ggt基因构建工程菌,诱导表达得到γ-谷氨酰转肽酶(GGT),利用L-谷氨酰胺和胱氨酸为底物,通过酶促转肽反应合成谷氨酰胱氨酸,并进一步通过二硫苏糖醇还原得到目的产物γ-谷氨酰半胱氨酸(GGC),最大转化率为24.5 %,简化了GGC合成工艺,对GGC的工业化生产具有推动作用.并且在对GGT酶学性质的研究中发现大肠杆菌来源的GGT催化反应的最适温度为40 ℃左右,最适pH在10.0左右,对于谷氨酰基化反应的工业化应用具有良好的参考价值. 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hmgcoa是什么意思
hmgcoa是什么意思
HMG-COA还原酶又叫3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶，是肝脏合成胆固醇过程中的限速酶，催化生成甲羟戊酸，HMG-CoA还原酶是调节血脂药物的重要作用靶点。
1、HMG-COA还原酶是合成胆固醇的限速酶，存在于小胞体内，催化底物HMG-COA生成甲羟戊酸，是体内合成胆固醇的限速步骤，抑制HMG-COA还原酶可以阻碍胆固醇的合成。
2、目前根据HMG-COA还原酶的结构，研制出了选择性的竞争性抑制HMG-COA还原酶的他汀类药物，以降低胆固醇的生成和体内的含量，主要适用于像纯合子型高胆固醇血症的家族性患者，以及存在高危危险因素心脑血管疾病的患者。
中医大-生物化学复习题及答案汇总
中医大 -生物化学复习题及答案汇总单选题1.复制产物为 5′ -GCTAGAT-3′ 它的模板是（ C）A.5′ -GCTAGAT-′3B.5′ -CGATCTA-′3C.3′ -CGATCTA-′5D.3′ -GCTAGAT-′5E.5′ -CGAUCUA-3′2.关于糖、脂代谢的叙述，错误的是（ C）A.糖分解产生的乙酰 CoA 可作为脂酸合成的原料B.脂酸合成所需的 NADPH 主要来自磷酸戊糖途径C.脂酸分解产生的乙酰 CoA 可经三羧酸循环异生成糖D.甘油可异生成糖E.脂肪分解代谢的顺利进行有赖于糖代谢的正常进行3.大多数处于活化状态的真核基因对DNaseI：（ A）A.高度敏感B.中度敏感C.低度敏感D.不敏感E.不一定4.下列哪一种情况下尿中胆素原排泄减少？（D）A.肠梗阻B.溶血C.肝细胞炎症D.胆道梗阻E.贫血5.限制性核酸内切酶切割 DNA 后产生（ B）A. 3 磷酸基末端和 5 羟基末端B. 5 磷酸基末端和 3 羟基末端C. 3 磷酸基末端和 5 磷酸基末端D. 5 羟基末端和 3 羟基末端E.3羟基末端、 5 羟基末端及磷酸6.能合成前列腺素的脂酸是（ D）A.油酸B.亚油酸C.亚麻酸D.花生四烯酸E.硬脂酸7.在磷脂酰胆碱合成过程中不需要（ D）A.甘油二酯B.丝氨酸C.ATP和 CTPD.NADPH＋H＋E.S-腺苷甲硫氨酸8.与三羧酸循环中的草酰乙酸相似，在尿素循环中既是起点又是终点的物质是（A）A.鸟氨酸B.瓜氨酸C.氨甲酰磷酸D.精氨酸E.精氨酸代琥珀酸9.梗阻性黄疸尿中主要的胆红素可能是：（B）A.游离胆红素B.葡萄糖醛酸胆红素C.结合胆红素－清蛋白复合物D.胆红素－ Y 蛋白E.胆红素－ Z 蛋白10.氨基酸活化的特异性取决于（ E）A.tRNAB.rRNAC.转肽酶D.核蛋白体E.氨基酰 -tRNA 合成酶11.转录是（ D）A.以前导链为模板B.以 DNA 的两条链为模板C.以编码链为模板D.以 DNA 的一条链为模板E.以 RNA 为模板12.引起血中丙酮酸含量升高是由于缺乏（A）A.硫胺素B.叶酸C.吡哆醛D.钴胺素E.NADP+13.关于呼吸链组分的叙述正确的是（ E）A.复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ均横跨线粒体内膜B.NADH-泛醌还原酶的辅基为 FADC.每分子含有 Fe4S4的铁硫蛋白可传递 4 个电子D.细胞色素氧化酶仅含有铁卟啉参与电子传递E.泛醌在线粒体内膜中的活动范围较大14.tRNA 的叙述中，哪一项不恰当（ D）A.tRNA 在蛋白质合成中转运活化了的氨基酸B.起始 tRNA 在真核原核生物中仅用于蛋白质合成的起始作用C.除起始 tRNA 外，其余 tRNA 是蛋白质合成延伸中起作用，统tRNA称为延伸D.原核与真核生物中的起始 tRNA 均为 fMet-tRNAE.tRNA对其转运的氨基酸具有选择性c 阻遏蛋白结合乳糖操纵子的是（ B）A.P 序列B.0 序列C.CAP结合位点D.I 基因E.Z基因16.基因组代表一个细胞或生物体的（ B）A.部分遗传信息B.整套遗传信息C.可转录基因D.非转录基因E.可表达基因17.下列哪种化合物属于解偶联剂？（ A）A.二硝基苯酚B.氰化钾C.抗霉素 AD.粉蝶霉素 AE.鱼藤酮18.增强子（ D）A.是特异性高的转录调控因子B.是真核生物细胞核内的组蛋白C.原核生物的启动序列在真核生物中就称为增强子D.是一些较短的能增强转录的 DNA 重复序列E.在结构基因的 5'端的 DNA 序列19.延伸进程中肽链形成叙述中哪项不恰当（ D）A.肽酰基从 P位点的转移到 A位点，同时形成一个新的肽键， P位点上的 tRNA 无负载，而 A 位点的 tRNA 上肽键延长了一个氨基酸残基B.肽键形成是由肽酰转移酶作用下完成的，此种酶属于核糖体的组成成分C.嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用，发生在转肽过程这一步D.肽酰基是从 A位点转移到 P位点，同时形成一个新肽键，此时 A位点 tRNA 空载，而 P 位点的 tRNA 上肽链延长了一个氨基酸残基E.多肽链合成都是从 N 端向 C端方向延伸的20.苹果酸为底物时，加入抗霉素 A 至离体线粒体悬液中（ C）A.所有电子传递体处于氧化态B.所有电子传递体处于还原态C.细胞色素 c 处于氧化态D.细胞色素 a 大量被还原E.呼吸链传递不受影响21.cAMP 对转录的调控作用中（ C）A.cAMP 转变为 CAPB.CAP转变为 cAMPC.cAMP 和 CAP形成复合物D.葡萄糖分解活跃，使 cAMP 增加，促进乳糖利用，来扩充能源E.cAMP 是激素作用的第二信使，与转录无关22.关于“基因表达”的概念叙述错误的是（ A）A.其过程总是经历基因转录及翻译的过程B.经历基因转录及翻译等过程C.某些基因表达产物是蛋白质分子D.某些基因表达产物不是蛋白质分子E.某些基因表达产物是 RNA 分子23.可与谷丙转氨酶共同催化丙氨酸和α -酮戊二酸反应产生游离氨的酶是（A）A.谷氨酸脱氢酶B.谷草转氨酶C.谷氨酰胺酶D.谷氨酰胺合成酶E.α-酮戊二酸脱氢酶24.不对称转录是指（ D）A.同一 mRNA 分别来自两条 DNA 链B.两相邻的基因正好位于两条不同的DNA 链C.DNA分子中有一条链不含任何结构基因D.两条 DNA 链均可作为模板链，不同基因的模板链不一定在同一条DNA 链上E.RNA聚合酶使 DNA 的两条链同时转录25.与 CAP位点结合的物质是（ C）A.RNA聚合酶B.操纵子C.分解（代谢）物基因激活蛋白D.阻遏蛋白E.cGMP26.呼吸链存在于（ A）A.线粒体内膜B.线粒体外膜C.线粒体基质D.细胞核E.胞质27.DNA 分子的腺嘌呤含量为 20%，则胞嘧啶的含量应为（ B）A.20%B.30%C.40%D.60%E.80%28.在糖酵解中，催化底物水平磷酸化反应的酶是（B）A.己糖激酶B.磷酸甘油酸激酶C.磷酸果糖激酶 -1D.葡萄糖激酶E.磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶29.有关原核生物 mRNA 分子上的 S-D序列，下列哪项是错误的（ D）A.以 AGGA 为核心B.发现者是 Shine-DalgarnoC.可与 16S-rRNA近 3′ -末端处互补D.需要 eIF 参与E.又被称为核蛋白体结合位点30.嘌呤霉素抑制蛋白质生物合成的机制是（ E）A.抑制氨基酰 -tRNA 合成酶的活性 ,阻止氨基酰 -tRNA的合成B.其结构与酪氨酰 -tRNA 相似 ,可和酪氨酸竞争与 mRNA结合C.抑制转肽酶活性D.可与核糖体大亚基受位上的氨基酰 -tRNA 形成肽酰嘌呤霉素E.可与给位上的肽酰 -tRNA 形成肽酰嘌呤霉素31.蛋白质分子在 280nm 处的吸收峰主要是由哪种氨基酸引起的？（B）A.谷氨酸B.色氨酸C.苯丙氨酸D.组氨酸E.赖氨酸32.下列氨基酸中属于必需氨基酸的是（ B）A.甘氨酸B.蛋氨酸C.酪氨酸D.精氨酸E.组氨酸33.关于草酰乙酸的叙述，不正确的是哪项？（B）A.草酰乙酸在 TCA循环中无量的改变B.草酰乙酸能自由通过线粒体内膜C.草酰乙酸与脂酸合成有关D.草酰乙酸可转变为磷酸烯醇式丙酮酸E.草酰乙酸可由丙酮酸羧化而生成34.测定酶活性时，在反应体系中，叙述正确的是（ E）A.作用物的浓度越高越好B.温育时间越长越好C.反应温度以 37℃为佳D.pH 必须中性E.有的酶需要加入激活剂35.摆动配对是指下列哪个碱基之间配对不严格：（ A）A.反密码子第一个碱基与密码子第三个碱基B.反密码子第三个碱基与密码子第一个碱基C.反密码子和密码子第一个碱基D.反密码子和密码子第三个碱基E.以上都不是36.直接针对目的 DNA 进行筛选的方法是（ D）A.青霉素抗药性B.分子筛C.电源D.分子杂交E.氨苄青霉素抗药性37.DNA 复制的体系不包括（ A）A.CTPB.ATPC.dNTPD.DNA 聚合酶E.DNA模板38.生物体内氨基酸脱氨基的主要方式是（C）A.转氨基作用B.还原性脱氨基作用C.联合脱氨基作用D.直接脱氨基作用E.氧化脱氨基作用39.影响离子通道开关的配体主要是（A）A.神经递质B.类固醇激素C.生长因子D.无机离子E.甲状腺素40.管家基因的表达（ B）A.不受环境因素影响B.较少受环境因素影响C.极少受环境因素影响D.有时受，也有时不受环境因素影响E.特别受环境因素影响41.关于原核生物切除修复的叙述，错误的是（A）A.需要 DNA-pol Ⅲ参与B.需要 DNA 连接酶参与C.是细胞内最重要和有效的修复方式D.可修复紫外线照射造成的 DNA 损伤E.需要 UnrA，UvrB，UvrC 蛋白参与42.激活的 G 蛋白直接影响下列哪种酶？（ E）A.蛋白激酶 AB.蛋白激酶 CC.蛋白激酶 GD.磷脂酶 AE.磷脂酶 C43.核酶（ E）A.以 NAD+为辅酶B.是有催化作用的蛋白质C.是由 snRNA 和蛋白质组成的D.有茎环结构和随后的寡聚 UE.能催化 RNA 的自我剪接44.肽类激素促使 cAMP 生成的机制是（ D）A.激素能直接激活腺苷酸环化酶B.激素能直接抑制磷酸二酯酶C.激素－受体复合物直接激活腺苷酸环化酶D.激素－受体复合物使 G 蛋白结合 GTP而活化，后者再激活腺苷酸环化酶E.激素激活受体，然后受体再激活腺苷酸环化酶45.抗脂解激素是（ E）A.肾上腺素B.去甲肾上腺素C.肾上腺皮质激素D.胰高血糖素E.胰岛素46.有关亲水蛋白质的高分子性质的描述中有哪项是错误的？（E）A.蛋白质在水溶液中的胶粒大小范围为1－ 100nmB.变性蛋白质的粘度增大C.蛋白质分子表面具有水化层D.它不能通过半透膜E.分子形状越对称，其粘度越大47.冈崎片段是指（ B）A.DNA 模板上的不连续 DNA 片段B.随从链上生成的不连续 DNA 片段C.前导链上生成的不连续 DNA 片段D.引物酶催化合成的 RNA 片段E.由 DNA 连接酶合成的 DNA 片段48.下列哪种受体常与 G 蛋白偶联？（ B）A.环型受体B.蛇型受体C.催化型受体D.非催化型受体E.胞内受体49.在真核细胞中，经 RNA 聚合酶Ⅱ催化的转录产物是（ D）A.18SrRNAB.tRNAC.全部 RNAD.mRNAE.28SrRNA50.基因表达过程中仅在原核生物中出现而真核生物没有的是（E）A.tRNA 的稀有碱基B.AUG用作起始密码子C.冈崎片段D.DNA 连接酶E.σ 因子、单选题（共 50道试题，共 100 分）1.在体内能分解为β- 氨基异丁酸的核苷酸是（C）A.CMPB.AMPC.TMPD.UMPE.IMP2.基因表达过程中仅在原核生物中出现而真核生物没有的是（E）A.tRNA 的稀有碱基B.AUG 用作起始密码子C.冈崎片段D.DNA 连接酶E.σ 因子3.下列有关酶的活性中心的叙述，正确的是（ A）A.所有的酶都有活性中心B.所有酶的活性中心都含有辅酶C.所有酶的活性中心都含金属离子D.所有抑制剂都作用于酶的活性中心E.酶的必需基因都位于活心中心之内4.冈崎片段是指（ B）A.DNA 模板上的不连续 DNA片段B.随从链上生成的不连续 DNA片段C.前导链上生成的不连续 DNA片段D.引物酶催化合成的 RNA片段E.由 DNA连接酶合成的 DNA片段5.属于生糖兼生酮氨基酸的是（ C）A.ArgB.LysC.PheD.AspE.Met6.结合酶表现有活性的条件是（ C ）A.辅酶单独存在B.有激动剂存在C.全酶形式存在D.亚基单独存在E.酶蛋白单独存在7.摆动配对是指下列哪个碱基之间配对不严格：（ A ）A.反密码子第一个碱基与密码子第三个碱基B.反密码子第三个碱基与密码子第一个碱基C.反密码子和密码子第一个碱基D.反密码子和密码子第三个碱基E.以上都不是8.正常生理状况下大脑与肌肉细胞中的能量来源主要是（ A）A.血糖B.脂肪酸C.酮体D.氨基酸E.核苷酸 A9.影响离子通道开关的配体主要是（ A）A.神经递质B.类固醇激素C.生长因子D.无机离子E.甲状腺素10.在磷脂酰胆碱合成过程中不需要（ D）A.甘油二酯B.丝氨酸C.ATP 和 CTPD.NADPH＋H＋E.S- 腺苷甲硫氨酸11.有关亲水蛋白质的高分子性质的描述中有哪项是错误的？（ E）A.蛋白质在水溶液中的胶粒大小范围为1－ 100nmB.变性蛋白质的粘度增大C.蛋白质分子表面具有水化层D.它不能通过半透膜E.分子形状越对称，其粘度越大12.氨基酸是通过下列哪种化学键与 tRNA 结合的 ? （C）A.糖苷键B.磷酸酯键C.酯键D.氢键E.酰胺键13.糖酵解时，提供 ~P 能使 ADP生成 ATP的一对代谢物是（B）A.3- 磷酸甘油醛及 6-磷酸果糖B.1,3- 二磷酸甘油酸及磷酸烯醇式丙酮酸C.3- 磷酸甘油酸及 6-磷酸葡萄糖D.1- 磷酸葡萄糖及磷酸烯醇式丙酮酸E.1,6- 双磷酸果糖及 1,3- 二磷酸甘油酸14.兼可抑制真、原核生物蛋白质生物合成的抗生素是（ E）A.放线菌酮B.四环素C.链霉素D.氯霉素E.嘌呤霉素15.疯牛病是由朊病毒蛋白的下列哪种构象变化引起的？（ C）A.α- 螺旋变为β-转角B.α- 螺旋变为无规卷曲C.α- 螺旋变为β-折叠D.β- 折叠变为α-螺旋E.β- 转角变为β-折叠16.催化可逆反应的酶是（ C）A.己糖激酶B.葡萄糖激酶C.磷酸甘油酸激酶D.6- 磷酸果糖激酶 -1E.丙酮酸激酶17.与 CAP位点结合的物质是（ C）A.RNA 聚合酶B.操纵子C.分解（代谢）物基因激活蛋白D.阻遏蛋白E.cGMP18.下列哪一种情况下尿中胆素原排泄减少？（ D）A.肠梗阻B.溶血C.肝细胞炎症D.胆道梗阻E.贫血19.DNA复制的体系不包括（ A）A.CTPB.ATPC.dNTPD.DNA 聚合酶E.DNA 模板20.能合成前列腺素的脂酸是（ D）A.油酸B.亚油酸C.亚麻酸D.花生四烯酸E.硬脂酸A）21.可与谷丙转氨酶共同催化丙氨酸和α- 酮戊二酸反应产生游离氨的酶是（A.谷氨酸脱氢酶B.谷草转氨酶C.谷氨酰胺酶D.谷氨酰胺合成酶E.α- 酮戊二酸脱氢酶22.下列何者是抑癌基因？（ C）A.ras 基因B.sis 基因C.P53 基因D.src 基因E.myc 基因23.蚕豆病患者的红细胞内缺乏（ E ）A.内酯酶B.磷酸戊糖异构酶C.6- 磷酸葡萄糖酸脱氢酶D.转酮醇酶E.6- 磷酸葡萄糖脱氢酶24.关于“基因表达”的概念叙述错误的是（ A）A.其过程总是经历基因转录及翻译的过程B.经历基因转录及翻译等过程C.某些基因表达产物是蛋白质分子D.某些基因表达产物不是蛋白质分子E.某些基因表达产物是 RNA分子25.引起血中丙酮酸含量升高是由于缺乏（A）A.硫胺素B.叶酸C.吡哆醛D.钴胺素E.NADP+26.关于腐败作用叙述正确的是（A）A.是肠道细菌对蛋白质或蛋白质消化产物的作用B.主要是氨基酸脱羧基、脱氨基的分解作用C.主要在大肠进行D.腐败作用产生的都是有害物质E.是细菌本身的代谢过程，以有氧分解为主27.肽类激素促使 cAMP生成的机制是（ D）A.激素能直接激活腺苷酸环化酶B.激素能直接抑制磷酸二酯酶C.激素－受体复合物直接激活腺苷酸环化酶D.激素－受体复合物使 G蛋白结合 GTP而活化，后者再激活腺苷酸环化酶E.激素激活受体，然后受体再激活腺苷酸环化酶28.原核细胞在 DNA模板上接近转录终止区域往往有（ A）A.较密集的 GC配对区和连续的 AB.多聚 A尾巴C.很多稀有碱基D.σ 因子的辨认区E.TATATA 序列29.关于草酰乙酸的叙述，不正确的是哪项？（ B）A.草酰乙酸在 TCA循环中无量的改变B. 草酰乙酸能自由通过线粒体内膜C. 草酰乙酸与脂酸合成有关D. 草酰乙酸可转变为磷酸烯醇式丙酮酸E. 草酰乙酸可由丙酮酸羧化而生成30. 关于糖、脂、氨基酸代谢的叙述，错误的是（ D ）A. 乙酰 CoA 是糖、脂、氨基酸分解代谢共同的中间代谢物B. 三羧酸循环是糖、脂、氨基酸分解代谢的最终途径C. 当摄入糖量超过体内消耗时，多余的糖可转变为脂肪D. 当摄入大量脂类物质时，脂类可大量异生为糖E. 糖、脂不能替代蛋白质31. 下列嘌呤核苷酸之间的转变中，哪一个是不能直接进行的？（ E ） A. GMP →IMPB. IMP →XMPC. AMP →IMPD. XMP →GMPE. AMP →GMP32. 关于外显子和内含子的叙述正确的是 （C ）A. 外显子在 DNA 模板上有相应的互补序列，内含子没有B. hnRNA 上只有外显子而无内含子序列C. 除去内含子的过程称为剪接D. 除去外显子的过程称为剪接E. 成熟的 mRNA 有内含子33. 最常出现在 β- 转角的氨基酸是（A ） A. 脯氨酸B. 谷氨酸C. 甘氨酸D. 丝氨酸E. 天冬氨酸34. Km 是指 （ B ）A. 当速度为最大反应速度一 半时的酶浓度B. 当速度为最大反应速度一 半时的底物浓度C. 当速度为最大反应速度一 半时的抑制剂浓度 D. 当速度为最大反应速度一 半时的 pH 值E. 当速度为最大反应速度一 半时的温度35 cAMP 对转录的调控作用中 （ C ）A. cAMP 转变为 CAPB. CAP 转变为 cAMPC. cAMP 和 CAP 形成复合物D. 葡萄糖分解活跃，使 cAMP 增加，促进乳糖利用，来扩充能源E. cAMP 是激素作用的第二信使，与转录无关36. 苹果酸为底物时，加入抗霉素 A 至离体线粒体悬液中 （C ）A. 所有电子传递体处于氧化态B. 所有电子传递体处于还原态C. 细胞色素 c 处于氧化态D.细胞色素 a 大量被还原E.呼吸链传递不受影响37.含有两个羧基的氨基酸是（ C）A.甘氨酸B.色氨酸C.天冬氨酸D.赖氨酸E.丝氨酸38.在真核细胞中，经 RNA聚合酶Ⅱ催化的转录产物是（ D）A.18SrRNAB.tRNAC.全部 RNAD.mRNAE.28SrRNA39.管家基因的表达（ B）A.不受环境因素影响B.较少受环境因素影响C.极少受环境因素影响D.有时受，也有时不受环境因素影响E.特别受环境因素影响40.下列哪种化合物属于解偶联剂？（ A）A.二硝基苯酚B.氰化钾C.抗霉素 AD.粉蝶霉素 AE.鱼藤酮41.下列关于 DNA复制的叙述哪一项是正确的 ? （ D）A.需 RNA指导的 DNA聚合酶参加B.以 NTP为原料C.不需要引物D.属半保留复制E.只有一条链作为模板42.复制产物为 5′ -GCTAGAT3-′ 它的模板是（C）A.5 ′ -GCTAGAT3- ′B.5 ′ -CGATCTA3- ′C.3 ′ -CGATCTA5- ′D.3 ′ -GCTAGAT5- ′E.5 ′ -CGAUCUA3-′43.胆色素中无色的是：（ C ）A.胆红素B.胆绿素C.胆素原D.尿胆素E.粪胆素44.不对称转录是指（ D）A. 同一 mRNA 分别来自两条 DNA 链B. 两相邻的基因正好位于两条不同的 DNA 链C. DNA 分子中有一条链不含任何结构基因D. 两条 DNA 链均可作为模板链，不同基因的模板链不一定在同一条E. RNA 聚合酶使 DNA 的两条链同时转录45. 生物体内氨基酸脱氨基的主要方式是 （C ）A. 转氨基作用B. 还原性脱氨基作用C. 联合脱氨基作用D. 直接脱氨基作用E. 氧化脱氨基作用46. 关于蛋白质结构的下列描述，其中正确的是 （ C ）A. 是至少有 100 个以上的氨基酸组成的高分子化合物B. 每一蛋白质都含有 2 条以上的多肽链C. 蛋白质空间构象遭到破坏，其生物学活性随之丧失D. 不同蛋白质分子的氨基酸组成基本相同E. 每种蛋白质都有种类不同的辅基47. 酶的活性中心是指酶分子（ E ）A. 其中的必需基因B. 其中的辅基C. 与底物结合部位D. 催化底物变成产物的部位E. 结合底物并发挥催化作用的关键性三维结构区 48. 氮杂丝氨酸能干扰或阻断核苷酸合成是因为其化学结构类似于A. 丝氨酸B. 谷氨酸C. 天冬氨酸D. 谷氨酰胺E. 天冬酰胺49. PKA 主要使哪种氨基酸残基磷酸化？（ E ）A. 酪氨酸B. 甘氨酸C. 酪氨酸 / 甘氨酸D. 甘氨酸 / 丝氨酸E. 苏氨酸 / 丝氨酸50. 抗脂解激素是 （ E ）A. 肾上腺素B. 去甲肾上腺素C. 肾上腺皮质激素D. 胰高血糖素E. 胰岛素中国医科大学 2013 年 7 月考试《生物化学 （本科）》在线作业 DNA 链上 D ）一、单选题1.含有两个羧基的氨基酸是（ C）A.甘氨酸B.色氨酸C.天冬氨酸D.赖氨酸E.丝氨酸2.催化可逆反应的酶是（ C）A.己糖激酶B.葡萄糖激酶C.磷酸甘油酸激酶D.6-磷酸果糖激酶 -1E.丙酮酸激酶3.关于“基因表达”的概念叙述错误的是（A）A.其过程总是经历基因转录及翻译的过程B.经历基因转录及翻译等过程C.某些基因表达产物是蛋白质分子D.某些基因表达产物不是蛋白质分子E.某些基因表达产物是 RNA 分子4.结合酶表现有活性的条件是（ C）A.辅酶单独存在B.有激动剂存在C.全酶形式存在D.亚基单独存在E.酶蛋白单独存在5.蛋白质分子在 280nm 处的吸收峰主要是由哪种氨基酸引起的？（B）A.谷氨酸B.色氨酸C.苯丙氨酸D.组氨酸E.赖氨酸6.与三羧酸循环中的草酰乙酸相似，在尿素循环中既是起点又是终点的物质是（ A）A.鸟氨酸B.瓜氨酸C.氨甲酰磷酸D.精氨酸E.精氨酸代琥珀酸7.测得某一蛋白质样品的氮含量为0． 60g，此样品约含蛋白质多少？（ B）A.16． 0gB.3． 75gC.6． 40gD.9．60gE.6． 25g8.在重组 DNA 技术领域所说的分子克隆是指（ B）A.建立单克隆技术B.无性繁殖 DNAC.建立多克隆抗体D.有性繁殖 DNAE.．构建重组 DNA 分子9.在磷脂酰胆碱合成过程中不需要（ D）A.甘油二酯B.丝氨酸C.ATP和 CTPD.NADPH＋H＋E.S-腺苷甲硫氨酸10.引起血中丙酮酸含量升高是由于缺乏（ A）A.硫胺素B.叶酸C.吡哆醛D.钴胺素E.NADP+11.氮杂丝氨酸能干扰或阻断核苷酸合成是因为其化学结构类似于（D）A.丝氨酸B.谷氨酸C.天冬氨酸D.谷氨酰胺E.天冬酰胺12.正常生理状况下大脑与肌肉细胞中的能量来源主要是（A）A.血糖B.脂肪酸C.酮体D.氨基酸E.核苷酸 A13.延伸进程中肽链形成叙述中哪项不恰当（D）A.肽酰基从 P位点的转移到 A 位点，同时形成一个新的肽键， P位点上的tRNA 无负载，而 A 位点的 tRNA 上肽键延长了一个氨基酸残基B.肽键形成是由肽酰转移酶作用下完成的，此种酶属于核糖体的组成成分C.嘌呤霉素对蛋白质合成的抑制作用，发生在转肽过程这一步D.肽酰基是从 A 位点转移到 P 位点，同时形成一个新肽键，此时 A 位点tRNA空载，而 P 位点的 tRNA 上肽链延长了一个氨基酸残基E.多肽链合成都是从 N 端向 C 端方向延伸的14.下列哪种受体常与 G 蛋白偶联？（ B）A.环型受体B.蛇型受体C.催化型受体D.非催化型受体E.胞内受体15.氨基酸是通过下列哪种化学键与 tRNA结合的? （C）A.糖苷键B.磷酸酯键C.酯键D.氢键E.酰胺键16. 1 分子软脂酸在体内彻底氧化分解净生成多少分子 ATP？（ B）A.108B.106C.32D.30E.1017.兼可抑制真、原核生物蛋白质生物合成的抗生素是（ E）A.放线菌酮B.四环素C.链霉素D.氯霉素E.嘌呤霉素18.在真核细胞中，经 RNA 聚合酶Ⅱ催化的转录产物是（ D）A.18SrRNAB.tRNAC.全部 RNAD.mRNAE.28SrRNA19.在体内参与脂酸合成的葡萄糖代谢的直接中间产物是（C）A.3-磷酸甘油醛B.丙酮酸C.乙酰 CoAD.磷酸二羟丙酮E.草酰乙酸20.关于糖、脂代谢的叙述，错误的是（ C）A.糖分解产生的乙酰 CoA 可作为脂酸合成的原料B.脂酸合成所需的 NADPH 主要来自磷酸戊糖途径C.脂酸分解产生的乙酰 CoA 可经三羧酸循环异生成糖D.甘油可异生成糖E.脂肪分解代谢的顺利进行有赖于糖代谢的正常进行21.生物体内氨基酸脱氨基的主要方式是（ C）A.转氨基作用B.还原性脱氨基作用C.联合脱氨基作用D.直接脱氨基作用E.氧化脱氨基作用22.脂酸β -氧化的限速酶是（ B）A.脂酰 CoA 合成酶B.肉碱脂酰转移酶ⅠC.肉碱脂酰转移酶ⅡD.脂酰 CoA 脱氢酶E.β-酮脂酰 CoA 硫解酶23.呼吸链存在于（ A）A.线粒体内膜B.线粒体外膜C.线粒体基质D.细胞核E.胞质24.核酶（ E）A.以 NAD+为辅酶B.是有催化作用的蛋白质C.是由 snRNA 和蛋白质组成的D.有茎环结构和随后的寡聚 UE.能催化 RNA 的自我剪接25.不对称转录是指（ D）A.同一 mRNA 分别来自两条 DNA 链B.两相邻的基因正好位于两条不同的 DNA 链C.DNA分子中有一条链不含任何结构基因DNA 链上D.两条 DNA 链均可作为模板链，不同基因的模板链不一定在同一条E.RNA聚合酶使 DNA 的两条链同时转录26.在糖酵解中，催化底物水平磷酸化反应的酶是（B）A.己糖激酶B.磷酸甘油酸激酶C.磷酸果糖激酶 -1D.葡萄糖激酶E.磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶27.激活的 G 蛋白直接影响下列哪种酶？（ E）A.蛋白激酶 AB.蛋白激酶 CC.蛋白激酶 GD.磷脂酶 AE.磷脂酶 C28.胆色素中无色的是：（ C）A.胆红素B.胆绿素C.胆素原D.尿胆素E.粪胆素29.提供嘌呤环 N-3 和 N-9 的化合物是（ E）A.天冬氨酸B.甘氨酸C.丙氨酸D.丝氨酸E.谷氨酰胺30.快速调节是指酶的（ A）A.活性调节B.含量调节C.酶的变性D.酶降解E.酶区域性分布31.下列有关酶的活性中心的叙述，正确的是（A）A.所有的酶都有活性中心B.所有酶的活性中心都含有辅酶C.所有酶的活性中心都含金属离子D.所有抑制剂都作用于酶的活性中心E.酶的必需基因都位于活心中心之内32.基因组代表一个细胞或生物体的（ B）A.部分遗传信息B.整套遗传信息C.可转录基因D.非转录基因E.可表达基因33.转录是（ D）A.以前导链为模板B.以 DNA 的两条链为模板C.以编码链为模板D.以 DNA 的一条链为模板E.以 RNA 为模板34.下列哪种化合物属于解偶联剂？（ A）A.二硝基苯酚B.氰化钾C.抗霉素 AD.粉蝶霉素 AE.鱼藤酮35.摆动配对是指下列哪个碱基之间配对不严格：（ A）A.反密码子第一个碱基与密码子第三个碱基B.反密码子第三个碱基与密码子第一个碱基C.反密码子和密码子第一个碱基D.反密码子和密码子第三个碱基E.以上都不是36.增强子（ D）A.是特异性高的转录调控因子。
TG酶的特点、原理及使用工艺方法
高弹性鱼种：凝胶形成能数值1000以上，飞鱼、蛇鲻、带鱼、牙鲆、付荚鱼。
普通弹性鱼种：凝胶形成能数值500~1000，大部分红肉鱼(鲣、鲐、秋刀鱼、黄肌金枪鱼、黑鲔、、远东拟沙丁鱼)
弱弹性鱼种：500以下，鲨鱼、乌贼、大多数淡水鱼。
4、粘肉
应用领域：牛排、猪排、鸡排、巴西烤肉等肉排块，涮羊肉、猪牛羊驴肉串、火锅肉片等，主要是以小家禽肉（猪、牛、羊、鸡等）为原料进行重组成型大肉块。
3、TG酶作用时间、温度、pH
1）酶制剂催化食品加工过程中的各种化学反应，特点是用量少、催化效率高、专一性强。酶的作用受温度、时间影响很大，温度高时相对需要的反应时间就会大大缩短，温度低时，反应速率比较低，甚至还会不反应。TG需要的作用时间和温度是由催化食品的加工工艺、食品最终想要表现出来的物理特性的改善来决定的。
喷洒成均匀的、薄的涂层. 不使用太多的粉!
(2)直接加入法
直接加入TG酶粉状
2）注意事项：
1、酶的使用量取决于肉排尺寸、表面积，一般一公斤用5-15gTG酶。
2、混合好原料肉装入模具，在半小时内完成，并加一定压力，将空气排出。
3、TG酶溶于水后，立即加入肉中，不得凝块。
5、千页豆腐
概述：千页豆腐，又称千页豆腐、百页豆腐、千张豆腐、Q脆豆腐等，是一种源于中国台湾，后来经大陆研发人员的技术改进而创造出的一种口感极其独特的豆腐，它的出现完全颠覆了传统豆腐的概念。
优点：交联大豆分离蛋白并交联肉中的蛋白
缺点：没有充分的反应时间、湿度、温度，不能完全反应。
主要用于：
中高档肉质较好的肉制品中。
3)2种方法融合使用
先做蛋白小颗粒，然后二次添加把做好的蛋白肉加入真肉中再加入TG酶（一般添加量在万分之5-8左右）
HMG-CoA还原酶的结构和调节
动物医学进展!200627<2>:38-40Pr O g ress i n Vet eri nar y M edi ci ne~MG-CO A还原酶的结构和调节李文全9王子花9申瑞玲<山西农业大学动物科技学院山西太谷030801>中图分类号"S852.23;@55文献标识码"A文章编号"1007-5038(2006)02-0038-03摘要"3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(3-h y-dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A9~MG-CO A)还原酶是胆固醇合成的限速酶O该酶的生成除了受到它的底物正向调节和终端产物的反馈调节外9还受各种激素的调节O文章就~MG-CO A还原酶的结构9以及胆固醇\胆汁酸\激素包括胰岛素\胰高血糖素\甲状腺素\糖皮质类激素和雌激素对~MG-CO A 还原酶生成的调节进行了概述O关键词"~MG-CO A还原酶;结构;调节胆固醇是构成细胞生物膜的成分又是体内合成胆汁酸和类固醇激素的前体对于维持细胞膜的完整性和体内生命活动具有重要的意义但体内过多的胆固醇会引起动脉粥样硬化等心脑血管疾病~MG-CO A还原酶位于细胞内质网内是胆固醇合成的限速酶通过调节该酶的活性能够维持体内胆固醇的稳定~MG-CO A还原酶在多水平上受到调节包括底物的正向调节终端产物的反馈调节激素调节以及转录水平~mRNA稳定性~翻译和共价修饰调节等1~MG-CO A还原酶的结构~MG-CO A还原酶的基因位于人5号染色体C13.3-C14.和小鼠13号染色体上基因编码约为26 kb含有一个2667b p开放阅读框~MG-CO A还原酶基因含有20个外显子和19个内含子启动子区有固醇反应元件<st er Ol res p Onsi ve el e m ent SRE>雌激素反应元件<estr O g en res p Onse el e m ent ERE>和c A MP反应元件<c y cli c A MP res p Onse el e-m ent CRE>转录发生在翻译起始子5,上游68至100个核苷酸的多个位点处到目前为止发现至少存在9个转录起始点[1]~MG-CO A还原酶是N-甘露糖糖蛋白由4个分子质量为97ku的相同亚基组成每个亚基有888个氨基酸残基组成磷酸化位点位于第872个氨基酸每个亚基分为3个不同的区域其氨基端的339<1～339>个氨基酸跨膜区110<340～449>个氨基酸的连接区羟基端域的439 <450～888>个氨基酸组成的催化区而氨基端经8次跨内质网膜并通过短环锚在内质网膜上跨膜区由167个氨基酸残基组成且和固醇反应元件结收稿日期"2005-10-17作者简介"李文全(1974-)9男9山西大同人9硕士研究生9主要从事基础兽医学研究··················································OAdvance i n t he A pp licati on of l i p oso m e as t he I mmune Ad uvants of vacci ne Z~OU~On g-l ei2LI Chun-li n g1WANG Gui-p i n g1~OU ji a-f a2<1.I nstit ute o f V eterinar$\e dicine Guan g don g A c ade m$o f A g ric ult ural Sciences Guan g zhou Guan g don g510640China32.Colle g e o f V eterinar$\e dicine Nan j in g A g ric ult ural Uniuersit$Nan j in g Jian g s u210095China>Abstract:L i p OsO m e as a ne W t yp e Of ad uvant f Or vacci ne can enhance t he res p Onse Of bOd y fl ui d i mmunit y and cell m edi at ed i mmunit y si mult aneOusl y havi n g a f uncti On Of i ncreasi n g eff ect On t he vacci ne.Thr Ou g h anal y zi n g t he f uncti On m echani s m Of li p OsO m e We su mm ari zed sO m e excell ences Of li p OsO m e as t he ad uvant and t he a pp li cati Ons i n t he anti bact eri a anti vir us anti p arasit e and antit u mOr vacci nes.The p r Obl e m s exi st ed Were enu m erat ed and t he i m p r Oved m eans Were p ut f Or War d.L i p OsO m e has g OOd p r Os p ects Of a pp li cati On.Ke y words:li p OsO m e3vacci ne3i mmune ad uvant合蛋白st er Ol res p Onse el e m ent bi ndi n g p r Ot ei n SREBP的裂解激活蛋白cl eava g e-acti vati n g p r O-t ei n SCAP的固醇敏感域st er Ol sensiti ve dO m ai n SSD具有很相似的胆固醇敏感区2胆固醇的反馈调节体外研究表明胆固醇能够在转录水平调节~MG-CO A还原酶胆固醇的转录调控和细胞内的固醇反应元件结合蛋白SREBP密切相关当细胞内胆固醇水平减少时内质网上SCAP SREBP 复合物的固醇敏感区能感受到这一变化SCAP护送SCAP SREBP复合物进入高尔基复合体接着经过活化的位点1蛋白酶sit e1p r Ot ease S1P和位点2蛋白酶sit e2p r Ot ease S2P切割SREBP前体并释放SREBP进入细胞核内且结合在DNA的固醇反应元件上从而促进~MG-CO A还原酶的转录相反当胆固醇的水平升高时胆固醇和SCAP 的固醇敏感区结合阻止SCAP SREBP复合物进入高尔基复合体结果SREBP停留在内质网上不能进入细胞核同时进入细胞核的SREBP也被降解体内研究表明不同动物的调节方式可能不同大鼠主要在翻译水平调节而仓鼠和小鼠表现在转录水平上2-4胆固醇也能加快还原酶的降解体外比较研究一致地表明胆固醇能够加快还原酶的降解这种降解是依赖跨膜区的泛素-蛋白酶途径当细胞内的胆固醇的浓度升高时胆固醇能通过直接结合到还原酶上或间接结合到内质网的受体上并引起还原酶的构象发生变化使还原酶SSD和I n-si g内质网上的一种跨膜蛋白结合导致与泛素化相关的酶集合使还原酶泛素化泛素化的还原酶然后被蛋白酶降解5Ness G C等6研究表明胆固醇没有改变大鼠肝还原酶的降解和泛素化这种矛盾可能反映了体内调节和体外调节的差异性3胆汁酸对~MG-CO A还原酶的调节胆汁酸是胆固醇代谢的主要终产物研究发现给大鼠饲喂含胆酸脱氧胆酸和鹅脱氧胆酸的日粮可以显著降低肝还原酶的mRNA水平酶活性和酶含量7用消胆胺干扰胆汁酸的肝肠循环能够使大鼠肝~MG-C O A还原酶mRNA的水平提高3倍8这表明胆汁酸能够提高~MG-C O A还原酶mRNA丰度但目前胆汁酸这种转录调节机制还不清楚4激素调节4.1胰岛素和胰高血糖素大量研究表明胰岛素可以使还原酶的活性增加当注射链脲霉素致大鼠糖尿病时可以使肝~MG-CO A mRNA水平在18h内下降12%酶含量降低到几乎不可测量的水平而给予胰岛素1h后mRNA和酶含量几乎恢复到正常水平9-10这表明胰岛素可以提高~MG-CO A还原酶mRNA水平胰高血糖素与胰岛素的作用恰恰相反4.2甲状腺素给予甲状腺切除的大鼠大剂量甲状腺素T3能够显著提高肝~MG-C O A还原酶的活性mRNA和酶含量也提高2倍～3倍同时能够促进7-羟化酶转录11用几乎受体饱和的T3治疗脑垂体切除大鼠也可以使肝~MG-C O A还原酶活性mRNA水平和酶含量提高30倍12进一步研究表明mRNA水平提高的原因是由于转录速率的提高伴随着mRNA 稳定性的增强还原酶半衰期从2.5h变化为大约15h13这些研究都表明甲状腺素可以提高~MG-C O A还原酶mRNA转录速率和稳定性4.3糖皮质类激素大鼠肾上腺切除后可以导致机体内~MG-CO A 还原酶mRNA半衰期从3h变为10h14地塞米松治疗可以显著抑制T3引起的脑垂体切除大鼠诱导的还原酶mRNA和酶含量提高且mRNA半衰期从13.5h降到2.5h但不能抑制T3诱导的~MG-CO A还原酶转录速率这些研究结果表明糖皮质类激素能够降低酶mRNA的稳定性4.4雌激素雌性大鼠~MG-CO A还原酶活性比雄性大鼠的高2倍～3倍性腺切除的大鼠体内~MG-CO A 还原酶的活性比正常大鼠的低40%～60%而皮肤埋植17-p雌二醇则可以恢复还原酶活性15将17-p雌二醇给予雄性蟾蜍可以使肝~MG-CO A还原酶的活性提高40多倍mRNA水平提高23倍但转录速率没有变化16这些研究结果表明雌激素能够增强还原酶mRNA的稳定性5~MG-CO A还原酶的昼夜节律~MG-CO A还原酶具有昼夜节律性其活性在白天很低而在夜晚活性开始升高其最大活性在午夜12点近年所使用的免疫印迹方法研究表明酶活性与酶含量同步变化17这说明~MG-CO A还原酶的日变异主要是由于酶含量变化引起的糖尿病大鼠可以消除这种日变异并导致酶活性降低而给予胰岛素则在2h内能恢复到正常水平说明胰岛素可能负责还原酶活性日变异6空腹动物试验表明饥饿和禁食可以使~MG-CO A93李文全等~MG-CO A还原酶的结构和调节还原酶合成和酶活性大幅度下降大鼠24h和48h的禁食能够显著降低还原酶的mRNA和酶含量且酶含量和酶活性呈现很好的正相关7这表明禁食可能降低还原酶的合成来调节胆固醇合成7小结随着人们生活水平的提高和生活方式的改变高血脂高血压高血糖患者呈上升趋势临床上已经使用沙汀类药物通过竞争抑制~MG-CO A还原酶的活性来治疗高血脂对还原酶的结构和调节机制的进一步认识和理解将有助于更好地开发可以抑制还原酶活性或加快还原酶降解的新药物提供高血脂治疗的新方法参考文献!1~u m p hri es S E T at a F~enr y I et al.The i sOl ati On charac-t erizati Ons and chr O mOsO m al assi g n m ent Of t he g ene f Or hu-m an3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase~MG-CO A reduct ase j.~u m Genet198571254-258.2Cha mbers C M Ness G C.D i et ar y chOl est er Ol re g ul at es he p at-i c3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase g ene ex-p ressi On i n rats p ri m aril y at t he l evel Of transl ati On j.A rchB i Oche m B i O p h y s1998354317-322.3Ness G C Kell er R K Pendl et On L C.Feedback re g ul ati On Of he p ati c3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase ac-ti vit y b y di et ar y chOl est er Ol i s nOt due t O alt ered mRNA l evelsj.j B i Ol Che m199126614854-14857.4Shi mO mura I Bash m akOv Y Shi m anO~.ChOl est er Ol f eedi n g reduces nucl ear f Or m s Of st er Ol re g ul at Or y el e m ent bi ndi n g p r O-t ei ns i n ha m st er li ver j.Pr Oc Natl A cad S ci199********-12359.5SOn g B L Russell A.D eBOse-BO y d Ubi C uiti nati On Of3-~y-dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l-CO A reduct ase i n p er m eabilized cellsm edi at ed b y c y t OsOli c el anda p ut ati ve m e mbrane-bOund ubi C-uiti n li g ase j.j B i Ol Che m200428798-28806.6Ness G C~Oll R C.D e g radati On Of~MG-CO A reduct ase i n rat li ver i s chOl est er Ol and ubi C uiti n i nde p endent j.Febs Let-t er20053126-3130.7Duck WOrt h P F V l ahcevi c Z R S t uder E j.E ff ect Of h y dr O-p hObi c bil e aci ds On3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase acti vit y and mRNAl evels i n t he rat j.j B i Ol Che m199********-9418.8Shef er S N g u y en L B S al en G.D iff eri n g eff ects Of chOl est er Ol and t aur OchOl at e On st ead y-st at e he p ati c~MG-CO A reduct ase and chOl est er Ol7-h y dr Ox y l ase acti viti es and mRNA l evels i n t he rat j.j L i p i d Res1992331193-1200.9Ness G C W i gg i ns L ZhaO Z.I nsuli n i ncreases he p ati c3-h y-dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase mRNA and i m-munOreacti ve p r Ot ei n l evels i n di abeti c rats j.A rch B i Oche mB i O p h y s1994309193-194.10Ness G C ZhaO Z W i gg i ns L.I nsuli n and g l uca g Ons mOdu-l at e he p ati c3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduc-t ase acti vit y b y aff ecti n g i mmunOreacti ve p r Ot ei n l evels j.jB i Ol Che m199426929168-29172.11Ness G C LO p ez D Cha mbers C M.E ff ects Of l-trii OdOt h y r O-ni ne and t he t h y r O m i m eti c L-94901On ser u m li p O p r Ot ei n l ev-els and he p ati c l O W-densit y li p O p r Ot ei n rece p t Or3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase and a p O A-I g ene ex-p ressi On j.B i Oche m Phar m acOl199856121-129.12S a m p l e C E Pendl et On L C Ness G C.Re g ul ati On Of3-h y-dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase mRNA l evelsb y l-trii OdOt h y r Oni ne j.B i Oche m i str y198726727-731.13S i mOnet W S Ness G C.T ranscri p ti Onal and p Ost-transcri p-ti Onal re g ul ati On Of rat he p ati c3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase b y t h y r Oi d hOr mOnes j.j B i Ol Che m198826312448-12453.14S i mOnet W S Ness G C.POst-transcri p ti On re g ul ati On Of3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase mRNA i nrat li ver G l ucOcOrti cOi ds bl Ock t he st abilizati On caused b y t h y r Oi d hOr mOnes j.j B i Ol Che m1989264569-573.15CarlsOn S E M itchell A D Cart er M L.Evi dence t hat p h y si-Ol O g i c l evels Of circul ati n g estr O g ens and neOnat al sex-i m p ri nt-i n g mOdif y p Ost p ubert al he p ati c m i cr OsO m al3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m e A reduct ase acti vit y j.B i Oche mB i O p h y s A ct a1980633154-161.16~en~Sha p ir O D j.Nucl eOti de se C uence and estr O g en i nduc-ti On Of X eno P us l aeuis3-h y dr Ox y-3-m et h y l g l ut ar y l cOenz y m eA reduct ase j.jB i Ol Che m199********-4629.17Ness G C Cha mbers C M.The di ur nal vari ati On Of he p ati c ~MG-CO A reduct ase acti vit y i s due t O chan g es i n t he l evel Ofi mmunOreacti ve p r Ot ei n j.A rch B i Oche m B i O p h y s199632741-44.S truct ure and Re g ul ati on of HMG-CoA Reduct aseLI W en-C uan WANG Z i-hua S~EN Rui-li nColl a g e o f Ani m al Science and T ec hnol o g$ShanI i A g rc ult ural Uniuersit$Tai g u ShanI i030801ChinaAbstract3-h y dr Ox y-3-m et h y l g ult ar y l cOenz y m e A~MG-CO A reduct ase i s g enerall y re g ar ded as cat al y zi n g t he rat e-li m iti n g st e p i n s y nt hesi s Of chOl est er Ol.It i s re g ul at ed b y vari Ous hOr mOnes substrat es and t er-m i nal p r Oducts.Thi s p a p er f Ocused On~MG-CO A reduct ase str uct ure and re g ul ati On Of chOl est er Ol bil e aci d hOr mOnes i ncl udi n g i nsuli n g l uca g Ons t h y r Oi d g l ucOcOrti cOi ds and estr O g en.Ke y words~MG-CO A reduct ase str uct ure re g ul ati On04动物医学进展2006年第27卷第2期总第148期HMG-CoA还原酶的结构和调节作者：李文全， 王子花， 申瑞玲， LI Wen-quan， WANG Zi-hua， SHEN Rui-lin作者单位：山西农业大学动物科技学院,山西太谷,030801刊名：动物医学进展英文刊名：PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE年，卷(期)：2006,27(2)被引用次数：2次1.Ness G C;Keller R K;Pendleton L C Feedback regulation of hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity by dietary cholesterol is not due to altered mRNA levels 19912.Chambers C M;Ness G C Dietary cholesterol regulates hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase gene expression in rats primarily at the level of translation[外文期刊] 19983.Humphries S E;Tata F;Henry I The isolation,characterizations,and chromosomal assignment of the gene for human 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase(HMG-CoA reductase) 19854.Ness G C;Wiggins L;Zhao Z Insulin increases hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase mRNA and immunoreactive protein levels in diabetic rats 19945.Shefer S;Nguyen L B;Salen G Differing effects of cholesterol and taurocholate on steady-state hepatic HMG-CoA reductase and cholesterol 7-hydroxylase activities and mRNA levels in the rat 19926.Duckworth P F;Vlahcevic Z R;Studer E J Effect of hydrophobic bile acids on 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity and mRNA levels in the rat 19917.Ness G C;Holl R C Degradation of HMG-CoA reductase in rat liver is cholesterol and ubiquitin independent[外文期刊] 20058.Song B L;Russell A DeBose-Boyd,Ubiquitination of 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase in permeabilized cells mediated by cytosolic elanda putative membrane-bound ubiquitin ligase 20049.Shimomura I;Bashmakov Y;Shimano H Cholesterol feeding reduces nuclear forms of sterol regulatory element binding proteins in hamster liver[外文期刊] 199710.Ness G C;Chambers C M The diurnal variation of hepatic HMG-CoA reductase activity is due to changes in the level of immunoreactive protein 199611.Hen H;Shapiro D J Nucleotide sequence and estrogen induction of Xenopus laevis 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase 199012.Carlson S E;Mitchell A D;Carter M L Evidence that physiologic levels of circulating estrogens and neonatal sex-imprinting modify postpubertal hepatic microsomal 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity 198013.Simonet W S;Ness G C Post-transcription regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase mRNA in rat liver:Glucocorticoids block the stabilization caused by thyroid hormones 1989 14.Simonet W S;Ness G C Transcriptional and post-transcriptional regulation of rat hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase by thyroid hormones 198815.Sample C E;Pendleton L C;Ness G C Regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase mRNA levels by l-triiodothyronine 198716.Ness G C;Lopez D;Chambers C M Effects of l-triiodothyronine and the thyromimetic L-94901 on serumlipoprotein levels and hepatic low-density lipoprotein receptor,3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzymeA reductase and apo A-I gene expression[外文期刊] 1998(1)17.Ness G C;Zhao Z;Wiggins L Insulin and glucagons modulate hepatic 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity by affecting immunoreactive protein levels 19941.郜玉钢.杨鹤.于英.臧埔.李璠瑛.刘霞.张连学人参HMGR基因的克隆与序列分析[期刊论文]-吉林农业大学学报2010(5)2.杨鹤.郜玉钢.李璠瑛.张连学人参皂苷等萜类化合物生物合成途径及HMGR的研究进展[期刊论文]-中国生物工程杂志 2008(10)本文链接：/Periodical_dwyxjz200602011.aspx。
EMP TCA
6. 底物水平的磷酸化
1. 丙酮酸的去路
四. 糖酵解产物的去路
(1)在无氧或相对缺氧时 —— 发酵
有两种发酵：酒精发酵、乳酸发酵
酒精发酵：由葡萄糖 → 乙醇的过程
丙酮酸脱羧酶需要TPP作为辅酶。
1. 丙酮酸的去路
四. 糖酵解产物的去路
(2)在无氧或相对缺氧时 ——乳酸发酵 乳酸发酵：由葡萄糖 → 乳酸的过程
二、TCA循环
Step 8. 苹果酸至草酰乙酸（再生）
Oxaloacetate is regenerated!
2. TCA循环的总反应
二、TCA循环
每经历一次TCA循环 有2个碳原子通过乙酰CoA进入循环，以后有2个 碳原子通过脱羧反应离开循环。
有4对氢原子通过脱氢反应离开循环，其中3对
由NADH携带，1对由FADH2携带。
碳 源 乙酰CoA → 2CO2
1GTP → 1ATP
能 量 3NADH → 3ATP×3 = 9ATP 1FADH2 → 2ATP×1 = 2ATP 共 12ATP
由乙酰CoA氧化产生的ATP中，只有1/12来自底
物水平的磷酸化，其余都是由氧化磷酸化间接产生
3.能量的化学计量
二、TCA循环
碳 源
（2）[G-1-P]低（因不断被利用）
所以，反应向正方向进行。
2. 淀粉的磷酸解
四、淀粉的降解
淀粉磷酸化酶从淀粉的非还原端开始，一 个一个地磷酸解a-1,4-糖苷键，直到距分支
点4个葡萄糖基为止。
所以，如果是支链淀粉，还需要另外两
个酶的参与，即转移酶和脱支酶。
2. 淀粉的磷酸解
四、淀粉的降解
2. 淀粉的磷酸解
四、淀粉的降解