植物组织培养技术考试要点.docx
植物组织培养考试快速复习
外植体：在植物组织培养过程中，由植物体上切取的根、茎、叶、花、果、种子等器官以及各种组织、细胞或原生质体等统称为外植体。
热处理脱毒：利用病毒和植物细胞对高温忍耐性不同，选择适当的高温处理染病植株，使植株体内的病毒部分或全部失活，而植株本身仍然存活。
平板培养法：是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。
消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。
玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。
脱毒苗：是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。
灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。
褐变：是指外植体在培养中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，有时使整个培养基变褐，从而抑制其他酶的活性，影响材料的培养。
纸桥培养：将培养基中放入滤纸，再将材料置于滤纸上进行培养称为纸桥培养。
微尖嫁接：指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖以培养脱毒苗的技术。
主要程序：无菌砧木培养—茎尖准备—嫁接—嫁接苗培养—移栽。
植物组织培养：在无菌和人工控制的环境下，利用适当的培养基，对离体的植物器官，组织，细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
脱分化:成熟的细胞转变或回复到分生状态的过程，而进行分裂形成愈伤组织的过程。
极性:细胞的结构或物质分布形成轴性梯度，产生不对称极的特性。
脱分化：也称去分化，指离体条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或不分化细胞的过程。
母液:俗称苦卤是在化学沉淀或结晶过程中分离出沉淀或晶体后残余的饱和溶液。
驯化:在人工选择条件下，生物体的性状向人类所要求的方向变化的过程。
初代培养基：是指用来第一次接种外植体的培养基。
组培考试复习题word版
●广义的快速繁殖：可包括植物组织快速繁殖，全光照育苗法，根颈扦插法等1、植物组织培养的一般概念定义：无菌条件下，在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞以获得再生植株等的过程、方法。
组织培养具有如下优点：（1）快速（2）周年生产（3）不变异（4）投资少，经济效益高（根据培养材料的分）植株培养，器官培养（胚、子房、花药、根等），茎尖分生组织培养，愈伤组织培养，悬浮细胞培养，原生质体培养外植体：由活体植物上切取下来进行培养的组织或器官。
技术水平：植株、胚胎、器官、组织、细胞、原生质体。
愈伤组织（c a l l u s）：原指植物受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。
在组培中指在人工培养基上从外植体上长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
●空白培养：主要用于无菌外值体的建立阶段，只含糖不加任何营养元素的培养。
●初代培养：外植体的第一次培养。
●继代培养：第二次以上的培养(由转入新的培养基上继续培养)胚性细胞（E C）：保持着未分化状态和旺盛的分裂能力的一类细胞，这类细胞彼此相似、细胞核大、细胞质浓稠、细胞间无间隙，主要分布于胚及各种顶端分生组织中。
位置效应：植物离体活组织，延续表现出来原生长部位的形态和特性的现象。
因此，要根据培养目的选择适宜的外值体.分化：细胞在形态、结构和功能上发生永久性的适度变化的过程。
脱分化：成熟的细胞转变为分生状态，进而分裂形成无分化的细胞团，即形成愈伤组织的过程。
再分化：脱分化后的细胞再次分裂、分化并形成不同组织、进而构成器官和植株的过程。
再分化过程的两种方式：（1）器官发生方式：（2）无性胚胎方式：组织培养的难易规律●生长点细胞》形成层细胞》薄壁细胞》厚壁细胞》纤维细胞》退化细胞●种子》花器》茎下部组织》茎中部组织》冠内部枝叶》冠外部枝叶●组培时间长的植物》组培时间短的植物植物组织培养技术的应用●1、优质种苗的快速无性繁殖：●（1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖●（2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗：如草莓、香蕉、甘蔗、马铃薯、大蒜等。
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1.植物组织培养按培养对象分为______ 、 _______ 、________ 、 ________ 、________ 等几种类型。
2.一个己停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成耒分化的愈伤组织的现象称为n tv3.不同的灭菌剂其灭菌的机理一般不一样，次氯酸钙和次氯酸钠都是利用分解产生 _________ 来杀菌的；升汞是靠 ________ 来达到灭菌日的。
4.去除植物病毒的主耍方法是 _____ 和_______ 两种方法，当把二者结合起來脱毒效果最好5.在通过微茎尖培养脱毒时，外植体的大小应以成苗率和脱毒率综合确定，一般以 __________ mm、带 ________ 个叶原基为好。
6.White培养基________ 浓度低，适合生根培养。
7.一个已停止分裂的成熟细胞转变为_________ 状态，并形成_________ 的现象称为“脱分化”。
8.BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进 ________ 的生长，这时_________ 占主导地位；比值高促进_________ 的生长，这时 _________ 占主导地位。
9.进行植物组织培养最基本的前提条件是 _____ 。
1、植物组织培养的理论基础是植物细胞全能性。
2、组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、空调机、夭平、显微镜、蒸饱水发生器等。
3、糖在植物组织培养中是不可缺少的，它不但作为离体组织赖以生长的碳源，而且还能维持培养菇渗透压4、培养基灭菌一般在-108 kPa的压力下,锅内温度达121 °C ,维持20-30 min o5、在离体叶培养中，6・BA和KT利于芽的形成:24D利于愈伤纟FI织的形成6、在离体叶组织脱分化和再分化培养屮，茎和芽的分化主要有4个途径：方•接产生不泄芽、由愈伤组织产工不定芽、胚状体形成、形成球状体或小鳞茎等途径。
7、目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径是茎尖培养脱毒。
植物组织培养复习重点
组培复习材料一、名词解释1、培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。
2、液体培养：把细胞或生物体的一部分，置于液体培养基中使其发育，并不断振荡，使之均匀地在悬浊液中进行培养的一种方法。
3、种子培养：是成熟种子和发育不全的未成熟种子的无菌培养。
4、叶培养：从母体植株上将叶组织（包括叶原基在内）切下，放在无菌的人工条件下使其生长发育形成植株的技术。
5、热处理脱毒：在一定范围内，用高温处理可部分或完全钝化植物组织中的某些病毒而不伤害或很少伤害植物本身的脱毒方法。
6、花药培养：是把花粉发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花粉的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成杯状体，然后再生植株，或形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。
7、连续培养：是利用特别的培养容器进行大规模细胞培养的一种培养方式。
（培养过程中，不断注入新鲜培养基，排掉等体积用过的培养基，或者抽取悬浮培养物，使培养物的营养物质得到不断补充，从而保持其恒定体积的培养。
——8、分批培养：指把细胞分散在一定容积的培养基中进行培养，建立单细胞培养物的培养方式。
（细胞生长在固定体积的培养基中，当主要营养物质耗尽时，细胞的分裂和生长即停止。
）二、简答题1、MS培养基特点。
答：MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，具有高含量的氮、钾，尤其是硝酸盐用量大，还有一定数量的铵盐，其养分的数量和比例合适，不需要添加更多的有机附加物，就能满足植物组织对矿质营养的要求，加速愈伤组织和培养物的生长，当培养物就不转移时仍可维持其生存。
目前应用最广泛。
2、植物组培生产特点。
答：①和传统的生产方式相比，具有不占耕地、生产不受季节限制而且能够整年连续进行、不受灾害性天气和病虫害影响的特点；②具有人为可控性，可采用更适合于植物生长的“培养基”代替土壤提供养分和生长调节物质；③具有很高的生产效率。
植物组织培养考试提纲(09生本)
植物组织培养考试提纲（09生本）一、名词解释：1植物细胞全能性；2初代培养；3继代培养；4体细胞胚；5胚的培养；6外植体；7驯化现象；8玻璃化苗；9愈伤组织；10脱分化；11再分化；12人工种子；13褐化现象；14器官培养，15原生质体培养； 16基本培养基；17完全培养基。
二、填空、选择、判断、简答、问答从下面提纲中出题1植物组织培养的定义、特点、发展简史（看最主要的部分）2.再分化分为四个水平，分别是什么？3.植物组织培养实验室的组成、无菌操作室、超净工作台种类及使用注意事项、化学实验室包括那些实验室？培养室定义及要求4.植物组织培养的最适温度、光照、光周期、强度、湿度、培养基的pH值5.常用灭菌方法及其适用范围、培养基的灭菌方法及注意事项6.接种前的准备及接种操作7.培养基的大量元素、微量元素分别是什么，铁盐有什么特点，怎么配制，碳源主要是哪些，使用浓度；维生素有哪些；什么是肌醇，作用是什么；主要添加什么氨基酸；天然复合物有哪些；8.琼脂的成分是什么，有什么特点，加入量通常是多少，、活性炭有什么作用？9.抗氧化物的作用及有哪些抗氧氧化剂？10.生长素类物质有哪些，作用分别是什么，怎样配制？细胞分裂素类物质有哪些，作用是什么，怎样配制？11.MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基的发明时间、发明人及特点12.培养基的母液分几种，分别怎么配制？13培养基配制的具体操作，高压蒸汽灭菌的原理；干热灭菌、过滤灭菌怎样操作及培养基的保存。
14.外植体选择应注意哪些方面，外植体灭菌常用的化学药品有哪些，及使用浓度、使用时间；外植体灭菌的步骤及茎尖、茎段以及叶片的灭菌方法。
15.植物离体快繁的概念、意义及优点16.污染的来源、种类及如何防止17外植体的褐变的原因及克服措施；试管苗玻璃化的概念及特点及克服措施。
18.试管苗的特点及提高移栽成活率的措施19.优良的愈伤组织有哪四个特点，愈伤组织分几个时期，特点是什么20.体细胞胚胎发生培养有什么意义，概念及含义，Haccius曾对体细胞胚胎做了组织学的定义有三点，分别是什么？体细胞胚与天然的合子胚的区别（教学课件中）。
生物技术实践 专题3--植物组织培养 常考知识点整理和练习
《植物的组织培养技术》1．植物组织培养的理论基础：细胞全能型。
2．植物组织培养的流程：离体的植物组织或细胞→愈伤组织→根或芽等器官3．愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
4．离体的（高度分化的）植物组织或细胞形成愈伤组织的过程，称为脱分化（去分化）。
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养形成根或芽等器官的过程叫做再分化。
再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
5．生物个体发育过程中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程叫细胞分化。
6．细胞分化本质：基因选择性表达。
7．植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
8．菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝（生长旺盛嫩枝）作材料。
9．植物的组织培养的培养基：MS 培养基。
10．MS 培养基营养的（一般情况下只有①～⑤）成分：①大量元素是N 、P 、S 、K 、Ca 、Mg ，②微量元素是Fe 、Mn 、B 、Zn 、Cu 、Mo 、I 、Co ，③植物激素，④蔗糖，⑤琼脂，⑥有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素等。
（大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
）11．植物激素主要是生长素和细胞分裂素，是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
在培养基使用顺序 实验结果 生长素／ 细胞分裂素比值与结果先生长素，后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 比值高时 促根分化，抑芽形成先细胞分裂素，后生长素 细胞既分裂也分化 比值低时 促芽分化，抑根形成同时使用 分化频率提高 比值适中 促进愈伤组织生长12．植物组织培养的影响因素：PH 、温度、光等。
13．MS 培养基采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
(完整版)植物组织培养试题及答案总结
《绪论》复习题及参考答案一、填空：★1、根据培养的材料，植物组织培养分：愈伤组织培养、器官培养、细胞培养、原生质体培养、悬浮培养等类型。
2、植物组织培养的发展分为三个阶段：萌芽阶段、奠基阶段和快速发展和应用阶段。
3、1902年，Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说，1934年，White出版了《植物组织培养手册》从而使植物组织培养为一门新兴学科。
二、名词解释：★1、植物组织培养(plant tissue culture)：是指通过无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。
由于培养材料已脱离了母体，又称为植物离体培养（Plant culture in vitro）。
2、脱分化（dedifferentiation）：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。
3、再分化（redifferentiation）：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官，这一过程称为植物细胞的再分化。
★4、外植体(explant)：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。
包括各种器官、组织、细胞或原生质体等★5、愈伤组织(callus)：原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则的薄壁细胞，多在植物体切面上产生。
三、问答题：1、简述植物组织培养的理论依据？植物组织培养的理论依据是细胞全能性学说，即植物体的每一个细胞都携带有一套完整的基因组，并具有发育成为完整植株的潜在能力。
★2、植物组织培养有哪些特点？（1）培养条件可以人为控制（2）生长周期短，繁殖率高：（3）管理方便，利于工厂化生产和自动化控制：★3、植物组织培养的分类？（1）根据培养对象不同：组织培养、器官培养、胚胎培养、细胞培养、原生质体培养等；（2）根据培养物培养过程：初代培养、继代培养；（3）根据培养基的物理状态：固体培养、液体培养。
植物组织培养复习重点
考试重点（大部分是课后作业）：题型：填空，判断，名词解释，问答（1）植物组织培养的广义和狭义概念？答：广义概念是指对植物的器官，组织，细胞及原生质体进行离体培养的技术。
狭义概念是指对植物的组织（如分生组织，表皮组织、薄壁组织等）及其培养产生的愈伤组织进行离体培养的技术。
（2）植物组织培养分类及其主要特点？答：根据外植体来源和培养对象不同，植物组织培养的研究类型可以分为5种，分别是器官培养，组织培养，细胞培养，胚胎培养，原生质体培养。
主要特点：⑴无菌条件；⑵成分完全确定的人工培养基；⑶起始材料处于离体状态；⑷克隆；⑸组培苗叶片表面一般都缺乏角质层或蜡质层，且气孔都是张开的；⑹环境温度、光照强度和时间等都是人为设定的；（3）植物组织培养的应用及展望？答：应用：植物离体快繁，无病毒苗木培育，培育新品种或创制新品种，次生代谢物生产，种质资源保存及制作人工种子。
展望：组培容器大型化，组培技术简单化，组培环境自然化（4）细胞全能性、脱分化、再分化概念？答：细胞全能性：离体细胞在适当条件下分化形成再生植株的能力。
脱分化：也称去分化，是指在离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。
再分化：是指离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化，形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至形成完整植株的过程。
（5）植物激素配比模式？答：生长素/细胞分裂素：高有利于根的形成；中无定向结构生长；低有利于芽苗生长；（6）体细胞胚胎发生的概念、方式、机理和特点？答：概念：植物离体培养细胞产生胚状体的过程。
方式：直接途径：从外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎。
间接途径：外植体先脱分化形成愈伤组织，再从愈伤组织的某些细胞分化出体细胞胚胎。
机理：特点：①双极性；②（与母体组织或外植体的维管束系统无直接联系，处于较为孤立状态，）即存在生理隔离。
组培考试重点
1.名词解释愈伤组织；原生质体；再分化；外植体；离体器官发生；污染；植物无糖组织培养；看护培养；胚状体；连续培养细胞全能性；脱分化；植物组织培养；褐化；植物脱病毒；植物器官培养；人工种子；细胞悬浮培养；脱毒苗；植物离体快繁；玻璃化；继代培养；植物离体快繁2.填空题1.植物组织培养过程中，最常用的培养基是？常用？和？调节pH，大多数植物的pH要求调节在？范围内。
2、植物组织培养按培养对象分为？、？、？、？、？等几种类型。
3、在原生质体的酶溶液中，需要加入一定量的？，其作用是保持原生质体膜的稳定。
4、培养基的灭菌要求压力为？、温度为？、维持时间为？。
5、组织培养中常用的有吲哚乙酸（IAA），2，4-二氯苯乙酸（2，4-D），吲哚丁酸（IBA），萘乙酸（NAA），它们的作用强弱顺序为？> ？> ？> ？。
6、在细胞培养中，常由分散性较好的_____？__ 来制备单细胞，也可以用____？___ 从植物不同组织直接制备单细胞。
7、活性炭在植物组织培养中的作用是？。
8、组织培养植株的再生途径有两条：一是？发生，另一是？发生。
9、可以通过？、？、？、？、？等措施预防褐变的发生。
10、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质预热不稳定，不能使用？的灭菌方法，而要采取？方法灭菌。
11、悬浮培养的材料必须达到？、？和？等三个要求。
12、植物组织培养技术的三大难题分别为？、？和？。
13、6-BA/NAA的高低决定了外植体的发育方向，比值低时促进？的生长，这时？占主导地位；比值高时促进？的生长，这时？占主导地位。
14、具有防止褐变作用的维生素是？。
3.判断题1. 环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发，一般要求80%-90%的相对湿度。
（）2. 幼年细胞比成年细胞和组织诱导愈伤组织更容易。
（）3. 一般来说，光照强度较强，幼苗容易徒长，而光照强度较弱幼苗生长的粗壮。
( )4. 培养基中的铁盐，常用不易分解的乙二胺四乙酸铁螯合物，以防在PH较高时铁被氧化为不溶的氢氧化铁。
植物组织培养重点粗略整理
题型：填空15分选择20分判断10分名词解释20分简答35分附加题未知一般培养基不含哪种维生素：培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
培养基部分名称解释：微室悬滴培养：利用表面张力将细胞培养液置于一张盖玻片表面制成悬滴，将组织或器官外植块接种培养液中，然后翻转盖玻片使外植块及培养液悬挂在盖玻片下，再置放于一凹形载片之上，最后用熔蜡密封盖玻片四周后放入培养箱中培养的技术。
外植体由活植物体上切取下来的可以用于组织培养的组织或器官。
外植体是指植物离体培养中的各种接种材料。
包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
愈伤组织在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、无规则）。
体细胞胚（体胚）体胚-离体培养下没有经过受精过程，但经历了胚胎发育过程所形成的胚的类似物，统称为体细胞胚或胚状体。
体胚还可以从花药或花粉培养、离体器官培养、单细胞悬浮培养中产生。
体胚来源于根、茎、叶和它们的组织和细胞，经离体培养而发生的类胚结构，染色体组为两套，可发育成为正常植物体。
胚性感受态植物组织或器官对外界环境条件所存在的特殊反应状态。
脱分化再分化脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。
再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程。
指示植物对病毒反映敏感，症状特征显著的植物指示植物法将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。
即指示植物法。
特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。
试管内生根试管(瓶)内诱导茎芽生根形成小苗时期试管外生根瓶外生根技术把生根诱导与驯化培养有机地结合起来，有效缩短育苗周期，节约生产成本，提高了移栽成活率，是一项值得应用与推广的技术。
植物离体保存将离体培养的植物细胞、组织、器官或试管苗，保存于人工环境下，一般需要在低温或超低温条件下进行，以抑制其生长，达到长期保存的目的。
植物组织培养考点突破
Ｄ．未受 精 的 卵发 育 成 植株
／ Ｉ 播 芽发育成枝条、 Ｉ 根尖分生区 发育成成熟
区， 是体 内分化 的器官和组织形成 了机体 的一部分 ， 并没有形成完整的生物体 。未受精的卵发育成植物 体 ， 自然情况下 的形成过程 ， 是 没有 涉及人工操作 。
ｃ 充足 的 光 照
Ｄ． 宜 的 养料 和激 素 适
（ ）要 进 行 激 素调 控 。 当 细 胞 分 裂 素 的效 应 高 ３
于生长素时 ，主要诱导植物组织 再分化和芽原基 的 植物组织脱分化 和根原基 的形成 。 （ ） （ ）要控制好光照 。 ４ 脱分化形成愈伤组 织时 ， 需
避 光 处 理 。再 分 化 形 成 植 物 幼 苗 时 ， 则需 光 照 处理 。
生 物 ・
簿 ■ ｌ 一 ，
织
口
１ ．植物 组 织 培 养 的理 论 基 础 与 过 程
２．植 物 组 织 培 养 操 作 注意 点
理 论 基 础 ： 度 分 化 的植 物 细胞 具 有 全能 性 。 高 高
（ ）恰当选择外植体 。 分化难易 因植物种类 、 １ 脱
度分 化的植物 细胞 表现 出全能性 的条件 ：离 体 、 营 器 官 来 源 及 生 理 状 况 的不 同而 有 差 异 。 花 和 幼 嫩 的 组织脱分化较为容易 ， 而植 物 的茎 、 和成 熟 的 老 组 叶 养 、 素 、 菌 、 宜 的 温度 和 ｐ 等 。 激 无 适 Ｈ
篝素
ｃ
能 力突 破
１ 胡萝 卜 皮部 细胞培养成 幼苗时 ， 列条 ．将 韧 下 例 ２ 甘薯种植 多年后 易积 累病毒 而导致品 种 件 中不需要 的是 （ ）
退 化 。 目前 生 产 上 采 用 茎 尖 分 生 组 织 离体 培 养 的 方 法 快 速 繁 殖 脱毒 的 种 苗 ．以保 证 该 品 种 的品 质 和 产
植物组织培养重点
一、名词解释（20）1、植物组织培养:是指用无菌方法，使植物体的离体器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、分生组织、花药组织、韧皮部、皮层等）和细胞（体细胞和生殖细胞）在人为提供的条件下生长和发育的培养技术的总称。
2、细胞全能型:离体的体细胞，具有母体植株的遗传物质，在适宜的条件下，能按其母株的表型完整地加以表达。
在形态建成上具有再生成完整植株的潜势，在代谢上具有合成原植物体所含有的代谢产物的能力。
3、培养基:人工配制的、适合于植物生长发育的“人工土壤”。
它含有植物生长所需的各种无机营养元素、有机营养元素、水分、植物生长调节物质以及培养基的支持体等。
4、母液（贮备液）:在组织培养工作中，配制培养基是日常工作，为简便起见，将配方中的药品一次称量供一段时间使用，即配一些浓溶液，用时稀释，这种浓溶液就是贮备液或母液5、外植体:组织培养的外植体，大致可分为带芽的外植体和由分化组织构成的外植体两大类。
带芽的外植体：茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等组织。
由分化组织构成的外植体：根、茎、叶等营养器官及花药、花瓣、花轴、花萼、胚珠、果实等生殖器官，它们是由薄壁组织构成的外植体，通过培养，大都有一个分化状态回复到分生组织状态的脱分化过程。
6、快速繁殖:在无菌条件下，利用植物体的一部分，包括细胞，组织或器官，在人为控制的营养和环境条件下快速繁殖植物的方法.7、腋芽（顶芽）萌发:腋芽萌发又称器官型再生，是指由培养的顶芽或腋芽直接萌发形成小茎后，再诱导小茎生根而形成完整植株的过程。
8、胚状体发生型:是指外植体在适宜的培养环境中，形成类似于合子胚结构的胚状体或体细胞胚。
9、不定器官发生型:离体培养条件下不定器官的发生可以通过直接或间接途径由外植体表面分化出不定芽或不定根等器官，并进一步发育成完整植株。
10、原球茎形成型 : 原球茎形成型是兰属植物特有的再生植株途径。
兰属植物外植体接种于培养基上，经过一段时间的培养便能形成原球茎，然后每一个原球茎可以进一步发育成完整植株，且原球茎可以进一步增殖。
植物组织培养考试重点
植物组织培养考试重点第一章1植物离体培养：通过无菌操作，把植物细胞或其他类型的外植体，接种于人工配置的培养基上，给予人工控制的环境条件，使培养或操作对象表现生长发育等生命活动。
2细胞全能型：细胞具有该有机体的全部遗传信息，并具有形成有机体所有细胞类型的能力。
3园艺植物生物技术的应用领域一在细胞工程的应用；1良种繁育，使繁殖系数大，周年生产，繁殖速度快，苗木整齐一致。
2离体种质保存，克服常规保存方法占用大量土地或消耗大量人力物力等缺点，并方便种质资源的地区和国际交换，避免病虫的人为传播。
3细胞工程育种，培育园艺新品种，克服远缘杂交育种障碍。
4有用物质的生产，大规模的细胞发酵罐培养生产药物，食品，调料香精等日用化工品。
二基因工程运用：作为园艺作物改良的有效手段之一。
三：分子标记运用，加快育种速度，降低选育种的成本，有效提高品种改良的成效。
四：在植物学基础研究上的应用：进行遗传多样性的分析，系谱分析，基因表达及调控的研究等。
4细胞脱分化：指外植体中已分化的细胞，在切割损伤和培养物内外因素作用下，逐渐丧失其原有的分化了的结构和功能，合成代谢变得旺盛，细胞壁由厚变薄，细胞内部结构发生变化，细胞高度液泡化，回复到分生组织状态，形成无组织的细胞团或愈伤组织的过程。
5器官分化：指培养条件下的组织或细胞团分化形成不定根，不定芽等器官的过程。
6胚胎发生：指从合子到成熟胚的发生发育过程，所形成的的胚称为合子胚。
7.离体胚胎发生和器官发生有何异同：自然条件下的器官分化是受植物体本身的自主调节控制，而在离体培养条件下，器官分化则是在人工辅助条件下完成的，有3个生长阶段，第一，外植体经过诱导形成愈伤组织。
第二，形成生长中心（也成为拟分生组织）。
第三，器官原基及器官形成、体细胞胚是离体培养的产物，体细胞胚起源于非合子细胞，体细胞经历了胚胎发育过程，与器官发生形成个体的途径不同。
第二章外植体：用于接种培养的各种离体的植物材料，包括胚胎材料，各种器官，组织，细胞，原生质体等。
植物组织培养技术考试要点
名词解释植物组织培养：是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程。
培养基：是离体植物(外植体)赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。
污染：在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。
褐变：在组培过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢而死亡的现象。
玻璃化：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。
脱分化：已有特定结构与功能的植物组织，在一定的条件下，细胞改变原来的分化状态，失去原来的结构和功能，转变为具有分生能力的细胞，这个过程称为脱分化。
再分化：在愈伤组织生长到一定阶段后即可通过更换培养基或改变培养条件，诱导促使其中的“芽点”或“原始胚状体”逐渐发育成一个幼小的植物体，这一过程就叫做再分化。
愈伤组织：植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经脱分化等一系列过程，转变为分化细胞，继而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。
驯化：开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象称为“驯化” 。
种质：亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。
植物种质保存：利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中含有的遗传物质保持其遗传完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。
常温保存：在常温( 20± 5)O C 条件下，通过改变培养基中某些营养物质的浓度，改变培养的环境条件，可达到种质保存的目的。
低温保存：低温保存也称为缓慢生长保存，是通过改变培养基和环境条件使培养基的生长降到最低限度，又不致死亡，以达到延长保存时间的目的。
超低温保存：也称为冷冻保存，主要是指在液氮的超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜的条件下细胞可迅速繁殖，再生出新的植株，并保持原来的遗传特性。
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名词解释植物组织培养：是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程。
培养基：是离体植物（外植体）赖以生长、分化的基础，是根据植物的需求，人工配制的含有各种营养成分的营养液。
污染：在组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。
褐变：在组培过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢而死亡的现象。
玻璃化：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。
脱分化：已有特定结构与功能的植物组织，在一定的条件下，细胞改变原来的分化状态，失去原来的结构和功能，转变为具有分生能力的细胞，这个过程称为脱分化。
再分化：在愈伤组织生长到一定阶段后即可通过更换培养基或改变培养条件，诱导促使其中的“芽点”或“原始胚状体”逐渐发育成一个幼小的植物体，这一过程就叫做再分化。
愈伤组织：植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经脱分化等一系列过程，转变为分化细胞，继而转变形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，称为愈伤组织。
驯化：开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象称为“驯化”。
种质：亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质。
植物种质保存：利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中含有的遗传物质保持其遗传完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。
常温保存：在常温（ 20± 5）O C 条件下，通过改变培养基中某些营养物质的浓度，改变培养的环境条件，可达到种质保存的目的。
低温保存：低温保存也称为缓慢生长保存，是通过改变培养基和环境条件使培养基的生长降到最低限度，又不致死亡，以达到延长保存时间的目的。
超低温保存：也称为冷冻保存，主要是指在液氮的超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜的条件下细胞可迅速繁殖，再生出新的植株，并保持原来的遗传特性。
1、简述植物组织培养技术的主要特点。
（1）基础理论植物组培的基础理论是植物细胞全能性的理论，即每个细胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件适合的情况下能够发挥该物种的各种功能和具有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。
（2）技术特点无菌培养和外植体培养（3）生产特点①不占用耕地，生产不受季节控制②周年连续生产，不受灾害天气和病虫害限制③生长环境可人工控制并人为创造2、植物组培的意义和作用主要有哪些？（1）培育新品种的有效手段（2）种质资源保存的有效方法（3）去除病毒、真菌和细菌等病害和无性系的快速繁殖（4）促进有机物的生产和生理学的研究3、简述通用实验室的构成和用途。
此区包括药品储存室、洗涤室、培养基配制室和灭菌室等。
（一）药品储存室药品储存室主要存放组织培养常用的各种化学试剂，如无机盐、有机物、生长调节剂、消毒剂及各种生化试剂等。
（二）洗涤室洗涤室用于清洗各种培养器皿、用具及培养材料等。
（三）培养基配制室培养基配制室用于培养基的配制、分装、封口，以及培养基灭菌前暂时存放。
（四）灭菌室灭菌室用于培养基、器皿、工具的灭菌消毒工作。
4、接种室包括哪些设备和用具？接种室又称无菌室，是进行菌种分离和接种的专用房间，室内安装一空调，使室温可控，接种室外面设缓冲间门不宜对开，最好安装滑动门窗，接种室内的地面和墙壁要求光滑洁净，室内根据要求配置一定数量的超净工作台、接种用的小推车以及接种工具和消毒用的乙醇、酒精灯等，室内和缓冲间装紫外线灯和日光灯。
5、培养设备是什么，主要包括哪些？培养设备是指专为培养物创造适宜的光、温、水、气等条件的设备，包括：空调器、定时器、恒温器、增湿机或去湿机、培养架、摇床或旋转床、光照培养箱、照度计及温、湿度计。
6、简述一个标准组培实验室应具备设施。
（1）玻璃器皿和其他实验器皿的清洗和储存（2）培养基的制备、灭菌和存放（3）植物材料的无菌操作（ 4）将接种材料培养在适宜的温度、湿度和光照条件下（ 5）培养材料的细胞学及解剖学观察、实体照相、切片观察7、玻璃器皿的清洗的总体要求、标准和不同玻璃器皿的清洗方法。
(1)总体要求：有机物、油脂等污物去掉（2）标准：瓶壁透明发亮，内外碧水膜均一，不形成水珠（ 3）不同器皿的清洗①新器皿1%稀 HCl 浸泡 12h，再用肥皂水洗净，清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗 1 遍，晾干后备用②用过器皿先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用温肥皂水或洗洁精洗净，清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗 1 次，晾干后备用③污染器皿在 121O C 高温蒸汽灭菌30min 后，倒去残渣，用清水冲洗，蒸馏水，晒干，有菌斑用毛刷刷净，再用清水冲洗干净，，浸泡于浓的重铬酸钾洗涤液中，浸泡 2 小时，清水冲洗后用蒸馏水洗，晾干8、组织培养工厂有哪些厂房和场地组成？各自的功能和作用是什么？组培育苗工厂一般划分为以下几个生产车间：培养瓶清洗车间、培养基母液调配车间、培养基制备车间、无菌操作车间、培养车间、炼苗温室和苗圃。
（1）培养瓶清洗车间可承担大量的培养器皿如三角瓶、试管、培养皿等的洗涤与试管苗出瓶工作。
（2）培养基母液调配车间已知的培养基组成成分不下10 种，为了减少工作量，提高工作效率，在配制培养基时，一般先配成比所需浓度高10~100 倍的母液，配制使用时可按比例稀释。
（3）培养基制备车间完成培养基配制、分装、包扎和高压灭菌等工作。
（4）无菌操作车间也称接种车间，是组培工厂最核心和关键部分。
（5）培养车间将接种的材料在人为控制温度、湿度和光照等条件下进行培养生长的场所。
（6）炼苗温室和苗圃①炼苗温室创造适宜温度条件②苗圃直接向社会提供各种良种壮苗，可根据市场信息、林业生产等需要灵活安排各种林业苗木、观赏花卉等的育苗计划。
9、组织培养工厂有哪些主要设备？这些设备各有什么作用？（1）超净工作台是一种提供局部无尘无菌工作环境的单向流型空气净化设备。
（2）高压蒸汽灭菌锅最基本的灭菌装备，用于培养基的灭菌。
（3）培养架摆放大量培养物，以利于大量生产的需要。
（4）照明光源补充植物光合作用的需要。
10、培养基的成分主要有哪些？主要包括 5 大类：无机养分、有机养分、植物生长调节物质、糖（碳源）以及介质或载体（纸桥或琼脂等），此外还含有大量的水分，可提供植物所需的碳、氢、氧，配制培养基时一般用离子交换水、蒸馏水或重蒸馏水。
11、什么是外植体？如何进行外植体的选择？外植体是指第一次接种用的植物材料。
（1）选择合适的部位木本植物、较大的草本植物采取茎段，本身矮小或缺乏显著的茎的草本植物采用叶片、叶柄、花葶或花瓣等作外植体，满天星、勿忘我、情人草和菊花等都是带芽的材料作为外植体。
（2）取材季节合理多年生植物—生长期取材，特别是春芽一年生植物—幼嫩组织（3）考虑器官的生理状态和发育年龄幼嫩年龄的组织器官更适于组培（4）选择合适大小的外植体0.5— 1cm（5）选择健壮的植株（6）选择优良的种质（7）选择合适的植物种类双子叶＞单子叶、草本＞木本12、外植体的接种主要有哪些技术步骤？（1）在接种前 4h 用甲醛熏蒸接种室，并打开室内紫外灯进行灭菌。
（2）在接种前 20min ，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯。
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等。
（4）上工作台后，用乙醇棉球擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面。
（5）先用乙醇棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干。
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等。
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min 。
若连续接种，每 5 天要大强度灭菌 1 次。
13、简述培养基配制的主要技术步骤。
①将已配种好的各种母液按顺序排好，根据母液倍数或浓度计算和吸收相应量的各种母液和生长调节物质；计算和称取琼脂和蔗糖。
②由于琼脂较难溶解，所以先在烧杯或量杯中放入一定量的水，加入琼脂，在电炉上加热并不断搅拌，使之溶解。
③按照大量元素、微量元素、铁盐、有机物和生长调节物质母液的顺序倒入已融化的琼脂中，继续加温，不断搅拌，使之均匀溶解。
若母液在贮藏过程中产生沉淀或结晶，或是变色，则不能使用，应重新配制。
④加入蔗糖，待蔗糖溶解后，加水定容至所需体积。
⑤调整培养基的pH 。
大多数的园林植物都要求在pH5.6~5.8 的条件下进行组织培养。
一般用1mol /L 的 HCl 或 1mol/L 的 NaOH 调节。
⑥培养基的分装：一般占培养容器的1/4~1/3 为宜。
14、外植体为什么褐变？如何防止其褐变？（1）原因由于外植体中的酚类化合物与多酚氧化酶作用被氧化形成褐色的醌类化合物，醌类化合物在酪氨酸酶的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，导致组织代谢紊乱，生长受阻，最终逐渐死亡。
（2）措施①正确选择外植体②选择适宜的培养基③创造合适的培养条件④连续转移15、配制母液的原则。
（1）相同类型试剂混合（2）容易形成沉淀的药剂要分开（3）母液浓度适宜（4）用量认真计算核对（5）药品准确称量16、用于外植体灭菌的常用药剂有哪些？各自特点如何？最常用的是次氯酸钠，所需的灭菌时间稍长，但性质比较温和，对植物材料杀伤较轻，比较灭菌的材料经常用它，但灭菌的彻底程度不如氯化汞，使用质量浓度2%，灭菌时间 5~30min 。
氯化汞相对灭菌效果最好，但必须较严格地掌握灭菌时间，并需多次无菌水冲洗才能洗脱表面附着的残液，否则植物材料易产生毒害或受到强烈抑制，使用质量浓度0.1~1%，灭菌时间 5~30min 。
乙醇使用体积分数 70~75% ，灭菌时间 0.2~2min 。
17、各种植物组织器官的灭菌方法。
消毒程序外植体备注前处理消毒冲洗茎段自来水冲洗后， 70%2%次氯酸钠溶液中无菌水冲洗 3~4 次以茎段或顶芽为外乙醇中浸泡数秒浸泡 15~30min植体叶片自来水冲洗后， 70%0.1% 氯化汞溶液中无菌水反复冲洗，吸以叶片或叶柄切段乙醇中浸泡数秒浸泡 1min ，再在 2%干过多的水分为外植体次氯酸钠溶液中浸泡 15~30min器官自来水冲洗后， 70%2%次氯酸钠溶液中无菌水冲洗 3~4 次，以芽眼或内部器官乙醇中浸泡数秒浸泡 20~30min无菌滤纸吸干水分为外植体果实70% 乙醇中浸泡数2%次氯酸钠溶液中无菌水冲洗 3~4 次培养幼胚获得植株秒浸泡 10min或取果肉为外植体种子70% 乙醇中浸泡数10% 次氯酸钙浸泡无菌水冲洗 3~4 次，以萌芽的幼苗各部分钟，无菌水冲洗20~30min ，再用 1%无菌滤纸吸干水分位为外植体的溴水浸泡5min18、组培中污染原因有哪些？如何预防？（1）①微生物细菌感染材料带菌或培养基灭菌不彻底②操作人员不慎工作人员使用了未经充分灭菌的工具及呼吸时呼出的细菌，或手接触材料或器皿边缘，使微生物落入材料或器皿③器械环境周围环境不清洁或空气不洁净，灰尘很多，或超净工作台的过滤装置失效，培养用器皿口径过大，瓶口边缘污染真菌（2）①防止材料带菌②外植体灭菌③玻璃器皿的灭菌④金属器械灭菌⑤布质制品灭菌⑥操作室培养室⑦操作人员严格按照无菌操作规范操作19、玻璃化的原因及预防措施。