弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响

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单抗制备小鼠免疫SOP

单抗制备免疫一、材料准备：弗式完全佐剂（complete Freunds adjuvant，CFA）弗氏不完全佐剂（incomplete Freunds adjuvant，IFA）实验动物：小鼠（Balb/c）雌性，8周以上,体重20g以上每种抗原蛋白免疫小鼠4只靶抗原：具有免疫原性的抗原或蛋白质、多肽，生理盐水抗原要求：抗原要尽量在无毒无刺激溶液中（PBS或生理盐水），纯度大于80%，浓度1mg/ml以上，总量大于2mg。

抗原尽量是可溶性抗原，溶液为PBS，如必需加入刺激物质，SDS浓度在0.5%以下，尿素在2M以下，不含咪唑，丙烯酰胺等变性剂，要求溶液澄清，无沉淀。

二、实验步骤1.抗原准备：每只小鼠按照100ug/100ul蛋白质或多肽置于生理盐水中制备成抗原。

2.抗原-佐剂的准备：将抗原液与佐剂混合制成乳状液，抗原与佐剂混合按照1：1比例进行，加入搅拌子后于4度搅拌过夜。

注射量为200ul 每只小鼠，抗原量为100ug。

第一次免疫使用弗氏完全佐剂，以后加强使用弗氏不完全佐剂，最后一次加强不加佐剂，免疫前采集阴性血做为对照，乳化因考虑损失，多计算两只小鼠的量。

乳化完全判断标准：挤出一滴乳状液滴于冷水表面以检测乳状液是否稳定，如果液滴散开则继续混合操作直至稳定的乳状液形成。

将乳状液移入1ml注射器。

3.小鼠免疫：将小鼠放在鼠笼上，拉住小鼠尾尖部，背部75%酒精消毒，针头15度角刺入小鼠皮下，挑起注射。

皮下注射共200ul，分5个点（背部皮下任意点）4.冲击免疫：如计划在免疫3d后进行细胞融合实验，则使用水相溶解的游离抗原进行直接脾脏免疫。

过程：将小鼠在固定架上固定，脾脏位置毛剪掉并消毒，快速分别剪开外皮和内皮，将脾脏拉出，吸取100ul/100ug抗原注入脾脏内，并快速用手术线分别缝合内皮和外皮。

5.小鼠阳性血清采集：尾部剪尾采血20ul，用生理盐水稀释10倍，离心收集上清。

6.效价检测：间接法检测小鼠多抗血清效价。

完全弗氏佐剂预防NOD鼠胰岛炎和糖尿病的机理研究

Research Laboratory of Hepatobiliary Disease,The Second Affiliated Hospital,Hunan Medical University,Changsha,410011
【Abstract】 Objective To study the effects and significance of Bax protein and heat shock protein 70 (HSP70) in prevention of insulitis and diabetes by complete Freund's adjuvant (CFA) in female NOD mice. Methods 5 female NOD mice of CFA-treated group were injected into the pad of hind foot with 50 μl CFA and 5 female NOD mice of control group with 50μl normal saline (NS) at 4 weeks of age. They were sacrificed at 30th week of age or when diabetes occurred. The pancreatic tissues were routinely processed and HE-stained and scoring of insulitis was done under optical microscopy. The Bax oncoprotein and HSP70 were stained with ABC immunohistochemical method and the counts of positive cells in islets were finished under high power field. Results The incidence of in-insulitis and the average score of insulitis were significantly lower in CFA-treated mice than that in NS-treated mice (P＜0.01). None of CFA-treated mice and 3 out of 5 NS-treated mice developed diabetes. The positive rate of Bax oncoprotein in islet cells was significantly lower in CFA-treated mice than that in NS-treated mice, the positive rate of HSP70 in islet cells was significantly higher in CFA-treated mice than that in NS-treated mice. Positive correlation was found between the positive rate of Bax oncoprotein in islet cells and the score of insulitis (r=0.613), and negative correlation between positive rate of HSP70 in islet cells and the score of insulitis (r=-0.913) was also revealed. Conclusion CFA can reduce insulitis severity and decrease incidence of diabetes in NOD female mice. CFA is able to inhibit the expression of Bax oncoprotein and induce the expression of HSP70 in islet技术公司进口，鼠抗人HSP70单抗(1/100)、兔抗人Bax蛋白多抗(1/100)、生物素标记羊抗鼠IgG或羊抗兔IgG(1/300)和ABC试剂盒(1/500)均购自Sigma公司，DAB-HCl为瑞士进口分装。

弗氏佐剂使用方法

弗氏佐剂使用方法弗氏佐剂是一种广泛应用于实验动物免疫接种的添加剂，能够增强疫苗的免疫原性，提高疫苗的效果。

在使用弗氏佐剂时，需要注意以下使用方法：一、弗氏佐剂的分类与选择1. 根据成分可分为油剂弗氏佐剂和水剂弗氏佐剂。

油剂弗氏佐剂主要包括油酸钠和胆固醇等，适用于油溶性抗原；水剂弗氏佐剂主要包括氢氧化铝和磷酸铝等，适用于水溶性抗原。

2. 根据剂型可分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。

不完全弗氏佐剂主要适用于初次免疫，添加比例一般为0.5%-5%；完全弗氏佐剂适用于加强免疫，添加比例一般为1%-5%。

二、弗氏佐剂的使用步骤1.准备抗原：根据实验需要，制备相应浓度和纯度的抗原溶液。

2.配制弗氏佐剂：根据实验需求，将弗氏佐剂与抗原溶液混合，充分搅拌，确保抗原充分吸附。

3.免疫接种：将配制好的弗氏佐剂-抗原混合物接种到实验动物体内，如小鼠、大鼠等。

接种部位可选择腹腔、皮下、肌肉等。

4.观察与监测：在免疫过程中，定期观察实验动物的生长状况、疫苗反应等，以评估疫苗效果。

三、弗氏佐剂的注意事项1.严格无菌操作：弗氏佐剂在使用过程中，应确保无菌操作，避免细菌污染。

2.适量使用：根据实验动物的体重、年龄等因素，合理控制弗氏佐剂的用量，避免过量导致不良反应。

3.观察动物反应：在免疫过程中，密切观察实验动物的反应，如食欲、精神状态等。

一旦发现异常，应及时处理。

4.储存条件：弗氏佐剂应存放在密封容器中，置于阴凉、干燥处，避免高温、潮湿。

总之，弗氏佐剂在实验动物免疫接种中发挥着重要作用。

正确选用和使用弗氏佐剂，可以提高疫苗的免疫效果，为实验研究奠定基础。

在使用过程中，要严格遵循使用方法，注意观察实验动物的反应，确保实验安全顺利进行。

动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用

动物疫苗中灭活剂与佐剂的种类及其作用摘要介绍了动物疫苗中的灭活剂和佐剂的种类及其作用,以期为灭活剂和佐剂的推广应用提供参考。

关键词动物疫苗;灭活剂;佐剂;种类;作用动物疫苗种类包括弱毒苗和灭活疫苗,在灭活疫苗生产过程中,必然涉及灭活剂和佐剂,二者的安全性和效力也决定了疫苗的质量和推广应用效果。

1疫苗灭活剂灭活是指破坏病原体的生物学特性,但尽可能避免影响其免疫原性或破坏血清中补体活性的过程。

常用的灭活剂有甲醛、β-丙内酯(BPL)或其他有效灭活剂。

1.1甲醛甲醛是一种有强烈刺激性的致癌物质,其既可作用于病毒含氨基的核苷酸碱基(如A,G,U),又可作用于病毒壳蛋白。

作用于病毒壳蛋白时,易使蛋白质发生交联或病毒颗粒聚集,不能再作用于壳蛋白内的核酸。

这样,病原体蛋白的抗原性会遭到严重破坏,并可能有病原体存活。

用甲醛灭活时间长,一般需要在37～39℃处理24h以上或更长时间,使用浓度一般为0.1%。

其灭活的效果易受温度、pH值、浓度、是否存在有机物、病原体的种类和含氮量等因素影响,残留的游离甲醛若随疫苗注入机体后,会产生制激性反应。

1.2β-丙内酯β-丙内酯(Beta-Propiolactone,BPL)在国外已广泛用于各种疫苗的灭活,是一种杂环类化合物,沸点155℃,常温下是无色粘稠状液体,对病毒具有很强的灭活作用。

能作用于病原体DNA或RNA,改变病毒核酸结构达到灭活目的,而不直接作用于蛋白,不破坏病原体的免疫原性。

大剂量β-丙内酯(BPL)虽是一种致癌物,但极易水解,在37℃水浴水解2h后消失,其水解为无毒性的人体脂肪代谢产物β-羟基丙酸。

另外,由于其能在疫苗液体中完全水解,不必考虑在成品疫苗中的残留,接种反应也轻微。

同时,β-丙内酯灭活病原时间短,从而显著地缩短了疫苗生产周期,提高了经济效益。

但与甲醛相比,价格明显昂贵,不适用于发展中国家或经济落后国家。

2免疫佐剂免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用、能增强机体针对抗原的免疫应答能力、或改变免疫反应类型的物质。

弗氏佐剂说明书

弗氏佐剂说明书
弗氏佐剂（Freund's adjuvant）是一种常用的免疫佐剂，用于增强抗原的
免疫原性，常用于制备疫苗和进行免疫学研究。

以下是弗氏佐剂的基本信息和使用说明：
1. 成分：弗氏佐剂主要包含羊毛脂和液体石蜡，有时还会加入卡介苗（BCG）或其他微生物成分。

2. 用法：在免疫动物前，将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，制备成“油包水”乳状液。

佐剂和抗原体积比一般为1：1。

制备好的乳化剂可用于免疫
注射。

3. 作用机制：弗氏佐剂的作用机制包括延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，延长抗原在体内滞留时间，有利于高亲和力抗体的产生。

此外，弗氏佐剂还能活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T细胞的相互作用，对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用。

4. 注意事项：
弗氏佐剂对动物有一定的毒性，使用时应严格按照说明书操作，避免直接接触皮肤或吸入。

储存和运输过程中应避免阳光直射和高温，选择阴凉干燥处存放。

弗氏佐剂含有羊毛脂等成分，可能会引起过敏反应，使用前应了解受试者的过敏史，如有过敏情况应及时处理。

注射后可能会引起局部和全身的不良反应，如注射部位红肿、炎症等，应密切观察受试者的反应情况，及时处理。

5. 安全性：弗氏佐剂具有一定的安全性，但也有一定的副作用和不良反应，如局部炎症、全身发热等。

因此，在实验过程中应严格控制剂量和使用条件，确保安全有效。

总之，在使用弗氏佐剂时，应严格按照说明书操作，注意安全性和有效性。

如有任何疑问或需要更多帮助，请咨询专业人士。

佐剂的免疫生物学作用

佐剂的免疫生物学作用
佐剂是一种能够增强疫苗免疫原性的物质，它能够激活免疫系统，促进疫苗的免疫效果。

佐剂的免疫生物学作用主要包括以下几个方面。

佐剂能够增强疫苗的免疫原性。

疫苗中的抗原通常是一种蛋白质，它们往往不足以激活免疫系统产生足够的免疫反应。

佐剂的作用就是增强疫苗的免疫原性，使得免疫系统能够更好地识别和攻击病原体。

佐剂能够改变疫苗的免疫反应类型。

不同类型的免疫反应对于不同的病原体具有不同的作用。

例如，细胞免疫反应能够清除细胞内寄生的病原体，而体液免疫反应则能够清除体液中的病原体。

佐剂能够调节疫苗的免疫反应类型，使得免疫系统能够更好地应对不同类型的病原体。

第三，佐剂能够增强疫苗的持久性。

疫苗的免疫效果通常是有限的，需要定期接种才能保持免疫力。

佐剂能够增强疫苗的持久性，使得免疫效果能够更长时间地持续。

佐剂能够提高疫苗的安全性。

疫苗中的抗原通常是病原体的一部分，如果疫苗的免疫原性不足，可能会导致疫苗接种后出现疾病症状。

佐剂能够增强疫苗的免疫原性，减少疫苗接种后出现疾病症状的风险。

佐剂在疫苗免疫生物学中具有重要的作用。

它能够增强疫苗的免疫原性，改变疫苗的免疫反应类型，增强疫苗的持久性，提高疫苗的安全性。

随着科技的不断进步，佐剂的种类和作用也在不断扩展，为疫苗的研发和应用提供了更多的可能性。

佐剂的免疫生物学作用

佐剂的免疫生物学作用
佐剂是指在免疫接种过程中加入的一种辅助物质，其作用是增强免疫原的免疫原性，提高接种后产生的免疫反应强度和持续时间，从而增强疫苗的免疫效果。

佐剂的免疫生物学作用主要包括以下几个方面：
1. 增强免疫原性：佐剂能够激活免疫系统，刺激免疫细胞的活性，增强免疫原的免疫原性，使其更容易被免疫系统识别和攻击。

2. 增加抗原摄取和处理：佐剂能够促进抗原在接种部位的摄取和处理，使其更容易被免疫系统中的抗原呈递细胞识别并启动免疫反应。

3. 激活免疫细胞：佐剂能够刺激免疫系统中的免疫细胞，如巨噬细胞、树突状细胞等，增强它们的活性和免疫反应能力，促进其与抗原的相互作用，从而增强免疫效果。

4. 促进免疫记忆：佐剂能够促进免疫系统中的B细胞和T细胞产生持久性的免疫记忆，使其在未来再次接触相同抗原时能够快速产生有效的免疫反应，从而增强疫苗的免疫效果和持久性。

总之，佐剂在免疫原接种中扮演着非常重要的角色，能够增强疫苗的免疫效果，提高接种后产生的免疫反应强度和持续时间，从而保证接种者的免疫保护效果。

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免疫失调(讲义)(原卷版)

4.3 免疫失调知识点1：过敏反应★★★1.过敏反应（1）定义：的机体，在再次接触相同的抗原时，有时会发生的引发或的免疫反应。

（2）机理（3）特点：过敏反应有之分；许多过敏反应有明显的和。

（4）防治：找出过敏原并且尽量避免再次接触该过敏原，若出现过敏症状应及时去医院诊断治疗。

2.过敏反应与体液免疫的比较过敏反应体液免疫激素因素..反应时机机体同种过敏原机体接触抗原抗体分布在皮肤、呼吸道、消化道黏膜、血液中某些细胞的表面、组织液反应结果使细胞释放等，从而引发过敏反应形成复合物【典例1】（2023春•岳阳期末）过敏性鼻炎（AR）是一种鼻黏膜非感染性疾病，以阵发性喷嚏、清水样鼻涕、鼻痒、鼻塞等为临床症状。

AR作为呼吸系统常见病，近年随着空气及环境质量下降，该病在全球范围内呈高发趋势，其中多见于儿童及青壮年人群，该病经药物治疗后症状可得到控制，但无法有效根治，该疾病受易感因素影响可反复发作，继而影响患者生活质量。

下列相关叙错误的是（）A．排查过敏原并避免与之接触是预防过敏性鼻炎有效的方法B．对过敏性鼻炎的过敏原检测需提取分析患者血清中的各种抗体C．再次接触过敏原时，浆细胞识别过敏原后能够分泌特异性抗体D．过敏反应中产生的抗体存在部位与一般免疫反应产生的抗体不同【变式1】（2023春•宜丰县校级期末）《美国科学院院报》杂志上发表的一项研究中，研究人员使用一种过敏原特异性抑制剂，有效地阻止了花生过敏原与IgE（一种抗体）的结合，以抑制对花生的过敏反应，在过敏反应初期，IgE和过敏原蛋白结合在肥大细胞表面，使肥大细胞释放出组织胺等化学物质，这是患者过敏反应中的第一步，也是最关键的一步。

下列相关分析错误的是（）A．过敏反应是人体免疫功能过强的一种表现，属于体液免疫B．过敏反应有快慢之分，许多过敏反应还有明显的遗传倾向和个体差异C．Ig E由浆细胞合成和分泌，参与其分泌的具膜细胞器有内质网、高尔基体和线粒体D．特异性抑制剂通过阻止过敏原与IgE的结合，促进肥大细胞释放组织胺、可有效避免人体发生过敏反应【变式2】（2023春•大荔县期末）过敏反应是一种免疫失调症状，如花粉过敏、吃海鲜呕吐腹泻，甚至有些人注射青霉素后出现胸闷、气急、呼吸困难等症状。

完全弗氏佐剂的成分

完全弗氏佐剂的成分
完全弗氏佐剂是一种用于预防和治疗动物疾病的佐剂，它由多种
成分组成。

以下是完全弗氏佐剂的成分以及其作用。

1. 矿物质与微量元素：矿物质和微量元素在动物体内发挥着重
要的生理作用，例如在体内协调传递神经信息、维持酸碱平衡。

此外，还参与多种代谢过程和酶反应，帮助机体增强免疫力。

2. 维生素：动物体内需要多种维生素，如A、C、D、E、K和B
族维生素。

维生素A有助于提高免疫功能和增强视力，维生素D有利
于钙和磷的吸收和利用，维生素B族则是合成和酵解蛋白质和糖类重
要的辅酶。

3. 氨基酸：氨基酸是蛋白质合成的主要原料，同时还能促进生
长和增强免疫力，对于动物的生长和健康至关重要。

4. 植物提取物：植物提取物是从各种植物中提取的天然化合物，具有多种生化活性，例如抗氧化、抗炎和抑菌作用等。

5. 生物活性成分：这些成分能够直接参与机体生化代谢反应，
提高机体免疫功能，促进生长发育，减轻疲劳和改善身体健康。

最后，完全弗氏佐剂除了以上基本成分外，还可能添加其他成分，以适应不同种类动物和不同的生长期需求。

这些成分可以发挥协同作用，提高佐剂的治疗效果，对于保障动物健康至关重要。

不同浓度弗氏佐剂对B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰模型建立的影响

294实验动物与比较更-学Laboratory Animal and Comparative Medicine Aug.2019,39(4) doi:10.3969/j.issn.1674-5817.2019.04.007不同浓度弗氏佐剂对B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰模型建立的影响陈阴，王佩娟，陈思，卢燕(南京中医药大学附属中西医结合医院妇产科，南京210028)［摘要］目的观察不同浓度弗氏佐剂对透明带3多肽(pZP3)诱导的B6AF1小鼠免疫性卵巢早衰(POF)模型的影响。

方法取6~8周龄雌性B6AF1小鼠80只，随机分为空白组、不完全弗氏佐剂组、完全弗氏佐剂组［含结核分枝杆菌(TB)1mg/mL)和不完全弗氏佐剂+TB(3.3mg/mL)组,应用HE染色法比较不同注射量的弗氏佐剂对POF模型小鼠免疫效果的影响。

结果免疫后模型组小鼠卵巢体积萎缩，闭锁卵泡增多，卵泡周围见间质淋巴细胞浸润。

不完全弗氏佐剂+TB(3.3mg/mL)组免疫效果最好，完全弗氏佐剂组次之。

结论不同浓度弗氏佐剂联合pZP3均可诱导B6AF1小鼠成功构建POF疾病模型，引起免疫性卵巢炎;含高浓度TB造模效果较好。

［关键词］卵巢早衰(POF);弗氏佐剂；结核分枝杆菌(TB);透明带3多肽(pZP3);B6AF1小鼠；卵巢炎［中图分类号］Q95-33［文献标识码］A［文章编号］1674-5817(2019)04-0294-04卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指40岁之前由于卵巢内卵泡耗竭或破坏而发生卵巢功能衰竭的一种综合征。

POF的发病率：20岁以前约为0.01%,30岁前约0.1%,40岁前约1%［1］,超过半数的本病患者貝有不良情绪英至抑郁、厌世［2］,严重影响女性身心健康，造成社会负担。

发病率的逐年升髙及病患年轻化的现状，与生育年龄的整体延后和社会对精神心理健康关注形成强烈矛盾。

本病的致病因素包括：遗传因素、感染因素、自身免疫因素、医源性损伤及精神因素等［3］，约1/3的POF的发病与自身免疫异常密切相关。

弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响

弗氏完全佐剂对小鼠细胞免疫功能的影响弗氏完全佐剂(CFA)是一种常用免疫佐剂，其提高体液免疫应答的作用已被公认，而对细胞免疫应答的影响鲜有报道。

作者测定了一些注射佐剂后小鼠的细胞免疫应答指标，同时测定体液免疫指标对CFA剂量作一监测，报告如下。

1材料和方法1.1实验材料1.1.1实验动物昆明种小鼠24只，由本校实验动物室提供。

1.1.2主要试剂弗氏完全佐剂，为sigma公司生产。

1.2实验方法1.2.1CFA对小鼠产生抗卵黄抗体水平的影响昆明种小鼠24只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，8只/组，以5倍稀释鸡卵黄为抗原。

免疫方法及程序见表1。

表1卵黄抗原免疫程序组别注射物第1天第4天第10天佐剂组佐剂(ml)0.2抗原(ml)0.20.2非佐剂组抗原(ml)0.20.2空白对照组生理盐水(ml)0.20.20.2注：以上均为背部皮下多点注射末次注射7 d后，将小鼠眼球取血并分离血清，用ELISA方法测定待检血清中抗卵黄抗体：鸡卵黄抗原5倍稀释包板，待检血清1∶10稀释，HRP-SPA按说明书配制。

1.2.2CFA对小鼠足跖肿胀的影响实验动物及免疫程序同表1，末次注射6 d 后每只小鼠右后掌皮下注射卵黄(5倍稀释)0.02 ml/只致敏，第2天测量其足的后掌至踝关节体积(ml)，并与小鼠自身左后足体积作对照，计算足肿率，如下：足肿率(%)=免疫后右足体积-自身左足体积自身左足体积×100%1.2.3CFA对小鼠碳粒廓清实验的影响昆明种小鼠16只，体质量18～22 g，雌雄随机分组，分为佐剂组与对照组，8只/组。

佐剂组小鼠腹腔注射CFA 0.2 ml/只，对照组腹腔注射无菌生理盐水0.2 ml/只，1 w后给2组小鼠分别经尾静脉注射20%墨汁0.2 ml/只，注射后1 min与5 min于小鼠眼球采血20 μl，置于2.0 ml 0.1%碳酸钠溶液中混匀，于680 ml波长下测定A值，并按如下公式计算K值：K=logA5-logA1[]T5-T1=[SX(]logA5/A1[]4[SX)]1.3统计分析数据均采用SPSS统计软件进行组间t检验，方差不齐时行t′检验。

弗氏完全佐剂制备

弗氏完全佐剂制备【一、弗氏完全佐剂的概述】弗氏完全佐剂（FCA，Freund"s Complete Adjuvant）是一种广泛应用于疫苗研究和动物实验的佐剂。

它可以增强疫苗的免疫原性，诱导机体产生更强的免疫应答，从而提高疫苗的保护效果。

弗氏完全佐剂由抗原、免疫剂和辅助剂组成，其制备方法相对简单，但在操作过程中需要注意一些细节。

【二、弗氏完全佐剂的制备方法】1.原材料：弗氏完全佐剂的主要原材料包括抗原、免疫剂和辅助剂。

抗原可以是蛋白质、多糖或核酸等，免疫剂通常为氢氧化铝（Al(OH)3），辅助剂主要有油酸、石蜡油等。

2.操作步骤：（1）将抗原与氢氧化铝混合，充分搅拌，使其形成均匀的悬浊液；（2）将石蜡油与水混合，加热至充分溶解，然后与氢氧化铝抗原混合物混合，再次搅拌均匀；（3）将混合物冷却至室温，缓慢加入油酸，持续搅拌，直至形成稳定的乳状液；（4）用滤纸过滤，除去杂质，得到弗氏完全佐剂。

3.注意事项：（1）抗原与氢氧化铝的比例要适当，过低免疫原性不足，过高则会导致佐剂性能不稳定；（2）在搅拌过程中，速度不宜过快，以免产生气泡，影响最终产品的质量；（3）加入油酸时，要缓慢均匀地加入，以免出现油水分离现象；（4）制备过程中需严格无菌操作，避免细菌污染。

【三、弗氏完全佐剂的应用领域】弗氏完全佐剂广泛应用于疫苗研究、免疫学实验和生物制品研发等领域。

通过加入弗氏完全佐剂，可以提高疫苗的免疫原性，增强机体对病原体的抵抗力，从而预防和控制多种疾病。

【四、弗氏完全佐剂的优点与局限性】优点：1.免疫原性强，能有效提高疫苗的保护效果；2.制备方法简单，易于操作；3.适用范围广泛，几乎可用于所有抗原的免疫实验。

局限性：1.有一定的副作用，可能导致注射部位疼痛、红肿等；2.对于某些抗原，可能出现过敏反应；3.储存和运输条件要求较高，不耐高温，易受微生物污染。

【五、总结】弗氏完全佐剂作为一种重要的疫苗佐剂，在疫苗研究和动物实验中具有广泛的应用。

弗氏完全佐剂制备

弗氏完全佐剂制备摘要：1.弗氏完全佐剂的定义与分类2.弗氏完全佐剂的主要成分3.弗氏完全佐剂的制备方法4.弗氏完全佐剂的作用与应用5.弗氏完全佐剂的注意事项正文：一、弗氏完全佐剂的定义与分类弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效地诱导产生高滴度的抗体。

它含有结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。

根据成分的不同，弗氏佐剂分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。

完全弗氏佐剂含有杀死的结核分枝杆菌，而不完全弗氏佐剂则不含细菌。

二、弗氏完全佐剂的主要成分弗氏完全佐剂的主要成分包括不可代谢的油（石蜡油和甘露醇单油酸酯）以及杀死的结核分枝杆菌。

其中，油滴中免疫原的持续释放是佐剂活性的来源，能够刺激局部免疫反应。

三、弗氏完全佐剂的制备方法弗氏完全佐剂的制备过程较为简单。

首先，将石蜡油和甘露醇单油酸酯混合，形成油包水的乳浊液。

然后，将杀死的结核分枝杆菌加入乳浊液中，即可得到完全弗氏佐剂。

四、弗氏完全佐剂的作用与应用弗氏完全佐剂的作用主要是通过刺激局部免疫反应，增强抗原的免疫效果。

它被广泛应用于疫苗制备和免疫学研究中，尤其是结核病疫苗的制备。

五、弗氏完全佐剂的注意事项1.本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗和食品及药品行业。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴手套操作。

在使用过程中，应注意避免吸入或接触到眼睛和皮肤。

3.实验动物应按照相关规定进行饲养和操作，确保实验结果的可靠性。

总之，弗氏完全佐剂是一种具有良好免疫效果且制备简单的佐剂，广泛应用于疫苗制备和免疫学研究领域。

小鼠免疫器官实验心得

小鼠免疫器官实验心得步骤：1、准备等体积PBS 含25～100 μg 抗原和弗氏完全佐剂的乳化液（200～400 μl/鼠）。

用双头带塞的连接器连接两个注射器，一个注射器装抗原，另一个装佐剂。

来回推压注射器，使得其内容物从一侧到另一侧注射器，推压 5～10 min 直到得到稳定的乳化液。

2、用 22－G 的针给小鼠腹腔注射（每一个抗原 3～5 只小鼠）。

3、3 周后，用等体积的含 10～50 μg 抗原的 PBS 和不完全弗氏佐剂配制成（200～400 μl）的乳化液再次腹腔注射。

4、第二次免疫后 7 天，用无菌剪刀或剃毛刀片切掉小鼠尾巴0、5 cm 采血。

收集 100～200 μl 血装于1、5 ml 的微量离心管。

将小鼠放在产热灯下 30～60 s 保暖或用拇指和食指挤压尾巴可以方便采血。

5、血块形成后，用木制涂棒把血块从管和表面移走，不要弄破血块。

移走血块后，用200μl 的移液器把血清装入另一微量离心管。

经 ELISA 确定血清抗体滴度。

如有需要，用免疫印迹，进一步对抗体定性。

6、如果滴度太低不能用于融合（≥1/1000），每两周给小鼠加强免疫直至达到足够的应答。

如果采血超过 3 次，用剃毛刀切开一侧尾静脉采血。

7、当抗体滴度足够高时（≥1/1000），融合前3 天，但要在前一次免疫的 2 周后，用含 10～50 μg 抗原的 PBS 溶液腹腔注射（200～400μl）或经皮下尾静脉（50～100μl）注射加强免疫。

8、在强化免疫的 3 天后进行细胞融合。

心得：1、免疫防御（Immunological defence)：是机体排斥外来抗原性异物的一种免疫保护功能。

正常：可产生抗感染的作用(清除病原微生物及其他抗原)；异常：应答过强或持续时间过长——超敏反应；应答过弱——免疫缺陷疾病。

2、免疫监视（Immunological surveillance）：指免疫系统及时识别、清除体内突变、畸变和病毒感染细胞的一种生理保护作用。

弗氏完全佐剂肌肉注射诱发炎性痛敏及免疫应答的转录组测序分析

弗氏完全佐剂肌肉注射诱发炎性痛敏及免疫应答的转录组测序分析石惊涛;张晓宁;曹婉萦;何伟;刘一寒;王睿;宿杨帅;万红叶;曲正阳;景向红;王晓宇【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2022(32)6【摘要】目的观察弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)肌肉注射后1~15 d的炎性反应,明确免疫应答反应的发生,通过分析转录组学的差异,为肌肉炎性反应及其诱发的痛觉敏化研究提供重要的参考。

方法90只Wistar大鼠随机分为正常组和CFA注射后第1天(MD1)、第3天(MD3)、第5天(MD5)、第7天(MD7)、第9天(MD9)、第11天(MD11)、第13天(MD13)和第15天(MD15)模型组。

在模型组大鼠左侧股二头肌肌腹注入200μL的CFA,观察各组大鼠左侧足底的机械痛阈值和热痛阈值变化;采用电化学发光法检测各组大鼠肌肉组织和外周血中炎性因子的含量;使用HE染色对正常组、MD3和MD13组大鼠注射侧局部肌肉组织进行形态学观察;采用基因组学的方法,分析这两组大鼠差异基因的表达。

结果(1)股二头肌肌肉注射CFA可诱发同侧足底持续的机械痛敏和热痛敏。

(2)CFA肌肉注射后24 h后,外周血和局部组织中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量明显升高,局部组织中促炎因子含量在注射后第13天再次明显升高。

(3)在CFA注射后第3天局部组织以中性粒细胞浸润为主,在CFA注射后第13天则以单核细胞浸润为主。

(4)与MD3组相比,MD13组大鼠局部组织中与免疫反应相关的差异表达基因上调,其中涉及到Th细胞的分化、细胞因子受体相互作用等与适应性免疫相关的生物学通路。

(5)CFA注射后局部组织中痛敏相关基因的表达水平升高,包括Ccl3、Cxcl1、Cxcl2、Cxcl9、Cxcl10等基因。

结论CFA的注射可有效刺激固有免疫和适应性免疫的发生,诱导炎性痛敏,其中不同趋化因子家族基因在不同的免疫应答中发挥了重要的作用。

弗氏佐剂与氢氧化铝佐剂对诱导小鼠获得性免疫应答作用的比较

弗氏佐剂与氢氧化铝佐剂对诱导小鼠获得性免疫应答作用的比较潘萌;蒋浩琴;周芸;郑捷【期刊名称】《现代免疫学》【年(卷),期】2006(26)2【摘要】为研究、比较不同佐剂对诱导小鼠产生获得性免疫应答的不同作用,以卵清白蛋白(OVA)为抗原,分别混合完全弗氏佐剂(CFA)或Al(OH)3佐剂,对C57BL/6小鼠进行常规免疫,采用流式细胞技术对细胞内细胞因子IFN-γ和IL-4进行检测;ELISA方法对特异性抗OVA抗体滴度及抗体亚型进行了检测。

结果显示在免疫后CFA组产生以IFN-γ为主的细胞因子而Al(OH)3组产生以IL-4为主的细胞因子;两组中均产生特异性抗OVA IgG抗体,但CFA组以IgG2a亚型为主,而Al(OH)3组则以IgG1亚型为主,不产生IgG2a亚型抗体。

实验表明,经CFA加抗原免疫后机体产生的免疫应答以Th1型细胞免疫为主,抗体类型为IgG2a;而Al(OH)3佐剂则诱导机体产生Th2型细胞免疫应答,抗体类型为IgG1。

【总页数】4页(P98-101)【关键词】弗氏佐剂;Al(OH)3佐剂;Th1;Th2细胞因子;抗体型别【作者】潘萌;蒋浩琴;周芸;郑捷【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院皮肤科;上海交通大学医学院上海市免疫学研究所【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.057 以氢氧化铝或弗氏完全佐剂为佐剂的全身免疫能诱导保护性抗螺杆菌免疫[J],2.Ⅱ型胶原蛋白与弗氏佐剂诱导关节炎小鼠模型的建立 [J], 周夏娟;应旭旻3.4-苯基咪唑+氢氧化铝复合佐剂对甲型肝炎减毒活疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响 [J], 马静;王海漩;李思瑾;何慧;胡凝珠;胡云章4.空肠弯曲杆菌与弗氏完全佐剂诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的建立 [J], 刘文斌;杨秀敏;周宁;王月华;张海霞;任德成;杜冠华5.不同氢氧化铝佐剂剂型辅助卵清蛋白诱导小鼠变应性鼻炎的效果比较 [J], 王黎源; 袁圆; 李成; 崔智君; 张敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

福氏完全佐剂包裹 IL-2及(或)5-FU 对小鼠 S180肿瘤抑瘤作用的初步研究

福氏完全佐剂包裹 IL-2及(或)5-FU 对小鼠 S180肿瘤抑瘤作
用的初步研究
黄晋生;刘为纹;刘新垣;范佩芳;袁爱力
【期刊名称】《实用肿瘤杂志》
【年(卷),期】1992(7)4
【摘要】福氏完全佐剂(FCA)通常用来包裹抗原免疫动物制备抗体,而 FCA 本身还有刺激动物细胞免疫和体液免疫的功能。

Ito 等人率先用福氏佐剂包裹化疗药物,配合肝动脉栓塞,肌注 IL-2,来治疗原发性肝癌,并取得较好效果。

而用 FCA包裹 IL-2,或同时包裹化疗药物及 IL-2进行抗肿瘤实验者,目前尚未见报道。

我们进行了有关的实验研究,现将结果报道如下。

【总页数】3页(P235-237)
【关键词】福氏完全佐剂;抗癌药
【作者】黄晋生;刘为纹;刘新垣;范佩芳;袁爱力
【作者单位】重庆第三军医大学西南医院消化科;上海生物化学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R979.1
【相关文献】
1.生鹅血对小鼠移植瘤S180抑瘤作用初步实验研究 [J], 刘巍;张春艳;马占好;柴新
2.戴氏绿僵菌提取物对小鼠肿瘤S180抑瘤活性研究 [J], 王良宏;熊晓丽;程萍;刘杰
麟
3.5—Fu福氏佐剂包裹物抗肿瘤作用的实验研究 [J], 刘松青; 黄晋生; 等
4.福氏佐剂包裹肿瘤坏死因子及/或5-Fu对小鼠艾氏腹水癌的抑瘤作用 [J], 黄晋生;刘为纹;刘新垣;范佩芳
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完全和不完全福氏佐剂的作用

完全和不完全福氏佐剂的作用以抗原免疫动物获得抗血清是制备抗体的经典方法。

为了提高免疫效果，在免疫的时候，常辅以佐剂以改变抗原的物理状态而延长其在体内的滞留时间，使抗原缓慢释放，同时非特异性的促进局部吞噬细胞反应来增强动物的免疫效果。

佐剂的类型较多，目前常用的还是福氏佐剂(Freund’s Adjuvant，FA)。

它是一种对大多数抗原都有效的佐剂，但由于它的一些副作用限制了它在实验动物上的使用。

因此，福氏佐剂只能在确实需要的情况下(如使用的抗原为小分子可溶性抗原或半抗原)和强佐剂活性时使用。

FA是用矿物油(石蜡油)、乳化剂(羊毛脂)和灭活的分枝杆菌(结核分枝杆菌或卡介苗)组成的油包水乳化佐剂。

这三种成分俱全的佐剂称为福氏完全佐剂(Freund’s ComD】ele Adjuvant，FCA)，不含分枝杆菌的佐剂为福氏不完全佐剂(Freund’s InconrpleteAdjuvant，FIA)。

石蜡油因不能代谢而存留在注射的部位，这就阻碍了抗原降解或快速反应，起到抗原储存作用，使抗原缓慢持续的释放，不断刺激机体的免疫系统而产生免疫反应。

乳化剂对于水溶性抗原与油稳定地乳化是必要的。

分枝杆菌具有很强的免疫刺激作用，可以非特异性的激活免疫系统。

FCA用于基础注射，而FIA用于辅助注射以避免分枝杆菌蛋白引起的过敏反应。

FA皮下注射或肌内注射可导致多种副作用，例如肉芽肿和无菌性脓肿的形成。

腹腔注射引起腹膜炎。

由于这些严重的副作用，FA不允许用于人或动物的疫苗接种免疫。

传统的免疫方案，包括使用福氏佐剂和某些免疫程序，已不再被一些国家的权威机构所接受。

据调查，在荷兰有64％的研究人员使用FCA，而且，用于多克隆抗体的生产方案差异很大。

因此，在1993年，荷兰发布了利用动物免疫技术制备多克隆抗体的生产指南。

主要规定了加强免疫注射的次数、免疫途径、注射量和佐剂的使用，并且支持使用替代佐剂来替换FCA。

由于FCA给实验动物带来的严重的副反应，对它的使用提出了特别的限制，规定了(小鼠和大鼠sc：0．1nd；i．d：家兔0．o5 rI1l；i．P：小鼠0．2nd)推荐使用量和注射途径。

sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书

sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书生物商城 / 2011-02-08一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。

如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。

二、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。

不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。

不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。

一般首次注射时用1／2体积FCA 加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。

如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。

在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。

因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。

抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。

一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。

佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。

待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。

本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。

（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。