疟原虫血片制作及染色
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现在二十五页，总共四十九页。
血膜制作的注意事项
3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干 透后才能用甲醇固定薄血膜，并对厚血膜溶血。 夏天标本尽可能24~48小时内固定、溶血和染色； 冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜 越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色， 薄血膜宜先用甲醇固定，然后用蒸馏水（或过滤 的清水）对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖 严，待以后染色。
标本片
厚、薄血膜的优缺点及其适用范围
厚血膜
用血量约为4μl～5μl,涂制成直径0.8 ～ 1cm的厚血
膜,由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态 上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度 的固缩。受影响较大的有大、裂殖体的形态。
由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间
，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的15 ～25倍。所以，我们推荐疟疾诊断（门诊检验及现场普
发热期外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖 体；
出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。 发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易
辩认，为诊断的有 利时机；
发作36-48h，可检出裂殖体； 发作1-2次后，配子体出 现较多。
现在六页，总共四十九页。
血膜制作（取血时间）
恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血，发作 后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退 热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体， 是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。
各种细胞和疟原虫主要是由不同的蛋白质或类氨基酸 组成。不同的氨基酸均含有氨基（NH2）和羧基（COOH ）。在游离状态时，氨基（NH2）获得一个氢离子成为带阳 电的离子（NH3 + ）；而羧基失掉一个氢离子成为带阴电的
离子（COO — ）。
现在二十九页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
现在二十二页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或 水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防 差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中 写上血片种类的代号和受检者的个人编号 ，依次顺序插入标本盒内。
现在二十三页，总共四十九页。
血膜制作的注意事项
现在三十六页，总共四十九页。
吉氏染液染色方法：
先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固 定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进 行染色。
成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒 入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫升稀 释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟，然后用清 水注入染缸将染液通过溢出方式洗去，再用清水浸洗 1-2次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板 上，待干后镜检。
涂2个厚血膜1个薄血膜，
标 标签签
以防血膜脱落而影响检查；
标本片
疟疾调查时，每张玻片
可涂制2~3人血膜。
现在十九页，总共四十九页。
发热病人血片
厚、薄血膜的位置
每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图
2.5cm
现在二十页，总共四十九页。
现在二十一页，总共四十九页。
各种不同的疟疾血片涂制法：
现在三十七页，总共四十九页。
单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用中 性蒸馏水（或娃哈哈矿泉水）1ml，加吉氏 母液1~2滴，混合均匀后滴入血片标本上， 染色10~20分钟，然后用清水轻轻将片上的 染液冲洗干净，晾干镜检。
现在三十八页，总共四十九页。
2、瑞式染液的配制：
将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充
分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出 研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下， 每天摇动5分钟，3天后即可使用。
此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液效果 稳定，又不能大量血片染色，常用于门诊应急情况下血片 染色。
现在三十九页，总共四十九页。
瑞氏染液的染色方法：
先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴 几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去 水滴。在薄血膜上加瑞氏染液6～7滴，摇 动玻片均匀染色30秒。然后再加10～12滴 蒸馏水于薄血膜上，摇动玻片将染液与蒸 馏水混合均匀后，用吸管把染液引到厚血 膜上，使厚血膜再染色5分钟。用清水轻轻 冲去染液，晾干镜检。
现在七页，总共四十九页。
血膜制作（工具准备）
一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片，推片 ，记号笔或铅笔。
现在八页，总共四十九页。
血膜制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒 取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后 再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和 食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（ 一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂 下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻向上挤压出血。
现在十一页，总共四十九页。
现在十二页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
薄血膜
取洁净的载玻片2张，1张以左手拇指，食指夹持载 玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另1张边 缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推 片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血量（相 当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触， 并形成25~30度夹角，待血液向两侧扩展约2cm长度时 ，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5cm长）。
血膜染色 （二）染色的原理
伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质 如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶 于水的沈淀物染成红色。
美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性蛋白 质如疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白 细胞的颗粒等即可结合染成兰色。
现在三十一页，总共四十九页。
两侧留出空间 注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚
血滴小，速度慢、角度小 血膜薄
现在十八页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂 在一张载片上。方法是将载片分为6等分，第1 、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中 央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为 标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊 和发热病人血片每片1人，
美蓝的有色基团带阳离子，是一种碱性染料，用的是盐酸 美蓝。溶于水后离解为带阴电的氯离子和能着色的美蓝阳 离子。
伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是 伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的 伊红离子。
天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染媒作 用。
现在三十页，总共四十九页。
现在三十二页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
染色化学反应反应的示意图：
疟原虫细胞浆的阴离子（COO—）＋ 美蓝阳离子—→呈蓝色
┏天青（染媒作用）
疟原虫核的阳离子（NH3+）＋┫
┗伊红阴离子
－→ 呈紫红色
现在三十三页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
蛋白质本身是阴阳电荷是相等，带有两基性的。所以其 所带阴阳电荷的数量可受周围液体的酸碱度（PH）而改 变，在偏酸的溶液中阳离子增加，易于伊红结合，着色 偏红。在偏碱的溶液中阴离子增加，易于美蓝结合，着 色偏蓝。这就说明了为何配制染液的酸碱度直接影响了 血片染色的质量，偏酸着色过红，偏碱着色过蓝。所以 在染血片时稀释液要控制在PH7.2，最为适宜，疟原虫的
现在十三页，总共四十九页。
现在十四页，总共四十九页。
现在十五页，总共四十九页。
将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推 玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的 速度向2的方向滑动（约2.5cm）。
现在十六页，总共四十九页。
现在十七页，总共四十九页。
血涂片质量评价： 血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、
主要内容
血膜制作
血膜染色 影响染色效果的因素
现在一页，总共四十九页。
血膜制作（血膜分类）
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状
，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。
厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而薄血膜上的 血细胞则要求平辅在玻片上面。
门诊或现场发热病人血片
现在二页，总共四十九页。
现在九页，总共四十九页。
现在十页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4-
5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与 平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转 ，转2~4圈，再回到圆心收起，涂成直径 0.8~1cm大小圆形厚血膜。水平放置，务必使 血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检 出率的要求。
，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加
入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒 入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为止。塞紧瓶塞，充分摇匀
，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。
也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入约50个玻璃珠（直径
3 ~5mm），用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，再把吉氏粉放入漏 斗中，用甲醇缓慢地把所有染料粉冲入瓶内，塞紧瓶塞，置于 室温内，每天用力摇动5分钟，3天后即可使用。
现在二十六页，总共四十九页。
血膜染色 一、染液的种类及染色原理
染液种类： 对镜检疟原虫染色虽然种类名称很多，但都是从
罗门诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。
多色性染液可分为水溶液和醇溶液两类。水溶液类有罗 氏（Romanowsky）染液、费氏(Field)染液等；醇溶液有 吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液等。
查）应以检查厚血膜为主。
现在三页，总共四十九页。
厚、薄血膜的优缺点及其适用范围
薄血膜 用血量约为1-1.5μl，涂制成2cm宽×2.5cm长面积
的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固 定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，适用 于对疟原虫虫种的鉴定。
由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，不 适用于大规模调查。特别在医院的检验室，由于要求在 短时间内作出诊断，因而极有可能出现漏诊。
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必 须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的 边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以 及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推 出的血膜均匀一致。
现在二十四页，总共四十九页。
血膜制作的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未 干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成 血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查 结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂 等昆虫吮吸血膜，凉干后应及时装入标本盒并盖 严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让醇 、醛等物质挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白 被其固定，不能溶血导致染色效果不佳。
现在四页，总共四十九页。
血膜制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
现在五页，总共四十九页。
血膜制作（取血时间）
间日疟
前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜 检多为阴性。
发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细胞期 ，镜检多为裂殖体和环状体。
血膜染色 （二）染色的原理
美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须 由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然 也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白 细胞核等原来只能染上极淡蓝色的结构染上显著的 酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显 著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲薄的原虫核和 淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。
结构才能清晰可见。
现在三十四页，总共四十九页。
吉氏染色血片外观
现在三十五页，总共四十九页。
偏酸
标准 偏碱
血膜染色 （三）染液的配制和染色方法
1、吉氏染液的配制：
这是目前最常用的疟原虫染色剂，它具有方便、染色效果稳定的优点， 也是我们推荐的染色方法。
将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨
现在二十七页，总共四十九页。Βιβλιοθήκη 血膜染色 （一）染液的种类
醇溶液类: 有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）
染液等。是在水溶液染液的基础上改进发展 而成。目前我们推荐的是运用醇溶液类中的 吉氏（Giemsa）染液
现在二十八页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
染色原理是染料于被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一 种化学反应。
血膜制作的注意事项
3. 血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干 透后才能用甲醇固定薄血膜，并对厚血膜溶血。 夏天标本尽可能24~48小时内固定、溶血和染色； 冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜 越不易溶血，染色效果也差。若不能及时染色， 薄血膜宜先用甲醇固定，然后用蒸馏水（或过滤 的清水）对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖 严，待以后染色。
标本片
厚、薄血膜的优缺点及其适用范围
厚血膜
用血量约为4μl～5μl,涂制成直径0.8 ～ 1cm的厚血
膜,由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态 上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度 的固缩。受影响较大的有大、裂殖体的形态。
由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间
，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的15 ～25倍。所以，我们推荐疟疾诊断（门诊检验及现场普
发热期外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖 体；
出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。 发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易
辩认，为诊断的有 利时机；
发作36-48h，可检出裂殖体； 发作1-2次后，配子体出 现较多。
现在六页，总共四十九页。
血膜制作（取血时间）
恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血，发作 后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退 热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体， 是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。
各种细胞和疟原虫主要是由不同的蛋白质或类氨基酸 组成。不同的氨基酸均含有氨基（NH2）和羧基（COOH ）。在游离状态时，氨基（NH2）获得一个氢离子成为带阳 电的离子（NH3 + ）；而羧基失掉一个氢离子成为带阴电的
离子（COO — ）。
现在二十九页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。
标准血片
门诊发热病人血片 居民普查血片
现在二十二页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或 水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防 差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中 写上血片种类的代号和受检者的个人编号 ，依次顺序插入标本盒内。
现在二十三页，总共四十九页。
血膜制作的注意事项
现在三十六页，总共四十九页。
吉氏染液染色方法：
先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固 定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进 行染色。
成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒 入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫升稀 释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟，然后用清 水注入染缸将染液通过溢出方式洗去，再用清水浸洗 1-2次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板 上，待干后镜检。
涂2个厚血膜1个薄血膜，
标 标签签
以防血膜脱落而影响检查；
标本片
疟疾调查时，每张玻片
可涂制2~3人血膜。
现在十九页，总共四十九页。
发热病人血片
厚、薄血膜的位置
每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图
2.5cm
现在二十页，总共四十九页。
现在二十一页，总共四十九页。
各种不同的疟疾血片涂制法：
现在三十七页，总共四十九页。
单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用中 性蒸馏水（或娃哈哈矿泉水）1ml，加吉氏 母液1~2滴，混合均匀后滴入血片标本上， 染色10~20分钟，然后用清水轻轻将片上的 染液冲洗干净，晾干镜检。
现在三十八页，总共四十九页。
2、瑞式染液的配制：
将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充
分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出 研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下， 每天摇动5分钟，3天后即可使用。
此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液效果 稳定，又不能大量血片染色，常用于门诊应急情况下血片 染色。
现在三十九页，总共四十九页。
瑞氏染液的染色方法：
先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴 几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去 水滴。在薄血膜上加瑞氏染液6～7滴，摇 动玻片均匀染色30秒。然后再加10～12滴 蒸馏水于薄血膜上，摇动玻片将染液与蒸 馏水混合均匀后，用吸管把染液引到厚血 膜上，使厚血膜再染色5分钟。用清水轻轻 冲去染液，晾干镜检。
现在七页，总共四十九页。
血膜制作（工具准备）
一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻片，推片 ，记号笔或铅笔。
现在八页，总共四十九页。
血膜制作（取血操作）
取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头， 通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒 取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后 再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和 食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（ 一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂 下端1~2毫米，不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻向上挤压出血。
现在十一页，总共四十九页。
现在十二页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
薄血膜
取洁净的载玻片2张，1张以左手拇指，食指夹持载 玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另1张边 缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推 片一端边缘的中点从取血部分取约1微升的血量（相 当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触， 并形成25~30度夹角，待血液向两侧扩展约2cm长度时 ，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5cm长）。
血膜染色 （二）染色的原理
伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质 如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶 于水的沈淀物染成红色。
美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性蛋白 质如疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白 细胞的颗粒等即可结合染成兰色。
现在三十一页，总共四十九页。
两侧留出空间 注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚
血滴小，速度慢、角度小 血膜薄
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血膜制作（涂片操作）
涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂 在一张载片上。方法是将载片分为6等分，第1 、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中 央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为 标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊 和发热病人血片每片1人，
美蓝的有色基团带阳离子，是一种碱性染料，用的是盐酸 美蓝。溶于水后离解为带阴电的氯离子和能着色的美蓝阳 离子。
伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是 伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的 伊红离子。
天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染媒作 用。
现在三十页，总共四十九页。
现在三十二页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
染色化学反应反应的示意图：
疟原虫细胞浆的阴离子（COO—）＋ 美蓝阳离子—→呈蓝色
┏天青（染媒作用）
疟原虫核的阳离子（NH3+）＋┫
┗伊红阴离子
－→ 呈紫红色
现在三十三页，总共四十九页。
血膜染色 （二）染色的原理
蛋白质本身是阴阳电荷是相等，带有两基性的。所以其 所带阴阳电荷的数量可受周围液体的酸碱度（PH）而改 变，在偏酸的溶液中阳离子增加，易于伊红结合，着色 偏红。在偏碱的溶液中阴离子增加，易于美蓝结合，着 色偏蓝。这就说明了为何配制染液的酸碱度直接影响了 血片染色的质量，偏酸着色过红，偏碱着色过蓝。所以 在染血片时稀释液要控制在PH7.2，最为适宜，疟原虫的
现在十三页，总共四十九页。
现在十四页，总共四十九页。
现在十五页，总共四十九页。
将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推 玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的 速度向2的方向滑动（约2.5cm）。
现在十六页，总共四十九页。
现在十七页，总共四十九页。
血涂片质量评价： 血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、
主要内容
血膜制作
血膜染色 影响染色效果的因素
现在一页，总共四十九页。
血膜制作（血膜分类）
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状
，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。
厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而薄血膜上的 血细胞则要求平辅在玻片上面。
门诊或现场发热病人血片
现在二页，总共四十九页。
现在九页，总共四十九页。
现在十页，总共四十九页。
血膜制作（涂片操作）
厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4-
5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与 平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转 ，转2~4圈，再回到圆心收起，涂成直径 0.8~1cm大小圆形厚血膜。水平放置，务必使 血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检 出率的要求。
，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加
入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒 入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为止。塞紧瓶塞，充分摇匀
，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。
也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入约50个玻璃珠（直径
3 ~5mm），用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，再把吉氏粉放入漏 斗中，用甲醇缓慢地把所有染料粉冲入瓶内，塞紧瓶塞，置于 室温内，每天用力摇动5分钟，3天后即可使用。
现在二十六页，总共四十九页。
血膜染色 一、染液的种类及染色原理
染液种类： 对镜检疟原虫染色虽然种类名称很多，但都是从
罗门诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。
多色性染液可分为水溶液和醇溶液两类。水溶液类有罗 氏（Romanowsky）染液、费氏(Field)染液等；醇溶液有 吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）染液等。
查）应以检查厚血膜为主。
现在三页，总共四十九页。
厚、薄血膜的优缺点及其适用范围
薄血膜 用血量约为1-1.5μl，涂制成2cm宽×2.5cm长面积
的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固 定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，适用 于对疟原虫虫种的鉴定。
由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，不 适用于大规模调查。特别在医院的检验室，由于要求在 短时间内作出诊断，因而极有可能出现漏诊。
1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必 须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的 边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以 及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推 出的血膜均匀一致。
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血膜制作的注意事项
2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未 干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成 血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查 结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂 等昆虫吮吸血膜，凉干后应及时装入标本盒并盖 严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让醇 、醛等物质挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白 被其固定，不能溶血导致染色效果不佳。
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血膜制作（取血时间）
取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普 查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
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血膜制作（取血时间）
间日疟
前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜 检多为阴性。
发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细胞期 ，镜检多为裂殖体和环状体。
血膜染色 （二）染色的原理
美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须 由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然 也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白 细胞核等原来只能染上极淡蓝色的结构染上显著的 酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显 著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲薄的原虫核和 淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。
结构才能清晰可见。
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吉氏染色血片外观
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偏酸
标准 偏碱
血膜染色 （三）染液的配制和染色方法
1、吉氏染液的配制：
这是目前最常用的疟原虫染色剂，它具有方便、染色效果稳定的优点， 也是我们推荐的染色方法。
将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨
现在二十七页，总共四十九页。Βιβλιοθήκη 血膜染色 （一）染液的种类
醇溶液类: 有吉氏（Giemsa）染液、瑞氏（Wright）
染液等。是在水溶液染液的基础上改进发展 而成。目前我们推荐的是运用醇溶液类中的 吉氏（Giemsa）染液
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血膜染色 （二）染色的原理
染色原理是染料于被染物的阴阳离子互相吸附而结合的一 种化学反应。