洁净室沉降菌的测试方法
沉降菌测试标准操作规程
版本号
修订原因
修订日期
01
新订
附录
测试区域 测试依据 测试日期
沉降菌测试记录
编码：SOP-ZL-HJ-006-01-R1
测试人员 培养基用量
测试状态
培养时间
培养温度
报告日期
测试房间
现场操 采样点
房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
符合规定
更鞋间
PLES123
8.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个
打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
8.2静态测试时，培养皿暴露时间为30min，动态测试时，培养皿暴露时
间为不大于4h。
9、培养：取样结束后将平皿倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并
以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。
10、结果计算
培养时间
报告日期现场操 采样点Fra bibliotek房间编 作人员 布置类
号数
型
沉降菌菌落数/cfu
a b 测点1 测点2 测点3 测点4
更衣 PLEQ003
缓冲间1 PLEQ004
取样间 PLEQ005
缓冲间2 PLEQ006 阴性对照
洁净度级别
AB
C
标准
＜1 5
50
沉降菌
警戒限
-- 3
40
cfu/4小时
纠偏限
-- 4
二更2 PLEZ122
缓冲间1 PLEZ123
缓冲间2 PLEZ124
微生物限度 室
PLEZ125
净化操作台 PLEZ125
阳性对照室 PLEZ126
洁净室沉降菌的测试方法
洁净室沉降菌的测试方法洁净室是用来生产和制造高品质产品的特殊环境，需要控制空气中的微生物污染。
沉降菌测试是衡量洁净室内微生物污染水平的重要方法之一、本文将介绍洁净室沉降菌的测试方法。
1.选择合适的培养基：根据待测试的微生物类型选择适当的培养基，如悬浮菌落培养基或接触菌落培养基等。
培养基的选择要根据标准要求和实际情况来确定。
2.准备培养皿：使用无菌的培养皿，通过高温高压或紫外线照射来消毒。
将培养基倒入培养皿，接种前将培养皿密封。
3.放置培养皿：将密封好的培养皿放置在洁净室内，放置时间通常为1小时或更长，以充分收集空气中的沉降菌。
4.培养：根据培养基的要求，在适当的温度和湿度条件下进行培养。
通常在30-37摄氏度下培养24-48小时。
5.计数和鉴定：观察培养皿中的菌落数量和形态，根据标准要求进行计数和鉴定。
沉降菌的计数应该进行按规则的网格方式或无规则的计数方式。
同时，需要鉴定潜在的病原微生物，并进行鉴定和分类。
6.数据分析：根据测试结果进行数据分析，比较测试结果与洁净室微生物污染的标准。
分析结果应该包括沉降菌数量、种类和类别等。
7.制定控制措施：根据测试结果和分析，在必要时制定相应的控制措施，如增加过滤器或消毒措施等，以减少洁净室内微生物的污染。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试是一种单点测试，只能反映特定时间段和特定位置的微生物污染水平。
因此，对于一个洁净室来说，需要多次进行沉降菌测试，并在不同时间段和位置进行测试，以全面了解洁净室内的微生物污染情况。
此外，洁净室沉降菌测试还应注意以下几点：1.操作人员应具备微生物测试和洁净室操作的专业知识和技能，遵守操作规程和标准。
2.培养基的制备和培养条件的控制应严格按照标准要求进行。
3.培养皿的密封和消毒要做到无菌操作。
4.样品收集和出租的时间要有一定的规律和标准，以保证测试结果的准确性和可比性。
总之，洁净室沉降菌测试是评估洁净室内微生物污染水平的重要测试方法。
洁净室(区)沉降菌的测试方法
一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作台、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.3.3 洁净度
洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.3.4菌落
细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。
4.5.4 沉降菌计数
4.5.4.1 采样点数目及其布置
4.5.4.1.1 最少采样点数目
沉降法的最少采样点数可按表1确定。
表1 最少采样点数目
面 积m2
洁 净 度 级 别
100
10000
100000
＜10
2～3
2
2
≥10～＜20
4
2
2
≥20～＜40
8
2
2
≥40～＜100
16
4
2
≥100～＜200
40
4.3.8 非单向流（曾称为乱流）
具有多通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
4.3.9 静态测试
洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.3.10 动态测试
洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
4.4 测试方法
10
3
≥200～＜400
80
20
6
≥400～＜1000
160
40Βιβλιοθήκη 13≥1000～＜2000
400
100
32
2000
800
200
63
沉降菌的测试方法国家标准
ISC 13.040.30 C 30中华人民共和国国家标准GB/T 16294—2010代替GB/T 16294—1996医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法Test method for settling microbe in cleanroom (zone) of the pharmaceutical industry前言本标准参考了ISO 14698-1《洁净间以及相关环境控制第1部分：微生物控制》，ISO/TS 11133-1：2000（英文版）《食品和动物饲料的微生物学培养基制备和生产指南第1部分：实验室培养基制备的质量保证通用指南》。
本标准代替GB/T 16294-1996《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
本标准与GB/T 16294-1996的主要区别为：—增加了确定最少采样点数目的方法；—修改了原标准 4.8.3.2，改为“4.10.2 采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d，采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20℃~25℃培养箱中培养，时间不少于5d。
”；—本标准增加了5.8“日常监控”的内容，增加了洁净室（区）空气微生物浓度控制的纠偏限度和警戒限度的设立和如何确定取样频次的内容。
本标准的附录A、附录B是规范性附录。
本标准的附录C是资料性附录。
本标准由国家食品药品监督管理局提出并归口。
本标准起草单位：上海市食品药品包装材料测试所、中国食品药品检定研究院医疗器械检验中心。
本标准主要起草人：陆维怡、徐敏凤、冯晓明、王志敏。
本标准所代替标准的历次标本发布情况为：GB/T 16294-1996。
医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法1 范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或局部空气净化区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测试和环境的验证。
沉降菌测试方法
沉降菌测试方法1、把ф90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15m l。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养，时间不小于48小时，采样点位置离地0.8m—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10mi n后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30m i n 后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3 平均菌落数=.........21nMnM M ++ n —培养皿总数 M 1—1号培养皿菌落数 M 2—2号培养皿菌落数 M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室(区)沉降菌的测规程
1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。
2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。
3 责任QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。
4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。
4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制备过程如下：◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。
4.2.3 采样点和监测频次4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。
4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。
4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.2.4.4 测试时间：◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
沉降菌检测
微生物检测一、沉降菌：用标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
二、测试方法：采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿（一般多采用90mm直径硼硅酸玻璃培养皿，俗称沉降碟），经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
三、采集的沉降菌为静态检测。
四、所需物料：（1）90mm培养皿：72个；（2）棉拭子：10个；五、沉降菌检测步骤：1、检测布点：生物安全柜（6个）；水平层流台（6个）；调配间（8个）；一更（3个）；二更（3个）；清洗间（3个）；2、通常的检测应在风机开启至少30min以上，紫外线照射30min，关闭紫外灯后开始采样。
3、将培养皿按采样点布置逐个放置，从内向外放置，摆放距离地面不低于60cm，培养皿暴露时间不得少于30min，不得大于4h。
操作台调配间一更/二更/清洗4、全部采样结束后，将二批杨敏倒置放置，随后送至检验科进行培养（2小时内送检）；每批均应有培养基对照实验，检验培养基本身是否污染，可每批做对照实验，与采样皿同法操作但不需暴露采样。
5、注意事项：（1）布置采样点时，至少应尽量避免尘粒较集中的回风口，采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量减少走动；（2）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除；（3）采样时摆放顺序为从里向外，净化台-调配间-二更-清洗间-一更。
回收培养皿时顺序相反。
（4）从检验科取来的培养皿不用时应在冷藏柜（2-8℃）保存。
（5）净化台沉降菌检测可轮流做，不必每个净化台都做检测；（6）二更和调配间均为万级，可轮流做检测；一更和清洗间为十万级，也可轮流做检测。
6、结果测定：（1）每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准的界限；（2）在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次结果均为合格才能判为符合；（3）洁净室沉降技术要求：洁净室沉降菌技术要求六、物体表面检测项目：1、物体表面检测：对静配中心洁净区内的各物体表面（操作台面、门把手、传递窗、大小推车、洁净服等）存在的病原微生物进行监控，达到规定标准，以保证所调配的输液质量。
食品加工与检测洁净室区沉降菌的测定方法(T-NAIA 0243—2023)
I CS 67.050CCS X 09食品加工与检测洁净室（区）沉降菌的测定方法宁夏化学分析测试协会 发 布T/NAIA前言本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。
本文件起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院、宁夏计量质量检验检测研究院、宁夏回族自治区标准化研究院、宁夏百瑞源枸杞股份有限公司、宁夏夏进乳业集团股份有限公司。
本文件主要起草人：冯秀娟、李谦、苏洋、何淑桢、王晓雨、岳苑、高俊峰、简敏捷、吕晓东、滕园园、杨娜、段巧云、陈玉娜、张小飞。
本文件为首次发布。
食品加工与检测洁净室（区）沉降菌的测定方法1 范围本文件规定了食品加工与检测洁净室（区）中沉降菌测试条件、测试方法。
本文件适用于食品检测机构和食品生产企业洁净室、洁净区以及局部空气清洁作业区(包括洁净工作台)的沉降菌的测试和环境的验证。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4789.1 食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB 4789.2 食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB/T 16294医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法GB/T 27405实验室质量控制规范食品微生物检测3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1 沉降菌将培养皿暴露在环境中，收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
3.2 沉降菌菌落规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4 测试规则4.1 测试状态静态和动态两种状态均可进行测试。
测试前，被测洁净室(区)由用户决定是否需要预先消毒。
测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人员数。
沉降菌测试方法
三、钙盐
1、配制标准溶液：
称取分析纯草酸铵3.5g，定溶至100ml容量瓶，贴标签。
2、分析：取样50ml平等样2份，倒入试管中，加2ml草酸铵溶液，均不得发生浑浊。
四、二氧化碳
1、配制标准溶液：
称取分析纯氢氧化钙0.3g，定溶至100ml容量瓶，用橡皮塞塞紧，用力振摇，放置1小时，用时取清液。
2、硫乙醇酸盐流体培养基（细菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装至适宜的容器中，瓶塞封口，灭菌。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养48小时，应无菌生长。
改良马丁培养基（真菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水，煮沸，摇匀，分装，灭菌。改良马丁培养基置24℃培养72小时，应无菌生长。
一、氯化物
1、配制标准溶液：0.1mol/L硝酸银溶液。
称取1.6987g分析纯硝酸银，定溶至100ml容量瓶中，转入棕色试剂瓶中，避光保存，贴标签。
2、取样，量取50ml样品水平行样（2份）倒入试管中，加5滴硝酸，再加入1ml硝酸银。均不得发生浑浊。
二、硫酸盐
1、配制标准溶液：称取5±0.5g氯化钡（分析纯），定溶至100ml容量瓶，倒入试剂瓶，贴标签。（如果浑浊，把蒸馏水烧开，放凉再用）
临用前，精确量取铅标准贮备液稀释至所需浓度。
2、分析：取样40ml，加醋酸盐缓冲液2ml，加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟。取38ml样品水加2ml铅标液加醋酸盐缓冲液2ml加硫代乙酰胺2ml，对比颜色；40ml样品水的颜色不得比铅标液的对照管深。（铅的含量0.00005%）
八、不挥发物：
1、取干净蒸发皿200ml2个，分别标号放入105℃干燥箱中。
沉降菌测试方法范文
沉降菌测试方法范文沉降菌测试方法，也称为沉降法菌落计数法或霉菌菌落计数法，是一种用于测定液体或固体样品中微生物总数的方法。
它是通过将待测样品稀释后，将其均匀涂布在富营养培养基上，然后在适宜的条件下培养并计数菌落数量来进行的。
以下是沉降菌测试方法的详细步骤：材料准备：1.培养基：选择适合菌落生长和明显可见的适宜富营养培养基，如琼脂培养基。
2.空气采样器：使用空气采样器采集空气中的微生物样本。
3.灭菌工具：包括火焰灭菌器、灭菌锅等。
4.精密量筒：用于稀释待测样品。
步骤：1.预处理样品：a.若待测样品为液体，则需要首先将其充分混匀。
b.若待测样品为固体，则需要将其用适宜的方法制备成液体悬浮液，以保证样品中微生物的均匀分布。
2.稀释样品：a.确定合适的稀释倍数，选择合适的容器，并在其中加入适量的培养基。
b.使用精密量筒将待测样品稀释至合适的浓度。
通常情况下，稀释倍数应为10的指数倍数，如10^-1、10^-2等。
3.涂布样品：a.取一支已灭菌的玻璃棒或镊子，沾取一定量的稀释后的样品。
b.将沾有样品的玻璃棒或镊子均匀涂布在琼脂培养基的表面，确保涂布均匀、无气泡和交叉污染。
4.培养样品：a.将琼脂培养基培养皿倒置，放入已灭菌的培养皿，并将其封闭。
b.将培养皿置于适当的温度和湿度条件下，一般为28-37摄氏度。
c.培养时间一般为24-48小时，根据不同微生物种类和培养基的要求可进行相应调整。
5.菌落计数：a.取出培养好的琼脂培养基培养皿，记录上面出现的菌落数量。
b.对于数目较多的菌落，可以进行随机选择部分区域进行计数，然后乘以相应倍数估算总菌落数量。
整个过程中，需注意严格的灭菌操作以及防止交叉污染的发生。
计数结果应及时记录并进行统计分析。
沉降菌测试方法
平均菌落数=
n—培养皿总数
M1—1号培养皿菌落数
M2—2号培养皿菌落数
Mn—n号培养皿菌落数
用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
营养琼脂根据实际用量按一皿装15ml，分装几个皿来计算，灭菌。
0.9%氯化钠分装至7支试管，封口，灭菌。
3、把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下，放入0.9%氯化钠试管中摇匀，作10倍系列稀释至10-7，然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml，分别放入标号5#、6#、7#培养皿里，倒入营养琼脂摇匀，（营养琼脂不能太烫，以不烫手为准）待营养琼脂冷却后倒置放入33℃培养箱中培养48小时，48小时中取出观察计数，根据菌落数小于100cfu来决定用几号。
把细菌内毒素检查水4支外表擦净打开，倒入烧杯中，用移液管取25.8ml倒入装3只瓣膜烧杯中，用锡纸封口，放进提前打开升温至37℃恒温培养箱中，培养1.5小时。供试液贮存应不超过2小时。
注：V-浸提介质体积，单位为毫升（ml）
L-产品细菌内毒素限值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
λ-所用鲎试剂灵敏度标示值，单位为细菌内毒素单位每毫升（EV/ml）
2、标定：取在105℃干燥至恒重的基准草酸钠约0.2克，精密称定，加新沸过冷水250ml与硫酸10ml搅拌使溶解，自滴定管中迅速加入本液约25ml，待褪色后，加热到65℃，继续滴定至溶液显微红色并保持30秒钟不褪；当滴定终了时，溶液温度应不低于55℃，每1ml高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）相当于6.70mg草酸钠，根据本液消耗量与草酸钠取用量，算出本液浓度，即得。
洁净室沉降菌测试方法
文件编号
版号
A.0
洁净室(区)沉降菌检验方法
页次
生效日期
2020/01/02
1．目的
制订洁净室(区)沉降菌检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检验方法及操作。
2．适用范围
本方法适用于洁净室(区)或无菌区域（包括超净工作台）沉降菌的检测和环境的验证。
3.职责
质检部对本规程实施负责。
注：如采用其他规格的平皿，可适当增减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm厚的琼脂层。
4.6.1.3制备好的培养基平皿如需存放后使用，应标记名称、制备日期等，存放在2℃～8℃环境下，1周内使用有效。
4.6.1.4使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。
4.6.2测试步骤
≥1000～＜2000
≥2000
2～3
4
8
16
40
80
160
400
800
2
2
2
4
10
20
40
100
200
2
2
2
2
3
6
13
32
63
注：表中的面积，对于100级的净化工作台，指的是送风口面积；对于10 000级，100 000级的非单向流洁净室，指的是房间面积。
b. 在满足最少监测点数的同时，还宜满足最少培养皿数：
4.6测试步骤
4.6.1制培养皿（平板）
4.6.1.1培养基配制：按瓶签上的《用法》进行配制。以下配制量为1000ml。
a.称量：称取瓶签上《用法》标示的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的量，倒入1000ml烧杯中。
b.溶解：在装有大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的烧杯中加入蒸馏水1000ml，搅拌均匀后，加热煮沸至完全溶解。
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。
沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。
以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。
按照培养基说明制备培养基。
2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。
3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。
4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。
可以采用定期采样或连续采样的方式。
5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。
通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。
6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。
可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。
7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。
在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。
沉降菌测定
GB/T 16294--1996 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法前言本标准依照国内外药品生产管理规范(GMP)的要求,非等效采用美国国家航空及宇宙航行局NASA标准NHB5340--2关于洁净室和洁净工作台微生物的控制标准&;,并参考JGJ--90洁净室施工验收规范制定。
悬浮粒子和微生物的测试是评价医药工业洁净室和洁净区空气洁净度的主要指标.本标准用沉降菌评价洁净室和洁净区空气中的微生物。
医药工业洁净室（区）沉降菌的测试应采用本标准的规定。
本标准的附录A、附录B、附录C都是标准的附录。
本标准的附录D是提示的附录。
本标准由国家医药管理局提出并归口。
本标准起草单位：上海市医药管理局药品测试所。
本标准主要起草人：钱周、步伯荪、沈建华、顾锋、唐小珍。
1、范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。
2、引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
YY/T0188.6---1995药品检验操作规程第6部分：药品生物测定法3、定义本标准采用下列定义。
3.1 洁净室(区) clean roon(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
3.2 洁净工作台cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
3.3 洁净度 cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
3.4 菌落colony forming units细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
SOPQC-ZG-2025洁净室沉降菌的测试标准规程.doc
1.目的：根据国家标准《医药工业洁净室（区）悬浮粒子沉降菌的测试方法》2010 版建立洁净区悬浮粒子测试操作规程，确保测试员正确操作。
2.范围：洁净区沉降菌的测试。
3.责任：质控部、QA现场监督检查4.内容：4.1测试方法本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿, 经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
4.2仪器应包括：a）培养皿；b）培养基（见本标准附录B）；c）恒温培养箱；d）高压蒸汽灭菌器。
4.2.1培养皿，一般采用4）90mmX 15mm规格的培养皿。
4.2.2培养基，大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或其他用户认可并经验证了的培养基。
其配制方法见附录B。
4.2.3恒温培养箱，必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.3测试步骤4.3.1测试前培养基表面必须严格消毒。
4.3.2将己制备好的培养皿按采样点布置图（附录A）逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.3.3静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时H培养皿暴露时间为不大于4ho4.3.4全部采样结束后，将培养皿盖盖好倒置于恒温培养箱中培养。
4.3.5采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30°C~35°C培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养基经采样后，在20 °C〜25°C培养箱中培养，时间不少于5d。
4.3.6每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.4菌落计数4.4.1用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。
4.5.2若平板上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
沉降菌检测方法
沉降菌检测方法：
沉降菌检测包括动态检测和静态检测，动态即有人操作及走动，静态即无人操作走动。
做沉降菌检测时，洁净室风机打开，超净台风机打开状态。
大超净台间隔放14个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
小超净台间隔放8个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
洁净室、培养箱室高效过滤进风口下方各放一个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
培养箱最上层、最下层各放一个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
血常规室手术台对角各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
走廊高效过滤风口下各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
风淋室对角各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
二更台子上、衣柜前、门口各放一个，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；一更柜子上放三个琼脂平皿，平皿摆好后，依次轻轻打开盖子，盖子斜立于旁边；
留两个平皿做阳性（手指摁）对照，两个阴性平皿（不做处理）；
沉降30min后收平皿，标记不同位置的所有平皿后，37℃培养，3天后观察。
沉降菌一个月检测两次，实验室打扫完卫生后1-2天进行检测，每次用琼脂平皿约50-60个。
超净台检测无菌落生长为合格；培养箱检测菌落1个为合格；洁净室菌落小于等于1个为合格；风淋室小于三个菌落合格；二更小于三个合格；一更小于5个合格；阴性0个为合格。
沉降菌的测试方法
沉降菌：用标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
测试方法：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿（一般多采用90mm直径硼硅酸玻璃培养皿，俗称沉降碟），经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
人员职责：洁净室的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000以上的区域。
测试步骤：1、测试前培养皿表面必须严格消毒。
2、将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿，使培养基表面暴露在空气中。
3、静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间不大于4h。
4、全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
5、采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配置的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d。
6、每批培养基应有对照试验，试验培养基本身是否污染。
可每批选定三只培养皿作对照培养。
注意事项：1、测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
2、采取一切措施防止人为对样本的污染。
3、对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4、由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并注意细菌菌落和培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
5、采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。
测试条件：测试之前，要对洁净室相关参数进行预先测试，参数包括：1、温度和相对湿度的测试。
2、室内送风量或风速的测试或压差的测试。
3、高效过滤器的泄露测试。
测试状态：静态和动态均可进行测试。
静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
沉降菌测试前，被测洁净室由使用者决定是否需要预先消毒。
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1.目的：
本文规定了洁净室沉降菌的测试方法，以达到对其空气洁净度的评定。
2. 适用范围：
适用于洁净区中沉降菌的监测和对洁净区等级的验证。
3. 检测仪器：高压消毒锅、恒温培养箱。
4. 检测依据：
GB/T 16294—2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法
5. 测试前准备：
5.1洁净室的温度应控制在18℃～26℃，相对湿度应控制在45％～65％之间。
5.2风速或压差的测试应符合要求。
5.3静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
5.4 对单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始。
5.5对非单向流测试应在洁净空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。
5.6 采样点数目见下表
5.7 采样点的位置一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。
5.8 采样点的布置，见下图
洁净室(区)采样点布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于稀疏。
下列采样点的图示可作参考。
洁净棚(层流罩)，洁净工作台等局部空气净化设施的采样点布置：
1. 水平单向流
2．垂直单向流
5.9 最少培养皿数：见表
6. 测试要求：
6.1 将已制备好的培养皿按要求的位置放置足够的数量，打开培养皿盖，使培养皿表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
6.2 在30℃～35℃的培养箱中培养不少于48h。
6.3每批培养基应选三只作对照培养，以鉴别培养基本身是否有污染。
6.4菌落计数，严防遗漏。
7. 结果计算和判断：
M1+M2+……Mn
平均菌落数＝——————————
n
Mn—n号培养皿菌落数
n—培养皿的总数
8. 结果评定：
8.1每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定的评定标准中的界限。
8.2 在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。