实验七 染色体核仁组织区的银染色法

作业
• 在油镜下绘制一中期分裂相图，显示 AgNOR的位置、数目和形态。
a ．被银染色的载玻片标本，根据染色深浅可用 2% Giemsa磷酸缓冲液（ pH6.8）复染1min，以便观察和摄影。 b.新鲜制片比片龄长的效果更好。 c.吸50%硝酸银与明胶显影液的吸管最好一样粗细。
实验结果
• 若染色适中，间期核及染色体为金黄色，油镜观察， 可在某些染色体上看到成对的黑色小点，此即为银染 NOR（Ag- NOR）。 • 若整张片子色淡，间期核及染色体都不易看清，为染 色时间不足，在未滴过香柏油的情况下，可重新续染。 • 若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时，仍可看到 黑色的NOR，只是NOR与染色体间的反差较低。染色 严重过度时，整张片子都布满黑色沉淀，这样的标本 一般都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊方法褪 色后重新染色。
三、实验用品
1、材料 人或其他动物的染色体制片 2、试剂（所有试剂均应为AR级） （1）50%硝酸银溶液：5g硝酸银溶解在10mL蒸馏水 中，过滤（不过滤亦可），保存在用铝箔包裹的玻 璃容器内，可稳定的保存1年。 （ 2 ）明胶显影液：称取 2g 明胶（ gelatin ）粉末溶解 于 99mL 蒸馏水中，加 1mL 甲醛（ formylic acid ）。 （ 3 ） 0.067mol/L 磷酸缓冲溶液（ pH6.8 ）和 Giemsa 原液的配制同“染色体标本制作及其组型实验相 同”。 （4）2% Giemsa磷酸缓冲溶液
实验方法
（ 1 ）在培养皿中底部放一用蒸馏水润湿的滤纸，上 放两根竹签，置水浴内保温至60℃~65℃。 （2）载玻片标本细胞面朝上平放其上，加2滴明胶显 影液和 4 滴 50%硝酸银溶液，覆以盖玻片，直到载 玻片标本呈现金褐色为止，一般为3~4分钟。 （ 3 ）移除擦镜纸或盖玻片，并用蒸馏水快速漂洗数 秒，晾干。 （4）显微镜观察，分析。
一、实验目的
掌握核仁组织ห้องสมุดไป่ตู้区（NOR）的快速银染显示法，
并了解NOR在细胞中分布情况。
二、实验原理 • 染色体上为5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA编码的基因 （rDNA）所在的部位，称为核仁组成区（NOR）。在间 期细胞中，这一区域的染色质，参与形成核仁，由于核仁 直至前期结束才完全消散，所以这一部分染色质常常来不 及完全收缩，在中期染色体上，比其它染色质更疏松，因 而被淡染，即表现为次缢痕结构。 • 每个染色体组中，常有多个NOR。例如人的23对染色体中， 有5对端部着丝点染色体短臂的次缢痕处为NOR。然而， 并不是所有的NOR随时都出于转录之中。当NOR在间期 转录时，产生一种与转录活动有关的酸性蛋白，此蛋白可 保留至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显现为 黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的 NOR数目，而且，染色的深黑程度，还可以反应出基因的 活性高低。
染色体核仁组织区的银染色法
核仁组织区（nucleolar organizing regions，NORs）是指参与形成核仁时的染 色体区，核仁从核仁组织区部位产生，同时 与该区紧密相连。核仁组织区定位在核仁染 色体次缢痕部位。对人来说，在13, 14, 15, 21, 22对染色体上存在核仁组织区。