实验七 染色体核仁组织区的银染色法
DNA和蛋白银染步骤(独门绝技--有图)
DNA银染
一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)
1、固定液：50ml乙醇
2、前处理液（敏化液）：5ml HNO3
3、染色液：0.5g 硝酸银（避光配制）
4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml
5、终止液：50ml 冰醋酸
二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）
1、准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中在摇床上轻摇1min；
2、凝胶固定：倒掉盒中的水，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动10min；
3、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次30S；
4、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化6min；
5、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗2次每次10S；
6、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；
7、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗1次10S；
8、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；
9、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇2-3min；
10、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次1min。
三、变性聚丙酰胺凝胶的配制（两块、使用1.0BioRad胶板）
1.2%的凝胶可以跑微卫星，和基因组DNA
1、尿素：7.2g
2、30%聚丙酰胺，4.68ml
3、10×TBE，1.5ml (Tris碱108g；硼酸55g；EDTA 40ml 0.5mol/L,Ph=8.0；加水至1L)
4、30%AP，35ul
5、TEMED,4ul
四、下图：左为果蝇正常基因组DNA与损伤后基因组DNA；右为果蝇微卫星电泳
12h Treatment24h Treatment
银染操作步骤
银染操作步骤
1. 固定：
电泳结束后，取凝胶放入约100ml固定液中，在摇床上室温摇动20分钟，摇动速度为
60-70rpm。固定40分钟以上甚至过夜可以进一步降低背景。
固定液的配制：依次加入50ml乙醇、10ml乙酸和40ml MilliQ级纯水或双蒸水，混匀后即成100ml固定液，可大量配制室温存放。
2. 30%乙醇洗涤：
弃固定液，加入100ml 30%乙醇，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。30%乙醇的配制：70ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入30ml乙醇，混匀后即成100ml 30%乙醇。
3. 水洗涤：（洗2次）
弃30%乙醇，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
4. 增敏：（辅染）现配现用
弃水，加入100ml银染增敏液(1X)，在摇床上室温摇动2分钟，摇动速度为60-70rpm。银染增敏液(1X)的配制：99ml MilliQ级纯水或双蒸水中加入1ml银染增敏液(100X)，混匀后即为银染增敏液(1X)。银染增敏液(1X)配制后需在2小时内使用。
银染增敏液(100X)的配制：即2.8%硫代硫酸钠溶液，需用黑袋包裹避光保存。
5. 水洗涤(共2次)：
弃原有溶液，加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为60-70rpm。
弃水，再加入200ml MilliQ级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动1分钟，摇动速度为
60-70rpm。
6. 银染：
弃水，加入100ml银溶液(1X)，在摇床上室温摇动10分钟，摇动速度为60-70rpm。
实验一光学显微镜构造及使用
六）微分干涉差显微镜
部件构成：起偏器+DIC棱镜+DIC滑行器+检偏器
偏振器装在聚光器的前面，使光线发生线性偏振，聚光器前
的DIC棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光（x
和y），二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微
镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致，在穿过标本相
邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，两束光产生
成像效果有浮雕立体感。为了使影像的反差达到最佳状态，
可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差，改变影
像的亮度，使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象，
三维立体感明显。
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微分干涉差显微镜调节使用
• 开启照明光源 • 明场（BF）聚焦 • 起偏器推入光路 • DIC滑座（附检偏器）推入光路，固紧螺丝 • 顺时针把DIC棱镜控制钮旋转到头
• 取下目镜可见物镜外缘，同时调节起偏器旋钮至黑色条纹最 黑的位置（若为两条黑纹，起偏器旋转90º，以使只可见一 条黑色条纹）固紧起偏器旋钮；
• 目镜复位，转动万能聚光镜转盘至DP（DIC棱镜）进入光路
• 样品聚焦（样品要表面干净），调节孔径光栏与光照强度至 最佳浮雕效果（调节视场光阑与视场外切，缩小孔径光阑可 增大反差）
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紫外防护罩
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汞灯
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汞灯调中检验器
我们实验室用的银染方法
我们实验室用的银染方法
我们实验室用的银染方法
1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次)
2.10%甲醇浸泡10分钟
3.水漂洗3次,每次数秒
4.2μM DTT溶液浸泡20分钟
5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟
6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML)
7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML)
8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML)
9.10G柠檬酸定影
显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀
水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏
此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看
一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。固定、银染之后均需充分的漂洗。
其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净
大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表面的蛋白
1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.
2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.
3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.
4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.
医学遗传学实验指导
医学遗传学
实验指导
内家古医学院遗传学教研室
目录
验一人体外周血淋巴细胞培养及染色体标本制备实验二小鼠骨髓细胞染色体标本的制备实验三人类染色体G 显带技术实验四人类染色体 C 显带技术实验五核仁形成区银染技术实验六人类染色体G 显带核型分析实验七X 染色质标本的制备实验八姐妹染色单体交换实验九微核检测技术实验十ABO 血型的测定及其基因频率的计算实验十一苯硫脲尝味试验及其基因频率的计算实验十二人类皮纹分析实验十三遗传咨询实验十四人类基因组DNA 的提取实验十五聚合酶链式反应（PCR）实验十六DNA 的琼脂糖凝胶电泳实验十七PCR-RFLP 技术
医学遗传学》实验须知
一、医学遗传学实验目的和要求
医学遗传学实验课是医学遗传学课程的重要内容。实验课有助于加深和巩固基础理论知识，并进一步了解和掌握本学科的基本实验内容和操作技能。在培养学生分析问题、综合问题和解决问题能力方面具有重要作用。为此，要求学生做到以下几点：
1、实验课前做好预习，明确实验目的、实验原理。
2、复习有关理论内容。
3、熟悉实验的主要步骤。
4、初步估计和判定实验的可能结果。
二、实验操作过程中的注意事项
1、认真操作，仔细观察和综合分析实验所出现的现象与结果并及时记录。
2、如果实验结果与理论结果不一致，须及时进行科学分析，判断结果的可靠性，寻找出现误差的原因。
3、各种实验试剂用后放回原处，瓶盖封严，轻拿轻放。
4、使用微量加样器时，一定调整好取用量，按使用要求操作。
5、实验室应保持肃静，注意清洁卫生，实验中用过的废弃物品要及时清理，避免堵塞下水管道。
银染色方法及其在细胞遗传学中的应用1)
ｍａ ｓ 或醋酸地衣红复染， 但注意染色不可过度。 就我们的体会，温育的温度和时间随不同的材
料而异， 而且还受许多因素的影响。 观察 １Ｓ ２Ｓ Ｎ ８ 十 ８ ｒ Ａ的银染色方法， Ｄ 修 改的方案很多。重要的是应根据自己的实验材
１Ｓ ８ ｒ Ａ的分布和转录活性的一种简 ８ 十２Ｓ Ｎ Ｄ
易有效的方法。 最近， 银染色还开始用于着丝
覆以盖片。在 ６℃ 热板上放置 ３ ５ －５分钟。待 盖片边缘出现 Ａ Ｎ０ 白色结晶时， ｇ ３ 水洗。加两
银染色的特异性和化学基础
滴３ 外中性福尔马林和两滴氨银液（ 克ＡＮ ３ ４ ｇ０ Ａ － Ｒ 即是原位分子杂交显示的 １Ｓ ｇＮＯ 。 ８十 ２Ｓ Ｎ ８ ｒ Ａ分布区， Ｄ 这已被许多工作所证实。 在 溶于５ 毫升蒸馏水， ７ 毫升Ｎ ４Ｈ ｏ 再加 ． ５ Ｈ０ ） 覆 以盖片， 镜检。经 ３ 分钟， －５ 染色体变为金黄 常规的 Ｇｅｓ ｉ ａ染色标本上， ｇＮ Ｒ 往往 ｍ Ａ－Ｏ 。 色， Ｏ Ｎ Ｒ为黑色。继之，染色体变为橙、 黑 表现为淡染色区， Ｒ痕 （） 棕、 即次ｒ １。因此， １ 一般说 色， 以至和Ｎ Ｒ Ｏ 难以区分。这时，在每个中期 来，ｈ ＮＯ ｓ １Ｓ＋ ２Ｓ Ｎ 。 但正如 ＝ Ｒ ＝ ８ ８ ｒ Ａ Ｄ
８ Ｈ ｎ＇ Ｓ 加 ５ ａｋｓ ＢＳ 毫升 ｌ ｘ胰酶－ Ｄ Ａ，Ｈ７ ） ５℃下温育４ 小时。镜检。 待染色适度时， ｏ ＥＴ ｐ ．， ０ ８ 水洗， ｉ ｓ Ｇｅ ａ染色。 ｒ ｎ 再以 １ ％ ｉ ｓ ． Ｇｅ ａ复染。除核仁、 Ｏ ，性泡 ０ ｍ Ｎ Ｒ、 ｓ ｖ ｃ） ｅ ｅｌ ｓ 经上述分带染色后， 镜检， 拍照。然后在甲 （ ｘ ｉｅ 为银染上色外，还可以看 到纤 细 此即联会复合体。以往， 有关联会 醇： 冰醋酸 （：） ３１ 中退色，干燥。再以Ａ－ Ｓ 的带状结构， ｇＡ 染色， 镜检。 复合体的结构和功能的研究需借助于电镜，而 （ 二）中心粒的银染色［ ［ ７ １ 本方法则只需普通光学显微镜即可， 简单方便。 ｌ ｈＵ ｅ ｒ， ｃ 在染色体标本上加４ ５％ ３ 滴 ０ Ａ 少０ 溶液， Ｆ ｔｅ０对此已详细介绍。
银染核仁组织区技术方法及应用
银染核仁组织区技术方法及应用
王风光;张中仪;孙正
【期刊名称】《北京口腔医学》
【年(卷),期】1999(000)002
【摘要】银染技术ＡｇＮＯＲ（以下简称ＡｇＮＯＲ技术）可在常规组织切片上，特异地显示细胞核内的银染核仁组织区，由于ＡｇＮＯＲ的数目取决于细胞核内的ｒＤＮＡ的转录水平和细胞染色体中ＮＯＲ染色体的数目。故对ＮＯＲ的定量分析不仅可反映细胞和细胞核的活性，而且可反映肿...
【总页数】1页(P101)
【作者】王风光;张中仪;孙正
【作者单位】首都医科大学附属北京口腔医院;首都医科大学附属北京口腔医院【正文语种】中文
【中图分类】R739.850.4
【相关文献】
1.视网膜母细胞瘤（RB）银染核仁组织者区和银染近端着丝粒... [J], 郑燕林;彭惠民
2.男性吸毒患者银染核仁组织区的研究 [J], 周好乐;韩艳秋;等
3.核仁组织区嗜银染色在甲状腺癌中的应用研究 [J], 付蔚华;张健;李泮泉
4.大肠癌患者血清胃泌素与癌组织的核仁组成区嗜银染色计数的关系--附56例检
测报告 [J], 李根武;周宇;王菊岩;朱艺
5.云南保种山羊的银染核仁组织区研究 [J], 叶绍辉
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买
无蹼壁虎和多疣壁虎种群内的差异
无蹼壁虎和多疣壁虎种群内的差异
雷富民;方荣盛
【期刊名称】《陕西师大学报：自然科学版》
【年(卷),期】1992(020)002
【摘要】周开亚等人先后对我国无蹼壁虎和多疣壁虎进行了形态描述,Nakamura 等对无蹼壁虎或多疣壁虎的核型亦有报导,本文是笔者在研究陕西省壁虎类形态及核型特征的基础上,讨论无蹼壁虎和多疣壁虎的种群内不同地方种群的差异.
【总页数】2页(P93-94)
【作者】雷富民;方荣盛
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】Q959.62
【相关文献】
1.无蹼壁虎线粒体全基因组及系统发育分析 [J], 秦峰;曾德龙;高成伟;秦新民;
2.褪黑激素受体Mel1a在无蹼壁虎视网膜的空间差异性表达 [J], 王智超;赵劲松;张晓盼;余中宾;张倩;鲁亚平
3.三种壁虎染色体核仁组织者的银染色观察与无蹼壁虎的核型 [J], 郭超文;李洁莉
4.南通地区无璞壁虎与多疣壁虎生物学指标初步研究 [J], 黄锐祥;王庆华;邵义祥
5.无蹼壁虎线粒体全基因组及系统发育分析 [J], 秦峰;曾德龙;高成伟;秦新民
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银染方法总汇及注意事项
ptotocol是这样的，请看哪里不妥：
蛋白银染步骤
步骤溶液时间
固定甲醇100ml
冰醋酸25ml
加双蒸水至250ml 30min
冲洗双蒸水3次
敏化甲醇75ml
戊二醛（25%w/）1.25ml
硫代硫酸钠(5%w/) 10ml
醋酸钠（17g）
加双蒸水至250ml 30min
冲洗双蒸水3次
银反应硝酸银溶液(2.5%w/) 25ml
甲醛(37%w/) 0.1ml
加双蒸水至250ml 20min
冲洗双蒸水2次
显色碳酸钠(6.25g)
甲醛(37%w/) 0.05ml
加双蒸水至250ml
2-5min
终止EDTA-Na22H2O(3.65g)
加双蒸水至250ml 10min
冲洗双蒸水3次
建议使用silia的方法！！
简单，快！
本人的银染方法：
1. 固定：100ml MeOH, 24ml H Ac, 56ml 0.04%HCHO, 20ml ddH2O,洗三次，每次>=20分钟；
2. 50％EtOH洗PAGE胶三次，每次20分钟；
3. 预处理：0.02％Na2S2O3 处理一分钟；
4. 水洗：ddH2O漂洗三次，每次20秒；
5. 染色：0.8ml 20％AgNO3+72ml 0.04%HCHO处理PAGE胶20分钟；
6. 水洗：同上；
7. 显色：25ml 12％Na2CO3, 24ml 0.04%HCHO, 1ml 0.02％Na2S2O3, 漂洗10－15分钟；
8. 水洗：同上；
9. 终止：50％MeOH, 12％H Ac,10分钟。
以上步骤从中科院生化所学来，过程和silia 的基本一致，不知道是否有出入，请大家指正。谢谢！！！
实验五染色体Ag-染色法
实验五 染色体Ag-染色法
❖ 1、实验原理 ❖ 应用银染色技术，哺乳动物的核仁组织者
(NOR)特异性染为黑色， ❖ 这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR ❖ 即18S+28S核糖体基因的分布区，
❖ (6)蒸馏水冲洗后，空气干燥，镜检。
5、实验结果与分析讨论
❖ 仔细观察．Ag-NOR分布， ❖ 并计数10个细胞分裂相Ag-NOR数目
此过程可不放在水浴锅内，直接将常规染色体标 本片放在56～60℃的电热板上亦可。
❖ (3)玻片标本细胞面朝上平放其上，加4滴50 %AgNO3溶液和2滴明胶显影液，
复以盖片(或擦镜纸)直到玻片标本呈金褐色为 止，一般为3 min。
❖ (4)移除盖片，并用蒸馏水快速漂洗，晾干。
❖ (5)用Giemsa染色液(磷酸缓冲液：Giemsa原 液=10：1)染色8～10 min，用自来水冲洗。
图15-1
❖ 银染色的是பைடு நூலகம்rDNA转录有关的一种酸性蛋白。 因此，银染的是有转录活性的NOR。
❖ 一般NOR位于次缢痕的位置。
2、实验材料
❖ 水浴锅、试剂瓶、镊子、滤纸、擦镜纸等 ❖ 硝酸银溶液、明胶显影液、Giemsa原液
染色体显带的技术
作业
绘制１－３对显带明显的染色体的形态．
染色体C带技术（原理）
本实验学习BSG（氢氧化钡/盐/吉姆萨）-显带方 法，BSG-显带是显示染色体的结构异染色质，即 着丝点和次缢痕区的较稳定的方法。 原理：经BSG程序处理后，然色染色体的臂区丧 失大量染色质（包括常染色质和异染色质），而 着丝点、部分次缢痕和异染色质区因含有大量的 重复DNA顺序及与之相结合的蛋白质却保留下来， 经由Giemsa染色形成深染的C带。 本方法可用于人类不同种族和个体之间染色体多 态性研究，鉴别染色体上不同的染色质类型；也 可以应用于基因定位、产前诊断，以及各种异常 细胞双着丝点染色体乃至多着丝点染色体之来源 等。
染色体显带技术
实验目的 实验原理 实验步骤 作业
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实验目的
了解几种常用的染色体显带方法，通
过实验初步掌握带和带的染色技术。
染色体显带技术简介。
染色体显带技术开始于1969年，是一项正处于不 断探索与发展中的新技术。它使用特殊的染色方 法，使染色体产生明显的染色的暗带与未染色的 明带相间的带型，即显现出染色体本身的更细微 的结构，形成更鲜明的染色体个体性，从而可以 更准确地鉴别每条染色体。显带技术也是为染色 体结构与功能的分析研究开辟了一条新的途径。
染色体G-带技术 （原理）
G带染色技术也称改良的吉姆萨染色法。因 用吉姆萨染色，所以称为G带。是目前应用 最广泛的染色体分带技术之一。 关于G带的显带机制，有许多说法，目前尚 无定论，比较公认的一种看法是：染色体 上富含A-T碱基对的区段，与蛋白质结合比 较紧密，较耐受胰酶处理，从而被Giemsa 深染，而富含G-C碱基对的区段，与蛋白质 结合疏松，在经胰酶处理后，蛋白质受到 破坏，而不被Giemsa染色，显示为淡染的 明区。
银染步骤及注意事项
银染步骤是1 固定10冰乙酸min。2 清洗双蒸水冲洗凝胶次每次1min。3 染色染色液1g硝酸银.5mL37甲醛1L双蒸水。现配染色30min。4 清洗迅速洗凝胶次。 5 显影30g 碳酸钠1.5mL37甲醛200uL 10mg/L硫代硫酸钠。显影至清晰带纹出现。成功银染的关键因素包括 1 用超纯水比如NANOpure或Milli-Q纯化或者是双蒸水作银染。2 用提供的碳酸钠或者ACS试剂级的碳酸钠。3 在染色后水清洗所用时间的长短很重要用不超过5-10秒的时间清洗胶然后放入显色溶液中一般在水里浸一下就好。 4 甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml在使用前及时加入到显色液中。 5 在使用前及时配染色液。银染的方法种类很多目前有文献报道的就有100 多种。但是其准确的染色机制还不是特别的清楚。大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银沉淀在蛋白质的表面上而显色。由于银染的灵敏度很高可染出胶上低于1 ng/蛋白质点故广泛的用在2D 凝胶分析上及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法对关键操作及要求做了补充主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测如内源性GST-Pulldown、Co-IP 等实验中相互作用蛋白的研究银染操作规程实验目的检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。实验原理在碱性条件下用甲醛将蛋白带上的硝酸银银离子还原成金属银以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有
关不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛实验操作程序固定30min或者更长时间o 100ml 乙醇40 乙醇o 25ml冰醋酸10 冰醋酸o 加水到250ml 致敏30min o 75ml 乙醇30 乙醇o 17g 乙酸钠28.2g 三水乙酸钠o 0.5g硫代硫酸钠o 加水到终体积250ml 水洗3 x
银染步骤及注意事项
银染步骤及注意事项
银染色步骤为1次固定10分钟冰醋酸2用双蒸水洗涤凝胶，每次1分钟3染色液1g硝酸银。5mL37甲醛1L双蒸水现在匹配染色30分钟。4.快速清洗并清洗凝胶数次。5开发30克碳酸钠1.5毫升37甲醛200微升10毫克/升硫代硫酸钠显影直到出现清晰的条纹银染色成功的关键因素包括:1 .用超纯水，如纳米纯水或Milli-Q或双蒸水进行银染色的纯化2.使用提供的碳酸钠或ACS试剂级碳酸钠染色后用于水洗的时间长度非常重要。清洗胶水，然后将其放入通常浸泡在水中的显色溶液中，只需5-10秒钟。4使用前及时向显色液中加入甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml5.使用前及时配制染液银染方法有很多种，目前文献报道有100多种。然而，确切的染色机理还不是特别清楚。一般原理是银离子在碱性酸碱度环境下还原成金属银，沉淀在蛋白质表面形成颜色。银染色广泛用于2D凝胶分析和垂直凝胶，用于极低蛋白质含量的测定，因为它对低于1纳克/蛋白质斑点的染色凝胶具有高灵敏度。本文介绍了我们实验室成功使用的银染色法，以补充关键操作和要求。主要用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测，如内源GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究。银染色程序用于检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白质带上的硝酸银和银离子还原成金属银，在蛋白质带上沉积银颗粒。染色程度与蛋白质中某些特殊基团的
有关。不含或很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时会被染色。银染的详细机制尚不十分清楚。试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、
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实验结果
• 若染色适中，间期核及染色体为金黄色，油镜观察， 可在某些染色体上看到成对的黑色小点，此即为银染 NOR（Ag- NOR）。 • 若整张片子色淡，间期核及染色体都不易看清，为染 色时间不足，在未滴过香柏油的情况下，可重新续染。 • 若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时，仍可看到 黑色的NOR，只是NOR与染色体间的反差较低。染色 严重过度时，整张片子都布满黑色沉淀，这样的标本 一般都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊方法褪 色后重新染色。
一、实验目的
掌握核仁组织者区（NOR）的快速银染显示法，
并了解NOR在细胞中分布情况。
二、实验原理 • 染色体上为5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA编码的基因 （rDNA）所在的部位，称为核仁组成区（NOR）。在间 期细胞中，这一区域的染色质，参与形成核仁，由于核仁 直至前期结束才完全消散，所以这一部分染色质常常来不 及完全收缩，在中期染色体上，比其它染色质更疏松，因 而被淡染，即表现为次缢痕结构。 • 每个染色体组中，常有多个NOR。例如人的23对染色体中， 有5对端部着丝点染色体短臂的次缢痕处为NOR。然而， 并不是所有的NOR随时都出于转录之中。当NOR在间期 转录时，产生一种与转录活动有关的酸性蛋白，此蛋白可 保留至中期并能将染液中的银离子还原为金属银而显现为 黑色。所以银染法可在中期染色体上显示具有转录活性的 NOR数目，而且，染色的深黑程度，还可以反应出基因的 活性高低。
三、实验用品
1、材料 人或其他动物的染色体制片 2、试剂（所有试剂均应为AR级） （1）50%硝酸银溶液：5g硝酸银溶解在10mL蒸馏水 中，过滤（不过滤亦可），保存在用铝箔包裹的玻 璃容器内，可稳定的保存1年。 （ 2 ）明胶显影液：称取 2g 明胶（ gelatin ）粉末溶解 于 99mL 蒸馏水中，加 1mL 甲醛（ formylic acid ）。 （ 3 ） 0.067mol/L 磷酸缓冲溶液（ pH6.8 ）和 Giemsa 原液的配制同“染色体标本制作及其组型实验相 同”。 （4）2% Giemsa磷酸缓冲溶液
染色体核仁组织区的银染色法
核仁组织区（nucleolar organizing regions，NORs）是指参与形成核仁时的染 色体区，核仁从核仁组织区部位产生，同时 与该区紧密相连。核仁组织区定位在核仁染 色体次缢痕部位。对人来说，在13, 14, 15, 21, 22对染色体上存在核仁组织区。
实验方法
（ 1 ）在培养皿中底部放一用蒸馏水润湿的滤纸，上 放两根竹签，置水浴内保温至60℃~65℃。 （2）载玻片标本细胞面朝上平放其上，加2滴明胶显 影液和 4 滴 50%硝酸银溶液，覆以盖玻片，直到载 玻片标本呈现金褐色为止，一般为3~4分钟。 （ 3 ）移除擦镜纸或盖玻片，并用蒸馏水快速漂洗数 秒，晾干。 （4）显微镜观察，分析。
作业
• 在油镜下绘制一中期分裂相图，显示 AgNOR的位置、数目和形态。
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