乳铁蛋白-聚合物泡囊载S14G-Humanin肽对Amyloid-β 25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的神经保护作用
牛乳铁蛋白肽的抑菌功能及基因工程制备进展
牛乳铁蛋白肽的抑菌功能及基因工程制备进展张云威;苏航;刁勇;戚智青【摘要】牛乳铁蛋白肽(lactoferricin bovine,LfcinB)是由乳铁蛋白(lactoferrin)经酸性胃蛋白酶降解N端而产生的含25个氨基酸残基的小肽,它具有抗菌、抗癌、抗氧化、免疫调节等一系列生物活性,成为目前研究与开发的热点.由于受到生产成本的限制,无法进行大规模商业化生产,基因工程技术将是实现大规模生产的最佳途径.对牛乳铁蛋白肽的抑菌功能以及基因工程制备的优势和改良方法进行了综述,旨在为基因工程生产牛乳铁蛋白肽提供新思路.【期刊名称】《生物技术进展》【年(卷),期】2016(006)004【总页数】4页(P235-238)【关键词】牛乳铁蛋白肽;抗菌肽;基因工程【作者】张云威;苏航;刁勇;戚智青【作者单位】华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021【正文语种】中文乳铁蛋白肽(Lfcin)是一种广泛存在于自然界并参与机体非特异性免疫的生物活性多肽。
它不仅存在于哺乳动物的乳汁中,也广泛分布在泪液、唾液、胰液、血液、精液、小肠液、胆汁和羊水等分泌物中,且初乳中含量最高[1]。
自乳铁蛋白肽首次被分离获得以来,目前发现牛乳铁蛋白肽(LfcinB)的抗菌活性最强,因此成为主要的研究对象。
LfcinB不仅抗菌,而且具备抗病毒、抗癌、消炎、调节免疫反应、抗氧化、抗分解代谢[2]等一系列生物活性,其本身也不含稀有氨基酸和外源化学成分,可以被机体中的酶消化吸收,不具有免疫原性,因此是一种安全、环保、高效的新型生物抗菌肽。
在医疗、食品、饲料、保鲜等领域展现了广泛的应用前景,而成为研究和关注的热点。
目前国内外制备LfcinB的主要问题在于来源困难和纯化LfcinB需采用多种分离纯化方法,造成成本太高,很多研究只限于实验室,难以实现工业化生产,因此采用基因工程技术解决LfcinB的来源问题,同时优化LfcinB的纯化工艺实现工业化生产对新一代生物抗菌肽发展具有重大意义。
乳铁蛋白及其活性肽的营养生理作用及应用前景
乳铁蛋白及其活性肽的营养生理作用及应用前景时间:2010-12-10来源:中国饲料添加剂网作者:摘要 :乳铁蛋白(LF)是一种多功能的糖蛋白,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的25个氨基酸残基的小肽。
文中阐述了乳铁蛋白及其活性多肽的结构,介绍了乳铁蛋白及其活性多肽的主要生理作用:抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化,调节机体的免疫和提高肠道对铁离子的吸收等作用。
根据乳铁蛋白制备的研究进展,讨论了乳铁蛋白及其活性多肽在乳、食品和动物生产中作为添加剂的应用前景。
抗生素作为抗菌促生长添加剂加到饲料中由来以久,但其广泛和大量使用导致动物性食品中药物残留等问题愈来愈令人担忧。
因此寻找一种安全、环保的新型饲料添加剂以成为当务之急。
近年来,乳铁蛋白(Lactoferrin,简称LF)成为当今乳品界和食品界最为关注的“热点”之一。
大量研究表明:乳铁蛋白具有抗菌、抑菌、抗病毒、抗氧化和调节机体免疫等作用,可用于开发新型的保健食品和绿色饲料添加剂。
乳铁蛋白(LF)是一种天然的铁结合蛋白,乳铁蛋白活性多肽(Lfcin)是从LF上被胃蛋白酶水解下来的25个氨基酸残基的小肽。
乳铁蛋白存在于人奶及大多数哺乳动物的奶中(马、牛、山羊、猪、兔、小鼠等),也存在于唾液、精液、泪液、气管、鼻腔分泌物、胰液以及其它的身体分泌物中。
乳来源不同,乳铁蛋白的含量差异较大。
人奶初乳中的乳铁蛋白浓度最高6~8mg/ml,常乳2~4mg/ml;牛的初乳1~5mg/ml,常乳0.02~0.35mg/ml;狗、大鼠奶中则基本不含乳铁蛋白。
但开发乳铁蛋白遇到的最大问题是:制造成本太高,大量制造较困难,难以实现商品化。
然而随着一些生物高新技术(如:亲和色谱分离,膜技术,基因工程技术等)得到广泛的应用,完全有可能降低它的成本,使之商品化。
目前关于乳铁蛋白的许多研究正在进行中,乳铁蛋白的活性多肽也逐渐引起人们的关注。
本文就乳铁蛋白及其活性肽的结构,营养生理功能,基因的调控与表达及开发与利用进行了展望。
乳铁蛋白肽的抑菌活性及其基因工程制备
乳铁蛋白肽的抑菌活性及其基因工程制备巴特;丁卓平;刘承初【摘要】乳铁蛋白肽是乳铁蛋白在酸性条件下经胃蛋白酶裂解,从N端释放的具有两亲性的阳离子多肽,具有广谱抗菌活性.目前,乳铁蛋白肽主要是通过水解乳铁蛋白来获得,无法大规模生产,基因工程技术将是大规模生产乳铁蛋白的最佳途径.文中对乳铁蛋白肽的抑菌活性及其转基因生产技术(包括表达系统的选择与比较,基因工程菌发酵液中乳铁蛋白肽的分离和纯化等)进行了简要的综述.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2010(036)007【总页数】8页(P114-121)【关键词】乳铁蛋白肽;抗菌肽;基因工程【作者】巴特;丁卓平;刘承初【作者单位】上海海洋大学食品学院,上海,201306;上海海洋大学食品学院,上海,201306;上海海洋大学食品学院,上海,201306【正文语种】中文乳铁蛋白(lactoferrin)是一种非血红素铁结合糖蛋白,与血清转铁蛋白、卵转铁蛋白和黑素转铁蛋白一样属于转铁蛋白科,由哺乳动物黏膜上皮细胞分泌,分子质量约为80 ku[1-2]。
乳铁蛋白约含690个氨基酸,不同种类的乳铁蛋白氨基酸序列具有非常高的同源性,其二级结构主要由α-螺旋和β-折叠组成,其中人和牛乳铁蛋白二级结构中α-螺旋多于β-折叠[2],并在二级结构的基础上折叠成两个对称的具有相似结构的球状叶(N-叶和C-叶),两叶氨基酸序列具有40%的同源性,同时各具有一个铁离子结合位点[3-4]。
乳铁蛋白的诸多生理功能均与其可逆鳌合Fe3+和能通过特殊的受体连接到细胞表面的特性有关[4-5],其生理功能主要有广谱抗菌、抗过敏、参与免疫调节和抗炎症作用、促进细胞生长、抗血小板凝集、抑制半胱氨酸蛋白酶等[6-9]。
乳铁蛋白主要分布于多种哺乳动物(除大鼠、兔和狗外)的白细胞和多种组织外分泌液中,如乳汁、泪液、胆汁、黏膜液、唾液等,其中乳汁中含量最为丰富,其含量仅次于酪蛋白,其中人乳中含量约为1.0~3.2 mg/mL,猪、豚鼠、小鼠和马乳中含量约为0.2~2.0 mg/mL,牛乳、山羊乳中约0.02~0.2 mg/mL。
重组牛乳铁蛋白功能片段在毕赤酵母中的表达及高密度发酵
1.2方法
1.2.1 重组酵母菌GS115fPIC9KFPTF'的构建与 筛选
提取 pPIC9K-BlfFf 重组质粒 DNA,用 Bpu1102
I线性化处理,电
赤酵母GS115 ,入1 mL预
冷的1 mol/L三梨醇,30 Q孵育2 h ,涂布于MD平板
中,30 Q静置培养72 h,
上 入 无 :并
His Tay ELISA DetyctOn KT试剂盒,南京金斯瑞%
1.1.4 培养基
LB、YPD、MD、BMGY 与 BMMY 配方参照 InviOe-
gen公司的《毕赤酵母
作手册》%
BSM 培养基 照 Pichia Feomeniaioon Guodeaones
2019年第45卷第1期(总第383期)29
DOI:10. 13995/j. akO 11 - 1802/ts. 019993
研究报告
重组牛乳铁蛋白功能片段在毕赤酵母中的表达及高密度发酵
魏春,任郑,吴涛,钱晓芬,孙杰,汪钊!
(浙江工业大学生物工程学院,浙江杭州,310014)
摘 要 该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional frayment,BlfFf),转入 毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过银亲和层析纯化Blfff,以Western Blot、液质联用和ELISA对 重组蛋白进行鉴定及检测。比较了 5 L发酵罐生产中3种不同高密度发酵培养基对Biff生产的影响#结果表
30位和265 ~ 284位2个氨基酸结构域[12-14],而且
这2个小肽在空间结构上很相近,2个结构域裤
作起作用,这比单一结构域具有更强的
乳铁蛋白的功能特性研究及应用进展
乳铁 蛋 白的功 能特 性 研 究及 应 用 进展
倪 丹 , 王 彩 云 , 云 战 友
(. 1 内蒙 古 农 业 大 学 食 品科 学 与 工 程 学 院 ,内 蒙古 呼和 浩 特 0 0 1 ; 10 8
2 内蒙古伊利实业集团股份有限公 司 技术 中心 ,内蒙古 呼和浩特 0 0 8 ) . 10 0
第 6期 ( 总第 2 7期 ) 4 2 1 年 6月 01
农 产 品 加 工 ・ 刊 学源自Ac d mi e i d c lo r P o u t Pr c s i g a e c P ro ia fFa m r d c s o e sn
No6 .
J n u.
文 章 编 号 :17 — 6 6( 0 1 0 — 0 7 0 6194 2 1 ) 608—4
(. l g f o dS in ea dEn ie r g n e n o aAgiutrl iesy Hu h t n e n oi 0 1 ,Chn ; 1 Col eo F o ce c n gn e n ,In r e i Mo g ̄ r l a vri , h o ,In r c u Un t Mo gl 01 0 8 a ia
2 I n r n o a i d s i ru o u h t n e o g l 1 0 8 hn ) .n e g l l I u ta G o pC ,H h o ,I n r n o a0 0 1 ,C i Mo i Y i n r l M i a
Ab t c:T i p p rr ve e e t e e r h p o r s b u h u c in lp o et s o a tfri , h i ic s in i o sr t h s a e e iws rc n s a c r g e s a o tt e f n t a r p ri fl coe r T e man d s u so s n a r o e n lcoe rnS t emo tb l y n i a tra r p ris rn c mb n t n a d i n a s r t n f n t n n o d r t rvd s f l a tfri h r sa i t,a t c e lp o e t ,i o i ai n r b o p i u ci ,i r e o p o i e u eu i b i e o o o o o
β-Amyloid(1-42) β淀粉样肽(1-42)要点
S-0107R
◆兔抗人、大鼠、小鼠β-Amyloid(1-42)多克隆抗体
◆200ul/1200.00 1ml/4200.00 (100ug/200ul 500ug/1ml)亲和纯化抗体
◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-1500 IP=1:50-150 IHC=1:300-600
抗体动物种属来源缩写:R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
Apaf-w1(C端)凋亡蛋白活性因子-1
S-0058R
◆兔抗人、大鼠、小鼠Apaf-1(CT)多克隆抗体
◆200ul/1000.00 1ml/2900.00 (100ug/200ul 500ug/1ml)亲和纯化抗体
◆WB=1:300-600 Elisa=1:500-1500 IP=1:50-150 IHC=1:300-600
◆APAF-1(Apoptosis protease activating factor-1)调节细胞色素C依赖的Caspase-9原有的自动催化活性,导致Caspase-3的激活和引起凋亡。Apaf-1在成年人的脾脏、外周血白细胞、肾脏、肺和胎儿脑、肾、肺中高水平表达。
抗体动物种属来源缩写:R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
◆血管紧张素原是一种大分子糖蛋白和α2球蛋白,分子量为55-65KDa,广泛分布于血液循环、淋巴、脑、肾脏等组织。
抗体动物种属来源缩写:R-兔、M-小鼠、r-大鼠、Sh-山羊、H-人
◆AR(Androgen Receptor; dihydro testosteroneR)是一个由920个氨基酸组成的蛋白质,位于雄激素靶组织细胞中或细胞表面上的特异分子部位或结构。AR在前列腺癌中起着重要作用,研究表明AR的表达与组织分型形成一定的相关性,AR在高分化的肿瘤中表达的较多,而在低分化的肿瘤中表达较少。分子量为:101KDa。
乳铁蛋白生物活性肽及其功能机制研究进展
乳铁蛋白生物活性肽及其功能机制研究进展石璞洁1,许诗琦2,王震宇2,吴 超2,卢卫红1,*,杜 明1,2,*(1.哈尔滨工业大学化工与化学学院,黑龙江 哈尔滨 150001;2.大连工业大学食品学院,海洋食品深加工省部共建协同创新中心,国家海洋食品工程技术研究中心,辽宁 大连 116034)摘 要:乳铁蛋白是一种天然铁结合糖蛋白,广泛分布于哺乳动物的乳清和大部分生物体液中。
人体摄入的乳铁蛋白经蛋白酶水解后,主要以肽的形式被消化吸收,从而发挥其生理功能。
近年来,国内外研究报道了多种具有广谱抗菌、抗肿瘤、降血压、抗炎和免疫调节功能的乳铁蛋白生物活性肽,它们具有调节机体生理功能和为机体提供营养的双重功效,因此对人体健康有重要作用。
本文主要对乳铁蛋白生物活性肽的种类、结构及其作用机制进行了综述,并探讨了其在食品领域中的应用,以期为乳铁蛋白来源的生物活性肽的研究和相关功能食品的开发提供理论参考。
关键词:乳铁蛋白;生物活性肽;抗菌;抗肿瘤;降血压Advances in Biological Activity and Functional Mechanism of Peptides from LactoferrinSHI Pujie 1, XU Shiqi 2, WANG Zhenyu 2, WU Chao 2, LU Weihong 1,*, DU Ming 1,2,*(1. School of Chemistry and Chemical Engineering, Harbin Institute of Technology, Harbin 150001, China; 2. Collaborative Innovation Center of Provincial and Ministerial Co-construction for Seafood Deep Processing, National Engineering Research Center ofSeafood, School of Food Science and Technology, Dalian Polytechnic University, Dalian 116034, China)Abstract: Lactoferrin is an iron-binding natural glycoprotein, which is distributed widely in the milk of various mammalian species and most biological fluids. Ingested lactoferrin is mainly adsorbed as peptides by the human body after protease digestion to exert its physiological functions. In recent years, a great number of bioactive peptides with antimicrobial, antitumor, antihypertension, anti-inflammatory and immune modulator activities derived from lactoferrin hydrolysates have been reported. These peptides have dual functions of regulating the body ’s physiological functions and providing nutrients for the body, thereby playing an important role in human health. In this review, the species, structures and mechanisms of action of functional peptides from lactoferrin are summarized and their applications in the field of food science are discussed to provide a theoretical basis for the research of these bioactive peptides and their applications in the functional food field.Keywords: lactoferrin; bioactive peptides; antibacterial; anticancer; antihypertensive DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200429-379中图分类号:TS252.1 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2021)07-0267-08引文格式:石璞洁, 许诗琦, 王震宇, 等. 乳铁蛋白生物活性肽及其功能机制研究进展[J]. 食品科学, 2021, 42(7): 267-274. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200429-379. SHI Pujie, XU Shiqi, WANG Zhenyu, et al. Advances in biological activity and functional mechanism of peptides from lactoferrin[J]. Food Science, 2021, 42(7): 267-274. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-20200429-379. 收稿日期:2020-04-29基金项目:国家自然科学基金面上项目(31771926)第一作者简介:石璞洁(1992—)(ORCID: 0000-0002-2658-9373),女,博士研究生,研究方向为蛋白质科学。
《乳铁蛋白人群健康效应专家共识》发布
《乳铁蛋白人群健康效应专家共识》发布作者:暂无
来源:《中国食品》 2018年第15期
近期,由中国营养学会妇幼营养分会主办的“乳铁蛋白临床前沿研讨会”在四川省成都市举行。
此次研讨会聚集了近20名国内权威营养学专家,分享了对乳铁蛋白的前沿研究成果。
会上,发布了《乳铁蛋白婴幼儿健康效应专家共识》(以下简称《乳铁蛋白共识》)。
这是中国营养学会妇幼营养分会首次发布针对婴幼儿喂养中有关功能性食物成分的建议。
与会专家们一致认为,乳铁蛋白是人类母乳中的核心活性蛋白成分,摄入一定量从牛乳中分离提取的乳铁蛋白,有助于改善婴幼儿营养状况。
对于孕产妇人群,乳铁蛋白在缺铁性贫血防治方面也有一定的效果。
南京医科大学公共卫生学院妇幼保健学系主任、中国营养学会妇幼营养分会主任委员汪之顼教授指出,乳铁蛋白是母乳中的重要活性蛋白,母乳是婴儿最好的营养来源。
母乳喂养不仅有利于婴儿近期健康,更对其成年后的健康有着长远影响。
对于母乳不足或不能纯母乳喂养的家庭,在选择母乳以外的喂养方式时,可参考《乳铁蛋白婴幼儿健康效应专家共识》建议,摄入接近母乳含量范围的乳铁蛋白。
母乳中的乳铁蛋白的含量是多少呢?《乳铁蛋白共识》指出,经过研究,早期母乳(即28天的母乳)乳铁蛋白含量在0.44g/L-4.4g/L,而鲜牛奶中乳铁蛋白的含量只有0.02g/L-
0.2g/L。
因此,非母乳喂养的婴儿可考虑选择乳铁蛋白含量达到母乳中乳铁蛋白含量范围的婴儿配方奶粉产品,应该会带来一定的好处。
乳铁蛋白作用机制
乳铁蛋白作用机制
嘿,咱今天就来讲讲乳铁蛋白的作用机制哈。
你知道吗,乳铁蛋白就像是身体里的一个小卫士。
它呀,可神奇了呢!就像个超级英雄一样,默默地守护着我们的健康。
它首先呢,就像是一个守门员,能把那些坏家伙,比如细菌、病毒啥的,给拦住,不让它们轻易地闯进我们的身体里搞破坏。
它会紧紧地抓住这些坏东西,让它们没办法捣乱。
然后呢,它还能调节我们身体的免疫系统,就像个指挥官一样。
它能让免疫系统更强大,更有战斗力,随时准备和那些有害的东西大战一场。
而且哦,乳铁蛋白还特别会照顾我们身体里的有益菌呢,就像个好朋友一样,帮助它们好好地生长。
想象一下,我们的身体就像一个大城堡,乳铁蛋白就是那个忠诚又厉害的卫士,一直坚守岗位,保护着我们。
说起来,我有次身体不太舒服,感觉像是有小怪兽在身体里捣乱。
后来我才知道,要是身体里有足够的乳铁蛋白这个小卫士,可能就不会那么容易被小怪兽攻击啦。
总之啊,乳铁蛋白的作用机制可重要了呢,它就是我们健康的小守护者呀!有了它,我们才能更安心地生活,不用担心那些坏家伙随时来捣乱。
哎呀,说了这么多,还是觉得乳铁蛋白真的太神奇啦!希望我们都能有足够的乳铁蛋白来保护我们哦,这样我们就能一直健健康康的啦!这就是乳铁蛋白的作用机制,你是不是也觉得很有趣呀!。
重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达
重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达
吕自力4*,张恩鹏2,郭爱珍2,罗斌4梁鑫4单旭东4庄静4张霞4王亮2
1成都中医药大学医学与生命科学学院,四川成都,10041) 2(江苏大学食品与生物工程学院,江苏镇江,1201)
乳铁蛋白是一种由哺乳动物黏膜上皮细胞分泌
产生的分子质量为80 kDa的糖基化蛋白,在不同物 种间具有高度的同源性⑴。乳铁蛋白也是转铁蛋白
家族的一员,对铁离子具有高度的
,被认为是
人类和哺乳动物防御系统的基本组成之一⑵。乳铁
蛋白肽是乳铁蛋白在酸
下经胃蛋白酶消 g
的一种短肽,具有良好的耐热性、非抗原性、免疫调
24 2019 Vol. 45 No. 15 (Total 387)
促进牛乳铁蛋白肽与细菌细胞膜脂多糖的结合 ,带正
荷的氨基酸残基与带负电的磷脂发生
互作
用,导致细胞膜穿孔,细胞内容物泄漏[9]。不同于传
生素的抑菌 ,牛乳铁蛋白新型抑菌机制有利
其作为抗生素替代药物的研发和应用。由于天然
来源有限且 工艺
达后发现发酵上清液具有较强的抗菌活性°实验研
究为
优 乳铁蛋白肽的抗菌活
基°
1仪器与试剂
GeoaPluscs Xcell™电转仪,美国伯乐公司;
1645050型DNA电泳仪,美国伯乐公司;EppeudorS
5415R型高速离心机,德国EppeudorS f
; SW-
CJ系
工作台,苏
技术有 【司;
QY200; 温
cmH)第8位Ary: 为Try后,其抗菌活性明显提
乳铁蛋白水解物修饰物的分离纯化及其抗大肠杆菌活性
乳铁蛋白水解物修饰物的分离纯化及其抗大肠杆菌活性马春敏;薄力影;范婧;李铁晶【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)001【摘要】利用胃蛋白酶水解乳铁蛋白得到最小抑菌浓度为200 mg/mL的乳铁蛋白水解物(LHS),进行类蛋白反应导入色氨酸(Trp)得到乳铁蛋白水解物修饰物.对LHS及其色氨酸修饰产物采用葡聚糖凝胶过滤色谱G-25进行分离纯化,收集出峰产物,比较各级产物的抗大肠杆菌活性.结果表明,LHS和Trp修饰物分离纯化后的峰1为抑菌活性峰,各级产物的抑菌效果为LHS< LHS纯化峰1产物<Trp修饰产物<Trp修饰产物纯化峰1产物.加样浓度200 mg/mL时,LHS、Trp修饰物对大肠杆菌的抑菌率分别为40.42%和85.83%.加样浓度100 mg/mL时,LHS纯化峰1产物、Trp修饰物、Trp修饰物纯化峰l产物对大肠杆菌抑菌率分别为41.12%、58.31%和88.00%.可见,色氨酸修饰物对大肠杆菌的抑菌率较未修饰前提高了45.41%,色氨酸修饰产物经过纯化后对大肠杆菌的抑菌率较未纯化前提高了29.69%.将收集的活性峰作为样品,采用反相高效液相色谱进一步分离鉴定,证明经过分离纯化得到了纯度相对较高且活性提高的抗菌肽.【总页数】5页(P92-95,106)【作者】马春敏;薄力影;范婧;李铁晶【作者单位】辽宁大学,辽宁大学轻型产业学院,辽宁沈阳110000;乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学,黑龙江哈尔滨150030;乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学,黑龙江哈尔滨150030;乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学,黑龙江哈尔滨150030;辽宁大学,辽宁大学轻型产业学院,辽宁沈阳110000;乳品科学教育部重点实验室,东北农业大学,黑龙江哈尔滨150030【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.酪蛋白磷酸肽、木糖醇等成分对乳铁蛋白抗大肠杆菌活性影响 [J], 胡志和;庞广昌;陈庆森;阎亚丽2.牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化及其抗菌活性研究 [J], 邬向东;李平华;陈如圣;全炳昭;罗军荣3.菜籽蛋白水解物的分离纯化及抗肿瘤活性研究 [J], 姚轶俊;袁强;鞠兴荣;王立峰4.牛乳铁蛋白活性多肽LfcinB在大肠杆菌中的串联表达、纯化及生物活性分析 [J], 刘珂杭;宗西翠;张慧丹;完颜杨珂;陈玉清5.猪血清免疫球蛋白IgG的分离纯化及抗大肠杆菌作用 [J], 孟腾飞;韩愈杰;王敬;魏萌;吴国江因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
(整理)乳铁蛋白-聚合物泡囊载S14G-Humanin肽对Amyloid-β25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的神经保护作用
乳铁蛋白-聚合物泡囊载S14G-Humanin肽对Amyloid-β25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的神经保护作用俞媛1,冯亮2,高会乐2,蒋新国2*(1第二军医大学药学院药剂学教研室上海200433,2 复旦大学药学院药剂学教研室上海200032)摘要:目的构建以乳铁蛋白作为靶向功能基、可生物降解聚合物泡囊为载体的脑靶向递药系统,并对其脑部递药特性作出药效学评价。
方法制备载神经肽S14G-Humanin的乳铁蛋白-聚合物泡囊并对其进行表征,建立大鼠阿尔茨海默病模型,采用Morris水迷宫试验评价载药系统对大鼠记忆认知障碍的改善。
结果聚合物泡囊粒径约126nm,zeta电位-2.54mV,包封率21.78%,药效学实验表明,载S14G-Humanin的聚合物泡囊能够显著改善大鼠的记忆缺陷,同时对Amyloid-β25-35诱导的Bax蛋白的过量表达具有抑制作用。
结论乳铁蛋白连接聚合物泡囊载药系统能够对多肽药物起到保护作用,提高药物的治疗效果,本递药系统具有较好的脑内递药特性。
关键词:聚合物泡囊乳铁蛋白阿尔茨海默病中图分类号:文献标识码:文章编号:Lactoferrin Conjugated self-assembled Polymer vesicles loaded S14G-Humanin, prevents Amyloid-β 25-35 induced memory impairment in ratsYU Yuan1, FENG Liang2, GAO Hui-le2, JIANG Xin-guo2* (1 Department of Pharmaceutics , School of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433; 2 Department of Pharmaceutics, School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 200032)ABSTRACT: OBJECTIVE To prepare a novel brain targeting system, lactoferrin conjugated self-assembled polymer vesicles(Lf-PVs), which the brain delivery property had been evaluated in vivo. METHODS S14G-Humanin (S14G-HN) as a neuroprotective peptide was entrapped within Lactoferrin conjugated self-assembled polymer vesicles by an ammonium sulphate gradients method. The Lf-PVs were characterized for shape, size, electrical charge and entrapment efficiency. The vivo effectof Lf-PVs contained S14G-HN was examined on amnesia induced by Amyloid-β 25-35 in rats. RESULTS The Lf-PVs had a round and vesicle-like shape with a mean diameter around 126 nm by direct cryogenic temperature transmission electron micrograph (Cryo-TEM) and a negative electrical charge(-2.54mV). Coupling of Lf with PVs was confirmed by immuno-gold labeling of Lf visualized under the TEM. The drug entrapment efficiency is 21.78%. S14G-HN encapsulated into Lf-PVs could protect latent learning as well as spatial working memory and inhibit the over-expression of Bax protein in Amyloid-β25-35 treated rats. CONCLUSION The Lf-PVs may provide a promising carrier to deliver peptide across the BBB for the treatment of brain infection.KEY WORDS: polymer vesicles; lactoferrin; Alzheimer's disease中枢神经系统疾病是危害人类健康的一大类疾病,而血脑屏障(blood-brain barrieer,BBB)限制了大多数化学药物、多肽药物和基因药物的脑内转运,使药物无法自主进入脑部。
乳铁蛋白肽(Lactoferricin)作用机制研究进展
乳铁蛋白肽(Lactoferricin)作用机制研究进展
冯兴军;王建华;杨雅麟;滕达;刘立恒
【期刊名称】《中国生物工程杂志》
【年(卷),期】2004(24)1
【摘要】近年来抗菌肽由于自身的优点成为抗生素的替代品 ,并已成为研究与开发的热点 ,其中乳铁蛋白肽因其强大的生物学功能而备受关注。
就其结构、功能进行了综述 ,并根据其结构和生物学活性的关系探讨该肽的作用机制 ,同时也提出了乳铁蛋白肽研究中存在的一些问题及相应对策。
【总页数】4页(P23-26)
【关键词】乳铁蛋白肽;作用机制;抗菌;免疫调节
【作者】冯兴军;王建华;杨雅麟;滕达;刘立恒
【作者单位】中国农业科学院饲料研究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q513
【相关文献】
1.牛乳铁蛋白抗菌肽(Lactoferricin)基因的克隆与表达质粒构建 [J], 邓强;王春晓;鲁建章;朱政;刘承初;刘景晶
2.乳铁蛋白肽的作用机制及其转基因研究进展 [J], 林松涛;张居农;王亮
3.乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展 [J], 史芳芳;王亮
4.抗菌肽Lactoferricin生物学功能及其应用研究进展 [J], 冯兴军;王建华;单安山
5.乳铁蛋白及乳铁蛋白肽的基因工程研究进展 [J], 史芳芳;王亮;吕自力;王安江因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨胰岛素样生长因子-1受体及其结合蛋白-2、4 mRNA表达的影响
乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨胰岛素样生长因子-1受体及其结合蛋白-2、4 mRNA表达的影响巫晓强;薛英;陈壹;于美琴;罗松;邱秀萍;康伦雅;侯建明【期刊名称】《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》【年(卷),期】2017(10)2【摘要】Objective To investigate the impact of the lactoferrin on the gene expression of insulin-like growth factor-1 receptor (IGF-1R),insulin-like growth factor binding protein-2(IGFBP-2) and insulin-like growth factor binding protein-4(IGFBP-4) in the ovariectomized rat models.Methods Randomly divide 50 cleaning female Sprague-Dawley rats into two groups:40 in Ovx group and 10 in Sham group.And the 40 rats are subdivided randomly into the following groups:the Con group (distilled water 2 mL/d),the Lactoferrin (100 mg/kg·d) group(LF1),the Lactoferrin(1g/kg·d) group(LF2), and the Lactoferrin (2.0 g/kg·d) group(LF3).Each group has 10 rats.Give them 6 months of interventional treatment,employ real-time PCR to measure the levels of insulin-like growth factor binding protein 2(IGFBP-2),the insulin-like growth factor binding protein 4 (IGFBP-4),the insulin-like growth factor-1 receptor (IGF-1R)mRNA.Results HE Staining shows that the trabecular bone has dense arrangement with a large amount of cells in Sham group, while in the Con group,it decreases in amount with dimination and breakage,and widens in space with few and scattered cells,which leads to a relatively large empty area in itsstructure.Trabecular bone of group LF is between group Sham and group Con.In condition of interventions of different lactoferrins,compared with group Con,the trabecular bone in group LF increases in its dense arrangement and thickness but decreases its pared with the sham-operated group,the relative expression of IGFBP-2, IGFBP-4 mRNA in the Con group significantly increases while the expression of IGF-1R mRNA significantly decreases (All P<0.01).Compared with the Con group,in group LF1,LF2, and LF3,the relative expression of IGFBP-2 significantly decrease to 0.085±0.01,0.013±JP0.00,0.012±0.00,IGFBP-4 mRNA decrease to0.329±0.07,0.040±0.01,0.032±0.01, which are positively correlated to the concentration of the lactoferrin (All P<0.01).While the expression of IGF-1R mRNA significantly increase to 1.977±0.55,3.139±0.53,3.600±2.46 and elevates in a dose-dependent manner.Conclusion Lactoferrin can promote the expression of IGF-1R mRNA but possibly inhibit the expression of IGFBP-2 and IGFBP-4.%目的探讨乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨组织中胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(insulin-like growth factor binding protein-2,IGFBP-2)、胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)mRNA表达的影响.方法50只清洁级雌性SD大鼠采用数字表法随机分为去卵巢模型组(Ovx组)40只与假手术组(Sham组)10只,同时把去卵巢大鼠模型组随机分为模型组(蒸馏水2 mL/d)(Con组)、乳铁蛋白(0.1 g/kg·d)组(LF1)、乳铁蛋白(1 g/kg·d)组(LF2)、乳铁蛋白(2 g/kg·d)组(LF3),每组10只,连续干预治疗6个月后,采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠骨组织中IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4 mRNA表达的情况,分析其异同.结果 HE染色结果显示:Sham组骨小梁排列密集,细胞数量多;而Con组骨小梁排列稀疏,细胞数量少;LF组介于Sham组和Con组之间,不同的乳铁蛋白干预后,与Con组相比,随着乳铁蛋白剂量增大,其骨小梁排列密度增大,细胞数量增多.与Sham组比较,Con组大鼠骨组织中IGFBP-2、 IGFBP-4 mRNA相对表达量明显增高,IGF-1R mRNA相对表达量明显降低(均P<0.01).与Con组比较,LF1组、LF2组、LF3组大鼠骨组织中IGFBP-2 mRNA相对表达量明显下降为0.085±0.01、0.013±0.00、0.012±0.00,IGFBP-4 mRNA下降为0.329±0.07、0.040±0.01、0.032±0.01,二者下降量均与乳铁蛋白浓度正相关(均P<0.01);而IGF-1R mRNA相对表达量升高为1.977±0.55、3.139±0.53、3.600±2.46,呈剂量依赖性升高.结论乳铁蛋白可能抑制去卵巢大鼠骨组织IGFBP-2、 IGFBP-4 mRNA的表达,促进其IGF-1R mRNA的表达.【总页数】7页(P114-120)【作者】巫晓强;薛英;陈壹;于美琴;罗松;邱秀萍;康伦雅;侯建明【作者单位】361026 福建厦门,厦门市海沧医院内分泌科;350028 福州,福建省立金山医院内科;350001 福州,福建省立医院心电图室;350001 福州,福建省立医院急诊科;350001 福州,福建省立医院急诊科;364000 福建龙岩,龙岩市第一医院内分泌科;362000 福建泉州,泉州第一医院城东分院内分泌科;350001 福州,福建省立医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】R589.9【相关文献】1.骨康对去卵巢大鼠骨源性碱性磷酸酶和胰岛素样生长因子的影响 [J], 陈一凡;黄宏兴;李颖2.不同运动方式对大鼠肝脏胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3及瘦素受体的影响 [J], 邵月3.乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度及骨M-CSF,IL-6mRNA的影响 [J], 薛英;侯建明;林庆明;蓝旭华;吴晖南4.乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度和骨形态学的影响 [J], 高威;张巧5.补肾调冲方对去卵巢大鼠性激素水平及下丘脑雌激素受体α、雌激素受体β mRNA表达的影响 [J], 杜永红;李沛霖;韩冰因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
乳铁蛋白对福尔马林致痛大鼠行为学及一氧化氮合酶表达的影响
乳铁蛋白对福尔马林致痛大鼠行为学及一氧化氮合酶表达的影响桂军云;周强;庞庆丰;曾因明【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2008(002)020【摘要】目的通过观察鞘内注射乳铁蛋白对福尔马林致痛大鼠行为学及一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨乳铁蛋白可能的抗伤害机制.方法雄性SD大鼠80只,随机分为生理盐水组(NS组)和福尔马林组(F组);实验组分为乳铁蛋白1 ug -福尔马林组(F-R1组),乳铁蛋白10 ug -福尔马林组(F-R10组)和乳铁蛋白100 ug -福尔马林组(F-R100组).五组鞘内分别给予NS 20 ul,NS 20 ul, 乳铁蛋白1 ug, 乳铁蛋白10 ug, 乳铁蛋白100 ug; 10 min后,除NS组大鼠组底注射NS 100 ul外,其余各组均给予5%福尔马林100 ul.经以上处理8只动物在福尔马林处理后30 min 取脊髓观察NOS 的表达,另8只动物在福尔马林处理后0~1 h观察行为学.结果 F 组的缩腿舔爪的时间和脊髓NOS表达显著长于,强于NS组;预先给予乳铁蛋白能抑制以上的作用,且呈剂量依赖性.结论乳铁蛋白明显抑制福尔马林致痛大鼠痛行为及NOS表达,可能是其产生抗伤害作用机制之一.【总页数】3页(P1-3)【作者】桂军云;周强;庞庆丰;曾因明【作者单位】528200,广东省中西医结合医院麻醉科;528200,广东省中西医结合医院麻醉科;徐州医学院江苏省麻醉重点实验室;徐州医学院江苏省麻醉重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.电针预处理对福尔马林致痛大鼠行为学及脊髓后角NOS表达的影响 [J], 张玲;崔巍;张莉2.曲马多对福尔马林致痛大鼠脊髓一氧化氮合酶、生长抑素的影响 [J], 林青;杨锡馨;林财珠3.鞘内注射阿米替林对福尔马林致痛大鼠行为学及脊髓Fos表达的影响 [J], 张健;聂鑫;冯智英4.尼氟灭酸对福尔马林致痛大鼠行为学的影响 [J], 李静;李丽;马克涛;司军强5.预先鞘内注射氯诺昔康对福尔马林致痛大鼠行为学及脊髓c-Fos蛋白表达的影响[J], 陈旭;杨勇;刘慧;肖红;杨邦祥因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
乳铁蛋白对糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨密度及骨形态学的影响
乳铁蛋白对糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨密度及骨形态学的影响顾燕;张巧【期刊名称】《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》【年(卷),期】2010(3)4【摘要】目的探讨乳铁蛋白对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠骨密度及骨组织形态学的影响.方法 60只雌性4月龄Wistar大鼠,随机分为对照组、模型组、乳铁蛋白治疗组和阿仑膦酸钠治疗组.除对照组外,各组均予地塞米松2.0 mg/kg肌肉注射(2次/周)诱导糖皮质激素性骨质疏松模型.造模同时分别给予乳铁蛋白3 g/kg·d-1、阿仑膦酸钠160 mg/kg·d-1预防性治疗,对照组、模型组予0.9%氯化钠注射液灌胃.3个月后行骨密度及骨形态学检测.结果 (1)与对照组相比,模型组左侧股骨及椎骨骨密度、骨小梁厚度及面积、成骨细胞计数明显降低,破骨细胞计数明显升高(P<0.01).(2)乳铁蛋白治疗组大鼠骨密度较模型组明显升高(P<0.01),与阿仑膦酸钠治疗组、对照组比较差异无统计学意义;(3)乳铁蛋白治疗组大鼠成骨细胞计数较模型组显著增多(P<0.01),与阿仑膦酸钠治疗组差异无统计学意义;(4)乳铁蛋白治疗组大鼠破骨细胞计数较模型组显著降低(P<0.01),较阿仑膦酸钠治疗组显著增多(P<0.01);(5)乳铁蛋白治疗组大鼠左侧股骨及椎骨骨小梁厚度与面积较模型组厚度显著增厚、面积显著变大(P<0.01),较阿仑膦酸钠治疗组厚度显著变薄、面积显著减少(P<0.01).结论 (1)乳铁蛋白可改善GIOP大鼠骨微结构,增加成骨细胞数目,降低破骨细胞数目.(2)乳铁蛋白与阿仑膦酸钠在增加骨密度、阻止成骨细胞数目降低方面疗效相似,但在降低破骨细胞数目、增加骨小梁厚度、骨小梁面积方面乳铁蛋白疗效不如阿仑膦酸钠.【总页数】7页(P269-275)【作者】顾燕;张巧【作者单位】550004,贵阳,贵阳医学院附属医院内分泌科;550004,贵阳,贵阳医学院附属医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】R681【相关文献】1.电针对糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠骨密度和骨代谢的影响 [J], 欧阳钢;景涛;徐小梅;王玲玲2.乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度和骨形态学的影响 [J], 高威;张巧3.硝酸甘油间断性给药对大鼠糖皮质激素性骨质疏松模型骨密度及血清NOS水平影响的初步研究 [J], 颜廷振;黄朝梁;邓忠良;陈世荣;柯珍勇;蔺超4.大豆苷元对糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨量及骨微结构的影响 [J], 孙强;刘建5.电针对糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠骨密度和组织形态的影响 [J], 欧阳钢;景涛;徐小梅;王玲玲因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较
不同来源乳铁蛋白及乳铁蛋白素对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的比较皮冰冰;赵晓;吕萍萍;彭钰凯;潘琳;许晓曦【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2018(039)013【摘要】以牛乳清乳铁蛋白(bovine whey lactoferrin,LFW)、牛初乳乳铁蛋白(bovine colostrum lactoferrin,LFC)、人乳铁蛋白(human lactoferrin,LFH)、牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)和人乳铁蛋白素(human lactoferricin,LfcinH)为研究对象,研究其对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响并比较不同来源乳铁蛋白(lactoferrin,LF)及乳铁蛋白素(lactoferricin,Lfcin)作用效果的差异性.采用CCK-8法检测不同来源的LF与Lfcin作用小鼠脾淋巴细胞24、48、72 h后,及其与丝裂原共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响.结果显示:LF与Lfcin 均在48 h时对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进效果最好,且在一定质量浓度范围内促进效果随质量浓度升高而加强;LF与Lfcin均在一定质量浓度范围内提高刀豆蛋白A 诱导的T淋巴细胞的增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞的增殖.结果表明:两种牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,LFB)及LfcinB可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提高婴幼儿免疫能力,LFB推荐添加质量浓度为0.50~2.00 mg/mL,Lfcin推荐添加质量浓度为75~125 μg/mL.【总页数】6页(P184-189)【作者】皮冰冰;赵晓;吕萍萍;彭钰凯;潘琳;许晓曦【作者单位】东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨 150030;绥芬河出入境检验检疫局,黑龙江绥芬河 157300;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨 150030;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨 150030【正文语种】中文【中图分类】TS252.1【相关文献】1.流式细胞术分析牛乳铁蛋白素对Jurkat细胞增殖、分化的影响 [J], 王静;赵宁;李萌;张艳杰;张书义;滕国新;宋真;刘宁;许晓曦2.蒙医瘟疫热症经典方查干汤对小鼠脾淋巴细胞增殖及白细胞介素-2和干扰素-γ分泌的影响 [J], 伊丽娜;张屏;张烜;昌妍希;杭凌宇;包保全3.不同巴氏杀菌条件下的牛源乳铁蛋白对IEC-6细胞增殖的影响 [J], 席恩泽;赵晓;崔东影;盛雪;李梦寒;许晓曦4.不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖影响 [J], 李赞阳;刘红;李炳奇;孙萍;谷新利5.牛乳铁蛋白及其酶解产物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 [J], 张东送;庞广昌;刘萍;王彦因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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史上最快最全的网络文档批量下载批量上传,尽在:/item.htm?id=9176907081乳铁蛋白-聚合物泡囊载S14G-Humanin肽对Amyloid-β25-35诱导的阿尔茨海默病模型大鼠的神经保护作用俞媛1,冯亮2,高会乐2,蒋新国2*(1第二军医大学药学院药剂学教研室上海200433,2 复旦大学药学院药剂学教研室上海200032)摘要:目的构建以乳铁蛋白作为靶向功能基、可生物降解聚合物泡囊为载体的脑靶向递药系统,并对其脑部递药特性作出药效学评价。
方法制备载神经肽S14G-Humanin的乳铁蛋白-聚合物泡囊并对其进行表征,建立大鼠阿尔茨海默病模型,采用Morris水迷宫试验评价载药系统对大鼠记忆认知障碍的改善。
结果聚合物泡囊粒径约126nm,zeta电位-2.54mV,包封率21.78%,药效学实验表明,载S14G-Humanin的聚合物泡囊能够显著改善大鼠的记忆缺陷,同时对Amyloid-β25-35诱导的Bax蛋白的过量表达具有抑制作用。
结论乳铁蛋白连接聚合物泡囊载药系统能够对多肽药物起到保护作用,提高药物的治疗效果,本递药系统具有较好的脑内递药特性。
关键词:聚合物泡囊乳铁蛋白阿尔茨海默病中图分类号:文献标识码:文章编号:Lactoferrin Conjugated self-assembled Polymer vesicles loaded S14G-Humanin, prevents Amyloid-β 25-35 induced memory impairment in ratsYU Yuan1, FENG Liang2, GAO Hui-le2, JIANG Xin-guo2* (1 Department of Pharmaceutics , School of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433; 2 Department of Pharmaceutics, School of Pharmacy, Fudan University, Shanghai 200032)ABSTRACT: OBJECTIVE To prepare a novel brain targeting system, lactoferrin conjugated self-assembled polymer vesicles(Lf-PVs), which the brain delivery property had been evaluated in vivo. METHODS S14G-Humanin (S14G-HN) as a neuroprotective peptide was entrapped within Lactoferrin conjugated self-assembledpolymer vesicles by an ammonium sulphate gradients method. The Lf-PVs were characterized for shape, size, electrical charge and entrapment efficiency. The vivo effect of Lf-PVs contained S14G-HN was examined on amnesia induced by Amyloid-β 25-35 in rats. RESULTS The Lf-PVs had a round and vesicle-like shape with a mean diameter around 126 nm by direct cryogenic temperature transmission electron micrograph (Cryo-TEM) and a negative electrical charge(-2.54mV). Coupling of Lf with PVs was confirmed by immuno-gold labeling of Lf visualized under the TEM. The drug entrapment efficiency is 21.78%. S14G-HN encapsulated into Lf-PVs could protect latent learning as well as spatial working memory and inhibit the over-expression of Bax protein in Amyloid-β25-35 treated rats. CONCLUSION The Lf-PVs may provide a promising carrier to deliver peptide across the BBB for the treatment of brain infection.KEY WORDS: polymer vesicles; lactoferrin; Alzheimer's disease中枢神经系统疾病是危害人类健康的一大类疾病,而血脑屏障(blood-brain barrieer,BBB)限制了大多数化学药物、多肽药物和基因药物的脑内转运,使药物无法自主进入脑部。
因此具有脑内靶向递药作用的新型药物传递系统得到广泛研究,其中尤以通过受体介导转运入脑的微粒递药系统的研究最为成功[12,13]。
乳铁蛋白(lactoferrin, Lf)是一种多功能蛋白,主要用于调节内环境离子稳定、抗微生物感染、调节细胞生长、增强免疫等,其生理功能通过乳铁蛋白受体介导进入细胞来实现[9],有研究表明脑部有乳铁蛋白受体的表达。
聚合物泡囊(Polymer Vesicles, PVs)是一种新型载药系统,由具有两亲性质、可生物降解的聚合物分子自组装而成,结构类似于细胞膜的双分子层,体内外的稳定性显著优于脂质体[1]。
PVs形成条件温和并且具有亲水性内核结构,对蛋白多肽类药物、基因药物的载药性能可望优于其他一些纳米微粒,此外通过聚合物分子的种类、分子量、嵌段比例选择,所构建PVs 递药系统的理化特性乃至体内行为更具有主观的可调控性[1,2,4]。
因此本研究以单甲氧基聚乙二醇-乳酸-羟基乙酸共聚物(MPEG-PLGA)和马来酰亚胺基聚乙二醇-乳酸-羟基乙酸共聚物(Maleimide-PEG-PLGA)[5]制备PVs作为载药系统,共价键连接具有靶向功能的Lf,构建一种新型的通过乳铁蛋白受体介导的脑内靶向递药系统(Lf-PVs)。
Humanin(HN)是由Hashimoto 等于2001 年成功地通过功能筛选的方法得到的一种对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD) 相关的细胞凋亡起特异阻断作用的神经保护肽,由24个氨基酸组成,是目前发现的唯一既能抑制Aβ淀粉蛋白又能抑制FAD基因突变诱发的神经毒性作用的线性短肽。
HN第14位的丝氨酸替换为甘氨酸得到S14G-Humanin(S14G-HN),其神经保护作用是HN的1000倍。
作为一种非常有前景的抗AD药物,S14G-HN具有高特异性以及低剂量的特点,但同时也具有难以透过BBB,易于机体内环境中代谢失活的缺点,需要脑室内注射给药,静脉给药难以达到理想的治疗效果[15,16]。
结合多肽药物脑部递药存在的问题及聚合物泡囊在药物输送中的特点,本研究采用离子梯度主动载药法将S14G-HN包载于Lf-PVs内制备载药泡囊系统(S14G-HN-Lf-PVs),考察递药系统对记忆缺陷AD模型大鼠的神经保护作用。
从而对Lf-PVs作为脑部多肽药物递送系统的可行性作出评价。
1 材料与方法1.1 试剂与仪器试剂:乳铁蛋白(Sigma公司);S14G-HN肽(纯度>90%,杭州中肽生化有限公司);淀粉样蛋白Amyloid-β 25-35(Sigma公司);MPEG-PLGA( Mr 3000:9000,自合成);maleimide-PEG-PLGA( Mr 3500:9000,自合成);Sepharose CL-4B(Pharmacia 公司);山羊抗乳铁蛋白亲和纯化抗体(BioVision公司);胶体金标记IgG抗体(10nm,Sigma公司);2-iminothiolane(Traut’s试剂,Sigma公司);Bax(P-19)兔多克隆抗体(Santa Cruz公司);生物素标记二抗(Immuno Research公司);ABC 免疫组化试剂盒(Vector公司);乙腈(TEDIA公司),其他试剂均为分析纯。
仪器:旋转蒸发仪(R-200,Buchi,德国);紫外分光光度仪(UV-240 1PC,Shimadzu,日本);粒度/zeta电位测定仪(NICOMPTM380 ZLS,NICOMP,美国);透射电镜(CM120,Philip,荷兰);冷冻透射电镜(JEOL 2010,JEOL,日本);Morris 水迷宫视频分析系统(DigBehv-MM,上海吉量软件科技有限公司);大鼠脑立体定位仪(江湾I-C型,第二军医大学);高效液相色谱仪(LC-10A RF-10AXL,Shimadzu, 日本);倒置相差显微镜(UFX-DX,Nikon,日本)。
动物:SD大鼠(♂,250g,中科院上海实验动物研究中心提供)。
1.2方法1.2.1S14G-HN-Lf-PVs的制备及表征制备注入法制备PVs,将Maleimide-PEG-PLGA与MPEG-PLGA一定比例混合,溶解于有机溶剂中,将溶液缓慢注入120 mmol·L-1(NH4)2SO4溶液中[7],静置4h,旋转挥发除去有机溶剂,Sepharose CL-4B凝胶柱置换外水相为0.01M的Nacl 溶液,加入定量S14G-HN和1,4-二氧杂环己烷[6],37℃孵育20min,透析除去有机溶剂,过凝胶柱分离游离药物得到未链接乳铁蛋白的药物泡囊(S14G-HN-PVs)。
将Lf溶解,按摩尔比加入2-iminothiolane得到巯基化Lf,将巯基化后的Lf以Maleimide:-SH=1:1加入已制备好的S14G-HN-PVs中,充氮室温下缓慢反应6h,得到S14G-HN-Lf-PVs[10,11]。
表征泡囊粒径和zeta电位采用粒度/Zeta电位测定仪分析。
1-2%(w/v,pH7.0)磷钨酸负染色后,透射电镜下观察泡囊形态。
冷冻透射电镜观察泡囊的膜层结构。