固始鸡白细胞介素18全基因的克隆与序列分析

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鸡白细胞介素18全长基因的克隆、表达及分子进化分析

收稿日期：０５０ — ５２０ — ６１
基金项目：国家 “６ ” 科技研究发展计划资助（０－９ — ２。江省重点科技项目（ｌ１２６）浙江省自然科学基金重８３高１１ｊ９０）浙０１０４５，
大项目（ｏＺ００）Ｎ．Ａ１５
化分析表明萧山鸡儿．８基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡尼一８成熟蛋白序ＪＪ
列插入ｐＥＴ２载体并在Ｅｃｌ中得到表达，ＧＸ４．ｏｉ获得４Ｄ的ＧＴＩｌ５ｋＳ．广８融合蛋白。Ｌ经纯化后用于制备
多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素ｌ８的全长基因进行了克隆及表达，并对其分子进化进行了分
２Ｉｓｔｔｏｒｖｎｉｅｅｎｒｄｃｎ，ｈｊｎｒｖｃｅｂｒｔ，ａｇｈｕ３０２，ｈｎ；．ｎｔｕｅｆｅｅｔｅＶｔａｙＭｅｉｅＺｅａｇｐｏｉｉｋｙｌｏａｒＨｎｚｏ０９ＣｉａｉＰｖｉｒｉｉｎａｌａｏｙ１３ＭｅｉｏｅｅｆｈｈｚＵｉｅｉ，ｉｊｎｈｈｚ８２０，ｈｎ）．ｄｃＣｌｇｉｅｉｎｖｒｔＸｎｉｇｉｅｉ３０２ＣｉｌａｌｏＳｓｙａＳａ
基因（ｅｂｎｃｅｓｎＡ６８４）Ｇｎａｋａｃｓｉ，Ｙ２６８。扩增片段全长５１ｐ共编码１７个氨基酸的前体蛋白，中含ｏ９，ｂ９其
有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡尼一８全长基因核苷』酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为９．％，８９只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失，９分子进

鸡自介素-18与鸡α-干扰素融合蛋白克隆及其原核表达载体的构建

术（ＳＯＥ）得到ｍＣｈｌＬ一１８／ｍＣｈＩＦＮ一融合ＤＮＡ。将回收的ＤＮＡ克隆于ｐＧＥＭ — ＴＥａｓｖ载体，并对其进行了测序。
测序结果表明获得了阅读框完整、连接部位正确的ｍＣｈｌＬ一１８／ｍＣｈｌＦＮ — ＯＬ融合分子ＤＮＡ。将所克隆湿性关节炎等方面有着
等细胞因子～１，增强Ｆａｓ介导的细胞毒作用】，促进Ｔ细胞
潜在的应用前景。ＩＬ一１８在结构上与ＩＬ一１很相似，但两
表３１０种药物的药敏试验结果
［２］Ａ．Ｄ．莱曼．猪病学【Ｍ】．张文军译．第六版．北京：北京农业大学出版社．１９９０．
［３】吴硕显．猪的链球菌与链球菌病ＩＪ１．养猪，２００６，
（５）：４３ — ４４．
［４］孙顺友．猪链球菌病的综合诊断与防制［Ｍ］．畜牧
与饲料科学．２００９，３０（２）：１７７ — １７８．【５］郑灵巧．猪链球菌研究进展改变救治原则【Ｊ］．动物
医学进展，２００９，３０（９）：１５－１８．
３结论
［６］房海，陈翠珍．畜禽致病性细菌对抗菌类药物的体外敏感性测定方法［Ｊ］．河北科技师范学院学报，１９８８，２（２）：
７９－８５．
经流行病学，临床诊断、实验室诊断及动物接种试验，

固始鸭白细胞介素-18全基因克隆与分子进化分析

ｒｓｌｓｏｄｔａｈｕｋＩ１ｅｅｉ６３ｂｎｌｎｔｎｏｉｇ２０ａｎｃｄ．ｅｇｎｓｈｇｌｏｓｒｅｎｈｒｄｅｕｔｈｗｅｈｔｔｅｄｃＬ－８ｇｎｓ０ｐｉｅｇｈｅｃｄｎ０ｍｉｏａｉｓＴｈｅｅｉｉｈｙｃｎｅｖｄａｄｓａｅ
９．８８％．９８％ｎｃｅｔｅｈｍｏｏｙａｄ９．％一９５％ａｎｃｄｈｍｏｏｔｔｅｕｋＩ－８ｇｎｓ（ｃｅｓｎＮｏ９．ｕｌｏｉｏｌｇｎ７５ｄ９．ｍｉｏａｉｏｌｇｗｉｏｈｒｄｃＬ１ｅｅａｃｓｉ．ｙｈｏ
Ｓｐ２０ｅ．０７
固始鸭白细胞介素一１８全基因克隆与分子进化分析
陈红英１，李新生，崔保安－，夏平安・，２，赵丽－，方丽云－一
（．１河南农业大学牧医工程学院，河南郑州４００；２河南省动物性食品安全重点实验室，河南郑州４００）５０２．５０２
ＣＨＥＮｎｇｙｎ，ＬＩＸｉ — ｈｎｇ，ＣＵＩＢａａＸＩＰｎａ，ＺＨＡＯ。，ＦＨｏ－ｉｇ ’ ｎｓｅｏ－ｎ ’ ，Ａｉｇ－ｎ。ＬｉＡＮＧ — ｕ、Ｌｉｙｎ
（．ｏｌｅｏｎｍａＨｕｂｎｒｎｔｒａｙＨｅａｒｕｔｒｌｎｖｒｉ，ｈｎｚｏ５０２Ｃｉａ１ＣｌｇｆＡｉｌｓａｄｙａｄＶｅｅｉｒ，ｎｎＡｇｉｌａｉｅｓｙＺｅｇｈｕ４００，ｈｎ；ｅｎｃｕＵｔ

鸡白细胞介素18研究进展

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安徽农业科学，ｏｒａｏＡｎｕＪｕｎｌｆｈｉ
．ｃ．０８３（６：７６—６７Ｓｉ２０。６１）６７７７
责任编辑
孙红忠
责任校对
况玲玲
鸡白细胞介索１８研究进展
王宪文，刘兴友王岩２杭柏林，，
ｔｏｆＩＮ－￣ｍｍａｗｉｈｈｓｔｅｅｅｔｎｏｎｉｉｆｃｉｎｐｍｏｉｇｇｏｈ，ｖｌｉｇｉｉｎｔｉｉｎｏＦｔｈｃａｈｆｃｉｆａｔｎｅｔ，ｒｏ — ｏｏｔｒｗｔｉｏｖｎｎｎａｍｍｕｅｒｓｏｓｓｔｎｎｅｎｅｐｎｅｏｍｉｒｂａｎｅｔｎｐｅｅｉｇｔｅｉ— ｃｏｉｌｉｆｉｒｃｄｎｈｎｃｏ
ｃｄｉａｉｅｗ山ａｍｏｅ￣ａｗｅｇｔｆ．Ｄａ．ｈｌｃｒｉｈ２０ｋｏ３ｔｅＮ－ｅｍｉａ９ａｎｃｄｐｐｉｅｄｔｒｎｎｒｃｌａｉｔｉｕｉｎｏ１，１ａ１ｌ８Ｃｉｄｃｅｒ— ｔｒｎｌ２ｍｉｏａｉｅｔｅｅｍｉｅｉｔａｅＭｒｄｓｒｂｔｆ Ⅱ ８．ｌａｎｕｅ￥ｃｄｏＣｌ，１ｎｅ
ｄｃｏｆｏｌｌｒｄｈｎｒｌｌＴｌｅｒｓｏｓｓＡｌｉｍｌｅａｊｖｎｓＣｌ－８ｉｉｔｏｔｎａｏ，ｏｅｖｒａｄｉｃｌｉｄｃｎｅｅｔｅａ— ｕｔｎｏｂｔｃｌａｕ￣ａｉｉｎｐｎｅ．ｓａｌｄｕａｔ，ｈＬ１ｉｈｅｕａｎＤａｅｌｍｌｌｓｍｍｍｓｉｌｔｍｒｏｅ，ａｌｎｕｅｃｉｍｒｎｔａｆｖｎ
ｔ— ｌＯｎｌｌａｅｐｎｅｉｈｃｅｉｔｌｒｉｌｌｅｒｓｓｃｉｋｎ．ＵｌｎｌｏｎＫｅｗｏｄＣｈＬ１ＩＮ－ＡｎｉｉｆｔｏｙｒｓＩ－８；Ｆｙ；ｔｎｅｉｎ — ｃ

鸡IL—18和IFN—γ协同抗病毒机制分析

鸡IL—18和IFN—γ协同抗病毒机制分析作者：李晓婷宋佰芬王歆桐王梦瑶余崴马金柱于立权崔玉东来源：《安徽农学通报》2017年第11期摘要：禽病毒性疾病如禽传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）一直困扰着养禽业的健康、快速发展。

在其他抗病毒感染的药物效果不理想时，有必要应用细胞因子制剂来改善机体免疫并提高抗病毒能力。

已证明，鸡白细胞介素18（Chicken interleukin-18，ChIL-18）和鸡干扰素γ（Chicken interferon，ChIFN-γ）对多种病毒感染具有抑制作用。

为了研究新型细胞因子制剂，该实验分析了鸡白细胞介素18（Chicken interleukin-18，ChIL-18）和鸡干扰素γ（Chicken interferon，ChIFN-γ）以及二者混合后的抗病毒机制。

ChIL-18和ChIFN-γ蛋白注射雏鸡后7d内，应用试剂盒检测雏鸡体内血清中细胞因子的变化情况。

利用鸡外周血单核细胞分析ChIL-18和ChIFN-γ对细胞内NO、几种Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）及下游信号通路的影响。

实验结果表明，混合组蛋白可刺激雏鸡血清中产生高水平IL-6，IL-12，及IL-17。

混合组蛋白可以诱导巨噬细胞中NO的分泌水平显著升高，TLR 2、TLR 3、TLR 4和MHC-II的表达量升高，MAPK和NFκB信号通路被激活。

综上结果表明，ChIL-18和ChIFN-γ以及二者协同可诱导机体对病毒感染产生有效的防御作用，为新型细胞因子制剂的研究提供参考。

关键词：鸡白细胞介素18；鸡干扰素γ；抗病毒；免疫调节中图分类号 S855.3 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2017）11-0040-07Synergistic Antiviral Mechanism of Chicken IL-18 and IFN-γLi Xiaoting1 et al.（1College of Animal Science and Technology，Heilongjiang Bayi Agricultural University，Daqing 163319，China）Abstract：The healthy and rapid development of poultry industry was troubled by avian viral diseases such as Infectious Bursal Disease（IBD）. With other anti-viral drug effect is not ideal，it is necessary to use cytokine preparations to improve the immune system and improve the anti-virus ability. Chicken interleukin-18 （ChIL-18）and chicken interferon gamma（ChIFN-γ）have been shown to inhibit a variety of viral infections. In order to study the novel cytokine preparations，the effects of ChIL-18 and ChIFN-γ and th e two mixed antiviral mechanism was analyzed. The results of this laboratory had showed that ChIL-18 and ChIFN-γ can inhibit IBDV proliferation in chickens，especially with the mixed group，which indicates that the mixed group has better antiviral effect. Within 7 days after ChIL-18 and ChIFN-γ injection of chickens，the kit was used to detect the changes of cytokines in the chicks. The effects of ChIL-18 and ChIFN-γ on intracellular NO，several Toll-like receptors （TLR）and downstream signaling pathways were analyzed by using peripheralblood mononuclear cells of chickens. The results showed that the levels of IL-6，IL-12 and IL-17 in the serum stimulated by mixed group ware significantly different from those in the PBS group. Mixed group proteins could induce NO production，the expression levels of TLR2，TLR3，TLR4 and MHC-II were increased and MAPK and NFκB signaling were activated. These results indicated that the mixed group had a better theoretical basis for antiviral ability，ChIL-18 and ChIFN-γ，both of which could induce the body to produce effective defense against virus infection and provide reference for the study of new cytokine preparations.Key words：Chicken interleukin 18；Chicken interferon γ；Antiviral；Immunoregulation1957年，Isaacs和Lindenmann在研究流感病毒的干扰现象时发现了一种与病毒干扰作用有关的活性物质，命名为干扰素（interferon，INF）[1]。

鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立

好的稳定性、重复性和特异性，为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。
关键词：白细胞介索１鸡８成熟蛋白（ＣＩ８；ｍｈＬ一１）原核表达；白纯化；蛋间接ＥＩＡＬＳ中圈分类号：５３Ｑ０文献标识号：Ａ文章编号：０１４４（０２０００ — ５１０ — ９２２１）４— ０５０
ＰｒｋｒｏｉｐｅｓｏｆＣｈｃｅＬ一１ａｕｅＰｒｔｉｎｎｏａｙｔｃＥｘｒｓｉｎｏｉｋｎＩＭｔｒｏｅｎＧｅｅａｄ８ＥｓａｌｈｅｔｏｎｒｃｔｂｉｍｎｆＩｄｉｅｔＥＬＩＡ０ＳｒｍｔｂｄｔｃｉｎｓＳｆｒ、ｅｕＡｎｉｏｙＤｅｅｔｏ
ＩｇＧ辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为１１０抗原抗体最佳结合时间是１５ｈ血清与二抗最适反：２０，０．，
应时间为１。阴性、ｈ阳性血清的判定标准为：被检样本的ＯＤ值是一组阴性样本ＯＤ值的２或３倍且Ｏ４ ≥ Ｄ５ｏ０５即为阳性，以ＰＮ表示，５＜Ｎ＜．．，比值／１Ｗ．２０为可疑，ＷＮ＜．为阴性。本试验结果证明该方法具有良１５
山东农业科学
２１，４４：９０２４（）５—
ＳａｄｎｇｉｕｔａＳｉｃｓｈｎｏｇＡｒｌｒｌｃｅｅｃｕｎ
鸡白细胞素１熟蛋白的原核表达８成及抗体间接ＥＩＡ方法的建立ＬＳ
苏倩倩，李恩扩，张海滨，周霞，胡敬东

鸡白介素18成熟肽基因原核表达及抗血清的制备

鸡白介素１８成熟肽基因原核表达及抗血清的制备
张海玲，多良。培欣冉，刘，闫丽辉曹殿军，
（＿国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，尔滨１００；２新疆农业大学动物１中哈５０１．医学学院，鸟鲁木齐８０５）３０２
摘要：用ＰＲ技术从含鸡Ｉ一８长基因质粒扩增出编码鸡Ｉ８成熟蛋白基因，克隆于ｐＲＥＨＴＣＩｌ全Ｉ１亚ＰＯＸａ
原核表达载体上，重组质粒转化大肠杆菌感受态Ｄａ中，Ｈ５随机筛选到阳性重组质粒，经酶切和测序证实目的基
ＡｂｔａｔＣｈｃｅｉ８ｍａｕｅｐｏｅｎｇｎｓａｐｉｅｒｍＩ１ｅｏｂｎｎｌｓｄｂｓｒｃ：ｉｋｎＩ１ｔｒｒｔｉｅｅｗａｍｌｉｄｆｏＩ一８ｒｃｍｉａｔｐａｍｉｙＰＣＲ，ｆ
ａｄｗａｕｃｏｅｎｏｐｏａｙｔｘｒｓｉｎｖｃｏＰＲＯＥＸＨＴａａｄｔｅｓｔａｓｏｍｅｎｏＥ．ｎｓｓｂｌｎｄｉｔｒｋｒｏｅｅｐｅｓｏｅｔｒｐｎｈｎｗａｒｎｆｒｄｉｔ
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新疆农业大学学报２０，９１：ｌ０６２（）～４
ＪｕｎｌｆＸｉｊａｇＡｒｃｌｒｌｎｖｒｉｏｒａｎｉｎｇｉｔａｉｅｓｙｏｕｕＵｔ

鸡白细胞介素18(IL-18)与临床疾病相关性的研究进展

—
来¨ 。ＩＬ—ｌ８的高水平与人和免疫相关的疾病有关，诸如病毒、菌感染和慢性炎症；用动物实验，制细应抑ＩＬ一１８的活性来治疗慢性炎症疾病如风湿性关节炎、克罗恩疾病和牛皮癣，可作为一个新的治疗理念。２４Ｉ８与心脏疾病Ｉ．Ｌ一１Ｌ—ｌ心脏疾病中也扮８在演了重要的角色。ＩＬ一１８作为促炎性因子能诱导细胞间粘附分子（ＣＭ一１、管细胞粘附分子和ＩＩＡ）血Ｌ— ｐ的产生，这些都与心脏功能障碍的发生有关，Ｌ一而Ｉ１８的血浆浓度与心脏功能障碍呈正相关 ¨ 引。高浓度的ＩＬ—ｌ８可以提高健康妇女获得心血管疾病的几率㈩。２５Ｉ．Ｌ一１肿瘤Ｉ８与Ｌ—ｌ２和ＩＬ—ｌ８都是肿瘤免疫的参与者，Ｌ一１Ｉ８有抑制肿瘤生长的功能。ＧｎａｇＸｕ等发现在间质干细胞中有腺病毒介导的ＩＬ一１８表达物可有效地抑制大鼠神经胶质瘤的生长；可产生Ｉ８的骨髓源基质细胞有协同治疗功能，Ｌ一１其是恶性神经胶质瘤的过继免疫疗法的一个新方法。ＩＬ一１８和Ｉ２的血清水平与食管癌发病程度呈正相关，Ｌ—ｌ其可作为食管癌患者的一个有用的肿瘤标记。ＭａｋｒＪＭｉｌｆ … ．ｃｌ等研究表明，Ｌ一１ａｅＩ８获得了对抗癌因子的抗性会降低与癌症细胞的免疫反应，免疫刺激的但细胞因子ＩＬ一１能增强ＩＦ～在耐药性肿瘤细胞８仍Ｎ（周血单核细胞）外的产生，明这些免疫刺激因子可表利于循环耐药性肿瘤患者的免疫疗法。ＭｏｆｅＬｅｌｒ等【究表明ＩＪ研Ｌ一１产生的沙门氏菌可以抑制皮下８早期肿瘤的生长，临床前细胞因子产生的细菌有望是肿瘤免疫疗法的一种新的微生物疗法。２６Ｉ．Ｌ一１其他Ｉ８与Ｌ一１参加了宿主防御，８还排斥移植器官。ＩＬ一１过促进先天和后天获得性免８通疫和促进ＴｌＴ２的反应来增强机体对抗原的免疫ｈ、ｈ应答，肾移植的免疫和免疫病理的反应起重要作用在并促进肾移植的排斥ｕ引。ＩＬ一１仅与临床疾病有８不关外，与焦虑、力、间学习等有关。敲除Ｉ还压空Ｌ一１８的小鼠与正常的小鼠相比，压抑程度显著、动程度其运几乎一样、忆力和探索能力显著下降，续４记连ｄ心室内注射ＩＬ一１８的已敲除ＩＬ一１８小鼠的学习记忆力也明显低于正常小鼠。ＩＬ一１８可以引起食欲下降和睡眠而引发出其他疾病。感染和压力的增大都会引起ＩＬ一１８水平的升高：Ｌ—ｌＩ８可能是调节下丘脑— 垂体一肾上腺的参与者之一，可能在调节中枢神经系也统担任一个重要角色而影响微生物、染病的感染和传疾病发生。 ¨。３鸡ＩＬ一１８的应用前景

鸡白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α基因荧光定量PCR检测方法的建立

鸡白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α基因荧光定量PCR检测方法的建立张昆丽;谢芝勋;滕丽琼;刘加波;谢丽基;庞耀珊;范晴;邓显文;罗思思【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2013(40)9【摘要】本研究根据GenBank上公布的鸡白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,在保守区域各设计合成1对特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组阳性质粒.采用梯度稀释重组标准品质粒DNA,构建SYBR GreenⅠ染料法荧光定量PCR标准曲线.结果显示,各基因的熔解曲线均呈单一熔解峰,IL-1β、IL-18、TNF-α和GAPDH的扩增效率分别是101.2％、95.6％、100.1％和98.2％,相关系数分别为0.9996、0.9998、0.9957和0.9989.敏感性试验结果表明,该检测方法在35个Ct值内可检测到100个模板拷贝数;重复性试验结果表明,组内变异系数均小于1.4％.本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法可用于鸡IL-1β、IL-18和TNF-αmRNA的检测,为导致免疫抑制性疾病病毒感染宿主细胞后细胞因子表达的定量分析奠定基础.【总页数】6页(P90-95)【作者】张昆丽;谢芝勋;滕丽琼;刘加波;谢丽基;庞耀珊;范晴;邓显文;罗思思【作者单位】广西大学动物科学技术学院,广西南宁530004;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001;广西壮族自治区兽医研究所,广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁 530001【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.白细胞介素18和鸡白细胞介素18 [J], 潘蔚绮;李广兴;刘胜旺2.生理状态下外周血白细胞γ干扰素、白细胞介素2、白细胞介素4和白细胞介素10基因表达的荧光定量PCR检测 [J], 陈佩杰;王茹;董强刚3.鸽白细胞介素8基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 潘超;韦天超;农海连;李秀凤;蒋桂林;苑亚东;程二财;磨美兰;韦平4.鸡IL-15、IL-16和IL-18基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 王远萍;唐涛;吴艳秋;王国镔5.鸡白细胞介素2和白细胞介素18基因的原核及真核表达 [J], 张艳雯;张鹤曦;覃静;周晴云;唐子琼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡白细胞介素-18(ChIL-18)重组蛋白的生物学活性检测

农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2007,15(1):5~10*基金项目：山东农业大学博士科研基金项目(No.23201)、“十一五”国家科技支撑计划重大项目(No.20061122)和山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(No.2006BS06015)资助。

**通讯作者。

Author for correspondence.教授，博士,主要从事畜禽传染病学和细胞因子的研究。

E-mail:<hkzhao@>.收稿日期：2006-01-11接受日期：2006-03-30·研究论文·鸡白细胞介素-18(ChIL-18)重组蛋白的生物学活性检测*李宏梅1,胡敬东1,马凤龙2,郑玉姝1,刘翠艳1,田兆菊1,赵宏坤1**(1.山东农业大学动物科技学院，泰安271018；2.山东信得药业,青岛266061)摘要：对含有鸡白细胞介素-18()基因的质粒在大肠杆菌()内进行诱导表达，经亲和层析法对表达产物进行纯化，用微量细胞病变抑制法CEF-VSV 系统，检测其对SPF 鸡脾淋巴细胞诱导产生γ-干扰素(IFN-γ)的活性和其对病毒的抑制效果；用3H-TdR 掺入法和MTT 法分别检测其对T 淋巴细胞诱导转化和NK 细胞杀伤活性的作用。

结果表明，经诱导表达出分子量44kD 的目的蛋白(与GST 融合表达)，纯化后得到去除菌体蛋白的高纯度目的蛋白；该蛋白能够诱导脾细胞产生IFN-γ，当浓度为250ng/mL 时诱导IFN-γ的活性最高，可达1×106U/mL ；但该蛋白不能直接抑制水疱性口炎病毒(VSV)在鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长；能够刺激淋巴细胞显著增殖，浓度为250ng/mL 时效果最佳；适当浓度的rChIL-18蛋白能促进NK 细胞的杀伤活性，浓度为150ng/mL 时，作用最强。

利用原核表达的重组鸡白细胞介素-18蛋白与天然鸡IL-18蛋白一样具有较广泛的生物学活性。

白细胞介素18和鸡白细胞介素18

白细胞介素18和鸡白细胞介素18潘蔚绮;李广兴;刘胜旺【期刊名称】《东北农业大学学报》【年(卷),期】2004(035)001【摘要】白细胞介素18是一种新发现的细胞因子,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌.目前在分子水平上已经证明,人、哺乳动物和某些鸟类中都有IL-18存在.IL-18在结构上属于IL-1家族,在功能上它与IL-12相似,且二者有协同效应.IL-18具有多种生物学功能,它不仅可以增强Th1型免疫反应,而且在Th2型免疫反应中也发挥一定的作用.人类医学研究证明IL-18在抗微生物感染、抗肿瘤免疫中具有应用潜力.在集约化畜禽养殖业中,包括白细胞介素18在内的细胞因子作为天然的免疫调节剂,目前已被公认为是一种可以替代传统疗法的新型治疗剂.鸡IL-18基因是最近才被发现的,由于它具有与人和哺乳动物相似的生物学功能,因而鸡IL-18在比较免疫学研究和禽病治疗中具有重要意义.【总页数】6页(P123-128)【作者】潘蔚绮;李广兴;刘胜旺【作者单位】东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学动物医学院,黑龙江,哈尔滨,150030;中国农科院哈尔滨兽医研究所,黑龙江,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S858.31;S852.3;S852.4【相关文献】1.鸡白细胞介素18（IL-18）与临床疾病相关性的研究进展 [J], 方礼禄;陈书明;武文君2.鸡白细胞介素1β、白细胞介素18、肿瘤坏死因子α基因荧光定量PCR检测方法的建立 [J], 张昆丽;谢芝勋;滕丽琼;刘加波;谢丽基;庞耀珊;范晴;邓显文;罗思思3.鸡白细胞介素2和白细胞介素18基因的原核及真核表达 [J], 张艳雯;张鹤曦;覃静;周晴云;唐子琼4.白细胞介素2和白细胞介素18对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗免疫作用的影响 [J], 张艳雯;玉发杨;黄福标;谭春萍;于冬玲5.重组鸡白细胞介素18(rChIL-18)对MDV感染SPF鸡细胞免疫的影响 [J], 李宏梅;胡敬东;郭慧君;郑玉姝;刘翠艳;田兆菊;赵宏坤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡白细胞介素18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

鸡白细胞介素18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达李新生;尹红征;陈红英;邵攀峰;王振亚;宋亚鹏【期刊名称】《安徽农业大学学报》【年(卷),期】2009(36)4【摘要】通过RT-PCR技术直接从罗曼鸡脾脏提取的总RNA中扩增鸡白细胞介素18(ChIL-18)全基因,并克隆和测序得到序列基因全长为597 bp的ChIL-18。

将ChIL-18成熟蛋白编码区(510 bp)定向插入到原核表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,构建重组表达质粒pGEX-ChIL-18,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下可高效表达融合蛋白(GST-ChIL-18)。

SDS-PAGE可检测到分子质量约为46 kDa的GST-ChIL-18。

Western blot证实GST-ChIL-18能与鸡IL-18单克隆抗体发生特异性反应。

融合蛋白GST-ChIL-18经谷胱苷肽Seph-arose-4B亲和柱层析纯化后明显促进鸡T淋巴细胞转化,表明所表达的ChIL-18具有一定的生物活性。

【总页数】5页(P547-551)【关键词】鸡白细胞介素18;成熟蛋白;克隆;原核表达【作者】李新生;尹红征;陈红英;邵攀峰;王振亚;宋亚鹏【作者单位】河南农业大学牧医工程学院;河南农业大学信息与管理科学学院【正文语种】中文【中图分类】S858.315.3【相关文献】1.海兰鸡白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 赵丽;崔保安;陈红英;宋凌云;方忠意;郑兰兰2.人白细胞介素-18基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 [J], 徐东刚;牛建章;孟宗达3.河南良杂猪白细胞介素18基因的克隆及其成熟蛋白在大肠杆菌中的表达 [J], 郑兰兰;贾云飞;崔保安;陈红英;陈瑞亮4.猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 郑敏;金宁一;张洪勇;李昌;尹革芬5.人白细胞介素18的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 [J], 赵春艳;赵宝昌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人白细胞介素18(hIL-18)的cDNA基因克隆及序列测定

人白细胞介素18(hIL-18)的cDNA基因克隆及序列测定佚名【期刊名称】《中国现代医学杂志》【年(卷),期】2001(11)4【摘要】目的：克隆人白细胞介素18(IL—18)全长cDNA基因，进一步探讨人白细胞介素18的功效。

方法：采用RT—PCR的方法从人胚肝组织中扩增出人白细胞介素18(IL—18)基因，并克隆到真核表达的绿色荧光蛋白报告栽体pGFP—N1中。

结果：经PCR及DNA序列测定得以证实其序列与文献报导一致。

结论：该实验成功地克隆了IL—18cDNA，并将其重组构建了含有IL-18cDNA的真核表达载体pEGFP—N1—IL18。

%Objective:In order to clone the whole cDNA fragment of human interleukin 18(hIL- 8) ,and to find its furthe efficacy. Methods:Human interleukin- 18 (hIL- 18) was amplified from human embryo liver tissue by Reverse Transcription- Polymerase Chain Reaction (RT- PCR). Then it was subcloned into an expresion vector in eukaryote- pEGFP- N1 whose report gene can express green flouorescence protein. Results: It was defined by PCR and DNA sequencing. Conclusions: IL- 18 cDNA was cloned successfully,and it was subcloned into an vector to from a new eukaryote expression vector- pEGFP- N1 - IL18.【总页数】3页(P30-32)【正文语种】中文【中图分类】Q785【相关文献】1.重组人白细胞介素18基因的克隆及序列测定 [J], 纪丽丽;杨玉英;李士泽;闫邦样2.人白细胞介素18(hIL-18)的纯化及生物学活性的鉴定 [J], 杨广民;方艳秋;谭岩;刘力华3.人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素-7剪接变异体cDNA的克隆和序列测定 [J], 潘德顺;吴培诚;孔凡虎4.鼻咽癌细胞中表达的人白细胞介素18(hIL-18)对鼻咽癌患者外周血 CD8+T细胞细胞毒活性增强作用的研究 [J], 陶剑平;夏云飞;张昌卿;李满枝;林学颜5.人白细胞介素13cDNA的克隆及序列测定 [J], 范灵芝;贾松惠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

中国人白介素18结合蛋白基因的克隆及其序列分析

中国人白介素18结合蛋白基因的克隆及其序列分析
扈玉婷;徐克刚
【期刊名称】《医学研究通讯》
【年(卷),期】2000(029)011
【摘要】白介素１８结合蛋白是新近发现的一种能与ＩＬ－８特异性结合并拮抗其相关生物学功能的蛋白质，它参与Ｔｈ１介异的细胞免疫调控。

另外，某些病毒编码的蛋白与ＩＬ－１８ＢＰ有较高的同源性，提示这可能与此类病毒逃避机体免疫的机制有关。

我们利用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人外周血细胞中扩增获得ＩＬ－１８ＢＰｃＤＮＡ片段，将其克隆至Ｔ载体中并进行了核苷酸序列分析，为进一步表达和研究其生物学功能奠定了基础。

【总页数】3页(P48-50)
【作者】扈玉婷;徐克刚
【作者单位】中国科学院研究生院生物学部;中国科学院研究生院生物学部
【正文语种】中文
【中图分类】R392.12
【相关文献】
1.貉白介素-18(IL-18)基因的克隆及序列分析 [J], 张海玲;罗国良;赵春霏;柴秀丽;王凤雪;易立;闫喜军
2.猪链球菌2型四川人源分离株ZYH18纤连蛋白结合蛋白基因的克隆和序列分析[J], 王花茹;王长军;唐家琪;陆承平;潘秀珍;郭恒彬
3.犬脾细胞白介素-18(IL-18)基因的克隆与序列分析 [J], 曹殿军;于立辉;闫丽辉;刘
培欣;孙建宏;杨玉英;赵玉军;杨国勇
4.中国人IL-18结合蛋白cDNA的克隆和序列分析 [J], 傅奕;赵惠仁;裴冬生
5.中国人磷脂转运蛋白基因克隆及序列分析 [J], 马百坤;庄一义;李克;吴向东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸡白细胞介素18单克隆抗体的制备与鉴定

鸡白细胞介素18单克隆抗体的制备与鉴定郑孟加;马萌;王永强;高丽;曹红;李淑芹;李晓齐;郑世军【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2022(58)9【摘要】为制备鸡白细胞介素18(chIL-18)单克隆抗体,本试验从被沙门菌感染过的鸡脾脏DNA提取物中扩增chIL-18基因,并将其插入至原核表达载体pET-28a 和pGEX-6p-1中,在大肠埃希菌中诱导表达并纯化重组蛋白;继而将纯化后的His-chIL-18蛋白免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,以GST-chIL-18作为筛选蛋白通过间接ELISA方法对阳性杂交瘤细胞进行筛选,经3次亚克隆后,最后获得2株能稳定分泌IL-18抗体的杂交瘤细胞,分别命名为2A7和2G5。

对抗体纯化后进行鉴定,结果显示,2株抗体亚型均为IgG1,亲和力解离常数(Kd)分别为4.4×10^(-12)和2.06×10^(-10),与chIL-1、chIL-10和chIFN-β无交叉反应,可分别识别chIL-18第58~113位和第114~169位氨基酸区域。

本试验制备的单抗为深入研究chIL-18的生物学功能及先天性免疫应答提供了有价值的手段。

【总页数】5页(P29-33)【作者】郑孟加;马萌;王永强;高丽;曹红;李淑芹;李晓齐;郑世军【作者单位】中国农业大学动物医学院农业农村部动物流行病学重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.抗重组人白细胞介素18单克隆抗体的制备与特性研究2.重组马白细胞介素-18生物学活性的测定及单克隆抗体中和活性鉴定3.马白细胞介素-18单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定4.白细胞介素-6单克隆抗体的制备、鉴定及其初步应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

编码鸡IL-18成熟蛋白基因的分子克隆与序列测定

编码鸡IL-18成熟蛋白基因的分子克隆与序列测定潘蔚绮;刘胜旺;孔宪刚;李广兴;夏春【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2003(025)002【摘要】白细胞介素18(IL-18)是一种能诱导IFN-γ产生的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用.本研究根据已发表的鸡白介素18(IL18)cDNA 基因序列设计引物,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从有丝分裂原ConA刺激48小时活化的白来航鸡脾细胞中扩增出编码鸡IL-18成熟蛋白质的基因,并进行序列测定,并与结果进行了比较,发现本研究克隆到的鸡IL-18成熟蛋白编码基因序列在482位为C,而Schnieder等报道的序列为T,这一核苷酸序列的变化导致了推导的对应氨基酸残基由苯丙氨酸变为丝氨酸.该处碱基变化的原因究竟是鸡IL-18本身存在多态性,还是反转录或PCR过程中的碱基错配所致,该处碱基的变化对于鸡IL-18蛋白的表达及其生物活性究竟有无影响等问题正在研究中.该基因为国内首次报道经序列测定证实的鸡IL-18基因,为进一步体外表达鸡IL-18蛋白并深入研究其功能奠定了基础.【总页数】4页(P114-117)【作者】潘蔚绮;刘胜旺;孔宪刚;李广兴;夏春【作者单位】东北农业大学动物医学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001;东北农业大学动物医学院;中国农业大学动物医学院【正文语种】中文【中图分类】S852.652;Q78【相关文献】1.鸡IL-18成熟蛋白基因原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 [J], 刘一尘;张春杰;程相朝;张谦;李银聚;吴庭才;赵战勤2.H5亚型AIV的HA1基因与鸡IL-18成熟蛋白基因的杆状病毒共表达载体的构建 [J], 孔娜;田夫林;兰邹然;杨林;冯涛;梁成珠;赵宏坤3.鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆及分子进化分析 [J], 王振国;金宁一;张洪勇;尹革芬;葛淑敏4.鸡IL-18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 王振国;金宁一;马鸣潇;张洪勇;尹革芬;金扩世5.鸡IL-18成熟蛋白基因变构体毕赤酵母表达载体的构建及表达 [J], 刘一尘;张春杰;程安春;程相朝;汪铭书;李银聚;吴庭才;易明林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。