维生素类药物的分析
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维生素类药物分析(SYSH)
返 回9
第一节 维生素A
维生素A包括有维生素A1（视黄醇）、去 氢维生素A（维生素A2 ）和去水维生素A（ 维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，
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10
一、结构和性质
R:
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-H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
11
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25
（2）波长的选择： ① 1
VitA的max（328nm） ② 2 3
分别在1的两侧各选一点
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26
第一法 等波长差法
32 8 31 6 34 0 328
A 3校 2 8 3 . 5 正 2 A 2 3 2 A 3 8 1 A 3 6 4
测定对象 VitA醋酸酯
结构分析
CH3
CH3
CH3 CH3
环己烯
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共轭多 烯侧链
CH3 CH2OR
多异构体 UV 易被氧化
12
1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 ❖ （1）具有UV吸收
❖ （2）存在多种立体异构化合物 ❖ （3）易发生脱氢、脱水、聚合反应
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13
2、不稳定性
VitA紫 外 线 、 O2 、 氧 化 剂 环氧化物 [ O]VViittAA酸 醛
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32
中国药典收载方法
第一法（维生素A醋酸酯的测定） 将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸
收度，计算吸收度比值（A/A328 ）
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33
数据处理
如果λmax在326-329nm之间，且A/A328比值未 超过规定值的±0.02，可直接按下式计算含 量：
药物分析维生素类药物的分析
终点颜色：无色→蓝色 1ml 0.1mol/L碘液，1ml8.806mg C6H8O6 加入新沸放冷的水为了减少水中溶解氧的影响。 酸性：使VC在空气中氧化速度减慢。
VC注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂.
2、 2,6-二氯靛酚滴定法 酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定剂
自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。
VA(5个共轭双键)在盐酸中加热,生成6个共轭双键的 去水VA
VA在326nm有一个吸收峰 去水VA在350-390nm有三个吸收峰（P247）
3、TLC：
确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯， 例：VA和其标准品用环己烷溶解
展开剂：环己烷—乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：磷钼酸为显色剂 Rf： VA 醇 0.１
二、鉴别试验 1、硝酸反应：（药典收录）VE在硝酸条件下,水解生
成生育酚.生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红. VE + HNO3 ----水解生成生育酚-----生育红（橙红色）
2、水解后氧化反应： VE在碱性条件下水解，得α—生育酚，在联吡啶和
三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。
VE+KOH – α生育酚（加入三氯化铁）--生育醌 + 铁配合物 （血红色）
VB1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非 水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。
溶剂：冰醋酸 / 醋酸汞 指示剂：喹哪定红- 亚甲蓝混合指示液 滴定剂：高氯酸（0.1mol/L) 终点：天蓝色 摩尔比：VB1：高氯酸=1：2 VB1摩尔质量=337.27 滴定度T=0.1×(1/2) ×337.27=16.86mg/ml
二. 鉴别试验 1. 硫色素荧光反应：
维生素B1在碱性溶液中，与铁氰化钾氧化成硫色 素，在正丁醇中显蓝色荧光
药物分析维生素类药物的分析
在方法验证的基础上，可构建维生素类药物分析的评价指 标体系，包括定量限、检测限、回收率、重复性、稳定性 等指标，以全面评价分析方法的性能。
持续改进方向和目标设定
持续改进方向
针对维生素类药物分析过程中存在的问题和 不足，可进一步改进样品前处理方法、优化 分析条件、提高检测灵敏度等，以不断提高 分析结果的准确性和可靠性。
数据处理和结果表达技巧分享
数据处理
对HPLC和UV-Vis法得到的数据进行整理、归纳和统计 分析，包括峰面积、保留时间、浓度等参数的计算和 处理。
结果表达
将分析结果以图表形式呈现，如色谱图、标准曲线图、 含量分布图等，使结果更加直观、易于理解。同时，对 分析结果进行解释和说明，提出改进意见和建议。
在选择维生素类药物的标准品时，应确保其 纯度高、稳定性好，且具有代表性。同时， 应关注标准品的来源和溯源性。
使用注意事项
在使用标准品时，需按照规定的条件进行保 存和使用，避免污染和降解。此外，应定期 对标准品进行复验和更新。
检测方法验证及评价指标体系构建
要点一
检测方法验证
要点二
评价指标体系构建
为确保维生素类药物分析方法的准确性和可靠性，需进行 方法学验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度 等指标的考察。
质量控制体系建立及实施情况介绍
质量控制体系
为确保维生素类药物分析结果的准确性和可靠性，需建立全面的质量控制体系，包括样 品采集、前处理、分析测试、数据处理等各个环节。
实施情况
目前，质量控制体系已在多个实验室得到广泛应用，有效提高了维生素类药物分析的准 确性和一致性。
标准品选择与使用注意事项
标准品选择
通过对该维生素类药物的定性、定量分析，评估其质量 稳定性和一致性，为药物研发、生产和监管提供科学依 据。
第十章维生素类药物的分析48
1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm
4. 吸收度校正公式：
A328 3.52(2A328 A316 A340) （校正）
A328 A328(校）
5.维生素A醋酸酯效价计算
效价(IU/g)样=
A A max×D
W×L×100
×1900
5.维生素AD胶丸中维生素A 的标示百分含量计算公式
判断差值是否超过规定值的
Ai 规定值 A 328
0.02
3）．计算校正吸收度
吸收度校正公式：
A328 3.52(2A328 A316 A340) （校正）
A328 328 （校正） A P= 100% A328
小结： 1. max 在326~329nm，计算比值差值。 max不在326~329nm，第二法测定。
释至9～15IU / ml 于300、 310、 325、 334nm处测A
(二).性质
1.溶解性：
＊ 不溶于水 ＊ 溶于乙醚，氯仿，异丙 醇，环己烷，脂肪和油。
2.
不稳定性
＊共轭多烯侧链—性质非常活泼.
Lewis , 无水HCl VA 脱水VA
光, 热, 氧化剂, 氧 VA 氧化产物(无活性）
维生素A的氧化产物：
▲ⅰ．环氧化物
1）. 相关物质的吸收 a. 维生素A的衍生物
ⅰ．维生素A2 去氢维生素A
CH2OH
效价为维生素A1的40%，max345~350nm
ⅱ．维生素A3
去水维生素A
CH2
效价低于维生素A1，max385~390nm
b. 维生素A的氧化产物：
环氧化物，醛，酸
d. 鲸醇：VA醇的二聚体，没有生物活性
维生素类药物的分析方法
（3）维生素A在光照下产生的无活性的聚合物：鲸醇。 （4）维生素A的异构体等： 以上这些杂质在 310nm~340nm 的波长范围内有吸收， 所以干扰维生素A的测定。
12
5. 合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式
维生素A，如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下 列第一法测定的规定时，可用溶剂溶解供试品后直接 进行测定，否则应按第二法，经皂化提取除去干扰后 测定。
pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值
（ΔA）。以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐 标绘制标准曲线。
30
样品的测定 取本品20片，精密称定，研细。精密称取适量粉末，
（2）反应介质需无水 （3）温度对呈色强度的影响很大 （ 4）本反应并非维生素 A专属，在相同条件下，某些有关物质均与
三氯化锑显蓝色，干扰测定，常使测定结果偏高。
（ 5 ）三氯化锑试剂有强的腐蚀性，易损坏皮肤和仪器，使用时应 严加注意。
15
（三）高效液相色谱法
采用RP-HPLC法同时测定人血清中维生素 A和维生素E的含量。 根据不同病理生理状态下人血清中维生素A、E的浓度，寻求弄清 与某些疾病的关系，为临床治疗学、营养学等研究提供参考。 1. 仪器与色谱条件 色 谱 柱 为 C18 ； 流 动 相 为 甲 醇 - 水 （ 96:4 ） ； 流 速 为 1.2ml/min。内标物为维生素A醋酸酯。 2. 分析用样品液 对照品：维生素A，维生素E，维生素A醋酸酯
维生素类药物的分析方法：
生物法 微生物法 化学法 物理化学法
2
第一节
维生素A的分析
维生素A 包括
药物分析 第十四章 维生素类药物的分析
第一节 维生素A的分析
➢紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大 吸收，可用于鉴别。
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3 1CH2OR
2
CH3
第一节 维生素A的分析
λmax 相对生物效价
维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 新维生素Ac 异维生素Aa 异维生素Ab
325.5 328 320.5 310.5 323 324
1 325nm, 2 310nm, 3 334nm
第一节 维生素A的分析
合成的或天然的维生素A 均为酯式维生素A， 根据供试品中干扰杂质的多少，可采用：
（1）直接测定法 （2）皂化法
4. 测定方法
（1）基本步骤
A选择，A328测定或A328校正
求 % 1cm(样)
% 1cm(样)
A C(%) l
= + 0.04
A32校 8 正 3.522A328 A316 A340 3.5220.6280.5610.523
0.605
第一节 维生素A的分析
f A328(校正) A328100% A328
3.7%(15%~ 3%)
标 示% 量 A3C2(g8校 /1正 0m 01)l900平 标均 示丸 量重 10% 0
（一）Carr-Price反应 与三氯化锑呈色反应
Vit A
SbCl3
蓝色
CHCl3(无水无醇)
紫红色
第一节 维生素A的分析
+
CH2
蓝色
+
CH2
紫红
第一节 维生素A的分析
条件： 无水、无醇
药物分析 第09章 维生素类药物的分析
ChP 片剂、注射剂
g/100ml
E11c%m = 421 A = ECL
（每片）相当于标示量的%=
E 1 1c % A m 10W 0稀 1 释 平 标 度 均 示 1 片 量 0% 0
g
稀释倍数 稀1释度
规格 g/片
（三） 硅钨酸重量法
1、 重量法特点
准确度高 灵敏度低 操作繁琐 设备简单
（三） 其他反应
S元素反应
V iN t B a N O P a H A b S c P b
HA N O3 g N AO g 白 C N H N lH H OO
K 2 HH + 4 g I淡[黄 B ]H 2H4g
I 2 H + K I 红 [B 色 ]H I2 I
硅 H 钨 + 酸白
色[B]2SiO2OH2
12WO 34H2O
苦 H +酮 酸 白 色 扇 形
橙红色
强氧化剂
H3C
CH3 O
O O
H3C HO
HNO3
CH3 O
CH3
CH3 C16H33
生育酚
CH3 C16H33
生育红（橙红色）
（二） 三氯化铁－联吡啶反应
VitE
K△OH
生育酚
Fe 3
[O]
对 生育醌
Fe 2 联吡啶 红色
H3C
CH3 O
CH3 C16H33
2×337.27
3479.22
换 算 2 因 M V数 i1t B 233 .27 70.19 M 沉淀34.2729
3、 测定方法
药物分析-14维生素类药物的分析
§14 维生素类药物的分析·脂溶性维生素：VitA、D2、D3、E、K1等·水溶性维生素：VitB族（B1、B2、B6、B12）、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺一、维生素A中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。
（一）结构与性质1.具有一个共轭多烯侧链的环己烯·具有UV吸收·存在多种立体异构化合物2.不稳定性（1）易发生脱氢、脱水、聚合反应·脱氢维生素A（A2），脱水维生素A（A3）效价低于维生素A ·鲸醇（维生素A醇的二聚体）无生物活性（2）共轭多烯侧链易被氧化维生素A应凉暗处保存，充氮气或加抗氧剂★3.与三氯化锑发生呈色反应4.溶解性不溶于水，乙醇中微溶；易溶于有机溶剂和植物油等（二）鉴别试验1.三氯化锑反应条件: 无水（SbCl3水解），无醇（和碳正离子作用使其电荷消失）。
2.UV法（BP2003）VitA有一个吸收峰，盐酸催化下加热30s生成脱水VitA，有三个吸收峰，且红移（向长波长位移）。
3.TLC法·BP 对照品法（供试品与不同VitA酯类），显色剂：三氯化锑·USP 规定斑点颜色和Rf值，显色剂：磷钼酸（氧化剂）12（三）含量测定 ★1.三点校正法 （1）原理①杂质的吸收在310~340nm 波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；②物质对光的吸收具有加和性。
（2）波长的选择λ1为VitA 的λmax ；λ2、λ3为分别在λ1的两侧各选一点 ①等波长差法——VitA 醋酸酯nm 12340316328=∆λλλλ，、、)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）②等吸收比法——VitA 醇33431032576A A A == 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）（3）测定方法①直接测定法（等波长差法）——高纯度维生素A 醋酸酯 Ⅰ核对λmax/329~326max 328改用造化法与规定值比较求否是−→−−→−∈A A nm i λ Ⅱ计算吸收度比及比值差规定吸光度比值-328/A A iⅢ判断差值是否超过±0.02，确定用A 或A 校正%15%3)3%%,15(]%3,%3[32802.032832832802.0计算用改用皂化法＜或＞计算用计算用、计算无超过（校正）（校正）有超过A f f A f A f f A −−−−→−→-+→--∈→+-∈→−−−−→−±±)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）%100328328328⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm E lc AE cm ⨯=)%(%11（样品）·注意：（纯品）（样品）%11%11cm cm E E ≠，c 为混合样品的浓度。
第九章维生素类药物分析
1、具紫外吸收 2、易氧化变质 3、能与三氯化锑呈色 4、水中不溶。
第一节 维生素A的分析
二、鉴别试验
1. 三氯化锑反应
VA 蓝色 → 紫红色 CHCl
SbCl3
3
2. 紫外吸收光谱
VA的无水乙醇溶液在328nm有最大吸收。 3、TLC
第一节 维生素A的分析
例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷—乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：SbCl3T.S. Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA棕榈酸酯 0.75
第一节 维生素A的分析
A300 A316 A328 A340 A360 ：0.354 ：0.561 ：0.628 ：0.523 ：0.216
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
Ai A 328
：0.555 ：0.907 ：1.000 ：0.811 ：0.299
换算因数
IU / g （纯品）
1% E1cm （纯品）
1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯 1g的维生素A醋酸酯就相当于
1,000,000 2,907 ,000 IU 0.344
% 1530（环己烷、 维生素A醋酸酯 E1cm
328 ）
第一节 维生素A的分析
2907000 换算因子 1900 1530
H3C N N NH2 CH2 N+ S CH2CH2OH
. Cl-.HCl
CH3
1、水中溶解 2、具紫外吸收 3、碱性中可被氧化 4、两个杂环与生物碱沉淀试剂反应
第二节 维生素B的分析
二、鉴别试验： 1、硫色素反应：
维生素B1 铁氰化钾 硫色素
第十三章维生素类药物
第十三章维生素类药物的分析一选择题（一）单选题相同知识点：维生素A的分析1．在饱和无水三氯化锑的无水三氯甲烷溶液中即显蓝色，渐变成紫红色的药物是（）。
A．维生素A B．维生素B1 C．维生素C D．维生素E E．维生素D答案：A2．维生素A分子结构特点是具有（）。
A．六元环(环己烯) B．羟基C．酯基D．甲基E．共轭多烯侧链的环己烯答案:E3．维生素A含量测定的第一法选择3个测定波长的方法为（）。
A．6／7定位法B．等吸收度法C．等波长差法D．代数法E．几何法答案:C4．采用紫外分光光度法测定维生素A的生物效价或含量时。
杂质与共存物干扰测定，为消除干扰，《中国药典》(2005年版)采用（）。
A．双波长紫外分光光度法B．三点校正法C．计算分光光度法D．三波长紫外分光光度法E．HPLC答案:B5. 紫外分光光度法测定维生素A的方法是（）。
A．三点定位校正计算分光光度法B．差示分光光度法C．比色法D．三波长分光光度法E．导数光谱法答案：A6．目前各国药典测定维生素A的含量，大多采用（）。
A．薄层色谱法B．红外分光光度法C．紫外分光光度法D．高效液相色谱法E．非水溶液滴定法答案：C相同知识点：维生素B的分析7．在碱性溶液中，加铁氰化钾，再加正丁醇，醇层显蓝色荧光的药物是（）。
A．维生素E B．维生素B1 C．维生素C D．维生素A E．维生素D 答案：B8．取某一维生素类药物约5mg，加氢氧化钠试液2．5ml溶解后，加铁氰化钾试液0．5ml 与正丁醇5ml，强力振摇2min，放置使分层。
上面的醇层显强烈的蓝色荧光。
加酸使成酸性，荧光即消失。
再加碱使成碱性，荧光又显出。
该药物为（）。
A．维生素C B．维生素E C．维生素B D．维生素A E．维生素K答案:C9．中国药典05年版测定维生素B1片剂的含量采用（）。
A．紫外分光光度法B．银量法C．非水溶液滴定法D．薄层色谱法E．高效液相色谱法答案：A10．维生素B与铁氰化钾作用，在正丁醇层呈强烈蓝色荧光的条件（）。
第十三章维生素药物的分析
（1）第一法（等波长差法）：使λ3－λl＝λl－λ2。中国药典规定，测定维生素A醋酸酯时，λl＝328nm，λ2=316nm，λ3＝340nm，Δλ=12nm。
（2）第二法（等吸收比法）：使 ＝ ＝6/7 。中国药典规定，测定维生素A醇时，λl＝325nm，λ2＝310nm，λ3＝334nm。
4．测定方法：维生素A测定法有“第一法”和“第二法”两种方法（中国药典2000年版）。
维生素C还可还原碱性酒石酸酮、高锰酸钾等氧化剂，使这些试剂褪色，产生沉淀或显色，从而用于鉴别。
2．紫外吸收光谱法：
三、含量测定
碘量法（重点）。中国药典即用直接碘量法，测定维生素C及其片剂、注射液的含量。
1．原理：维生素C具有还原性，可被不同氧化剂定量氧化，可用氧化还原法测定含量。
2．方法：维生素C原料的含量测定取本品约0.2g→精密称定→加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解→加淀粉指示液1ml→立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定→显蓝色并在30秒钟内不褪。
第三节维生素B1的分析
一、结构和性质
1．结构维生素B1又称盐酸硫胺，是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵化合物的盐酸盐。
2．性质
（1）溶解性（2）杂环上氮原子的性质（3）紫外吸收特性
（4）硫色素反应（5）氯化物的特性
二、鉴别试验
1．硫色素反应（重点）维生素B1在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或异丁醇等）中，显蓝色荧光。该反应为维生素Bl的特有反应。
2．紫外分光光度法
中国药典（2000年版）收载的维生素B1片和注射液，均采用本法测定含量。
3．硅钨酸重量法
（1）原理：维生素B1在酸性溶液中，能与硅钨酸定量地生成组成恒定的硅钨酸盐沉淀，根据沉淀的重量和供试品的称取量即可计算维生素B1的含量。沉淀的组成为（C12H17ClN4OS）2·SiO2（OH）2·12WO3·4H2O，其分子量为3479.22，维生素B1的分子量为337.27。
（2）第二法（等吸收比法）：使 ＝ ＝6/7 。中国药典规定，测定维生素A醇时，λl＝325nm，λ2＝310nm，λ3＝334nm。
4．测定方法：维生素A测定法有“第一法”和“第二法”两种方法（中国药典2000年版）。
维生素C还可还原碱性酒石酸酮、高锰酸钾等氧化剂，使这些试剂褪色，产生沉淀或显色，从而用于鉴别。
2．紫外吸收光谱法：
三、含量测定
碘量法（重点）。中国药典即用直接碘量法，测定维生素C及其片剂、注射液的含量。
1．原理：维生素C具有还原性，可被不同氧化剂定量氧化，可用氧化还原法测定含量。
2．方法：维生素C原料的含量测定取本品约0.2g→精密称定→加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解→加淀粉指示液1ml→立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定→显蓝色并在30秒钟内不褪。
第三节维生素B1的分析
一、结构和性质
1．结构维生素B1又称盐酸硫胺，是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵化合物的盐酸盐。
2．性质
（1）溶解性（2）杂环上氮原子的性质（3）紫外吸收特性
（4）硫色素反应（5）氯化物的特性
二、鉴别试验
1．硫色素反应（重点）维生素B1在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或异丁醇等）中，显蓝色荧光。该反应为维生素Bl的特有反应。
2．紫外分光光度法
中国药典（2000年版）收载的维生素B1片和注射液，均采用本法测定含量。
3．硅钨酸重量法
（1）原理：维生素B1在酸性溶液中，能与硅钨酸定量地生成组成恒定的硅钨酸盐沉淀，根据沉淀的重量和供试品的称取量即可计算维生素B1的含量。沉淀的组成为（C12H17ClN4OS）2·SiO2（OH）2·12WO3·4H2O，其分子量为3479.22，维生素B1的分子量为337.27。
药物分析课件 第六章 维生素类药物的分析-4
皂化法（等吸收比法）： 测定维生素A醇，规定1＝325 nm，
2＝310 nm，3＝334 nm。
A325(校正) = 6.815A325 – 2.555A310 – 4.620A334
最大吸收波长是否在323~327之间
是
否
A300/A325是否 超过0.73
否 计算A325（校正），计算d值 d值是否在± 3.0%以内
天然维生素主要为全反式维生素A （生理活性最高）。
CH3
CH3
CH3 CH2OR
CH3 CH3
R= H = COCH3 = -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
ChP中维生素A指全反式维 生素A1醋酸酯。
CH2OH
维生素A2 （去氢维生素A）
CH2
维生素A3
（去水维生素A）
（二）紫外吸收法
BP
VitA 无水乙醇—盐酸（100:1） Sol1
Sol1 水浴加热30s
测λmax（326nm）
冷却
Sol2
测λmax 348，367，389nm
332nm处有拐点
CH3
CH3
CH3 CH2OR
CH3 CH3
VitA1
无水乙醇—盐酸 水浴加热30s （100:1）
CH2
去水VitA （VitA3 ）
标示量%
维生素A效价(IU/g) × 内容物平均丸重
=
× 100%
标示量(IU/丸)
VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量 差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻 度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量 瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己 烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并 在下列波长处测得吸收度为:
维生素类药物分析
A3（ 2校 5 ） 正 A32510% 0 (P) A325
最大吸收波长是否在323～327之间
是 A300/A325是否≤ 0.73
否 色谱法纯化
是
否
A325校正A325100%
A325
A325校正 = 6.815A325-2.555A310-
A 325校正4.260A334 A 325
A 325校正
A3 2 8
A300/A325 ≤ 0.73
超
否
A A3（ 28校正 A3） 2810% 0
A3 2 8
32 8
±3% 之间：A328
-15%～-3%： A328校正
A325校 A正 325A325100% 色法谱 ±3% 之间：A325
<-15%或>+3%:皂化
<-3%或>+3%: A325校
法A328校正
＊相关物质—结构相似,维生素A最大吸收波长 附近也有吸收，对测定有影响。
＊Morton和Stubbs等人在1946年提出了三 点
校正法。
相关物质的吸收
＊a. 维生素A的衍生物（A2、A3） ＊ b. 维生素A的氧化产物 ＊ c. 合成时的中间体
＊ d. 鲸醇：维生素A醇的二聚体， 无生物活性
＊ e. 维生素A异构体 ＊ f. 稀释用油
练习题：维生素A醋酸酯胶丸的含量测定 已知：平均胶丸重为0.0815g 维生素A的标示量为10000IU/丸 取 样 ： 0.1279g→100ml ， 从 中 取 出 2ml →
25ml.
求：维生素A醋酸酯的标示百分含量。
首先计算吸收度比值和吸收度比值差。由结果 知，需计算校正吸收度。
维生素类药物分析
维生素类药物分析
发射波长435nm
第27页
对照液 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 S
+ NaOH + 异丁醇
d
供试液 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 A
+ NaOH + 异丁醇
b
VitB1%
Ab Sd
W对 W样
稀释度 稀释度
100%
维生素类药物分析
第28页
（3）特点 ①灵敏度高，线性范围宽 ②代谢产物不干扰，适合用于体液分析
VitA SbCl3 蓝色 紫红
CHCl3
4、溶解性 不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等
维生素类药物分析
第8页
二、判别试验
1、三氯化锑反应
维生素A在饱和无水三氯化锑无醇 氯仿溶液中展现不稳定蓝色，再变为紫 红色。
VitA SbCl3 蓝色 紫红
CHCl3
维生素类药物分析
第9页
反应条件：
① 要求无水，如存在水可能产生氯化 氧锑（ SbOCl ）。
2、UV分光光度法（药典用于测定片剂、注 射剂）
（1）原理：维生素B1分子中含有共轭双键结 构，含有紫外吸收特征，可在其最大吸收波 长下测定吸收度，依据取样量计算含量。
（2）方法
维生素类药物分析
第26页
（三）硫色素荧光法
（1） 原理
VitB
铁氰化钾
NaOH
硫色素
异丁醇 荧光
（2）方法与计算 激发波长365nm
维生素类药物分析
第48页
一、结构与性质
(一)结构
维生素D2为9，10-开环麦角甾5，7，10(19)， 22-四烯3β-醇，又名骨化醇或麦角骨化醇。
最新【药学课件】17(维生素类药物的分析)-药学医学精品资料
平均丸重 1% E1cm 换算因数 100% 标示量
A 平均丸重 换算因数 100% c 标示量
A 平均丸重 换算因数 100% c 标示量
%
A 换算因数 平均丸重 100% W 稀释度 100 标示量
量取体积 稀释体积
（五）A值的选择
第二法
测定维生素A醇
等吸收度法（皂化法） （6/7吸收度法）
6 A A 310 A 334 325 7
测定波长
300、310、325、334
第一法无法消除杂质干扰时用此法
（三）生物效价及换算因数
维生素A含量是用生物效价表示 单位 IU/g（国际单位）
1IU 0.344g全反式维生素A醋酸酯 1IU 0.300g全反式维生素A醇
D、改用另一校正公式计算
E、以上都不对
例3、哪些描述适合VitA结构及性质 A、分子具有长二烯醇侧链，易被氧化
B、具有较长的全反式共轭多烯结构
C. 含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍生
物，易被氧化 很快转变为紫红色
E、样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加热后，
D. 与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色，
1、杂质的吸收在310～340nm波长 范围内呈一条直线，且随波长
的增大而吸收度变小
2、物质对光的吸收具有加和性
即样品各波长的吸收度是维生
素A与杂质吸收度的代数和
（二）测定方法
第一法 测定维生素A醋酸酯 等波长差法
λ1 = 328nm
λ2 = 316nm
λ3 = 340nm 测定波长 300、316、328、340、360
1% 含量样 （ IU g） E1cm样 含量标 （ IU g） E 1% 1cm标
A 平均丸重 换算因数 100% c 标示量
A 平均丸重 换算因数 100% c 标示量
%
A 换算因数 平均丸重 100% W 稀释度 100 标示量
量取体积 稀释体积
（五）A值的选择
第二法
测定维生素A醇
等吸收度法（皂化法） （6/7吸收度法）
6 A A 310 A 334 325 7
测定波长
300、310、325、334
第一法无法消除杂质干扰时用此法
（三）生物效价及换算因数
维生素A含量是用生物效价表示 单位 IU/g（国际单位）
1IU 0.344g全反式维生素A醋酸酯 1IU 0.300g全反式维生素A醇
D、改用另一校正公式计算
E、以上都不对
例3、哪些描述适合VitA结构及性质 A、分子具有长二烯醇侧链，易被氧化
B、具有较长的全反式共轭多烯结构
C. 含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍生
物，易被氧化 很快转变为紫红色
E、样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加热后，
D. 与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色，
1、杂质的吸收在310～340nm波长 范围内呈一条直线，且随波长
的增大而吸收度变小
2、物质对光的吸收具有加和性
即样品各波长的吸收度是维生
素A与杂质吸收度的代数和
（二）测定方法
第一法 测定维生素A醋酸酯 等波长差法
λ1 = 328nm
λ2 = 316nm
λ3 = 340nm 测定波长 300、316、328、340、360
1% 含量样 （ IU g） E1cm样 含量标 （ IU g） E 1% 1cm标
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1O
32
HO
OH
L－抗坏血酸
一、结构与性质 （一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）还原性
二烯醇结构
CC OH OH
二烯醇结构
O
CC
OO
二酮基结构
C H 2O H
C H 2O H
H C OH O O
HO
OH
HO CH CHOH CO
有活性
[O ] C H 2 O H H + OH - C O
►例如： VA——夜盲症 VB1——脚气病 VD缺乏——佝偻病
分类 按溶解性分 脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等 水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素A简介：
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
三氯化锑反应（ChP2005鉴别试验）
Vi tA S b 3C 蓝 l 色 紫红
CHCl3
条件：无水无醇
第二节 维生素E
O
HO
苯并－二氢吡喃醇
CH3
R2
O
*
HO R1
名称
R1
α-生育酚
CH3
β-生育酚
CH3
γ -生育酚
H
δ -生育酚
H
*
R2 CH3 H CH3 H
*
相对活性 1.0 0.5 0.2 0.1
干燥失重不超过 5.0%。
四、含量测定 （一）非水溶液滴定法（原料药）
BC-lHC+lHClO H （ gA ） cBClO -HClO
喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝）
溶剂——冰醋酸； 指示剂——喹哪定红-亚甲蓝； 滴定剂——高氯酸、醋酸汞； 终点——天蓝色
反应摩尔比为1：2
T c M 0.1337.27
N
2+
Fe
血红色
（三）UV法（2000）
0.01%无水乙醇中 λmax = 284nm λmin = 254nm
E11c%m = 41.0～45.5
（四）IR法（2005）
三、杂质检查
1. 酸度 2. 以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控
制。 2. 游离生育酚
原理
限量 ≤2.15％
限量 %VT10% 0 W
限 量 %1.00.0 02 11504% 0 0.1
2.15%
四、含量测定
（一） GC法（2005） 1、GC特点
选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好
挥发性低、不稳定、 极性强→衍生化易 受样品蒸气压限制
2、结果计算 内标加校正因子法：
( f ) As /cs AR /cR
第三节 维生素B1
H3C N N
HCl
NH2 S
+
CH2 N
CH2CH2OH CH3
Cl-
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)
一、结构与性质 （一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）UV 共轭双键
λmax = 246nm
（三）硫色素反应
Vit B1 O - H O 硫色 正 素 丁 蓝 醇色
生育 +2 C4 + 酚 e 2 C3 + e+对 -生育
T CM n
（M生育酚= 430.8）
T0.0 143 .8 02.1（ 5m 4/m g） l 2
例 取本品0.10g，加无水乙醇5ml 溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸 铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸 铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。
维生素类药物的分析
主要内容
►维生素A ►维生素D ►维生素E ►维生素B ►维生素C
脂溶性 水溶性
►维生素 维持人体正常生理机能所必须的
生物活性物质
10%油、脂肪
及甜品
10%乳类制品
10%肉类、蛋类 制品
18%蔬菜
12%水果
40%谷类和麦类主食
►人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏 症，而影响人体的正常生理机能。
n
2
16.86mg/ ml
（二） UV法 （片剂、注射 剂）
ChP 片剂、注射剂
g/100ml
E11c%m = 421 A = ECL
（每片）相当于标示量的%=
A E11c%m×
×磢 D 100 W
× 平标均示片量重× 100%
g
规格：g/片
第四节 维生素C
CH 6
2
O
H
H C OH 5 O
4
CH3
H3C
O CH3
CH3
H3C CO O CH3
CH3
CH3 CH3
dl－α－生育酚醋酸酯
一、结构与性质
苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链 1、UV
2、乙酰化的酚羟基：易水解
VitE
H+
or OH-
△
生育酚
[O]
醌型化合物
杂质，需检查
二、鉴别 （一）硝酸反应
Vit E
HNO3 75℃15′
H C OH O O
COONa H
无活性
O
O
有活性
（三）具糖的性质
结构与糖类相似 糖类的显色反应
△H + 脱 水 糠糠 醛醛 衍 酚 生 类 显 物
Vi tH + C 脱 水 糠 吡 醛 咯 蓝
50℃
生育酚
[O]
生育红
橙红色
（二）三氯化铁－联吡啶反应
CH3 CH3-COO
CH3 O
CH3 C16H33
KOH
CH3
CH 3
CH 3
O
HO CH 3
CH 3 C16H33
H3C
CH3 O
CH3 C16H33
HO
生育酚
弱氧化
CH3
剂
3+
Fe
[O]
CH3
H3C
O OH CH3
C16H33
O
对-生育醌
CH3
（四）嘧啶环 —— 噻唑环 ——
与生物碱↓→↓
（五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。
二、鉴别试验
（一）硫色素反应（ChP2005）
Vit1BNa O H -H 2 O环 合 K3Fe（ C N） 6硫色素 正 丁 醇
[O ]
蓝色荧 光 OH H-+ 荧光消失
（二）沉淀反应
K 2 HH + 4 g I淡[黄 B ]H 2H4g
为一个具有共轭多烯侧链的环己 烯共轭多烯结构，可以形成维生素 A醇或其酯。
❖ 具有UV吸收
❖ 存在多种立体异构化合物
❖ 易发生脱氢、脱水、聚合反应
VitA2 VitA3
共轭多烯侧链 易被氧化
VitA紫 外 线 、 O2 、 氧 化 剂 环氧化物 [ O]VViittAA酸 醛
❖ △或有金属离子存在时氧化↑
I 2 H- +K I 红 [B 色 ]H I2 I
硅 H 钨 + 酸白
色
[B]2SiO2OH2
12WO 34H2O
苦 H 酮 + 酸 白色扇形
三、杂质检查
1、酸度 控制pH2.8~3.3
2、溶液澄清度及颜色 水溶液应澄清无色
3、硝酸盐 靛胭脂法。
4、铁盐 比色法，限量
0.002% 5、干燥失重