毛细管电泳出现问题分析

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SSR标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析

SSR标记荧光毛细管电泳在种子检测中常见问题分析李巧英（山西省种业发展中心，太原030006）摘要：SSR分子标记荧光毛细管电泳在农作物种子质量检测中常用于种子真实性检测、种子纯度鉴定和指纹数据库的构建。

试验过程中模板DNA浓度、特异峰型的统计分析以及仪器设备运行和维护、试验结果与指纹数据库的比对等关键环节都直接影响待测样品的结果判定。

就检测中遇到的问题进行分析，并提出相应的解决方法，以期为农作物种子质量检测荧光毛细管电泳技术平台提供参考。

关键词：SSR标记；荧光毛细管电泳；种子检测；问题；分析分子标记技术是近年来发展较快的基因检测技术，随着新标记方法的开发和试验技术的改进，在基因水平上检测农作物种子信息逐渐成为监控种子质量的一个重要手段。

由于分子标记法不受自然条件和表现性状的约束，实现了种子品种遗传信息室内快速检测，受到大家的青睐。

SSR作为第2代分子标记方法，是一种共显性标记，具有重复性好、等位变异多、数据分析简便、易操作等优点，在农作物种子质量检测中被广泛使用。

荧光毛细管电泳技术将荧光检测的高灵敏度和毛细管电泳的高效性结合，利用电泳和电渗流的电动力学原理，在毛细管中灌满胶分离PCR产物，检测荧光信号，数据软件分析系统将其转化成峰图，显示试验结果。

该技术自动化程度高，检测通量高，试验操作简单，数据统计程序化，避免人为估算的主观性，结果精确到1bp[1]，直接显示扩增产物片段的大小，实现了指纹图谱与碱基序列长短之间的对应转换，易于实验室间结果比对，常用GeneMapper 和GeneMarker分析SSR扩增片段[2]。

本文就试验中遇到的荧光信号强度、特异峰型的统计分析以及毛细管电泳仪运行和维护、试验结果与数据库比对等问题进行分析，为SSR分子标记荧光毛细管电泳检测农作物种子质量试验技术标准化提供参考。

拟，为所有专业方提供可控管、无破坏性、性价比高、低风险并允许反复运用的可行性方法。

BIM技术可以有效地提高施工技术水准，预防施工事故，减少施工成本浪费并缩短时程，强化施工过程中决策、控管能力。

毛细管电泳荧光检测中的异常电泳类型及原因分析

通讯作者。ｉａ＠２３ｎｔｊｕｎ６．ｒｅ
摘
要
采用毛细管电泳荧光检测技术进行玉米ＳＲ标记的片段分析。利用峰型、Ｓ峰面积和其它荧光干扰
峰等方面的特征对特异峰和非特异峰进行甄别。分析了特异峰的具体表现类型及原因：Ｒ．Ｓ，
玉米标准ＤＡ指纹数据库的构建是一个复杂析，ＦＭ、Ｎ以Ａ ⅥＣ、Ｅ和ＰＴ４种不同颜色的荧光ＮＤＥ
的系统工程，ＰＲ扩增产物的分析方法提出了更染料标记ＳＲ引物，Ｉ记分子量内标，不同荧对ＣＳＬＺ标将
峰、续多峰、峰和高低峰等。连三探讨了片段扩增产物大小与异常峰型的关系。为保证玉米品种ＤＮ指纹库Ａ
构建的标准化，出了数据统计规范化的解决方案。提
关键词毛细管电泳，荧光检测，米，Ｓ玉ＳＲ
ＡｎｌｓｓｏｅＡｂｏｍａｅｋＴｙｅｐｌｒｅｔｏｈｒｓｓｗｉｌ — ａｙｉｆｈｎｒｌａｐｓｉＣａｉａｙＥｌｃｒｐｏｅｉｔＦｕｔＰｎｌｈｏｅｃｎ一ｂｌｄｒｓｅｔ１ｅｅａ
’Ｔｈｓｕｂｅｅａ￡ｏｃｎｒｂｔｄｅｕｌｉｒｏｔｕｅｑａｌｔｔｓｉｙｏｈｗｏｋ
Ｃｒｓｏｄｎｕｈｒｊｕａ＠２３ｎｔｏｒｐｎｉｇａｔｏ，ｉｎ６．ｅｒｅ

多重荧光PCR-毛细管电泳进行微卫星不稳定性分析中的常见问题

。
PCR
一
扩增有效种情况
一
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来茂德男博士教授通讯作者
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引物上标记的荧光素衰竭
经凝胶电泳检查发现
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扩增是有效的
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更换荧光标记的
620
临床与实验病理学杂志
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扩增目标位点无荧光信号
可能原因及解决方案： ( 1 )
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3 收稿 1 期
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扩增未成功
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此种情况表现为 G e n e
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基金项目：浙江省科技厅国际合作项目 ( 2 0 0 7 C2 4 0 0 9 ) 浙江省科技厅重大科技专项和优先主题项目 ( 2 0 0 7 C 1 3 0 2 0 )
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及真核生物基因组中具有高度多态性的短的串联重复核苷
微卫星不稳定性 ( m
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毛细管色谱分析常见问题

毛细管分析及色谱常见问题一、峰丢失可能的原因及应采用的排除方法1.注射器有毛病，用新注射器验证。

2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值。

3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整。

4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整。

5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速。

6.柱断裂，如果柱断裂是在柱进口端或检测器末端，是可以补救的，切去柱断裂部分，重新安装。

二、前沿峰1.柱超载，减少进样量。

2.两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开。

3.样品冷凝，检查进样口和柱温，如有必要可升温。

4.样品分解，采用失活化进样器衬管或调低进样器温度。

三、拖尾峰1.进样器衬套或柱吸附活性样品：更换衬套。

如不能解决问题，就将柱进气端去掉1~2圈，再重新安装。

2.柱或进样器温度太低：升温（不要超过柱最高温度）。

进样器温度应比样品最高沸点高25度。

3.两个化合物共洗脱：提高灵敏度，减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开。

4.柱损坏：更换柱。

5.柱污染：从柱进口端去掉1~2圈，再重新安装毛细管分析常见问题的解决。

四、只有溶剂峰1.注射器有毛病：用新注射器验证。

2.不正确的载气流速（太低）：检查流速，如有必要，调整之。

3.样品太稀：注入已知样品以得出良好结果。

如果结果很好，就提高灵敏度或加大注入量。

4.柱箱温度过高：检查温度，并根据需要调整。

5.柱不能从溶剂峰中解析出组分：将柱更换成较厚涂层或不同极性。

6.载气泄漏：检查泄漏处（用肥皂水）。

7.样品被柱或进样器衬套吸附：更换衬套。

如不能解决问题，就从柱进口端去掉1~2圈，并重新安装。

五、宽溶剂峰1.由于柱安装不当，在进样口产生死体积：重新安装柱。

2.进样技术差（进样太慢）：采用快速平稳进样技术。

3.进样器温度太低：提高进样器温度。

4.样品溶剂与检测相互影响（二氯甲烷/ECD）：更换样品溶剂。

5.柱内残留样品溶剂：更换样品溶剂。

电泳中断原因分析

电泳中断原因分析毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）又称高效毛细管电泳（high perform ance capillary electrophoresis，HPCE），是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。

毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容，它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为可能。

毛细管电泳技术的不断发展，毛细管电泳仪也越来越多的得到了大家的认同，但往往我们在试验的过程中经常会遇到一些问题，如样品的重现性，运行时的电流波动，阻碍电泳进一步发展的重要问题，及时的解决电泳的相关问题，对电泳的发展乃是分析化学的未来有这重要的现实意义。

毛细管电泳是在高压的作用下，以毛细管为分离通道，柱子中充满着缓冲溶液，毛细管两端浸泡在缓冲溶液的小瓶中，如图1所示，这样就构成了回流，对应的回流也就有了电流，但往往在试验的过成中电流并不像我们想的那样稳定，甚至有断流的现象，接下我们分析一下产生这种现象可能的原因。

图1 毛细管电泳仪示意图可能导致断流的原因：1、毛细管电泳柱子1.1柱子断裂毛细管柱子外壁涂有聚亚酰胺涂层，有很好的韧性，一段这层涂层脱落，毛细管柱子将失去原有的韧性，变得很脆，很容易折断。

取毛细管柱子时千万不要用利器划柱子，否则柱子很容易在划痕处断开。

毛细管柱子断裂后，缓冲溶液从断裂处流出色谱柱子，进而不能构成回路，从而导致电流迅速下降，致使电流中断，分离分析中断。

解决方法：更换柱子（平时更换柱子特别注意，不要用利器划到柱子）图2 断了柱子的毛细管电泳示意图1.2毛细管电泳柱子堵了常用的毛细管电泳柱子内径有50微米、75微米及100微米，内径很小，如果我们在试验的过场中不注意缓冲溶液及样品的纯度，或是使用了粘度很大的缓冲溶液，很容易堵死毛细管柱子，造成电流的中断。

图3柱子被堵后毛细管电泳示意图解决方法：压力反向冲洗柱子、样品及缓冲溶液使用前过滤2、气泡问题2.1缓冲溶液中的气泡我们在配置缓冲溶液时，所选用的水及在配置的过程中会使缓冲溶液溶解少量的气体，当这部分缓冲溶液进入到毛细管柱子内部时，两端加高压，运行一段时间会是缓冲溶液中的气体溢出，使柱子内产生气泡，从而使电流中断。

Sebia MINICAP毛细管电泳仪的常见故障及维护

盘的１号位必须是空的．转盘的２号位放１不带条形码在个
的试管：３检查ＭＩＩＡ（）ＮＣＰ的转盘是否正确放置了。
２定标（）择 ‘ ３ａｌｕｅＳｎｏｌｒｔｎ’ １选Ｃ２ＳｍｐｅＴｂｅｓｒＣａｉａｉ：ｂｏ
・
２７４・
第２卷第３期８２１００年６月
实验与检验医学
ＥＸＰＲＩＮＴＡＮＤＥＭＥＡＬＬＯＲＡＡＢＴ０ＲＹＭＥＣＮＥＤＩＩ
Ｖ１８Ｎ．ｏ．ｏ３２
Ｊｎ２１ｕ．００
・
实验室管・
ＳｂａＭＩＩＡｅｉＮＣＰ毛细管电泳仪的常见故障及维护
供参考
１５ｌ个ｍ的试管．在此管中放１个加有ｌｏ１馏水的子弹ｏ￣蒸
头。２定标（）择Ｃ７ ‘ａｐｅＰｏｅＣｐｃｔｅＤｔｔｎ１选２Ｓｍｌｒｂａａｉｖｅｃｏｉｅｉ
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测试模式，择 ‘ ｅｔｙｌ ’ 口；３在转盘的２选ＴｓＣｃｅ窗（）８号位，上放
白电泳该仪器设计理念新。度快，果精确，定性好并速结稳且维护简单．一款理想的电泳仪。对该仪器使用近一年来．是总体运行良好．然而在日常工作中也出现一些报警和故障。现将使用过程中出现的故障和处理方法及经验介绍给大家．

影响毛细管电泳分析结果精密度的因素及其控制-中国现代应用药学

2
石英毛细管的清洗毛细管首次使用或长时间不用后重新使用应清洗毛细
管内壁表面并用稀碱液活化因为迁移时间的精密度与分析前或分析中毛细管内表面的预处理有关 ∀ 一般使用浓度为
∗ #
≈
的盐酸 !氢氧化钠溶液和高纯水按一定程序因为酸液中的对管壁上吸附的阳离子有很
冲洗即可
6 2
强的置换能力碱液对去污及活化管壁作用显著 ∀ 石英毛细管的冲洗石英毛细管内壁具有硅羟基它是构成氢键吸附并使毛细管内电解质产生电渗流的重要原因 ∀ 电泳分析过程中的管壁吸附现象通常不可避免并具有很大的随机性 ∀ 当吸附发生时被吸附的分子影响毛细管的表面性质使电渗流改变液流紊乱并影响到组分的峰形出现谱带展宽 !响应及分离度下降 !迁移时间改变等现象 ∀ 冲洗程序可以清除记忆效应使管壁状态复原 ∀ 具体的冲洗程序应根据实验情况灵活设计 ∀ ∞ 等 ≈ 系统地研究了不同冲洗技术在多种离子测定中对迁移时间和校正峰面积精密度的影响结果表明冲洗操作可稳定和改善迁移时间的重复性 ∀ 通过选择合适的冲洗措施毛细管内表面被恢复吸附的溶质分子被消除从而提高了迁移时间的重复性 ∀ 采用氧化钠溶液 !
4 3
进样的影响
≤ ∞ 的进样方式有流体动力学进样和电迁移进样前者
值可起到
是最常用的进样方法它主要是压力进样当用压力进样时进样体积是样品缓冲液黏度 !所用压力及进样时间的函数进样量与淌度无关所用压力的变化通过调整进样时间自动补偿 ∀ 文献 ≈ 给出了三种进样时间进样重复性的比较结果表明进样的重复性优于及
的吸收低 ≈ 自身的淌度低即分子大而荷电小以减少电流的产生 …为了达到有效的进样和合适的电泳淌度缓冲液的位∀ 值至少必须比被分析物质的等电点高或低个单只要条件允许就尽可能采用酸性缓冲液因在低缓冲体系 ∀ 的

电泳过程中常见的问题及解决的方法

电泳过程中常见的问题及解决的方法电泳施工中常见漆膜缺陷及防止办法虽然电泳涂装是大量操作变量的动态平衡，操作人员不时地对电泳涂装工艺的控制参数进行监控和调整，就可以获得良好的外观、膜厚和物理特性。

因此，当检测出漆膜缺陷时，就应对它进行一系列准确、可靠的分析，然后及时提出解决办法1 ）纯水水质要求在电导率＜5μs/cm2 ）槽液液温控制在25 -30℃（冷热循环控制）3 ）进槽要清洗干净，不要将酸碱带入槽中问题原因解决对策膜厚不足固体份低提高固体份电压低提高电压温度低提高温度漆膜过厚工作周围循环不好通常因泵，过滤器及喷嘴阻塞所致固体份高降低固体份温度高降低温度电导率高提高超滤液排放量电压高降低电压水迹沌水不干净换纯水温度过高降低湿度固体份过低加漆起泡工作表所不洁净充分水洗漆膜外观不丰满颜色基比过高减少颜料补加，增加树脂含量槽液有泡沫进气漏气检查管道和泵是否泄漏溢流槽液体过低提出高液体高度涂膜粗糙颜料份高减少色浆，增加树脂电导率高超滤，降低电导率针孔槽液温度低升高槽液温度电导率过高超滤降低电导率漆膜不均匀，破裂槽液温度高降低温度电压高降低电压电导率高超滤降低电导率斑纹地图斑痕底材表面污染检查金属表面漆迹清洗不够增加清洗凹孔，缩孔杂质污染清除工件上杂质颜料份低补加色浆硬度烘烤时间延长，严格按工艺操作烘烤温度升温不够流平加溶剂麻点液温低升温溶剂少加溶剂浓度低加漆条纹表面外观不佳电压升高快溶剂含量低槽液固含量低常见故障及其纠正方法故障产生原因纠正方法桔皮或表面粗糙电压过高降低电压溶液温度高降低温度固体分过高稀释溶液极距太近加大极距烘烤加温太快压缩空气吹干后再烘烤PH 值过高用有机酸调整针孔或麻点固体分过低调整至工艺范围PH 值过低降低溶液酸度清洗水不干净换清洗水溶液电导率太高超滤去掉杂质离子膜厚太薄增加电泳电压或时间电镀表面针孔压缩空气吹干后再烘烤火山口或油点工件上附有油加强除油工序槽液面有油渍防止槽液被油污染颗粒污染加强循环过滤和超滤电压高膜层厚降低电泳电压和时间彩虹膜层太薄增加电泳电压颜色不符膜层太厚或太薄选择合适的工作电压和时间调配涂料时，颜色比例错严格按工艺配方配制电泳漆溶剂太多，渗透能力差，膜层厚薄不均调整溶剂含量，使其符合工艺规范不规则图形前处理不彻底加强前处理工序硬度不够烤烘时间短或温度低严格按工艺规范进行涂装面点状或片状颜色差异零件有针孔或砂眼杜绝不合格工件下槽色料乳化搅拌不匀加强电泳漆搅拌表面有水液用压缩空气吹干水滴未干即烘烤用压缩空气吹干电泳前水洗不彻底加强入槽产零件的清洗。

电泳仪的故障

高效毛细管电泳仪实验过程中常见问题解答序号现象可能原因纠正措施1电源开启后毫无反应1.电源没接通2.保险丝已断将仪器插头从电源插座中取出，确认插座里有电，检查保险丝，更换电源线。

2 电流指示为零电极断掉，弯曲或没有插对更换、校正、重插。

3仪器实验过程中电流不稳或电流指示远底于正常值，但电压值正常1.毛细管堵塞2.毛细管中无缓冲溶液3.毛细管破裂4.电压未加5.仪器参数设定错误6.柱内有大气泡7.用水做溶剂配样，在压力进样时将一部分水压入缓冲溶液中重新用HCl、NaOH清洗毛细管或剪去进样端小段毛细管，如果仍旧不能清洗，更换毛细管。

检查毛细管是否浸在缓冲溶液中。

更换毛细管。

检查电压值。

重新设定仪器参数。

重新注入缓冲溶液。

用稀释的运行缓冲溶液代替水配样。

4 电流指示过高毛细管柱过热用干净缓冲溶液冲洗毛细管柱，使之冷却。

5电流指示不断变化1.毛细管内有许多小气泡2.环境温度过高或过底，通风不好重新注入缓冲液。

调整环境温度，最好使用控温装置。

6恒压操作时电压显示值闪动电流设置过底重新设置电流值。

7电泳谱图上没有出现峰1.样品浓度太低或体积太小2.样品被管壁严重吸附3.毛细管检测窗与检测器光路未对准4.信号线连接错误增加样品浓度或样品体积。

对毛细管壁进行修饰处理。

取出毛细管，重新安装。

检查信号线连接情况。

8基线漂移或噪声较大1.毛细管被污染或未清洗2.毛细管柱的光学窗口被污染3.有小气泡4.操作电压太高5.缓冲溶液浓度太大6.缓冲溶液或样品中有小颗粒物质7.毛细管有很小裂缝8.检测器灯源老化9.接地问题10.检测器参数设定错误11.数据系统设定错误用0.5mol/LNaOH溶液、水、缓冲液清洗毛细管。

取下检测池，清洗光学透镜。

缓冲溶液脱气。

降低操作电压。

降低冲溶液浓度。

过滤缓冲溶液或样品溶液并检查缓冲溶液与样品是否发生作用。

更换毛细管。

更换灯源。

将检测仪和电泳仪连接在同一电源上。

检查检测器参数设定值。

重新设定数据处理参数。

SebiaMINICAP毛细管电泳仪的常见故障及维护_刘素兰

进行沟通；其中，实验室认可工作所需经费巨大，尤其是质控费用、仪器维护费用等，对于国内大多数实验室难以承担。并且许多医院对辅临科室的重视程度不够，投入的发展经费往往较少，一旦盲目启动实验室认可工作，将大大增加科室成本，减少经济效益，降低工作人员福利待遇，最终以失败告终。另外，临床科室对检验前质量控制的认识十分淡薄，对样本采集及运送的重要性理解不够，临床实验室在医院的地位较低，导致绝大多数医院检验科的检验前质量控制工作很难得到临床科室的支持与配合。
如下： 1 准备（1）运行 1 次 Capiclean 循环清洗取样针；（2）进入
测试模式，选择‘Test Cycle’窗口；（3）在转盘的 28 号位，放上 1 个 5ml 的试管，在此管中放 1 个加有 100μl 蒸馏水的子弹头。
2 定标（1）选择 C27 ‘Sample Probe Capacitive Detection Calibration (DCN)’；（2）检查并选上 ‘start 1 cycle’；（3）检查并选上 ‘auto ‐ stepping’；（4）点击 ‘START selected CYCLE’；（5）当出现提示信息 ‘Mini‐cycle 27, Step 5 finished !!! ’时，此定标结束；（5）点击 ‘Data Display’检查定标参数，临界值 (Thresh.)必须在 200 和 400 之间；（6）退出测试模式并自动重启仪器即可。
1.2 医院能否为科室提供充足的空间资源，并对实验室结构进行合理改造，以保证能够符合生物安全要求。
1.3 医院能否积极协调检验科与临床科室的关系，保证检验科实验室认可工作能够得到外界的大力支持，有利于按要求做好检验前及检验后的各项工作。

毛细管电泳原理及分析策略CE

电源系统
电源要求
毛细管电泳仪的电源系统需要提供稳定的直流电，以保证仪器的正常运行和实验结果的准确性。
电压调节
毛细管电泳仪的电压调节范围通常很宽，可以从几千伏到几十万伏，以满足不同实验条件的需求。
电流控制
为了保护仪器和保证实验结果的准确性，电源系统通常需要具备电流控制功能，能够限制电流的大小和方向。
工业废水等。
重金属离子分析
02
毛细管电泳可以用于分离和测定环境中的重金属离子，如铅、
汞、镉等。
营养物质与毒素分析
03
毛细管电泳可以用于分离和测定环境中的营养物质与毒素，如
硝酸盐、亚硝酸盐等。
04 毛细管电泳的优缺点
CHAPTER
优点
高分离效率
毛细管电泳采用微米级别的分离通道，能够实现高分离效率，尤其适用于复杂样品的分析。
毛细管电泳可以分为多种类型，如自由溶液毛细管电泳、凝胶毛细管电泳、等电聚焦毛细管电泳、
亲和毛细管电泳等。
根据检测方式分类
毛细管电泳也可以分为多种类型，如紫外可见吸收光谱检测、荧光检测、质谱检测等。
根据应用领域分类
毛细管电泳还可以分为临床检测、生物分子分析、环境监测等领域。
02 毛细管电泳仪器
在药物分析中的应用
药物成分分离
毛细管电泳能够快速分离和测定药物中的有效成分和杂质。
药物代谢产物分析
毛细管电泳可以用于药物代谢产物的分离和鉴定，有助于药物代谢动力学研究。
药物质量控制
毛细管电泳可用于药物质量控制，确保药物的有效性和安全性。
在环境监测中的应用
有机污染物分析
01
毛细管电泳可以用于分离和测定环境中的有机污染物，如农药、

毛细管电泳中毛细管对结果的影响1

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毛细管分析常见问题的解决教程文件

毛细管分析常见问题的解决一、峰丢失可能的原因及应采用的排除方法1.注射器有毛病，用新注射器验证。

2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速6.柱断裂，如果柱断裂是在柱进口端或检测器末端，是可以补救的，切去柱断裂部分，重新安装二、前沿峰1.柱超载，减少进样量2.两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开3.样品冷凝，检查进样口和柱温，如有必要可升温4.样品分解，采用失活化进样器衬管或调低进样器温度三、拖尾峰1.进样器衬套或柱吸附活性样品：更换衬套。

如不能解决问题，就将柱进气端去掉1~2圈，再重新安装2.柱或进样器温度太低：升温（不要超过柱最高温度）。

进样器温度应比样品最高沸点高25度3.两个化合物共洗脱：提高灵敏度，减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开4.柱损坏：更换柱5.柱污染：从柱进口端去掉1~2圈，再重新安装四、只有溶剂峰1.注射器有毛病：用新注射器验证。

2.不正确的载气流速（太低）：检查流速，如有必要，调整之3.样品太稀：注入已知样品以得出良好结果。

如果结果很好，就提高灵敏度或加大注入量。

4.柱箱温度过高：检查温度，并根据需要调整5.柱不能从溶剂峰中解析出组分：将柱更换成较厚涂层或不同极性6.载气泄漏：检查泄漏处（用肥皂水）7.样品被柱或进样器衬套吸附：更换衬套。

如不能解决问题，就从柱进口端去掉1~2圈，并重新安装五、宽溶剂峰1.由于柱安装不当，在进样口产生死体积：重新安装柱。

2.进样技术差（进样太慢）：采用快速平稳进样技术。

3.进样器温度太低：提高进样器温度。

4.样品溶剂与检测相互影响（二氯甲烷/ECD）：更换样品溶剂。

5.柱内残留样品溶剂：更换样品溶剂6.隔垫清洗不当：调整或清洗7.分流比不正确（分流排气流速不足）：调整流速六、假峰1.柱吸附样品，随后解吸：更换衬管，如不能解决问题，就从柱进样口端去掉1~2圈，再重新安装。

毛细管电泳出现问题分析

一、无样品峰出现A、检查电流是否稳定：①没有电流。

可能原因——毛细管堵塞或断裂。

解决方法——用水冲洗毛细管，并观察是否有水流出，若无水流出请拆下卡盒检查毛细管两端和窗口是否断裂；毛细管没有断裂的话可以用水反向高压冲洗以试图解决此问题。

缓冲溶液需要过滤，将样品过滤或者离心去除其中的颗粒。

②电流波动很大，直至几乎消失。

可能原因——缓冲溶液中有气泡产生或者区带中样品析出。

解决方法——将缓冲溶液超声脱气，如果还有此现象发生，则可能是样品区带有析出，可以通过降低样品浓度/延长ramp time来试图解决这一问题；对于在缓冲溶液中溶解度不高的样品则需要在缓冲溶液中加入添加剂以解决此问题。

③电流初始值较小，后逐渐增大。

可能原因——样品进样量过大。

解决方法——减少进样量，通常进样参数设置在0.5psi,5sec左右。

④电流正常。

可能原因：a样品浓度过低：使用高浓度样品测试，如果无法解决则有可能是以下其他原因。

b检测波长设置不正确：请确认被分析物的特征吸收，检查方法中的检测波长设置。

c分离极性错误：对于蛋白样品，请注意蛋白在分离条件下其PI及所带电荷；对于核酸样品，通常条件下会带负电荷。

d样品在毛细管内壁吸附：对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。

e光学检测器或光纤损坏：进行标准样品的测试，如果没有对应的结果出现，则有可能存在硬件问题，请联系工程师。

B、检查毛细管窗口，是否有透明窗口：可能原因——忘记开毛细管窗口或窗口位置不正。

解决方法——重新开毛细管检测窗口，或将窗口调整到正确位置。

二、样品峰出现拖尾可能原因——样品在毛细管内壁吸附。

解决方法——对于蛋白及核酸样品应尽量采用涂层毛细管分离，或采用极端pH条件或动态涂层防止样品吸附。

三、样品峰形不对称A、检查毛细管入口：可能原因——毛细管入口切口不平齐。

解决方法——重新切割毛细管入口，注意毛细管切割方法，不可以用力过猛或反复刮擦。

毛细管及色谱常见问题霍永生

毛细管分析及色谱常见问题一、峰丢失可能的原因及应采用的排除方法1.注射器有毛病，用新注射器验证。

2.未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值。

3.进样温度太低，检查温度，并根据需要调整。

4.柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整。

5.无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速。

6.柱断裂，如果柱断裂是在柱进口端或检测器末端，是可以补救的，切去柱断裂部分，重新安装。

二、前沿峰1.柱超载，减少进样量。

2.两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开。

3.样品冷凝，检查进样口和柱温，如有必要可升温。

4.样品分解，采用失活化进样器衬管或调低进样器温度。

三、拖尾峰1.进样器衬套或柱吸附活性样品：更换衬套。

如不能解决问题，就将柱进气端去掉1~2圈，再重新安装。

2.柱或进样器温度太低：升温（不要超过柱最高温度）。

进样器温度应比样品最高沸点高25度。

3.两个化合物共洗脱：提高灵敏度，减少进样量，使温度降低10~20度，以使峰分开。

4.柱损坏：更换柱。

5.柱污染：从柱进口端去掉1~2圈，再重新安装毛细管分析常见问题的解决。

四、只有溶剂峰1.注射器有毛病：用新注射器验证。

2.不正确的载气流速（太低）：检查流速，如有必要，调整之。

3.样品太稀：注入已知样品以得出良好结果。

如果结果很好，就提高灵敏度或加大注入量。

4.柱箱温度过高：检查温度，并根据需要调整。

5.柱不能从溶剂峰中解析出组分：将柱更换成较厚涂层或不同极性。

6.载气泄漏：检查泄漏处（用肥皂水）。

7.样品被柱或进样器衬套吸附：更换衬套。

如不能解决问题，就从柱进口端去掉1~2圈，并重新安装。

五、宽溶剂峰1.由于柱安装不当，在进样口产生死体积：重新安装柱。

2.进样技术差（进样太慢）：采用快速平稳进样技术。

3.进样器温度太低：提高进样器温度。

4.样品溶剂与检测相互影响（二氯甲烷/ECD）：更换样品溶剂。

5.柱内残留样品溶剂：更换样品溶剂。

毛细管区带电泳分析

CZE在PSL微球中的应用
CZE分离不同组成成分的PSL微球混合物 CZE测定PSL微球的电泳淌度 CZE用于研究两种不同组成成分的胶乳粒子之间的相互作用。
微球的表观电泳淌度与粒子的表面电荷（或荷质比）之间无线性关系。
VanOman提出PSL微球的分离是因为各粒子与毛细管内壁相互作用造成不同程度的粒子滞后而产生的 Ballou认为PSL微球的分离与粒子自身的性质有关
脂质体有包封脂溶性药物或水溶性药物的特性，药物被脂质体包封后有主要特点：靶向性和淋巴定向性缓释性细胞亲和性与组织相容性降低药物毒性保护药物提高稳定性
脂质体的评价指标
脂质体的形态、粒径及其分布
包封率的测定
渗透率的测定药物体内分布的测定
CZE在脂质体中的应用
微粒体－膜微囊
细胞在水溶液中通过机械力让其破裂产生胞内膜，该膜包裹于微粒体表面而形成微囊即称为线粒体－膜微囊
Radkon等利用CZE（Tris-硼酸电泳缓冲液，pH 8.3，检测波长 280nm）研究微粒体－膜微囊
检测器
CZE分析脂质体的在线检测方法有多种：如UV，可见光吸收（合适的染剂嵌入在膜内）、LIF（荧光染剂嵌入在膜内或包裹于脂质体内）、柱后化学发光法等。
毛细管区带电泳分析微米级和亚微米级粒子
粒子在电泳中迁移的机制 CZE在各种类型的粒子中应用粒子在CZE中的特殊电泳行为
胶体粒子的电学性质
胶体粒子表面带有电荷电泳
电离
离子吸附
离子溶解
Gouy-Chapman-Stern 模型
Smoluchowski 认为在电场中粒
子的运动是带电粒子表面的静电力F1 及阻力F2的综合结果。

毛细管电泳仪器的相关问题

毛细管电泳仪器的相关问题1：电源部分问题现有的毛细管芯片电源作为芯片毛细管电泳系统的一部分，在整个系统的产品化之前还需要进行相应的改进。

除了整体功能上需要进行一些小的改动之外，在体积、外形、外观以及如何与系统中其他部分进行系统集成，成为一个完整的整体仪器方面还需要做很多工作。

1）现有电源设计方案及功能：现有电源已经实现的功能有：●两个0－20kV CZE系列电源模块输出控制●两个0－2kV MP系列电源模块输出控制以及8路开关信号输出。

●软件控制四路电源输出及实时监测四路电源输出信号。

（软件部分还包括光电倍增管信号的采集）2）现有电源可以改进的部分：（1）去掉CZE系列电源模块，只使用MP系列电源模块。

由于CZE系列电源模块的体积较大，而且现在芯片毛细管电泳使用的电压MP系列的电源模块已经可以满足要求。

（2）电源信号监测部分的改进。

将原来的8位AD改为12位AD，可以监测提高精度，而且如果精度足够，可以将光电倍增管信号采集电路合并进来，可以省去目前光电倍增管信号采集使用的AD转换卡。

（3）控制电路电源的改进。

控制电路需要＋15V、＋5V、－5V直流电源，MP系列电源模块需要＋24V直流电源。

现有电源分别使用两个变压器，并且＋24V直流电源使用风扇降温。

可以考虑将两部分合并，减小总体积。

3）改进方案从时间和成本上考虑，我们设计了两种改进方案。

（1）改进方案一：考虑项目的整体时间进度，只对（1）进行改进。

具体工作内容及时间安排如下：●MP系列电源模块直接购买。

●电路原理图及PCB图改进设计（1周）●电路板加工（7－10天）●PC端软件改动（一周以内）●焊接及调试（一周）（2）改进方案二：对1、2、3项都进行改进具体工作及时间安排：●MP系列电源模块购买●电路原理图及PCB图改进设计（2周）●电路板加工（7－10天）●单片机程序改动（1周）●PC端软件改动（1周以内）●焊接及调试（2－3周）2：芯片定位问题1）现有结构需要改进的地方（1）现有芯片结构简单，制造完全靠手工实现，没有定位的基准，导致每块芯片上的毛细管道位置千差万别，在应用时只能够依靠显微镜观察并调整平台位置来进行毛细管道位置的调整，操作起来相对繁琐。

高效毛细管电泳思考题和答案解析

写在前面的话本试题的复习思考题与分离科学与技术上课用的课件相同步，为我认真的看了老师的课件和阅读了相关文献和结合自己的观点后，认真的总结完成了思考题的答案编写，试题仅供复习期末考试和考研复习用，答案要点均详细，需认真总结回答要点，在考试中，写出要点和适当作扩展即为正确答案，如你在阅读过程中，有任何疑问或者更好的答案，请发送邮件，我们再相互讨论，祝我们取得好成绩！第四章高效毛细管电泳复习思考题1、电泳分离的主要依据是什么？【问题分析】在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象称为电泳。

【参考答案】电泳分离的主要依据是指带电离子在电场中定向移动时，不同离子具有不同的迁移速度。

当带电离子以速度ν在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用而实现分离。

2、电泳分离中的电泳趟度指什么？影响电泳趟度的因素主要有哪些？【问题分析】电泳趟度又称为有效趟度，其计算式为：πηλνμ6qE e ==；而电渗淌度：ηεξνμ==E EOFEOF 表2电泳趟度与电渗淌度类型定义主要影响因素电泳趟度单位电场强度下的电泳速度E:电场强度；V －毛细管柱两端施加的电压；L －毛细管柱的长度。

电渗淌度单位电场强度下的电渗流速度与电场强度成正比，毛细管材料，溶液pH ，温度，离子强度，添加剂。

【参考答案】电泳趟度：单位电场强度下的电泳速度，影响电泳趟度的因素主要有：1）E:电场强度;；V －毛细管柱两端施加的电压；L －毛细管柱的长度。

问题反馈：**************************3、某同学在进行毛细管电泳分析时，发现组分的迁移时间不能重现性。

请帮他分析问题出现的可能原因有哪些？【问题分析】CE分析迁移时间的重现性受毛细管的使用时间、内表面的化学性质、使用前的预处理、所加电压、毛细管的柱温和运行缓冲溶液的组成等因素影响。

CE分析中，被分析物的确定依据是所测得的迁移时间和电泳淌度值。