蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测（GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测）方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5 磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4•12H2O]与1.59g无水磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1、整体测定法（1）选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片,取5g防入带盖瓶中，加入10 mL缓冲溶液，振摇50次，静置2min以上.(2) 取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
（3）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法（粗筛法）（1）擦去蔬菜表面泥土，滴2~3滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
（2）取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
（3）放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 ℃恒温装置中放置10 min。
预反应10 min，预反应后的药片表面必须保持湿润。
（4）将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1、结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
农药残留检测流程(酶抑制法)
农药残留检测流程【简介】农药残留是指在农业生产中施用农药后一部分农药直接或间接残存于谷物、蔬菜、果品中的现象。
有机磷和氨基甲酸酯类农药中存在着部分高毒和剧毒品种，如果被施用于生长期较短、连续采收的蔬菜，则很难避免因残留量超标而导致人畜中毒。
农药进入粮食、蔬菜、水果中，造成食物污染，危害人的健康。
由于农药残留对人和生物危害很大，各国对农药的施用都进行严格的管理，并对食品中农药残留容许量作了规定。
【检测原理】有机磷或氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的活性具有抑制作用，通过测定该酶的活性被抑制的程度即可知样品中含有农药的残留情况。
计算公式：抑制率(%)=(ΔA0-ΔA i)/ ΔA0×100%【检测对象】粮食、蔬菜、水果等【试剂配制】①缓冲液：将缓冲液试剂袋中的试剂倒出，溶于500mL 蒸馏水中，溶解、混匀即可。
②底物：往标注为底物的瓶中加入13mL蒸馏水。
2~4ºC环境下冷藏保存。
③显色剂：无需配制放入冰箱冷藏（2~4ºC），切勿冷冻结冰。
④酶试剂：酶试剂已配成溶液可直接使用。
平常要在2~4ºC环境条件下冷藏保存！【操作步骤】1.样品前处理：(1) ①植株：称取2.0g样品（叶菜剪成宽度为1厘米的菜样，块根菜取1厘米左右的表皮样品）放入三角瓶中，加入10mL缓冲液后，振荡提取2分钟；②茶叶：称取0.5g茶叶样品，加入5ml丙酮，振荡提取5分钟；取0.2mL上述丙酮溶液，40~50℃水浴蒸干；加入2.5mL缓冲液，振荡2分钟；[备注]：葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有对酶有影响的植物次生物质，易产生假阳性。
处理这类样品时，可采取整株浸提，避免次生物物质干扰。
2.检测样品的制备：(1) 空白对照液:①取酶100μL，缓冲液2.5mL，加入专用反应瓶中，再加入显色剂100μL，静置15分钟（35度恒温更佳）。
②加入底物100μL；③摇匀后立即测试。
【实用文档】食品安全现场快速检测分析方法
食品安全现场快速检测分析方法编号索引标准溯源GB/T 中华人民共和国国家标准分析方法CDC/SB 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测分析方法CDC/SB 101 农药有机磷类和氨基甲酸酯类的快速检测：采用国家标准快速检测方法GB/T5009.199-2003。
适用于蔬菜、水果以及其它食品中农药残毒的快速检测，也适用于食物中毒物质中农药的快速筛选定性。
现场使用，20分钟出结果。
CDC/SB 102 鼠药毒鼠强的快速检测：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。
主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。
检出限5ug/ml。
现场使用，20分钟出结果。
CDC/SB 103 鼠药敌鼠钠盐的快速检测：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。
主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。
检出限45ug/ml。
现场使用，10分钟出结果。
CDC/SB 104 鼠药安妥的快速检测：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。
主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。
检出限20ug/ml。
现场使用，10分钟出结果CDC/SB 105 鼠药氟乙酰胺的快速检测：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。
主要用于预防性监测和中毒物的筛选、定性鉴别。
检出限50ug/ml。
现场使用，15分钟出结果。
CDC/SB 106 亚硝酸盐的快速检测：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。
本方法是在国家标准GB/T5009.33-2003盐酸萘乙二胺检测方法基础上改进的现场快速检测方法--速测管法。
定性兼半定量检测。
可用作卫生指标检测、投毒监测和食物中毒物质的快速筛选、定性定量。
最低检出量为0.025mg/L。
现场使用，15分钟出结果。
CDC/SB 107 甲醇急性中毒指标的快速检测：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所现场快速检测方法。
国家实用新型专利ZL03242107.9酒醇仪法，与系列对照液对比检测，酒中甲醇浓度在2%～60%范围内可定量检测。
蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法
蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法(二>
NY/T 761.1-2004
第2部分蔬菜和水果中有机氯类、拟除虫菊酯类农药
多残留检测方法
o，p'-DDT、p，p'-DDT、异菌脲、五氯硝基苯、林丹、乙烯菌核利、三氯杀螨醇、三氟氯氰菊酯、氯硝胺、百菌清、三唑酮、甲氰自动进样器同时将样品注人气相色谱的两个进样口，组分经不同极性的两根毛细管柱分离，电子捕获检测器(ECD>检测。
外标法定
表1 22种有机氯农药及拟除虫菊酯类农药标准品
3.8 农药标准溶液配制
药标准储备液，贮存在－18℃以下冰箱中。
使用时根据各农药在对应检测器上的响应值，吸取适量的标准储备液，用正己烷稀释配制体积的同组别的单个农药储备液分别注入同一容量瓶中，用正己烷稀释至刻度，采用同样方法配制成3组农药混合标准储备溶液。
使
缓通人氮气或空气流，蒸发近干，加入2.0mL正己烷，盖上铝箔待检测。
面时，立即倒人样品溶液，用15mL刻度离心管接收洗脱液，用5mL丙酮十正己烷(10十90>涮洗烧杯后淋洗弗罗里矽柱，并重复一次。
析柱A获得的样品溶液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。
样品中某组分的两组保留时间与标准中某—农药的两组保留时间相差都在±0.5min内的可认定为该农药。
～5.00mg/L三个水平添加到蔬菜和水果样品中进行方法的精密度实验，方法的添加回收率在70％～120％之间，变异系数小于20％。
附录A<资料性）
申明：
所有资料为本人收集整理，仅限个人学习使用，勿做商业用途。
KJ01蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测(精)
§3.1 蔬菜中有机磷和氨基甲 酸酯类农药残留量的快速检测
1.农药残留测试的相关知识点 2.农药残留的快速检测技术 3.多功能食品安全检测仪的使用
上海农林职业技术学院
一、背
景
2001年，杭州的空心菜有机磷中毒事件。 2003年，南京蔬菜有机磷残留导致中毒的事件。
2007年，福建大田发生有机磷污染水源导致中毒事件。
品种类中的“空白测”项，按“确认”键。
将放置10min的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀
马上放入仪器中，按“检测”键，进行空白检测，记录反应3 min，过
程中请勿打开盖子。
《食品安全快速检测》
上海农林职业技术学院
实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法
3、 样品溶液测定
先于试管中加入2.5 mL样品提取液，再加入0.1 mL酶液、0.1 mL显色 剂。摇匀后于35 ℃放置10 min以上。 于“检测”状态下选择“农药残留”项目，按“确认”键，选择样品 种类中的“蔬菜”项，按“确认”键。 将放置10min的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀 马上放入仪器中，按“检测”键，进行空白检测，记录反应3 min， 过程中请勿打开盖子。
药的总称。大多为磷酸酯类或硫代磷酸酯类。
有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化 乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲 胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。 氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威 （呋喃丹）、异丙威、灭多威等。
《食品安全快速检测》
上海农林职业技术学院
实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法
有机磷和氨基甲酸酯类农药残留标准
有机磷和氨基甲酸酯类农药残留标准摘要：一、有机磷和氨基甲酸酯类农药概述二、有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的危害三、有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测方法四、我国相关标准及规定正文：一、有机磷和氨基甲酸酯类农药概述有机磷和氨基甲酸酯类农药是我国农业生产中大量使用的杀虫剂。
有机磷农药是含有有机磷的农药化合物，品种多、药效高、用途广，但部分品种对人、畜的急性毒性较强。
氨基甲酸酯类农药则是一类具有广泛应用的农药品种。
二、有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的危害有机磷和氨基甲酸酯类农药残留对人体健康造成危害，主要通过三条途径进入人体：一是偶然大量接触，如误食；二是长期接触一定量的农药，如农药厂的工人、周围居民和使用农药的农民；三是日常生活接触环境和食品、化妆品中的残留农药。
三、有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测方法有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测方法主要包括酶抑制法等。
如RP100型农药残毒速测仪，是按国家标准GB/T5009.199-2002所规定的有酶抑制率法测定蔬菜（水果）中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速测定方法所开发的检测仪器。
四、我国相关标准及规定我国对于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测标准有GB/T5009.199-2002等，同时还规定了肉中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易检验方法、酶抑制法（GB/T 18626-2002）。
这些标准旨在保障农产品质量和人体健康，对于农业生产者和消费者都具有重要的指导意义。
总结：有机磷和氨基甲酸酯类农药在我国农业生产中占据重要地位，但其残留问题不容忽视。
了解农药残留的危害、掌握检测方法以及遵循国家相关标准，有助于保障农产品质量和人体健康。
蔬菜中有机磷类农药残留的快速检测
近年来，由蔬菜中农药残留超标而引起的中毒事故时有发生，因此对蔬菜中农药残留的监测显得尤为重要。
在蔬菜生产中，所使用的农药主要包括有机磷类和氨基甲酸酯类农药[1]。
传统的有机磷类和氨基甲酸酯类农药的残留分析方法主要有气相色谱法、液相色谱法、薄层色谱法及质谱联用[2]等，这些方法测试灵敏、准确度高，但预处理较为烦琐，测试时间较长，且仪器比较昂贵，对仪器的使用条件和操作人员要求也比较严格，只适用于实验室检测[3]。
如果能在蔬菜上市前快速检测出其农药残留是否超标，将能防止许多农药中毒事件的发生，确保消费者的安全。
为了满足市场需求，九十年代快速检测方法应运而生[4]，其中植物酯酶抑制法以其操作简单、方法灵敏、检测快速、原料来源广、成本低廉、保存期长、适合现场检测等优点被广泛使用[5]。
目前用于快速检测的植物酯酶主要是从大米、小米、玉米、面粉[6]、大豆[7]等粮食作物中提取，在很大程度上造成了粮食的浪费。
本实验通过使用从苜蓿这种非粮食作物中提取的植物酯酶，以2，6—二氯乙酰靛酚为显色剂，通过对蔬菜中常用的氧化乐果、甲基对硫磷、甲拌磷、甲胺磷、久效磷等5种有机磷农药的敏感性研究，确定了蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法。
实验结果表明，该方法农药残留最低检测限较低，可以满足国内和欧盟对以上5种有机磷农药最低残留量的检测要求。
1试剂与仪器1.1仪器UV-2802PCS 型紫外可见分光光度计（上海尤尼柯仪器有限公司），高速冷冻离心机（法国JOUAN ），蔬菜中有机磷类农药残留的快速检测王亚飞，张金艳（黑龙江八一农垦大学文理学院，大庆163319）摘要：通过研究蔬菜中常用的5种有机磷农药对植物酯酶的抑制作用，以2，6—二氯乙酰靛酚为显色剂，确立了蔬菜中有机磷农药残留的快速检测方法。
实验结果表明：该方法能快速检测氧化乐果、甲基对硫磷、甲拌磷、甲胺磷、久效磷等5种有机磷农药在蔬菜中的残留，最低检测限范围为0.002~0.05μg ·mL -1。
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
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2
我 国 农药 残 留检 测 方 法 的研 究 现 状
一
农药 残 留分 析 是 门 综 合 性 高 涉 及 面 广 的分析 科 学 食 品 k k 中 农 药残 留水平 般 在 m g ／ g ~ t g ／ g 之 间 农 药 残 留检 测 是 对 复 杂 混 合 物 中痕 量 组 分 进 行 检 测 当 前 我 国对 蔬 菜 瓜 果 等农产 品 中农 药 残 留 的 定 量检 测 技 术 已 达 到 相 当 高 的 水平 目前 采 用 的农 药残 留分析 方法 可 分 为 定 量 及 定 性 分 析法 定 量 分 析 法 主 要 有 薄 层 色 谱 分 析检 测 技 术 气 相 ( 液 相 ) 色 谱 分 析 技 术 毛 细 管 电色 谱 分析技 术 超 临界流 体 色 谱 分 析技术等 波 谱 分 析检 测 方 法 该 类技术在 分 析检 测方 面 较 为精确 但 是 由 于 仪 器 价格 昂 贵 操 作 成 本高 以 及 操作耗 时较 长 结 果 滞 后 若 采 用 其 开 展 快 速 检 测 工 作 不太 切 合 实 际 定 性 分 析 法 主 要 有 化 学 显 色 法 生 物传 感 器 法 及 酶 学 法 生
一 一
l pr o d u c t s ha h l p r o d u c ts a n d t
s
s t im u
v e g e t a b l e s i s c o n s id e r e d t o b e la t e d th e d e v e lo p m e n t o f m e t h
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一
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一
酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留
酶抑制法检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留以及对该检测方法的评价王志波（如皋市农产品质量检验测试中心 226500）摘要：在人们广泛关注食品质量安全的今天，作为监控农产品质量安全的最直接的有效手段，蔬菜农药残留速测技术得到迅速发展。
蔬菜农药残留速测法主要有酶抑制法和化学试剂速测法两种。
它们都具有快速、简便、灵敏、成本低等特点。
在基层监督部门、蔬菜生产基地及市场得到广泛应用。
本文根据行业标准《NY／T448-2001》，利用酶抑制法和相关农残速测仪及配套试剂盒对我市主要批发市场、农贸市场、超市的蔬菜样品进行了检测。
关键词：质量安全；农药残留；速测；酶抑制Abstract：The increasing concern on the food security has stimulated the development of methods for rapid detection of pesticide residues which is the most direct and most effective means of quality-safety monitoring of agricultural products. The methods of rapid detection of pesticide residues on vegetables, including enzyme inhibition method and chemical method, have been widely used in primary regulation departments、vegetable production bases and markets due to their simple, rapid, sensitive and low costing characters. Vegetable samples collected from wholesale markets、farmer markets、supermarkets were detected by enzyme inhibition method using pesticide residues detector coupled with reagent set according to standard (NY／T448-2001) in this paper.Key words: agricultural products security;Pesticide residues; rapid test;enzyme inhibition1仪器与试剂1.1检测仪器RP－410速测仪，T－200型电子天平，电热恒温培养箱，可调移液枪（10～100微升；1-5毫升），配套玻璃仪器及其它配件。
实验一 农药残留检测
实验一农药残留的检测（酶抑制法）一．概要有机磷和氨基甲酸酯类农药中存在着部分高毒和剧毒品种，如甲胺磷、对硫磷、涕灭威、克百威、水胺硫磷等，如果被施用于生长期较短、连续采收的蔬菜，则很难避免因残留量超标而导致人畜中毒。
农药进入粮食、蔬菜、水果、鱼、虾、肉、蛋、奶中，造成食物污染，危害人体健康。
二．实验原理在一定条件下，有机磷与氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药浓度成正比。
在正常条件下，胆碱酯酶可催化底物（乙酰胆碱）水解，水解产物可与显色剂进行显色反应，产生黄色产物。
可在412nm下检测吸光度的变化值，计算出抑制率，通过抑制率判断农药残留是否超标。
三．实验材料、仪器与试剂（一）材料：果蔬样品（二）仪器：农药残留快速检测仪(中检维康icheck101)、电子天平、水浴箱、样品杯、比色皿、移液枪、10ml离心管（三）试剂：农药残留快速检测试剂盒（缓冲液、显色剂、底物、胆碱酯酶）四．实验步骤对照实验：向离心管中加入2.5ml缓冲液，再加入100ul酶、100ul显色剂，37℃水浴10分钟后（设置仪器的相关选项），加入底物100ul，迅速倒入比色皿，放入任一通道。
测得吸光度为ΔA0。
样品前处理：取2g（±0.1）果蔬制品（剪成1cm大小）于样品杯中，加入10ml缓冲液，摇2min，待用。
样品检测：取2.5ml样品液于离心管中，加入100ul酶、100ul显色剂，37℃水浴10min 后（设置仪器相关选项），加入底物100ul，迅速导入比色皿，放入设置好参数的通道中。
测得吸光度为ΔA t。
五．计算）/ΔA0}×100%抑制率：{（ΔA0﹣ΔAt式中:ΔA0----对照组反应3min吸光度的变化值ΔA t----样品组反应3min吸光度的变化值六．限量标准GB/T5009.199 2003中规定抑制率≦50%为合格七．注意事项及实验反思1.取样时注意均匀取样2.注意移液枪的使用，熟练掌握移液枪的量程3.利用实验中的等待时间设置仪器中检测的样品信息4.运用不同的实验仪器进行农药残留实验，尽快熟练农药残留的检测，脱离说明书进行操作。
有机磷类和氨基甲酸酯类农药的快速检测
有机磷类和氨基甲酸酯类农药的快速检测集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-有机磷类和氨基甲酸酯类农药的快速检测（农药速测卡使用说明）方法编号：CDC-1011 1 适用范围：本方法适用于蔬菜、水果、相应食物、水及中毒残留物中有机磷类和氨基甲酸酯类农药的快速检测。
本方法摘自国家标准快速检测方法GB/T5009.199-2003。
2 检测原理：胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此判断样品中是否含有过量有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留。
3 检测试材3.1 固化有胆碱酯酶和靛酚乙酸酯试剂的农药速测卡。
3.2 乙酸乙酯3.3 pH7.5磷酸盐浸提（缓冲）溶液：分别取15.0g磷酸氢二钠[Na2HPO4·12H2O]与1.59g磷酸二氢钾[KH2PO4]，用500mL蒸馏水溶解。
3.4 称量天平3.5 有条件时配备专为农药速测卡而设计的“农药残留速测仪”和超声波提取器。
4 蔬菜、水果中农药残留量的检测、结果判断与注意事项4.1 表面测定法（粗筛法）：擦去蔬菜表面泥土，滴2～3滴浸提液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
取一片速测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
放置10min进行预反应，将速测卡对折（红色药片与白色药片叠合）后，用手捏3min时，打开与空白对照实验卡比较，白色药片不变色或略有浅蓝色均为阳性结果。
白色药片变为天蓝色或与空白对照卡相同为阴性结果。
有条件时，将纸片插入“农药残留速测仪”自动恒温、定时检测。
4.2 整体测定法：选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm 左右见方碎片，取5g放入带盖瓶中，加入10mL浸提液（样品与浸提液的比例为1+2），震摇50次（有条件时，可将提取瓶放入超声波提取器中震荡30秒），静置2min以上。
蔬菜中农药残留_有机磷_的快速测定
条件试验 8))
87 ! 盐酸加入量的影响 吸取 ’7 按上述 (2 1) > 份分别置于 > 个 $’21 量瓶中， 方法操作（其中 ’7 ’!6/01 分别加 ’、 (、 9、 >、 5、 !’2 1）测 消光值， 结果见表 !。
表 !)) 盐酸加入量对甲胺磷消光值的影响
’7 ’!6/01 加入量
上述试验表明盐酸加入量多少基本不影响甲胺磷 消光值的变化。
87 ( 不同有机磷农药的回收率
将市售的敌敌畏、 甲基对硫磷、 辛硫磷、 氧化乐果标 分别吸收 (2.34. 准试剂分别配制或 2.34. 的标准溶液， 与甲胺磷一道， 加入黄瓜试材母液进行抽提， 测定结果
AA
见表 ! 。
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结论 +**
蔬菜中常用的定量检测农药残留方法气相色谱法， 准确度和灵敏度均很高， 可作为有机磷农药精确定量的 分析方法， 但需要一定的仪器设备， 试验费用高， 而且需 要训练有素的专门人员进行操作， 分析时间长， ,- 年代 以后， 又出现了免疫分析， 超临界流体提取与超临界流 体色谱及毛细管管区域电流等新的分析检测技术。 这些 技术虽然在特异性和灵敏度方面有很大改进， 但很难普
果蔬中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留快速测定方法
一
理 学原 理 ， 其 用于 农药 残 留 的检 测 中［１如果 蔬 菜 的提 取 将 ５。 － ７
液 中 不合 有 机 磷 或 氨基 甲酸 酯 类 农 药残 留或 残 留量 较 低 ，
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现 代农 业 科技
２ １ 第 ３期 ０ ２年
植 物保 护学
果蔬 中有 机磷 及 氨 基 甲酸酯 类 农 药 残 留快 速测 定 方 法
张 莹
（ 宁省 沈 阳市 农 业 检 测 中心 ， － Ｈ １０ ３ ） 辽 ａ ／ １０ ４ ｚｖ Ｚ￣
摘要 介 绍 了果 蔬 中有机 磷 及氨 基 甲酸酯 类农 药残 留快速 测 定 方法 的原 理 、 设备 、 法 、 果判 定及 注 意 事项 ， 系统 阐述 了快 速 测 方 结 并 定方 法的 优点 、 点 ， 缺 以供参 考 。 关键 词 果 蔬 ； 有机 磷 ； 基 甲酸 酯 ； 药 残 留 ； 氨 农 快速 测定 方 法 中 图分类 号 Ｓ Ｓ ８ 文 献标识 码 Ａ 文章 编 号 １ ０ — ７ ９ ２ １ ）３ ０ １ － １ ６：４ １． ８ ０ ７ ５ ３ （０ ２ ０ — ２ １ Ｏ
的积累 ， 影响 正 常 传 导 ， 昆虫 中 毒 致死 。 据 这 一 昆 虫毒 使 根
１３ ， 明实 验 设 备 、 剂 与 条件 良好 ， 以检 测 。 是 加 ０％ 说 试 可 三
底 物 和上 机 的 过程 要 尽量 快 速 ， 证 保 置 时 间要 与空 白样品 严格 保 持一 致 。 ３ 快 速 测定 方 法 的优缺 点
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测随着现代城市化发展和经济的迅速增长，人们对食品的质量和安全性越来越关注。
由于蔬菜作为人们日常饮食中不可或缺的组成部分，因此其安全性备受关注。
然而，蔬菜中存在着各种农药残留，其中包括有机磷和氨基甲酸酯类农药，这些化合物被广泛用于蔬菜生产中的虫害和病害防治。
因此，蔬菜中的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测具有重要的现实意义。
有机磷和氨基甲酸酯类农药对人体健康有潜在的危害。
有机磷类农药与乙酰胆碱酯酶的结合会引起中毒作用，而氨基甲酸酯类农药也有潜在的毒性。
在食品中，这些化合物的残留量可能会对人体健康造成不利影响。
因此，为了保障食品安全，有必要开发一种快速和准确的检测方法，以检测有机磷和氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残留量。
目前，常用的农药残留检测方法包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相质谱法等。
这些方法通常需要耗费大量的时间和成本，且需要复杂的仪器设备和高度技术人员的操作技能。
这使得这些方法不适合于在食品加工和销售过程中进行快速检测。
近年来，基于生物技术手段，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光探针法等新的农药残留检测方法得到了广泛的研究和应用。
这些方法具有快速、准确、低成本和易操作等优点，且可以实现高通量检测和多重残留物的同时检测。
其中，基于ELISA技术的快速检测方法是目前应用最广泛的一种方法。
ELISA技术是一种基于免疫反应原理的化学测量方法，通常用于快速检测多种化合物的残留量。
它通过检测蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药的抗原抗体结合反应，确定蔬菜中的农药残留量。
基于ELISA技术的农药残留检测方法具有很多优势。
首先，它可以提高检测速度和准确性，同时可以检测多种化合物的残留量。
其次，它可以在不需要复杂的化学试剂和设备的情况下进行实验操作，降低检测成本和提高检测效率。
此外，ELISA技术还能够在食品加工和销售过程中进行快速检测，以保障食品安全。
叶菜类蔬菜农药残留快速检测操作
蔬 菜 农 药残 留 的快 速检 测是 把 好农 产 品质 量 安全 关 的重 要 手段 之 一 。近 年来 ， 江西 省政 府 实 施 了省 预 警、 市监 督 、 县定 量 、 乡快速 的农 产 品质 量 安全 监 测 办法 ， 将 蔬 菜快 速检 测 工作 确 定 为 乡镇监 管 内容 ， 实现 了
可 以食 用 ； 抑 制率 在 ５ ０ ％左右 的样 品 ， 需再 次测 量 直到 确定 其是 否 残 留超标 。
２ ． ４ 注意 事项
（ １ ） 试剂 保存 原 则 ： 试剂 应 置 于 ４ ￣ Ｃ 冰箱 保存 ， 切 勿冷 冻 至结 冰 ， 使用 前 摇 匀并 恢 复 到室 温 。 （ ２ ） 器皿 专 用
中不 含 有 机磷 或 氨基 甲酸 酯类 农 药 或含 量 较 低 ， 酶 的活 性就 不 会 被抑 制 ， 试 验 中加 入 的底 物 就 被 酶水 解 或
少部 分 被 水解 ， 水 解 产 物 与加 入 的显 色 剂 反应 产 生 颜 色 。反 之 ， 如 果 蔬 菜 的提 取 液 中含 有 一 定 量 的有 机 磷 或 氨基 甲酸 酯 类农 药 ， 酶 的 活性 就 被 抑 制 ， 试 验 中加 入 的底 物 就 不 能被 酶 水 解 ， 从 而不 显 色 或 颜 色 变 化 很 小， 用分 光 光度 计测 定 吸光 值 随 时间 的变 化 ， 计算 出抑制 率 ， 就 可 以判 断蔬 菜 中有 机 磷 或氨 基 甲酸 酯类 农 药
酶抑制分光光度法
酶抑制分光光度法酶抑制分光光度法蔬菜农药残留速测检测方法--酶抑制分光光度法，其原理是：有机磷和氨基甲酸酯类农药具有抑制昆虫中枢和周围神经系统中的乙酰胆碱酯酶活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死的原理来检测此类农药在食品中的综合残留量。
此种方法主要是从家蝇或其他动物组织中提取乙酰胆碱酯酶〔AChE〕，将乙酰胆碱酯酶与蔬菜样本提取液混合，以碘化乙酰硫代胆碱〔ATChI〕为底物，二硫双硝基苯甲酸〔DTNB〕为显色剂，经一段时间比色后，根据吸光值，计算乙酰胆碱酯酶受抑制程度。
造成蔬菜和水果农药残留问题主要是有机磷和氨基甲酸酯类农药。
如果蔬菜的提取液中不含农药或残留量很低，酶的活性就不被抑制，试验中参加的基质就被水解，水解产物与参加的显色剂反响产生颜色或水解产物本身有颜色。
如果蔬菜提取液中含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，基质就不被水解，当参加显色剂时就不显色或颜色变化很小。
在分光光度计测定吸光度的变化，计算出抑制率就可以判断农药〔有机磷和氨基甲酸酯类〕的残留情况。
抑制率与农药浓度呈正相关。
残留农药对乙酰胆碱酯酶活性有抑制，浓度越高，抑制率越高。
仪器通过测定酶与底物、显色剂显色反响变色速率，并与空白对照比拟求得酶抑制率，从而判定农药残留量是否超标。
农药残留速测检测结果判断标准〔国标〕中明确，酶抑制率≥50%时，蔬菜中某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒超标。
酶抑制率法对局部农药的检出限农药名称检出限／〔㎎／㎏〕农药名称检出限／〔㎎／㎏〕敌敌畏0.1氧化乐果0.8对硫磷1.0甲基异柳磷5.0辛硫磷0.3灭多威0.1甲胺磷2.0丁硫克百威0.05马拉硫磷4.0敌百虫0.2乐果3.0呋喃丹0.05 AChE 化学反响式：I(CH3)3NCH2CH2SOCCH3+H2O I(CH3)3NCH2CH2SH+CH3COOH 〔ATChI〕碘化硫代胆碱与5,5,-二硫双硝基苯甲酸〔DTNB〕作用生成5-硫基-2-硝基苯甲酸〔黄色〕，用溶液吸光度测出乙酰胆碱酯酶的催化活度。
农残快速检测原理及操作流程
农残快速检测原理及操作步骤农残快速检测原理：有机磷和氨基甲酸酯类农药是中国现在使用量最大农药，而且较多是严禁使用在果品、蔬菜上。
该类农药在生物体内能够和乙酰胆碱酯酶（Ache）结合，并不易分离，即乙酰胆碱酯酶活性被抑制，致使人体神经传导中乙酰胆碱不能水解而积累，神经过分兴奋，出现中毒症状甚至死亡。
基于此原理，以乙酰胆碱酯酶同蔬菜萃取液反应，若受到抑制即表示该萃取液中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，因为酶活性被破坏，使之不能正常分解乙酰胆碱，依据乙酰胆碱酯酶活性改变程度来测定果品蔬菜样品中残留农药。
农残检测操作步骤：(SJ-10农药残留检测仪)(在网方法) （一）、前期准备1、开启SJ-10农药残留检测仪让其自检并预热10~15分钟，以确保光源稳定；2、打开电脑，登录复讯农药残留检测系统，进行端口设置并连接检测仪。
3、对前一天对照液参考值及检测信息进行清零。
（二）、对照液制备及测试1、对照液制备取酶100ul，缓冲液2.5ml，加入比色皿中，混匀，再加入显色剂100ul，底物20ul。
摇匀后立即将比色皿放入仪器中进行对照测试。
2、对照液测试结果保留测试结果应在0.3~0.8之间，若超出此范围，疑似操作有误或显色时间过长，需重做，直至合格后保留结果。
（三）、待测样品信息录入：按待测样品编号次序录入该样品生产、被检单位，样品名称、检测标准等信息。
（四）、检测样品液制备1、取2g果蔬样品（叶菜剪成1厘米见方小片，瓜果取1厘米见方横截面）放入三角瓶中，加入10ml缓冲液，振荡提取2分钟后过滤，取出清夜即为待测试液；2、取酶100ul，待测液2.5ml，加入比色皿中，混匀（静置抑制10分钟）后，加入显色剂100ul，底物20ul。
盖上比色皿颠倒两次后立即把比色皿放入仪器中进行样品测试。
农残检测结果判定：（SJ-10农药残留检测仪）1、若样品抑制率小于50％，说明试样中农药残毒性小，该样品合格；2、若样品抑制率大于或等于50％，说明试样中农药残毒性大，该样品不合格，通知暂停交易，并进行追踪改善和汇报主管部门；3、若样品抑制率在40%~50％之间为疑似农残超标样品，需复查。
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蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法（除韭菜外）果菜类豆菜类瓜菜类根菜；
1范围：本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。
本标准适用于叶菜类叶菜类（除韭菜外）果菜类豆菜类瓜菜类根菜类（除胡萝卜茭白）中甲胺磷氧化乐果对硫磷甲拌磷久效磷倍硫磷杀扑磷敌敌畏克百威涕灭威灭多威抗蚜威丁硫克百威甲萘威丙硫克百威速灭威残杀威异丙威等的农药残毒的快速检测。
2原理：
有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒死亡，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。
加入反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的残毒情况。
即：乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药→酶活性被抑制
→活性被抑制→样本中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药
乙酰胆碱酯酶+样本提取液︱→
→活性正常→样本中不含有有机磷或氨基甲酸酯类农
如以乙酰硫代胆碱（AChE）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410纳处有最大吸收峰，用分光光度计可测的酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。
3试剂：
3.1磷酸缓冲液。
3.2丁酰胆碱酯酶：根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，⊿A值控制在0.4～0.8之间。
3.3底物典化硫代丁酰胆碱，用缓冲液溶解。
3.4显色济：二硫代二硝基甲酸，用缓冲液溶解。
4仪器:
4.1波长为410纳米±3纳米专用测速仪,或用可见光分光度计.
4.2电子天平（准确度0.1克）.
4.3微型样品混合器.
4.4台式培养箱
4.5可调移液枪: （10～100微升,1～5毫升）.
4.6不锈钢取样器（内径2厘米）.
4.7 配套玻璃仪器及其他配件等.
5 检测
5.1 取样
用不锈钢管取样器取来自不同植株叶片(至少八～十片叶子)的样本;果皮从表皮到果肉1-1.5厘米处取样.
5.2检测过程
取两克切碎的样本(非叶菜类取4克),放入提取瓶内,加入20毫升缓冲液震荡一到两分钟,倒出提取液,静止3-5分钟;于小试管内分别加入五十微升酶,3毫升样本提取液,50微升显色剂,于37～38℃下放置30分钟后再分别加入50微升底物,倒入比色杯中,用仪器进行测定.
5.3 检测结果计算
检测结果按式(1)计算
抑制率(%)=﹝△ΑC-△Αs﹞/△Α c ×100 (1)
式中△ΑC——对照组三分钟后与三分钟前吸光值之差;
△Αs——样本三分钟后与三分钟前吸光值之差.
抑制率≥70%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒.此时样本要有2次
以上重复检测,几次重复检测的重现性应在80%以上.
6最低检出浓度
本方法的最低检出浓度见表1。
农药中文名毒性最低检出浓度（溶液）毫克/升最低检出浓度（蔬菜）毫克/千克
甲胺磷高毒1～2 3～5
氧化乐果高毒0.7～2 2～5
对硫磷高毒0.7～1.5 2～4
甲拌磷高毒0.3～0.7 1～2
倍硫磷高毒2～2.5 6～7
久效磷高毒0.3～0.7 1～2
杀扑磷高毒2～2.5 6～7
敌敌畏高毒0.1 0.3
克百威高毒0.3～0.7 1～2
涕灭威高毒0.3～0.7 1～2
灭多威高毒0.3～0.7 1～2
抗蚜威高毒0.5～1 1.5～3
丁硫克威中毒0.7～1 2～3
甲萘威中毒0.3～0.7 1～2
丙硫克百威中毒0.3～0.7 1～2
速灭威中毒0.5～0.8 1.5～2.5
残杀威中毒0.3～0.8 1.5～2.5
异丙威中毒0.5～0.8 1.5～2.5
丁酰胆碱酶对甲基对硫磷乐果毒死蜱二嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10毫升
|千克以上。
实验= 植物抗逆性的鉴定——电导仪法
植物抗逆性研究,在植物生理生态研究中有一定重要性,与生产关系也很密切,因此常要
求对植物抗逆性进行坚定.该实验练习根据电导率变化来测定细胞透性变化(透性变化能反
映抗逆性大小)的技术,并观察干旱,高温等因子对细胞透性的影响,为深入开展抗逆性研究
提供条件
—,原理
当植物组织受干旱或其他不良条件如高温,低温等影响时,常能伤害原生质体的结构而引
起透性增大,结果细胞内含物将有不同程度的外渗,使外渗液的电导度增大,用电导仪即可明
显的测定出来;透性变化愈大,抗性欲弱.
二,材料与设备
(1)植物材料:植物叶片
(2)仪器与用具:电导仪,万分之一天平,温箱,真空泵,真空干燥器一个,恒温水浴锅一
个,50ml烧杯10个,100ml量瓶6个,1000ml一个,玻璃蒸馏器或离子交换纯水器一套,玻棒十根,滤纸若干,洗瓶一个,解剖剪一把.
(3)试剂
①重蒸馏水或无离子水;
②100氯化钠标准溶液:取分析纯氯花钠100mg,先溶于少量无离子水或重蒸馏水中,用
1000ml量瓶定容并摇匀;
③硫酸-重铬酸钾洗涤液适量.
三,方法
1,清洗用具
由于电导变化极为灵敏,稍有杂质即产生很大误差,故清洗用具是重要步骤.所以玻璃用具均须先用肥皂洗,再用新配洗涤液洗,然后用自来水,无离子水(或重蒸馏水)各洗四五遍(最后容器向下用水冲),最后倒置于洗净而垫有洁净率纸的盘中,上用洁净纱布或玻璃板覆盖.需要干的可用烘干箱烘干
2.作标准曲线
如需要定量测定透性变化,可用分析纯NaCl配成0.10.20.40.60.80.100的标准液,在20-25℃恒温下用电导仪测定,记录读书,并制作标准曲线.如只须定性,则制作标准曲线这一步可以省去.。