高氧暴露抑制新生小鼠肺血管内皮细胞Sox17的表达
小鼠血管内皮细胞的培养、鉴定及巨噬细胞移动抑制因子对其促增殖作用的研究
作 用 。方 法 取 小 鼠主 动 脉 ， 去 除周 围 的 脂 肪 和结 缔 组 织 ， 将动脉环剪成 ０ ． ５ ｎ ｌ ｍ大小 ， 放入基质胶 处理 的 １ ２孔 培 养 板 内， 待 细 胞 长满 ， 用胰酶消化后 ， 取单细胞悬液用抗 Ｃ Ｄ １ ４ ６免 疫 磁 珠 纯 化 ， 再用 Ｃ Ｄ ３ １抗 体 鉴 定 细 胞 纯 度 ， 按 ｌ ０ 个 细胞／ ｆ － Ｌ 加入 ９ ６孔 板 培 养 ， 细胞 ７ ０ ％ ～８ ０ ％ 融 合 时 用 不 同 浓 度 Ｍ１ Ｆ或 ＭＩ Ｆ抑 制 剂 处 理 细 胞 ， ４ ８ ｈ后 用 甲 基 噻 唑 基 四 唑（ Ｍ Ｔ Ｔ ） 检 测 细 胞 增 殖 程 度 。结 果 经Ｃ Ｄ １ ４ ６磁 珠 纯 化 后 细 胞 纯 度 为 ９ ５ ％ 以上 ， ＭＴ Ｔ检 测 结 果 显 示 低 剂 量 ＭＩ Ｆ能
ｃ ｏ ｍ ｍ ｏ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｍａ ｃ ｒ ｏ ｐ ｈ ａ ｇ ｅ ｍ ｉ ｇ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｙ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ（ ＭＩ Ｆ ） ．Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｍｕ ｒ ｉ ｎ ｅ ａ ｏ ｒ ｔ ａ Ｖ Ｅ Ｃ ｗ ｅ ｒ ｅ ｇ ｏ ｔ ｉ ｒ ｄ ｏ ｆ
的增 殖 ， 说明 Ｍ Ｉ Ｆ在 血 管 内皮 细胞 的 多 种病 理 生 理 反 应 中 起 重 要 作 用 。 ［ 关键词 ］ 巨噬细胞移动抑制因子 ； 血 管 内皮 细 胞 ； 细胞培养技术 ； 剂量效应关 系； 小 鼠 ［ 中国 图书 资 料 分 类 号 ］ Ｒ 一 ３ ２ ２ ； Ｒ ３ ２ ９ ． ５ ［ 文 献 标 志码 ］ Ａ ［ 文章编号 ］ ２ ０ ９ ５ — １ ４ ０ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） ０ １ — ０ ０ １ ０ － ０ ４
哮喘小鼠肺组织中IL-17及IL-17受体的变化
哮喘小鼠肺组织中IL-17及IL-17受体的变化刘晓丹;张晗;尚云晓【摘要】目的:探讨哮喘小鼠肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-17(IL-17)及肺组织匀浆中IL-17受体含量的变化.方法:将64只BALB/c小鼠分为正常组32只,哮喘组32只,两组分别于造模后第3、7、14、21天取小鼠肺泡灌洗液及肺组织,每次8只.应用ELISA法检测小鼠BALF中IL-17及肺组织匀浆中IL-17受体的含量.结果:哮喘组较正常组IL-17及IL-17受体含量有显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).哮喘组第7天IL-17及IL-17受体含量达到高峰.结论:哮喘组小鼠肺组织中IL-17及IL-17受体含量升高,且在造模后第7天达到高峰.IL-17及IL-17受体可能是参与支气管哮喘急性发作的主要细胞因子.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2014(027)004【总页数】3页(P421-422,436)【关键词】支气管哮喘;肺泡灌洗液;白细胞介素17;白细胞介素17受体【作者】刘晓丹;张晗;尚云晓【作者单位】辽宁省沈阳市儿童医院内科 110032;中国医科大学附属盛京医院小儿呼吸内科;中国医科大学附属盛京医院小儿呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R-332近年来儿童哮喘的发病机制和治疗方法越来越被人们所关注。
支气管哮喘是多种炎性细胞和炎症因子相互作用而形成的慢性呼吸道炎症性疾病。
哮喘的核心是气道高反应性，其本质是呼吸道慢性炎症，以嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等通过释放炎症因子和细胞因子而起主要作用。
但目前哮喘确切的发病机制尚不明确，许多临床及实验研究表明，IL－17与哮喘关系密切。
白细胞介素－17（interleukin17，IL－17）是由一种新型的不同于Th1型和Th2型的CD4＋效应T 细胞－Th17 细胞亚群特异性产生［1，2］，IL－17是一个N 末端信号肽含有155个氨基酸的糖蛋白，由二硫键连接的同源二聚体组成，在C末端区域有5个空间上保守的半胱氨酸残基，形成IL－17家族典型的半胱氨酸结节。
mTORC1
mTORC1/2双重抑制剂OSI -027抑制高氧诱导的肺成纤维细胞增殖和分化*吴黎虹， 唐坤， 党红星△， 符跃强， 刘成军， 李静， 许峰（重庆医科大学附属儿童医院重症医学科，国家儿童健康与疾病临床医学研究中心，儿童发育疾病研究教育部重点实验室，儿科学重庆市重点实验室，重庆 400014）［摘要］ 目的：分析哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin ， mTOR ）复合物1/2（mTORcomplex 1/2， mTORC1/2）双重抑制剂OSI -027对高体积分数氧（高氧）所致人胚肺成纤维细胞增殖和分化的抑制作用。
方法：高氧（95% O 2）处理人胚肺成纤维细胞MRC -5建立增殖分化模型，分为对照组、高氧组、高氧+OSI -027组和高氧+雷帕霉素组。
Western blot 检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin ， α-SMA ）、I 型胶原蛋白（collagen type I ， Col I ）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen ， PCNA ）、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、RhoA 、Rho 相关含卷曲螺旋蛋白激酶1（Rho -associated coiled -coil -containing protein kinase 1， ROCK1）、蛋白激酶B （protein kinase B ， PKB/AKT ）、p -AKT 和mTOR 的表达； CCK -8实验检测细胞活力；流式细胞术检测细胞周期。
结果：与对照组相比，PCNA 、cyclin D1、Col I 和α-SMA 表达随高氧处理时间增加而增加（P <0.05）。
与高氧组相比，OSI -027及雷帕霉素干预后，细胞活力下降，细胞周期被抑制在G 1期（P <0.05）。
氧诱导小鼠视网膜新生血管发生中乙酰肝素酶及串珠素的表达
ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｐ ｒｅ ａ ｍＲＮＡ ｉ ｔ ｒｔｎａ ｏ ｄｆｅ ｅ ｔ ｇ ｓ ｆ ｃ ａ ｔ ｅ ｆｅ ｅ ｇｏ ｓ ｈ ｗｅ ｓｇ ｉｉａ ｔ ｉ ｅ ｅ ｃ ｓ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｅ ｌｃ ｎ ｎ ｈｅ ｅｉ ｓ ｆ ｉｆｒ ｎ ａ ｅ ｏ ｍｉｅ ｎｄ ｈ ｄｉ ｒｎｔ ｒ ｕｐ ｓ ｏ ｄ ｉ ｎｆｃ ｎ ｄｆ ｒ ｎ ｅ
（ ｐ＝７ ３ １ Ｐ＝０ ０ ３； … ＝９ ０ ８ Ｐ＝０ ０ ０； ㈨。 ． ４ Ｐ＝０ ０ ０） ａ ｄｉｃｅ ｓ ｎｄｆ ｒｎ ｅ ｌｏｗ ｒ ｌａｌ Ｆ ．５ ， ． １ Ｆｔ ．９ ， ．０ Ｆ ＝３ ３ ９， ． ０ ，ｎ ｎ ｒａｅｉ ｉｅｅ ｃ ｓａｓ ｅｅｃｅｒ ｆ ｙ
ｓｕ ｙ ｉ ｏ ｉ ｖ ｓｉａｅ ｔ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｈ ｐ ｒ ｎ ｓ ｎｄ ｐ ｒｅ ａ ｎ ｒ ｔｎ ｓ ｗｉｈ ｏ ｙ ｅ —ｎ ｕｃ ｄ ｒ ｔｎ ｐ ｔ ． Ｍ ｅｈｏｄ Ｓ ｘｙ ｔ ｄ ｓｔ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｈ ｘ ｒ ｓｉ ｎ ｏ ｅ ａ ａ ａ ｅ ａ ｅ ｌｃ ｎ ｉ ｅ ｉａ ｔ ｘ ｇ ｎ ｉ ｄ ｅ ｅｉ ｏ ａｈｙ ｔ ｓ ｉ ｔ—
Ｃｏ ｌ ｉｎ ｎｃｕｓｏ Ｔｈｅ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｆ ｅ ａ ａ ａ ｅ ａ ｄ ｅ ｌｃ ｎ ｓ ｓ ｏ ｉ ｔｄ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｏ ｈ ｐ ｒ ｎ ｓ ｎ ｐ ｒｅ ａ ｉ ａ ｓ ｃａｅ ｗｉｈ ｈｅ ｅ ｅｏ ｔ ｔ ｄ ｖ ｌｐｍｅ ｔ ｎｄ ｎ ａ ｐｒ ｇｅ ｓｏ ｏ ｒ ｔｎ ｌ ｏ ｒ ｓ ｉｎ ｆ ｅｉ ａ
FUNDC1调控小鼠肺动脉内皮细胞线粒体分裂水平参与其增殖的机制研究演示稿件
线粒体分裂的检测方法
免疫荧光技术
通过标记线粒体分裂相关蛋白，如Fis1、Drp1等 ，观察线粒体的形态变化。
透射电镜
利用电镜观察线粒体的超微结构，检测线粒体分 裂的形态特征。
Western blot
检测线粒体分裂相关蛋白的表达水平，分析线粒 体分裂的活性。
线粒体分裂的定量分析
分裂指数
通过计算分裂的线粒体数量占总体线粒体数 量的比例，评估线粒体分裂程度。
总结词
FUNDC1通过调控细胞凋亡相关蛋白 的表达，影响细胞的存活和死亡。
详细描述
FUNDC1能够抑制促凋亡蛋白Bax和 Bak的表达和活性，从而抑制线粒体 凋亡途径的激活。此外，FUNDC1还 能调控抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，促进 细胞的存活。
06
结论与展望
研究结论
• 研究结论：本研究通过实验验证 了FUNDC1在小鼠肺动脉内皮细 胞中调控线粒体分裂水平，进而 影响细胞增殖的作用机制。这为 理解肺动脉内皮细胞增殖的调控 机制提供了新的视角，并为相关 疾病的治疗提供了潜在的靶点。
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THANKS
基因表达
FUNDC1能够调控与线粒体分裂 相关的基因表达，从而影响线粒 体的分裂过程。
FUNDC1与细胞增殖的关系
细胞周期
FUNDC1能够影响细胞周期进程，促进细胞增 殖。
细胞凋亡
FUNDC1能够调控细胞凋亡过程，对细胞的生 存和死亡具有重要影响。
细胞分化
FUNDC1能够影响细胞的分化过程，对细胞的发育和功能具有重要作用。
分裂速度
测量线粒体分裂过程中关键蛋白的磷酸化水 平，分析分裂速度。
定量PCR
检测线粒体DNA拷贝数，分析线粒体数量变 化。
转录因子SOX17在子宫内膜相关疾病中的作用
综述转录因子SOX17在子宫内膜相关疾病中的作用孟凡荣1,孙文霞2,苗聪秀3,李全喜3 (1.长治医学院，山西 长治046000；2.长治医学院附属和平医院妇科，山西长治046000；3.长治医学院附属和平医院生殖遗传科，山西长治046000)子宫内膜癌；宫颈病变；子宫内膜异位症；子宫腺肌病；不孕症致茁-catenin 在细胞质内的积累，该蛋白与其他转录因子如TCF 结合后转移至细胞核内调控目标基因的转录表达，如细胞周期因子CyclinD1和致癌基因MYC 等［5］。
最近许多研究表明SOX17和WNT/0-catenin 信号通路有着密切的关系,SOX17可以在不同的层次上干扰茁-catenin 信号通路的活性,比如SOX17即可作为转录因子调控茁-catenin 基因的转录表 达，也可结合于茁-catenin 蛋白直接干扰茁-catenin/TCF 在目标基因启动子上的转录活性［6］。
最近,Mukherjee 等人在内胚［关键词］SOX17；转录因子 SRY-box containing gene 17 ( SOX17)隶属于SOX 基因家族F 亚族，定位于人8号染色体q11.23,已知SOX17在胚胎发育过程中内胚层形成、干细胞分化、神经突胶 质细胞发展及血管生成等方面起着十分重要的作用。
大量证 据表明SOX17作为一个新的抑癌基因与许多细胞的癌变过程 密切有关,SOX17基因启动子序列的甲基化导致了 SOX17基因表达含量的下降和WNT/0-catenin 信号通路的持续激活， 并进而诱导细胞周期因子和致癌基因的表达。
最新研究发现SOX17在子宫内膜的表达与其生理功能有关,SOX17表达水平的减少不仅与女性的不孕有关，与许多常见的妇科相关疾病如宫颈上皮内瘤变、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫内膜异位症、 子宫腺肌病存在着密切的关系。
阐明SOX17在子宫内膜中的 表达调控机理和作用有可能为诊断、治疗内膜相关疾病提供新的诊断标志物与治疗靶点。
SOX17_过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建
第 49 卷第 6 期2023年 11 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.6Nov.2023DOI：10.13481/j.1671‑587X.20230603SOX17过表达慢病毒载体和稳定转染细胞系的构建黄少婷1,2, 李友1,2, 吴钊淳2, 何嘉文2, 廖科棋2, 李胜男1,2（1. 广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室，广东湛江524002；2. 广东医科大学附属医院神经病学研究所，广东湛江524002）［摘要］目的目的：构建性别决定区Y盒17（SOX17）过表达慢病毒载体，使用SOX17过表达慢病毒感染PC12细胞并建立稳定过表达SOX17的细胞系。
方法：在NCBI数据库中查找、设计并合成SOX17过表达序列，将其与经Bam HⅠ和AgeⅠ双酶切的慢病毒GV492载体连接，构建GV492-SOX17过表达重组质粒。
琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物，筛选携带GV492-SOX17过表达重组质粒的阳性菌，克隆后测序。
将GV492空载质粒和GV492-SOX17过表达重组质粒分别转染至人胚肾HEK 293T细胞中，转染48 h后收集GV492对照慢病毒和GV492-SOX17过表达慢病毒进行包装并测定病毒滴度。
将PC12细胞分为空白组、GV492对照组和GV492-SOX17组，空白组不作处理，GV492对照组和GV492-SOX17组分别采用相应慢病毒感染细胞（感染复数＝100），10 mg·L－1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的PC12细胞，荧光显微镜观察各组PC12细胞生长状态及绿色荧光表达情况。
采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组PC12细胞中SOX17 mRNA表达水平，Western blotting 法检测各组PC12细胞中SOX17蛋白表达水平。
结果结果：GV492-SOX17过表达重组质粒的基因片段长度约为744 bp， GV492-SOX17过表达重组质粒基因序列与设计合成的SOX17过表达序列一致。
间歇高压氧暴露对小鼠肺、脑组织中抗氧化蛋白Peroxiredoxin 6含量的影响
间歇高压氧暴露对小鼠肺、脑组织中抗氧化蛋白Peroxiredoxin 6含量的影响目的考察間歇吸氧对小鼠肺、脑组织中抗氧化蛋白Peroxiredoxin 6（Prx 6）含量的影响，探讨间歇吸氧对抗氧中毒的机制。
方法将小鼠随机分为正常组、持续暴露后即刻组、间歇暴露后即刻组、持续暴露后24 h组和间歇暴露后24 h 组，通过不同暴露方法，分别取小鼠肺、脑组织采用免疫组织化学和Wester blot 等方法测定Prx 6的含量。
结果经高压氧暴露的各组小鼠肺组织中Prx 6的含量均明显高于正常组（P 0.05），间歇暴露后24 h组含量明显高于持续暴露后24 h组（P 0.05），间歇暴露后24 h组与持续暴露后24 h组高于各自对应的暴露后即刻检查的结果（P 0.05）。
结论间歇吸氧可以促进肺、脑组织中Prx 6的含量增加，从而增强组织的抗氧化能力。
[Abstract] Objective To investigate the effects of intermittent hyperbaric oxygen exposure on the contents of peroxiredoxin 6 （Prx 6）in the lung and brain of mice，and to explore the mechanism underlying intermittent hyperbaric oxygen exposure protecting against oxygen toxicity. Methods Mice were randomly divided into normal group，immediate group after continuous exposure，immediate group after intermittent exposure，live 24 h group after continuous exposure，live 24 h group after intermittent exposure. The content of Prx 6 in the lung and brain were detected using immunohistochemistry and western blot analysis respectively. Results In lung，compared with normal group，Prx 6 contents of all mice experiencing hyperbaric oxygen exposure were increased （P 0.05）. The Prx 6 content of live 24 h group after intermittent exposure was significantly higher than that of live 24 h group after continuous exposure （P 0.05）. The Prx 6 contents in each live 24 h group was higher than that in each immediate group （P 0.05）. Conclusion Intermittent hyperbaric oxygen exposure can facilitate the expression of Prx 6 in lung and brain，and this may be related to the enhanced ability to protect against oxygen toxicity.[Key words] Peroxiredoxin 6；Hyperbaric oxygen；Intermittent hyperbaric oxygen exposure；Oxygen toxicity近年来发现过氧化物酶家族成员中的抗氧化蛋白（peroxiredoxin，Prxs）在体内广泛分布，现已知在哺乳动物中至少存在6种Prx亚型（Prx Ⅰ～Ⅵ）。
具有阻断新生血管形成功能的多肽化合物[发明专利]
![具有阻断新生血管形成功能的多肽化合物[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/720757b43b3567ec112d8a33.png)
专利名称：具有阻断新生血管形成功能的多肽化合物专利类型：发明专利
发明人：马衍青,许祯,苗春晓,张莹莹,杨超,高娟,邓文锋申请号：CN201410473491.1
申请日：20140917
公开号：CN104231087A
公开日：
20141224
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种具有阻断新生血管形成功能的多肽化合物。
该多肽化合物为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
该小分子多肽化合物可以通过阻断新生血管的形成而抑制实验小鼠体内实体肿瘤的生长，属于生物医学领域。
本发明基于该小分子多肽化合物能够抑制体外人脐静脉内皮细胞形成血管状结构，抑制裸鼠皮下接种基底膜基质中血管的生成，抑制裸鼠皮下接种实体瘤的生长；并且与传统的抗瘤药物顺铂相比，该小分子多肽化合物对小鼠的体重无明显影响，因此具有低副作用的优势，可作为治疗肿瘤的潜在的高效低副作用的药物。
申请人：上海大学
地址：200444 上海市宝山区上大路99号
国籍：CN
代理机构：上海上大专利事务所(普通合伙)
代理人：陆聪明
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6O%氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响
ｌｎ ｓｏ ｒ ｔｒ ｒｔ Ｗ ＡＮＧ 肌 ｕ ｇ ｆｐ ｅｅｍ ａ ｓ ，Ｗ ＥＪ Ｗ ｅ ， ＷＡＮ Ｇ 一 ， ｅ １ Ｄｅ ａ ｔ ｎ ｆ Ｐｅ ａ ｒｃ ， ｉ Ａｎ ｔａ ． ｐ ｒｍｅ ｔｏ ｄｉｔ ｉｓ
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及 其 受 体 表 达 的影 响
王伟 韦伟 王安 茹 蒙 晶 宁琴 罗小平
【 要】 目 的 摘 观察 ６ 氧 暴 露 对 早 产 大 鼠肺 血 管 内 皮 生 长 因 子 （ ａｃｌｒｅ ｄ ｔｅｉ ｒｗ ｈ Ｏ ｖｓｕａ ｎ ｏｈｌ ｌ ｏ ｔ ａｇ
ｆｃｏ， Ｇ ） 其 受 体 — — 胎 肝 激 酶一 体 （ｅａ ｌ ｅ ｉａｅ１ ｌ＿） 达 的 影 响 ， 讨 其 与 新 型 ａｔｒＶＥ Ｆ 及 １受 ｆｔｌｉ ｒｋｎｓ－，Ｆ ｋ１ 表 ｖ 探 支 气 管 肺 发 育 不 良发 病 机 制 之 间 的 关 系 。 方 法 早 产 鼠 生 后 ６ｈ内 随 机 分 为 中 浓 度 氧 组 （ 称 中 简
【 键 词 】 高 氧 症 ；支 气 管 肺 发 育 不 良 ；血 管 内 皮 生 长 因 子 Ａ；血 管 内 皮 生 长 因 子 受 体 ２ 关 ； 大 鼠 ； 儿 ， 产 婴 早
β-榄香烯抑制高氧诱导小鼠视网膜新生血管的实验研究的开题报告
β-榄香烯抑制高氧诱导小鼠视网膜新生血管的实验研究的开题报告一、研究背景糖尿病视网膜病变是糖尿病的一种常见并发症，临床上表现为视力下降、眼底出现微血管病变、新生血管以及渗出等症状。
高氧是一种重要的诱因，可以促进新生血管的形成，并使其破裂，造成出血和视力丧失。
目前，临床上采用激光和手术等方法治疗糖尿病视网膜病变的效果并不理想，因此寻求一种更有效、安全的治疗方法非常必要。
β-榄香烯是一种从天然植物中提取的化合物，具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤等多种保健功效。
近年来，研究发现β-榄香烯对于糖尿病和其并发症的治疗具有非常潜在的作用。
此外，一些初步的研究数据显示β-榄香烯还可以抑制体内血管生成和肿瘤细胞的增殖，但对其抑制高氧诱导小鼠视网膜新生血管的作用尚未明确。
因此，本研究旨在探讨β-榄香烯是否可以作为一种治疗糖尿病视网膜病变的有效药物来应用。
二、研究目的本研究的主要目的是探讨β-榄香烯对于高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的作用，并探讨其可能的作用机制和可行性。
通过评估β-榄香烯的治疗效果和安全性，为开发治疗糖尿病视网膜病变的有效药物提供科学依据。
三、研究方法1、实验动物：选用6周龄C57BL/6J小鼠50只，随机分为5组，每组10只小鼠。
2、实验设计：对于每组小鼠，分别注射高氧处理1周，然后用β-榄香烯治疗2周。
其中，注射高氧组为阴性对照组；注射高氧+β-榄香烯（10、20、50 mg/kg）的分别为各组实验组；注射高氧+吉非替尼组为阳性对照组。
3、实验方法：采用Western blot和Immunohistochemistry等技术测定眼球组织中VEGF（血管内皮生长因子）、CD31（内皮细胞标志物）等指标的表达水平，同时观察小鼠视网膜新生血管的形成和眼底图像学变化。
采用ELISA等技术测定小鼠血浆中TNF-α（肿瘤坏死因子α）、IL-6（白细胞介素6）等炎症指标的含量。
四、研究意义本研究将为进一步认识β-榄香烯在糖尿病视网膜病变中的作用提供实验依据，为探索和开发新型治疗糖尿病视网膜病变的药物提供参考。
β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋亡的影响的开题报告
β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋
亡的影响的开题报告
标题：β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋亡的影响
研究背景和意义：
视网膜新生血管生成是一种主要的病理生理现象，在许多眼部疾病中都存在。
高氧暴露可以导致新生血管萎缩和细胞凋亡，是许多视网膜疾病的共同因素。
β-榄香烯是一种天然产物，可以通过抗氧化和抗炎作用来减轻组织损伤。
因此，本研究旨在探讨β-榄香烯对高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管凋亡的影响。
研究方法：
将新生小鼠随机分组，每组10只。
在高氧条件下诱导视网膜新生血管生成。
将正常组和模型组分别接受等量的生理盐水和β-榄香烯，治疗期为10天。
采用组织学和细胞学方法评估β-榄香烯对视网膜小血管生成和凋亡的影响。
预期结果：
预计β-榄香烯治疗组较模型组有更少的新生血管生成和更低的血管凋亡率。
这表明β-榄香烯可以减轻高氧诱导下新生小鼠视网膜新生血管生成的影响，并提供了潜在的治疗选项。
结论：
本研究将有助于深入了解β-榄香烯在视网膜疾病治疗中的作用。
通过探索β-榄香烯抗氧化和抗炎作用在视网膜新生血管生成中的作用，可能为发展有效的治疗策略提供新思路。
IL-17在小鼠急性铜绿假单胞菌肺部感染模型中的作用研究的开题报告
IL-17在小鼠急性铜绿假单胞菌肺部感染模型中的作
用研究的开题报告
1. 研究背景和目的
铜绿假单胞菌是一种常见的革兰氏阴性菌，能引起人类各种部位的感染。
肺部感染是其中较严重的一种，症状包括咳嗽、呼吸急促、胸痛等。
IL-17是T细胞分泌的一种细胞因子，与炎症反应密切相关。
本研究旨在探究IL-17在小鼠急性铜绿假单胞菌肺部感染模型中的作用，进一步了解其对炎症反应的影响和可能的治疗作用。
2. 研究方法和步骤
2.1 建立小鼠铜绿假单胞菌肺部感染模型
选取健康雄性C57BL/6小鼠60只，随机分为对照组和感染组。
感染组小鼠接受铜绿假单胞菌肺部感染，对照组小鼠接受生理盐水注射。
收集小鼠肺组织进行病理学检测和细菌培养。
2.2 分析IL-17水平
通过ELISA检测小鼠血清、肺泡灌洗液中IL-17水平的变化。
2.3 观察炎症反应
利用免疫组织化学方法检测肺组织中炎症细胞及相关蛋白的表达情况，包括白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8等。
3. 预期结果和意义
通过比较感染组和对照组小鼠的IL-17水平和炎症反应情况，预计得到以下结果：
3.1 小鼠感染铜绿假单胞菌后，IL-17水平升高。
3.2 随着感染时间的延长，肺部炎症细胞数量增加，相关炎症因子表达增加。
以上结果表明IL-17参与了铜绿假单胞菌引起的肺部感染的炎症反应，可能是治疗肺部感染的潜在靶点。
该研究可为新抗炎症药物的开发提供基础研究依据。
肝癌细胞内Sox17基因表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究
ｏｆ ＣＰＬＡ，Ｂｅｉｊｉｎｇ
１００１４２，Ｃｈｉｎａ；’Ｔｈｅ Ａｃａｄｅｍｙ
ｏｆＭｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ ＰＭ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００１８２，Ｃｈｉｎａ．
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
ｉｎｖａｓｉｏｎ ｐｏｗｅｒ ｍａ ｓａｙｓ
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ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｓｏｘｌ７ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｅｓｓ
ｉｍｍｉ９１＿．ａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌｓ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｐｏｗｅｒ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ；Ｓｏｘｌ；Ｃ］ＴＮ；ｃｏｒｔａｅｔｉｎ
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ
ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏｘｌ ７ ａｎｄ ｃｅｉｌｓ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，
ｏｆ ｔｈｅ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ
ＱＳＧ７７０１
ａｎｄ ｆｏｕｒ ｆｏｒｍｓ ｏｆ ｈｅｐａｔｏｍａ ｃａｒｃｉｎｏ—
ＨＵＡＮＧ Ｚｉｍｉｎ９１，ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇｙｉ２，ＺＨＡＯ Ｇａｎ９２，ＬＩ
１
Ｚｈｉｊｉｅ２，ＸＩＡＯ
Ｊｕｎ３，ＹＡＮ Ｆａｎ９３，ＬＶ Ｌｉｐｉｎ９３
Ｔｈｅ Ｐｏｓｔ—Ｇｒａｄｕａｔｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
ｏｆ Ａｎｈｕｉ
Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｈｕｉ ＨｅＦｅｉ ２３００３２，Ｃｈｉｎａ；２Ａｉｒ Ｆｏｒｃｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ
早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系
早产鼠高氧暴露后肺组织血管内皮生长因子和一氧化氮合酶的动态变化及相互关系韦伟;王伟;宁琴;罗小平【期刊名称】《中国当代儿科杂志》【年(卷),期】2007(9)5【摘要】目的最近研究表明,血管内皮生长因子(VEGF)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)功能的缺失,在支气管肺发育不良(BPD)发病机制中发挥了重要的作用。
该文通过动态观察持续中浓度高氧暴露(60%O2)对早产大鼠肺内VGEF蛋白及mRNA和eNOS蛋白及mRNA表达的影响,探讨BPD的发病机制。
方法将21d 孕早产鼠随机分为高氧暴露组(简称高氧组)和空气对照组(简称空气组),分别置于常压高氧仓中(60%O2)和正常空气中暴露。
分别于生后1,4,7,11,14d每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本。
苏木精-伊红染色观察病理改变,免疫组化检测VEGF和eNOS蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应方法检测VEGF和eNOS mRNA表达。
结果早产鼠高氧暴露4d后出现肺泡间隔减少,微血管发育异常,间质纤维化,且病变随着高氧暴露时间的延长而加重。
高氧组大鼠第4,7天时肺组织VEGF蛋白表达明显低于相应空气对照组(P<0.05),VEGF mRNA表达亦显著减少(P<0.05)。
随着暴露时间的延长,VEGF蛋白和mRNA进行性降低。
高氧组大鼠在高氧暴露过程中肺组织eNOS蛋白和mRNA表达亦随着暴露时间的延长而降低。
结论高氧暴露导致早产鼠肺组织VEGF和eNOS表达持续性减少,微血管发育异常和肺泡化受阻。
这些由高氧暴露诱导产生的BPD样损害,可能与VEGF和eNOS的表达下调有关,且二者之间存在着密切的联系。
【总页数】6页(P473-478)【关键词】高氧;支气管肺发育不良;血管内皮生长因子;一氧化氮合酶;早产大鼠【作者】韦伟;王伟;宁琴;罗小平【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.转化生长因子β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在早产大鼠高氧肺损伤后肺组织中的表达变化和意义 [J], 张谦慎;常立文;容志惠2.宫内炎性预敏及生后高氧暴露对早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响 [J], 王伟;韦伟;宁琴;罗小平3.宫内炎性暴露对胎鼠及早产大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响 [J], 王伟;黄波;韦伟;宁琴;罗小平4.高氧致慢性肺疾病早产鼠的肺组织CDK4、p21动态变化及其意义 [J], 岳晓红;富建华;薛辛东5.持续高氧暴露降低新生大鼠肺组织血管内皮生长因子的表达 [J], 刘博;刘雪燕;李娟;王伟;魏克伦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
伏立诺他对小鼠骨髓来源树突状细胞表达CCL17及Treg细胞增殖分化
通过体外细胞学实验探索伏立诺他对原代树突状细胞表达 CCL17 及其诱导 CD4+T 细胞向 CD4+CD25+T 细胞增殖分化的影响，以探索伏立诺他在动脉粥样硬化炎症 发生过程中可能的抑制作用。
方法
将 ApoE-/-小鼠的骨髓细胞在体外被 GM-CSF/IL-4 诱导分化成树突状细胞。从小鼠 脾脏分离单个细胞，用 CD11c+、CD4+抗体磁珠分选分别获得 CD11c+树突状细胞 及 CD4+T 细胞。细胞培养体系中伏立诺他的浓度分别为 0.05uM、0.1uM、0.5uM、 1.0uM，分别培养 12h、24h、36h、72h 后回收细胞及上清，并提取总 RNA 后反 转录获得 cDNA。用荧光定量 PCR 测定 CCL17 mRNA 水平，用 ELISA 法测定细胞 上清中 CCL17 蛋白水平，用流式细胞分析抗 CD4-FITC/抗 CD25-PE 荧光标记后的 细胞分群情况。
一、实验方法 ................................................................................................................................................... 13 二、实验结果 ................................................................................................................................................... 20 三、小结............................................................................................................................................................. 30 第二部分 ..............................................................................................................................................31 组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他对小鼠骨髓来源树突状细胞诱导 TREG 细胞增殖 分化的影响 .........................................................................................................................................31 一、实验方法 ................................................................................................................................................... 31 二、实验结果 ................................................................................................................................................... 34 三、小结............................................................................................................................................................. 39 讨论 .......................................................................................................................................................40 局限性 ...................................................................................................................................................44 创新性与展望 .....................................................................................................................................45 结论 .......................................................................................................................................................46 参考文献 ..............................................................................................................................................47 文献综述： .........................................................................................................................................55 组蛋白去乙酰化酶与心脏疾病 ....................................................................................................55 附录 1：英文缩写一览表 ..............................................................................................................64 附录 2：预实验 .................................................................................................................................66 附录 3：荧光定量 PCR 反应曲线与溶解曲线 ........................................................................69 附录 3：各次 ELISA 测定的标准曲线 .......................................................................................74 致谢 .......................................................................................................................................................76 原创性声明 .........................................................................................................................................77
小鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定
小鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定郑加永;谢炳寿;陈萍;胡理明【期刊名称】《温州医学院学报》【年(卷),期】2005(035)004【摘要】目的:建立小鼠肺微血管内皮细胞体外分离培养方法及对微血管内皮细胞的鉴定.方法:取小鼠肺组织边缘剪成小块,用含有20%新生牛血清、肝素90μg/mL、L-谷胺酰胺4 mmoL/L、青霉素200 U/mL和链霉素200μg/mL的RPMI-1640培养基进行培养.纯化细胞进行Ⅷ因子相关抗原间接免疫组化染色和透射电镜观察Weilel-palade小体.结果:获得的内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态,Ⅷ因子相关抗原间接免疫组化染色阳性而且在透射电镜观察到Weilel-palade小体.结论:成功建立了小鼠肺微血管内皮细胞体外培养方法,并为体外研究肺微血管内皮细胞提供实验模型.【总页数】2页(P328-329)【作者】郑加永;谢炳寿;陈萍;胡理明【作者单位】温州市第三人民医院检验科,浙江,温州,325000;温州市第三人民医院血液内科,浙江,温州,325000;温州市第三人民医院血液内科,浙江,温州,325000;温州市第三人民医院血液内科,浙江,温州,325000【正文语种】中文【中图分类】R332【相关文献】1.小鼠肺微血管内皮细胞的培养鉴定及其血管形成功能的研究 [J], 高润娣;曹婕;卢珊;应琳;高璇;陆国华;李和权;周建英2.改良贴壁法结合内皮细胞培养基培养小鼠肺微血管内皮细胞 [J], 黄偲璇;贺涛;邢怡桥3.改良贴壁法结合内皮细胞培养基培养小鼠肺微血管内皮细胞 [J], 黄偲璇;贺涛;邢怡桥4.原代小鼠肺微血管内皮细胞的培养及鉴定 [J], 刘海琴;马华根;唐元瑜5.干扰素-γ作用后的小鼠肺微血管内皮细胞对共培养T淋巴细胞增殖的影响及机制 [J], 徐金环;尹琎;李琳;李赟;张义成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮生长因子在氧诱导小鼠新生血管中的表达及意义
血管内皮生长因子在氧诱导小鼠新生血管中的表达及意义孔怡淳;韩梅;赵堪兴【期刊名称】《中华实验眼科杂志》【年(卷),期】2006(024)004【摘要】目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在小鼠视网膜新生血管中的表达及意义.方法对新生c57BL/6N小鼠高氧后相对低氧饲养,诱导产生视网膜新生血管.在出生后12 d、17 d摘除眼球,应用RT-PCR,Western Blot以及视网膜血管荧光灌注造影技术检测全视网膜VEGF mRNA、蛋白表达水平以及视网膜新生血管的发生程度.结果视网膜血管造影显示高氧造成血管发育受限,相对低氧后产生新生血管.伴随新生血管的发生,VEGF mRNA升高2.3倍;VEGF蛋白含量也升高7.3倍.结论VEGF表达改变与新生血管发生成正相关,其升高也是造成病理性视网膜新生血管发生的机制之一.减少内源性VEGF表达可能成为治疗视网膜新生血管的新方法.【总页数】4页(P407-410)【作者】孔怡淳;韩梅;赵堪兴【作者单位】300074,天津医科大学;300022,天津市眼科医院;300022,天津市眼科医院【正文语种】中文【中图分类】R77【相关文献】1.小鼠氧诱导视网膜新生血管形成中EphA2与 VEGF 的表达及相关性研究 [J], 黄文志;李倩庆;高宗银2.氧诱导新生小鼠视网膜病变中血管新生和氧应激相关基因表达的变化 [J], 余增洋;龚陈媛;张国庆;季莉莉N1在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义 [J], 底煜;张轶欧;杨飏;陈晓隆4.YAP在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义 [J], 杨军;周佳莹;董德坤;刘盈5.色素上皮细胞衍生因子在氧诱导大鼠视网膜病变新生血管中的表达及意义 [J], 马玉胜;马锋伟;程美红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
COPD小鼠肺组织中Th17细胞相关因子的表达规律
COPD小鼠肺组织中Th17细胞相关因子的表达规律王晶;李风森;权志龙;张洪平;姜敏;田戈【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2012(35)10【摘要】目的探讨慢性阻塞性肺病(COPD)小鼠体内Th17细胞相关因子的变化特点及其与COPD发病机制间的关系.方法 40只昆明小鼠随机分为正常组和COPD 模型组(应用烟熏法建立小鼠COPD模型),持续观察6个月,收集其肺组织及外周血,采用ELISA法检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)和白细胞介素-10(IL-10)的水平,使用Real-Time PCR方法检测肺组织中STAT-3、IL-17和RORγt mRNA的变化水平.结果 COPD模型组小鼠血清中IL-17、IL-10与IL-6的含量高于正常对照组(P<0.05);模型组COPD小鼠肺组织中STAT-3、IL-17和RORγt mRNA水平与对照组相比明显增高(P<0.05).结论 Th17细胞可能在COPD 气道炎症的发生发展中起着重要作用,介导肺部炎性反应,并可能对肺部炎症性疾病具有促进作用.【总页数】5页(P1308-1312)【作者】王晶;李风森;权志龙;张洪平;姜敏;田戈【作者单位】新疆医科大学附属中医医院国家中医临床研究基地,乌鲁木齐,830000;新疆医科大学附属中医医院国家中医临床研究基地,乌鲁木齐,830000;新疆医科大学附属中医医院国家中医临床研究基地,乌鲁木齐,830000;新疆医科大学附属中医医院国家中医临床研究基地,乌鲁木齐,830000;新疆医科大学附属中医医院国家中医临床研究基地,乌鲁木齐,830000;新疆医科大学附属中医医院国家中医临床研究基地,乌鲁木齐,830000【正文语种】中文【中图分类】R563【相关文献】1.消银合剂对银屑病小鼠模型血清Th17细胞相关因子表达的影响 [J], 李舒佳;闵仲生;朱晓芳;赵莎2.参萸补血方对再生障碍性贫血模型小鼠Th17细胞及其相关因子IL-6、IL-17及IL-23表达水平的影响 [J], 曾清;陆海颂;程纬民;何艾;邓德君;赖春凤3.SOCS1过表达的树突细胞对慢性阻塞性肺疾病小鼠肺组织中Th17及Treg相关细胞因子的影响 [J], 刘茂茂; 郑相如; 欧阳瑶4.小鼠过敏性哮喘模型肺组织中Th9细胞相关因子的变化及意义 [J], 付宗强;牛小斌;张汇征;李永伟5.固本止咳中药对COPD模型小鼠肺组织中角质细胞生长因子表达的影响 [J], 刘颖;敬岳;郭丽丽;舒峻;秦玉英;谷明杰;潘琳;李鸿;马秉智;蔡哲;张洪春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
P物质对血管内皮细胞一氧化氮分泌及表达的影响
P物质对血管内皮细胞一氧化氮分泌及表达的影响肖文明;吴伯瑜;陈晓东;王顺宾【期刊名称】《福建医药杂志》【年(卷),期】2005(27)5【摘要】目的探讨P物质(SP)对血管内皮细胞一氧化氮(NO)分泌及表达的影响.方法采用不同浓度P物质(10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L)作用于人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),分别于15 min、30 min、1 h、3 h、6 h和12 h检测培养上清液中NO含量,并应用免疫组化方法检测HUVEC内诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的表达.结查10-9mol/L～10-6mol/L浓度范围的SP作用15 min,均可使HUVEC内eNOS表达增强,分泌NO 水平上升,并于1 h后达峰值,与对照组比较具有显著性差异(P＜0.05),其中10-8mol/LSP浓度组作用最为明显;而不同浓度的SP对HUVEC内iNOS的表达与对照组比较无显著性差异.结论SP可通过增强HUVEC内eNOS的表达来促进NO 的分泌;SP对HUVEC内iNOS的表达则无明显影响.【总页数】3页(P144-146)【作者】肖文明;吴伯瑜;陈晓东;王顺宾【作者单位】福建医科大学协和临床医学院,福建省烧伤研究所,350001;福建医科大学协和临床医学院,福建省烧伤研究所,350001;福建医科大学协和临床医学院,福建省烧伤研究所,350001;福建医科大学协和临床医学院,福建省烧伤研究所,350001【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.阿司匹林对炎症条件下人血管内皮细胞一氧化氮的产生及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响 [J], 何志旭;廖清奎;徐学聚;罗春华;周同甫;李钦伯;李丰益;王树人2.血瘀证兔模型血管内皮细胞中一氧化氮合酶的基因表达及其分泌一氧化氮的变化 [J], 侯孟君;陈云波;王奇;梁伟雄;温泽淮;赖世隆3.赤芍醇提物对血管内皮细胞一氧化氮合成和分泌的影响 [J], 史海霞;杨嘉君;聂绪强;薛永亮;卞卡4.葛根芩连汤及葛根素对脂多糖诱导小鼠小肠粘膜微血管内皮细胞分泌一氧化氮和内皮素的影响 [J], 王新;徐锦涛;孙书芳;丛霞;宋学文;马凯;王聪;单虎5.小檗碱对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌一氧化氮的影响 [J], 索占伟;胡格;段慧琴;许剑琴;张涛;尹龙;刘钟杰;穆祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｄａｙ ｔ４ ｉｎ ｒｏｏｍ ａｉｒ ｇｒｏｕｐ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ｌｕｎｇｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ
ｄａｙ １４ ｉｎ ｈｙｐｅｒｏｘｉａ
ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｎｏｎ—ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ ａｌｖｅｏｌｉ
ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ Ｓｏｘｌ７ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ａｓ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉｅｓ，ｖｅｉｎｓ ａｎｄ ａｌｖｅｏｌａｒ ｃａｐｉｌｌａｒｙｓ，ａｓ ｗｅｌｌ
ｈ；
加入Ｓｏｘｌ７一抗（美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司）４ ｃＣ过夜， 加人生物素化二抗室温孵育３０ ｒａｉｎ，加入生物素一 辣根过氧化物酶复合物室温孵育３０ ｍｉｎ，二氨基联 苯胺（ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，ＤＡＢ）显色；核固红复染、 脱水、封片。染色呈棕黄色颗粒为阳性。 ４．逆转录聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测肺组织中Ｓｏｘｌ７
Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｊｉａｏ Ｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
ｔｏ
Ｓｃｈｏｏｌ
ｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ
２０００９２，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ
ａｕｔｈｏｒ：Ｘｉａ Ｈｏｎｇｐｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｈｐ＠ｙａｈｏｏ．Ｃｏｒｎ
Ｔｏ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
泡上皮细胞。生后７和１４ ｄ时，高氧组ＲＡＣ值均低于空气组『分别为（３．７±Ｏ．７）与（５．０±０．８），
（５．３±０．６）与（８．３±Ｏ．９）个１，差异均有统计学意义（ｔ值分别为３．０５７和８．１４８，Ｐ值均＜Ｏ．０１）。
生后７和１４ ｄ，高氧组Ｓｏｘｌ７ ｍＲＮＡ水平均低于空气组（分别为０．６２±０．１０与０．８８４－＿０．１ｌ，０．４４±０．０６ 与Ｏ．９０±０．１ ５），差异均有统计学意义（ｔ值分别为３．６０７和６．９２６，Ｐ值均＜０．０１）。生后７
万方数据
主堡国亡匡堂盘查！！！！生ｉ旦箜！！鲞箜！塑垒！也！！！堕！型Ｍ！虫！婴：！！！！：№！：！！：盟！：！
Ｔｈｅ ＲＡＣ
ｏｎ
ｄａｙ ７ ａｎｄ ｄａｙ １４ ｉｎ
ＶＳ
ｈｙｐｅｒｏｘｉａ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ
ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｒｏｏｍ ａｉｒ ｇｒｏｕｐ ｒ３．７±０．７
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖａｓｃｕｌａｒ
ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｘｙｇｅｎ ｅｘｐｏｓｕｒｅ
ｏｎ
ｔｈｅ Ｓｏｘｌ７
ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｎｅｏｎａｔａｌ ｍｉｃｅ ｌｕｎｇｓ，ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｂｌｏｃｋｅｄ ｌｕｎｇ
Ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｆ
ＶＳ
ｄａｙ ７ ａｎｄ ｄａｙ １４
ＶＳ
ｈｙｐｅｒｏｘｉａ ｇｒｏｕｐ
ｗｅｒｅ
０．７６±０．０４，０．３６±０．０７
０．９６±０．０６．ｔ＝－３．１０２ ａｎｄ
ｃａｕｓｅ
８．４２ １，ｂｏｔｈ
ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｙｇｅｎ ｍａｙ
ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ
Ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｆ ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｘｙｇｅｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｓｏｘｌ７ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｎｅｏｎａｔａｌ
ｍｉｃｅ ｌｕｎｇｓ
Ｗａｎｇ Ｌｉ，Ｚｈａｎｇ Ｋａｉ，Ｚｈｕ Ｊｉａｎｘｉｎｇ，Ｘｉａ Ｈｏｎｇｐｉｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＮｅｏｎａｔｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｈｕａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｐｕｌｍｏｎａｒｙ
ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｓｏｘ １ ７ ｍＲＮＡ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ
ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｓｏｘｌ７ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ，Ｔｗｏ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｆ—ｔｅｓｔ
ＶＳ
Ｏ．８８±０．１１，０．４４±０．０６
ｉｎ
０．９０±０．１５，ｔ＝３．６０７ ａｎｄ ６．９２，ｂｏｔｈ Ｐ＜０．０１）．Ｓｏｘｌ７ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ｂｏｔｈ ｌｏｗｅｒｅｄ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｒｏｏｍ ａｉｒ ｇｒｏｕｐ ｆ０．３２±０．０４ Ｐ＜Ｏ．０ １）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ
生后６ ｈ内的健康新生Ｃ５７ＢＩ／６Ｊ小鼠共３２只，随机分为高氧组和空气组，每组
１６只。高氧组小鼠置于氧体积分数为８５％的氧舱中。分别于生后７和１４ ｄ，每组各取８只小鼠，
取肺组织行形态学检测，并计算从呼吸性细支气管中心至最近纤维隔或胸膜直线上的肺泡数，即辐 射状肺泡计数（ｒａｄｉａｌ
ａｌｖｅｏｌａｒ
ｃｏｕｎｔｓ，ＲＡＣ）。免疫组织化学染色检测肺血管Ｓｏｘｌ７蛋白表达。
与生后７ ｄ比较，空气组小鼠生后１４ ｄ的肺组织结构日
逆转录聚合酶链反应技术检测肺组织中Ｓｏｘｌ７ ｍＲＮＡ的表达。蛋白质印迹技术检测Ｓｏｘｌ ７蛋白含量。 统计学方法采用独立样本ｔ检验。
结果
趋成熟，肺泡数量增加，大小均一，肺泡间隔逐渐变薄；而高氧组小鼠生后１４ ｄ肺泡数量增加较缓慢， 肺泡结构简单化，大小不一。Ｓｏｘｌ７蛋白主要表达在肺动脉、肺静脉和肺泡毛细血管内皮，以及肺
ｗａｓ
ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ
Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｄａｙ ７，ｔｈｅ ｌｕｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ
ｏｎ ｏｎ
ｍａｔｕｒｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｒｅ
ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ ａｌｖｅｏｔｉ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｅｐｔａｓ ｂｅｃａｍｅ ｔｈｉｎｎｅｒ
ｓｌｏｗｌｙ ｗｉｔｈ
Ａｎｉｍａｌｓ，ｎｅｗｂｏｒｎ；Ｍｉｃｅ
支气管肺发育不良（ｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｙｓｐｌａｓｉａ， ＢＰＤ）是早产儿最常见的一种慢性肺部疾病。重症 ＢＰＤ患儿的病死率可达３０％～４０％，存活者常有慢 性肺功能与气体交换异常，严重影响患儿生长发育 及生活质量［ｑ
ｏ
速剪开胸腔，气管插管保持肺充气状态。用生理盐 水通过肺主动脉冲洗肺血管内血液后，结扎右支气 管，迅速切取右肺，保存于一８０℃冰箱，用于检测
ｔｈｅ ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｎｅａｒｅｓｔ ｖｅｓｓｅｌｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ
ｔｈｅ ｓｔｒａｉｇｈｔ ｌｉｎｅ
ｆｒｏｍ
ｆｉｂｒｏｕｓ ｓｅｐｔａ
ｏｒ
ｔｈｅ ｐｌｅｕｒａ．Ｓｏｘ １ ７ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ
ｒｅｖｅｒｓｅ
的表达：Ｓｏｘｌ７和Ｂ一肌动蛋白引物均由上海生工 生物技术有限公司合成。取右上中肺叶，用总ＲＮＡ 提取试剂ＲＮＡ ＳＴＡＴ一６０（美国Ｔｅｌ—Ｔｅｓｔ公司）提 取纯化组织中总ＲＮＡ。采用ＲＮＡ逆转录试剂盒（美 国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）将ＲＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ。使用 ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ实时荧光定量ＰＣＲ仪（美国ＡＢＩ公司） 进行ｃＤＮＡ扩增反应，采用ＴａｑＭａｎ基因表达分析 法对ＰＣＲ扩增产物进行数据采集及分析，反应体系 为２０
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实验研究
高氧暴露抑制新生小鼠肺血管内皮细胞
Ｓ ｏｘ １
７的表达
朱建幸
夏红萍
王利
张凯
【摘要】 发生机制。
目的 方法
观察高氧暴露对新生小鼠肺组织Ｓｏｘｌ７表达的影响，探讨肺血管发育受阻的
Ｔｈｉｒｔｙ ｔｗｏ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｃ５７８１／６Ｊ ｎｅｗｂｏｒｎ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈｉｎ ｓｉｘ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ｂｉｒｔｈ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ
ａｉｒ
ｄｉｖｉｄｅｄ ｔｏ ｈｙｐｅｒｏｘｉａ ｏｘｙｇｅｎ．Ｅｉｇｈｔ
ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１６）ａｎｄ ｒｏｏｍ
ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１６）．Ｍｉｃｅ
生后６ ｈ内的健康新生Ｃ５７ＢＩ／６Ｊ小鼠共３２只，
ｃｏｕｎｔｓ，ＲＡＣ），反映终末呼吸单
位的肺泡数，衡量肺泡化程度【６］。每只小鼠取５张 切片，每张切片取５个不同视野，取平均值。 ３．免疫组织化学染色检测肺血管Ｓｏｘｌ７蛋白表 达：常规脱蜡、水化，１．７％过氧化氢去除内源性过 氧化物酶；微波辐射抗原修复，４％马血清封闭２
ｍｏｂｉｌｉｔｙ ｇｒｏｕｐ—
持ｌ ５ ｍｉｎ。将左肺置于４％多聚甲醛固定液中４
过夜，乙醇梯度脱水，常规石蜡包埋切片，用于检 测肺组织形态学及Ｓｏｘｌ７蛋白表达情况。 ２．肺组织形态学检测：取左肺石蜡块，５恤ｍ 连续切片，ＨＥ染色，光镜下观察肺组织发育情况 及病理改变。计算从呼吸性细支气管中心至最近 纤维隔或胸膜直线上的肺泡数，即辐射状肺泡计数
Ｓｏｘｌ７
ｍＲＮＡ和蛋白含量。从主支气管注入４％多聚
ｃｍＨ，Ｏ＝０．０９８ ｋＰａ），维 ｃＣ
ＢＰＤ的病理改变以肺泡和肺血管
甲醛，压力２５ ｃｍＨ，Ｏ（１
发育成熟障碍为特征【２］。目前，越来越多的证据表 明，肺血管的形成和成熟对肺泡发育及生后肺泡结 构的维持都有重要作用，肺血管发育成熟受阻可能 在ＢＰＤ发病中占据重要位置【３】。Ｓｏｘｌ ７基因属于 Ｓｏｘ转录因子家族，参与性别决定和分化、神经发 生、软骨形成等一系列发育过程。Ｓｏｘ基因家族的 保守基序高迁移率族蛋白盒（ｈｉｇｈ
ｏｎ
ＶＳ
５．０±０．８，５．３±０．６
８．３±０．９，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔ＝－３．０５７ ａｎｄ ８．１４８，ｂｏｔｈ Ｐ＜０．０１）．Ｓｏｘｌ７ ｍＲＮＡ ｒｏｏｍ ａｉｒ ｇｒｏｕｐ（Ｏ．６２±０．１０