实验2-培养基的制备
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告本次实验的目的是制备培养基，为细菌的分离、培养和纯化提供良好的条件。
下面将从实验的步骤、注意事项、结果及讨论等方面进行介绍。
一、实验步骤1、准备物质：本次实验需要的物质有蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂、蔗糖、粉红色指示剂等。
2、称量：按照配方称取所需要的物质，放置于烧杯中。
3、加水：将溶液加到烧杯中，使用热水搅拌溶解。
4、调pH值：使用磁力搅拌器搅拌溶液，同时加入酸、碱溶液调整其pH值。
5、加入琼脂：琼脂在液态时将其加入培养基中，在0.5小时后，将烧杯放入水浴中，加热至琼脂溶解。
6、灭菌：将培养基热量至65℃进行灭菌处理。
二、注意事项1、称量精准：由于配方中各种物质的比例不同，所以在称量时应该特别注意精准。
2、调pH值准确：必须要根据实验要求，合理的加入酸、碱溶液，使pH值调整在适宜的范围内。
3、琼脂的加入和热力均匀：琼脂的加入需要在液态状态下进行，加入方法应该温和，慢慢地注入。
在加热的过程中也需要注意热力的均匀分布。
4、灭菌时间和方法：都应该根据实验要求进行相应的调整和安排，保证灭菌的效果。
三、结果及讨论培养基制备完成后，我们使用其进行实验，成功得到了所需的细菌菌落。
同时我们也根据实验结果对制备过程中的一些问题进行了总结和讨论。
1、物质的准确称量对实验结果影响较大。
2、pH值的调整应详细了解各个物质对呈酸、碱性的影响。
3、琼脂的加入要在合适的液态下进行，加热过程要均匀。
4、灭菌的方法和时间应根据实验要求进行相应的调整和安排。
综上所述，本次实验是制备培养基，为细菌的分离、培养和纯化提供良好的条件。
实验过程中我们按照步骤并严格注意了一些细节问题，最终得到了满意的结果，更加深入了我们对实验的了解。
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
实验二 培养基的配制和灭菌
实验二培养基的配制和灭菌一、实验目的微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。
培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二、内容、材料和方法(一)培养基的配制培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。
1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）这是植病实验室最常用的培养基(简称PSA)，主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。
成分：马铃薯200克蔗糖 10~20克琼脂 17~20克加水至1000毫升方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。
马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH，培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。
5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。
2肉汁胨培养基（BPA）这种培养基主要用于细菌的分离和培养成分：牛肉浸膏 3克蛋白胨 5~10克蔗糖 10克酵母浸膏 1克琼脂 17~20克加水至 1000毫升方法：先将琼脂加热熔化于大部水中，再将其它各成分用少量水化开加入，调节pH至7，趁热用双层纱布过滤，分装，塞棉塞高压灭菌。
牛肉浸膏和酵母浸膏十分粘稠，不易称重，称重时用小烧杯盛装，以玻璃棒沾取，故要先称好杯和棒的重量后，再开始沾取浸膏称重，称后将杯和棒上粘着的浸膏洗净于锅中。
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌一、实验目的：1. 掌握常用培养基的制备方法；2. 了解培养基的成分、类型及特点；3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。
培养基的主要成分的详细内容见课本p26~29。
为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。
在配制母液时应注意防止沉淀产生。
绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要时加入稀酸或稀碱等物质促溶。
各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。
通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。
灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。
培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间见课本P32表2ˉ2。
培养基必需保证绝对无菌，否则因其营养丰富细菌、真菌极易滋生而导致植物死亡。
灭菌后的培养基不宜马上使用，以免造成培养材料的损失。
（一）、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
实验2培养基制备和灭菌技术_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验二培养基制备和灭菌技术一、实验目的1．学习一般培养基的制备方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。
二、实验原理（一）培养基培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。
它是微生物的生活环境，各种微生物对养分和培养基的物理、化学要求条件不一样，为了分离、培养、鉴定、保藏和研究不同种类的微生物，就应当根据它们的需要，配制合适的培养基。
微生物在培养基上生长发育，必须在一定的最适酸碱度范围才能表现出它们最好的生命活动力。
不同的微生物对酸碱度的要求不同，因此，我们在配制培养基时，必须调节培养基的pH值。
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质配制而成，如马铃薯、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定的天然有机物质配制成的培养基，如牛肉膏蛋白胨、马铃薯、麦芽汁培养基。
它适用于生产上大规模培养微生物。
2．合成培养基:合成培养基是用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基，例如高氏一号培养基、查氏培养基等。
一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。
3．半合成培养基:在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。
大多数微生物都能在此种培养基上生长，因此，应用广泛，如马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基，大多数霉菌都生长良好。
4．固体培养基:在液体培养基中加入凝固剂即为固体培养基，常用凝固剂有洋菜、明胶、硅胶，硅胶用于配制自养微生物的固体培养基；对于其他多数微生物来讲，洋菜最为合适，一般加入1.5～2.5%即可凝固成固体，如牛肉膏蛋白胨培养基等。
植物组织培养培养基的配制与灭菌
★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。
植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。
2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。
二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。
2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。
各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。
2. MS0培养基。
3. 1/2MS培养基。
4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。
5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。
6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。
7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。
8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。
（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。
2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。
3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。
4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。
5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。
（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。
2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。
3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。
四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。
2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。
实验二 培养基的配制及器材的灭菌
实验二培养基的配制及器材的灭菌（3课时）一、实验目的要求1、进一步学习并熟练培养基的制备的方法、步骤和技术。
2、进一步学习和掌握高压蒸汽灭菌的具体操作方法和技术。
3、为下一次实验做好实验前的准备。
二、原理培养基是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，它是进行科学研究，生产微生物制品及应用等方面的基础。
由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多，要根据培养目的和检测需要不同，选择配制不同的培养基。
从培养基的用途来区分，培养基可分为选择培养基、增殖培养基、鉴别培养基等。
●选择培养基在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长的培养基，称之为选择培养基。
如链霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生长；而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长；结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。
●增殖培养基在自然界中，不同种的微生物常生活在一起，为了分离我们所需要的微生物，在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基，这种培养基常用于菌种筛选和选择增菌中。
在某种程度上讲，增殖培养基也是一种选择培养基。
●鉴别培养基在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后呈现出明显差别，因而有助于快速鉴别某种微生物。
这样的培养基称之为鉴别培养基。
例如用以检查饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一种常用的鉴别性培养基。
有些培养基是具有选择和鉴别双重作用。
例如食品检验中常用的麦康凯培养基是一例。
它含有胆盐、乳糖和中性红。
胆盐具有抑制肠道菌以外的细菌的作用（选择性），乳糖和中性红（指示剂）能帮助区别乳糖发酵肠道菌（如大肠杆菌）和不能发酵乳糖的肠道致病菌（如沙门氏菌和志贺氏菌）。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
实验二培养基的制备消毒与灭菌
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培养基配制实验原理
❖培养基是人工配制的适合微生物生长繁 殖或积累代谢产物的营养基质。
❖人工制备培养基的目的，在于给微生物 创造一个良好的营养条件。
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培养基配制要素
❖营养：碳源、氮源、能源、生长因子、 水分和无机盐；
❖适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力； ❖一定的氧化还原电位；
• 当含盐类的液体和含盐的琼脂中大量的盐类泼 洒在工作腔体，要立即换水，冲洗腔体，仔细 擦干锅盖垫圈上的水滴。否则它们会带来腐蚀 和变质。
• 要检查压力表上的指数为“0 Mpa”后才能打 开锅盖。
• 外来物质（金属、液体）不能堵塞通风孔，否 则会引起装置故障、起火、短路。 编辑课件
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过滤除菌
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要 高（160～170℃），时间要长（1～2h）， 但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器 皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
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高压蒸气灭菌
❖ 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的灭菌锅 内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸气急剧将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气 阀，继续加热。由于水蒸气无法排出，增加了灭菌锅内 的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。
• 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体
中细菌的方法。根据不同的需要选用不同 的滤器和滤板材料。
• 此法除菌的最大优点是可以不破坏溶液中
各种物质的化学成分，但由于滤量有限， 所以一般只适用于实验室中小量溶液的过 滤除菌。
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紫外线灭菌
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200~300 nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力 最强。
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告
实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法，为后续微生物实验提供基
础条件。
实验原理，培养基是微生物生长繁殖的营养物质，其主要成分包括碳源、氮源、磷源、微量元素和水。
培养基的制备需要根据不同微生物的生长需求进行配方，通常包括基础培养基和选择性培养基两种类型。
实验步骤：
1. 称取适量蔗糖和琼脂，加入蒸馏水中，混合搅拌至完全溶解；
2. 加入适量氨基酸、磷酸盐和微量元素，搅拌均匀；
3. 调节pH值至7.0，加热煮沸，然后灭菌；
4. 倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
实验结果，制备好的培养基呈黄色透明凝胶状，无异味，pH值稳定在7.0左右。
实验分析，本次实验中，我们成功制备了基础培养基，为后续微生物的培养提
供了必要条件。
在实验过程中，需要注意控制好各种原料的比例和加热时间，以保证培养基的质量和稳定性。
实验结论，通过本次实验，我们掌握了基础培养基的制备方法，并取得了良好
的实验结果。
培养基的质量对微生物的培养和研究具有重要影响，因此在实验过程中需要严格按照配方和操作规程进行操作，确保培养基的质量和稳定性。
实验改进，在今后的实验中，可以尝试制备不同类型的培养基，以满足不同微
生物的生长需求，并且可以对培养基的配方和制备工艺进行进一步优化，提高培养基的质量和效率。
总结，培养基的制备是微生物实验的基础，掌握好培养基的制备方法对于后续实验的顺利进行具有重要意义。
通过本次实验，我们对培养基的制备方法有了更深入的理解，为今后的实验工作奠定了基础。
以上就是本次培养基的制备实验报告内容，希望对大家有所帮助。
实验二培养基的制备
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9
一些物质在培养基中的应用原理 4.具有缓冲作用的
磷酸盐 碳酸盐
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一些物质在培养基中的应用原理
5.具有PH指示作用的
• 中性红指示液 变色范围 pH6.8～8.0（红→黄） • 孔雀绿指示液 变色范围 pH0.0～2.0（黄→绿）；11.0～13.5(
绿→无色) • 石蕊指示液 变色范围 pH4.5～8.0（红→蓝） • 甲基红指示液 变色范围 pH4.2～6.3（红→黄） • 刚果红指示液 变色范围 pH3.0～5.0（蓝→红） • 亮绿指示液 变色范围 pH0.0～2.6（黄→绿） • 结晶紫指示液 pH值0.15（黄）～0.32（绿），pH值1.0（绿）～1.5（蓝
实验二 培养基的制备
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1
一、目的要求
1. 掌握培养基制备的原则； 2. 掌握培养基的制备方法。
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2
二、实验原理
1、培养基的概念？
培养基是指由人工方法配合而成的营养基质，专 供微生物培养、分离、鉴别、研究和保存菌种用的 混合营件: 配好立即高压灭菌，
⑧ 培养基的灭菌
⑨ 培养基的质量测试
⑩ 培养基的保存
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18
4、培养基制备的基本方法
① 培养基配方的选定
② 培养基的制备记录
③ 培养基成分的称取
④ 培养基各成份的混合和溶化
⑤ 培养基pH的调正
培养基必须均质透明。
⑥ 培养基的过滤 ⑦ 培养基的分装
通常采用过滤以达到此项要 求。一般液体培养基可用滤纸 过滤法。
在加热溶化过程中，因 蒸发而丢失的水分，最后 必须加以补足。
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4、培养基制备的基本方法
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告实验目的，通过制备培养基，培养微生物，观察微生物的生长情况，了解培养基对微生物生长的影响。
实验原理，培养基是为了提供微生物生长所需的营养物质而制备的一种特定的生长环境。
培养基的制备包括选择合适的基础成分、添加适当的营养物质和调节pH值等步骤。
实验步骤：1. 准备所需材料和设备，蒸馏水、琼脂、培养基粉、试管、培养皿、pH试纸、称量器等。
2. 精确称量培养基粉，并加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀。
3. 将培养基溶液加热至沸腾，使琼脂完全溶解。
4. 调节培养基的pH值，使其达到微生物生长所需的最适pH。
5. 将培养基倒入培养皿中，待其凝固后，即可用于培养微生物。
实验结果与分析：经过制备的培养基，观察到微生物在培养基上生长良好，形成了典型的菌落。
通过不同培养基的制备，我们发现不同的微生物对培养基的要求也有所不同，有些微生物对酸性培养基更适应，有些对碱性培养基更适应。
因此，制备不同类型的培养基对于不同微生物的培养具有重要意义。
实验总结：通过本次实验，我们深入了解了培养基的制备过程和对微生物生长的影响。
制备培养基是微生物学实验中的重要环节，合理的培养基制备可以为微生物的培养提供良好的生长环境，有利于我们对微生物的研究和应用。
同时，我们也意识到不同微生物对培养基的要求不同，因此在实际应用中需要根据具体微生物的特性来选择合适的培养基。
通过本次实验，我们不仅掌握了培养基的制备方法，还加深了对微生物生长环境的理解，为今后的微生物学研究奠定了坚实的基础。
参考文献：1. 李华. 微生物学实验教程. 北京，高等教育出版社，2008.2. 微生物学实验指导. 北京，科学出版社，2015.3. 培养基制备与应用. 北京，化学工业出版社，2012.。
实验二 微生物培养基的配制和灭菌
培养基成分 牛肉膏 0.3g;蛋白胨 1g;氯化钠 0.5g;琼脂 2g;蒸馏水
100mL;pH 7.0～7.2;灭菌 1.05kg/cm2，20-25min
用量：
100-150mL/行；制备8-10个平板；2个/组（涂布/划线）
制作斜面（只需1个组制备）：无需抗生素
化学药剂消毒灭菌： 微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒 精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液， 它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。
培养基和玻璃器材的 灭菌方法
培养基配制的原则
配制培养基的配方，及方法 培养基蒸汽灭菌原理，方法
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基
自养细菌能利用铵盐、硝酸盐作为机体生长的氮源与能源， 某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的条件下，也可以利用 氨基酸作为能源物质。 无机氮源：碳酸铵、硝酸盐、硫酸铵、尿素 有机氮：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏等。
生产上常用的氮源有硝酸盐、铵盐、尿素、氨以及蛋白含 量较高的鱼粉、蚕蛹粉、黄豆饼粉、花生饼份、玉米浆等。
培养基的配制原则
一、营养成分 二、PH值 三、渗透压 四、氧化还原电位
培养基的配制原则
一、营养成分 总体原则
1. 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基， 如自养型微生物：由简单的无机物质组成
异养做生物：至少需要含有一种有机物质。
按微生物的主要类群来说，又有细菌、放线菌、酵母
菌和霉菌之分。它们所需要的培养基成分也不同，分别
实验程序2:分离培养微生物常用器皿的准备
清洗一些玻璃仪器：如三角烧瓶、试管、培养皿、吸管等。 棉塞的制作
包装培养皿和吸管等。
湿热灭菌法原理
实验二培养基的制备
出 ➢ 现沉淀，使培养基不透明。水的作用是溶解营养物质。 ➢ ②蛋白胨 是蛋白质经蛋白酶、酸或碱水解后的中间产物， ➢ 含有胨、肽和氨基酸等成分，主要提供氮素营养。因
其为 ➢ 两性化合物，故有酸碱缓冲作用，可维持pH的稳定。 ➢ ③肉浸汁或牛肉膏 肉浸汁为牛肉的水浸出液，牛肉膏是
➢ [方法和步骤] ➢ 1、普通肉汤培养基
配方： 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml
pH 7.4
➢ 配制方法： ➢ ①按配方剂量称取各种试剂，置于搪瓷缸中。 ➢ ②上述成分混合、加热溶解，补足蒸发的水分。 ➢ ③以1mol／L氢氧化钠溶液调pH至7.4～7.6。 ➢ 〔 初配好的培养液是偏酸性的，需用NaOH
实验二 培养基的制备
➢ [实验内容]
➢
普通肉汤及普通琼脂培养基的制备。
➢ [目的要求]
➢ 1、掌握一般培养基制备的原那么和要 求。
➢ 2、熟悉一般培养基制备的过程。
➢ 3、掌握培养基酸碱度的测定。
➢ [培养基的概念和用途]
➢ 概念：
➢
培养基是按照各类微生物的生长需要，
➢
以人工方法配制成的一种混合营养基
一
➢ 种半乳糖硫酸脂，98℃时溶于水，45℃ ➢ 以下重新凝成凝胶状，它在培养基中只
起
➢ 凝固剂的作用，以便观察菌落特征。培 养
➢ 基中琼脂含量在1.5% 以上时呈固体状态， ➢ 在0.5% 左右时呈半固体状态。 ➢ ②指示剂 用来观察pH的变化或其他反响现
➢ [实验材料] 1、器皿及仪器： 量筒(100ml)、搪瓷缸 (500ml)、漏斗、 漏斗架、三角瓶(100ml)、试管、玻璃棒 、 吸管(1ml和10ml各1个)、pH酸度计、滤 纸、电子天平、电磁炉、硅胶塞、包装纸、 扎绳、洗耳球等。 2、试剂： 牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂条或粉、 1 mol／L的NaOH和1 mol／L的HCl溶液、 蒸馏水等。
实验二常用基础培养基的制备
实验二常用基础培养基的制备同学们大家好欢迎来到微生物检验课堂今天我们做的实验是常用基础培养基的制备。
这节课我们一起来学习三种不同的培养基制备的操作;好那我们开始，这节课的实验原理是：培养基是人工合成的一种混合营养料，用以分离细菌。
基础培养基中含有大多数常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可制成液体、半固体、固体三种不同的性状。
实验项目是细菌培养基的制备，最常见的培养基包括：肉汤培养基的制备普通琼脂平板培养基的制备半固体斜面培养基的制备等三种方法实验目的是：掌握培养基制备方法实验材料有：牛肉膏、蛋白胨，氯化钠、蒸馏水琼脂粉，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶量筒，天平酒精灯、等培养基的制备步骤：配料→熔化→测定pH→滤过+分装→灭菌→备用。
肉汤培养基:取1000ml蒸馏水,加人牛肉膏3-5g,蛋白胨10g,氯化钠5g,混合加热溶解，调整pH至7.4-7.6,分装于烧瓶中，可供一般细菌生长。
(2) 普通琼脂培养基:取1000ml肉汤培养基，加入2% ~3%琼脂，加热溶化，过滤,分装于烧瓶或试管中。
(3)半固体培养基:取1000ml肉汤培养基，加人3-5g琼脂，分装于烧瓶或试管中，主要用于保存菌种或观察细菌动力三种培养基分装好后均在全自动高压灭菌器中高压。
高压灭菌的主要方法：首先把制备好的培养基放入灭菌器里，把盖子盖好，温度调制121.3摄氏度，时间调制30分钟，开始高压灭菌，好，灭菌时间到了，取出培养基，待冷却后即可以使用。
利用PPT照片展示结果：一下就是三种培养基制备好后的形态。
注意：通过今天的实验我们已经学到了固体培养基，液体培养基，半固体培养基等三种不同培养基的制备，下课后希望大家可以分组讨论本次实验收获。
好同学们，今天的课程就讲到这里，下节课再见。
培养基的制作实验报告
一、实验目的1. 掌握培养基的配制原理和方法。
2. 了解培养基在微生物培养中的应用。
3. 熟悉灭菌和消毒的方法及注意事项。
二、实验原理培养基是微生物生长繁殖所必需的营养物质混合物。
根据微生物种类和实验目的，培养基的配方和种类有所不同。
本实验以牛肉膏蛋白胨培养基为例，介绍培养基的配制、灭菌和消毒方法。
三、实验材料与试剂1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、pH试纸等。
2. 试剂：1M HCl、1M NaOH、无菌水等。
四、实验步骤1. 培养基配制（1）称取牛肉膏10g、蛋白胨10g、氯化钠5g，加入1000ml蒸馏水；（2）加入琼脂15g，搅拌均匀；（3）将混合液煮沸，溶解琼脂；（4）用pH试纸检测培养基pH值，调节至7.0-7.2；（5）将培养基冷却至50-60℃，过滤去除杂质；（6）分装至灭菌试管中，每管10ml。
2. 灭菌（1）将装有培养基的试管放入高压蒸汽灭菌锅中；（2）关闭锅盖，加热至压力达到0.1MPa，维持15-20分钟；（3）待压力降至0时，打开锅盖，取出灭菌试管。
3. 消毒（1）将灭菌后的试管置于超净工作台；（2）用无菌镊子取出试管，放入无菌培养皿中；（3）用酒精灯对试管进行消毒；（4）将培养皿放入培养箱中，待培养基凝固。
五、实验结果与分析1. 培养基配制：按照实验步骤，成功配制了牛肉膏蛋白胨培养基。
2. 灭菌：高压蒸汽灭菌法能够有效杀死培养基中的微生物，保证培养基的无菌状态。
3. 消毒：酒精灯消毒可以进一步降低培养基的污染风险。
六、实验讨论1. 在培养基配制过程中，应注意控制pH值，以保证微生物的正常生长。
2. 灭菌和消毒是保证培养基无菌的关键环节，应严格按照操作规程进行。
3. 实验过程中，应注重无菌操作，避免外界微生物的污染。
七、实验结论通过本次实验，掌握了培养基的配制、灭菌和消毒方法，为微生物培养提供了基础条件。
在实验过程中，应严格遵守无菌操作规程，确保实验结果的准确性。
培养基的制备实验报告_2
培养基的制备实验报告（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌（一）、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
（二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
（三）、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
（四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
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实验二微生物培养基的制备
一、目的要求
1、巩固培养基的配制原理及培养基的理论知识
2、掌握培养基制作的基本方法
3、熟悉2种常用培养基的制作过程
二、实验原理
培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。
人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。
把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。
自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。
但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。
此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。
根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。
根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。
培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的选择配制。
固化体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。
琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。
因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。
三、实验器材
1、药品琼脂，1N NaOH溶液，1N HCl溶液，牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基的配方药品；
2、材料具刻度1000毫升塘瓷盅，铝锅，天平，20×200mm试管，量筒，小烧杯，玻璃棒，骨匙，pH试纸，分装漏斗，试管盒，纱布，棉花，报纸，麻绳，标签。
四、操作步骤
1、计算称量根据配方，计算出实验中各种药品所需要的量，然后分别称(量)取。
2、溶解一船情况下，几种药品可一起倒入烧杯内、先加入少于所需要的总体积水进行加热溶解(但在配制化学成分较多的培养基时，有些药品，如磷酸盐和钙盐、镁盐等混在一起容易产生结块、沉淀，故宜按配方依次溶解。
个别成分如能分别溶解，经分开灭菌后混合，
则效果更为理想)。
加热溶解时，要不断搅拌。
如有琼脂在内，更应注意。
待完全溶解后，补足水分到需要的总体积。
3、调节pH用滴管逐滴加入1N NaOH或lN HCl边搅动；边用精密的pH试纸测其pH值，直到符合要求时为止。
pH值也可用pH计来测定。
4、过滤要趁热用四层纱布过滤。
5、分装按照实验要求进行分装。
装入试管中的量不宜超过试管高度的1/5，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。
在分装过程中，应注意勿使培养基沾污管口或瓶口、以免弄湿棉塞，造成污染。
图Ⅴ-1培养基的分装装置与棉塞。
A.培养基的分装
B.棉塞的做法：
1.正确；
2.管内太短，外部太松；
3.整个棉塞太松
4.管内太紧，外部太短松
6、加塞培养基分装好以后，在试管口或烧瓶口上应加上一只棉塞。
棉塞的作用有二：一方面阻止外界微生物进入培养基内，防止由此而引起的污染；另一方面保证有良好的通气性能，使微生物能不断地获得无菌空气。
因此棉塞质量的好坏对实验的结果有很大影响。
7、灭菌在塞上棉塞的容器外面再包一层牛皮纸，便可进行灭菌。
培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。
如果分装的斜面，要趁热摆放并使斜面长度适当(为试管长度1/3-l/2，不能超过1/2)。
培养基经灭菌后，应保温培养2-3天，检查灭菌效果，无菌生长者方可使用。
6.制作斜面培养基和平板培养基
8、斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。
(1) 斜面培养基在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。
将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。
(2) 平板培养基将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
五、注意事项
1、配制固体培养基用的琼脂应先行用冷水浸泡，纱布过滤，在调好pH值后加入。
2、配制高氏一号合成培养基时应小心溶解淀粉，不要成团。
3、制备含琼脂的固体培养基应，先将琼脂加热融化后再加入水溶性的糖等物质
六、作业
1、分别写出PDA培养基、牛肉膏蛋白胨培养基的制作过程。
2、培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？
3、实验观察：灭过菌与未灭菌的肉汤培养基有什么区别？
实验制备培养基
1）马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)，成分为（g/L）：
去皮马铃薯200（汁）葡萄糖20 琼脂15
水1000ml pH 6.7
2）牛肉膏蛋白胨培养基，成分（g/L)：
牛肉膏3 蛋白胨5 琼脂15
NaCl 5 水1000ml pH 7.2-7.4 3）细菌培养营养肉汤培养基，成分（g/L)：
牛肉膏3 NaCl 5 蛋白胨5
水1000ml pH 7.2-7.4 4）放线菌培养常用的高氏１号培养基，成分为成分（g/L)：
可溶性淀粉20 KNO3 1 K2HPO4 1
MgSO4. 7H2O 0.5 FeSO4. H2O 0.01 NaCl 1
水1000ml pH 7.2-7.4 试验安排：
1、每组做培养基前2种培养基各1L，各前试管30支，剩余的装入500ml三角瓶
2、无菌水各组1000ml
3、平皿灭菌每组20个
4、空试管灭菌每组10支
5、刻度吸管10ml、1ml 每组各10支
6、无菌滤纸每组各10张
7、洗尔球共5个
8、无水乙醇共2瓶
9、灯用酒精共3L
10、。