[整理]S2实验二培养基及其配制理论.
《药学微生物》2-1-2 实训 常用培养基的配制及灭菌技术
四、常用培养基
培养wk.baidu.com的配制及灭菌技术
3．马铃薯蔗糖琼脂培养基的制备 马铃薯(去皮)浸出液20%，蔗糖(或葡
萄糖)2%，琼脂2%， 加水至1000mL ， pH自然 高压蒸汽灭菌，121℃灭菌30min。
五、实训结果
培养基的配制及灭菌技术
• 抽取灭菌后培养基放入恒温培养箱培养，检查是否无菌。
六、思考题
此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一 定的氧化还原电位和合适的渗透压。固体培养基是在液体培养基中 添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以 琼脂最为常用。
二、实训原理
2 、 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌 锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽，增加了 灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
实训 常用培养基的 配制及灭菌技术
一、实训目的
培养基的配制及灭菌技术
明确培养基配制的原理及方法，了解培养基中各成分的作用 ； 掌握高压蒸汽灭菌的原理和方法； 学会包扎吸管、培养皿，制作棉塞的操作。
二、实训原理
1 、 微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物 质的要求也各不相同，所以培养基在组成原料上也各有差异。不同 种类培养基中，均含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、 无机盐和生长因子以及某些特需的微量元素等。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告
（文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌
（一）、目的要求
1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
（二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
（三）、实验材料
1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
（四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌
一、实验目的：
1. 掌握常用培养基的制备方法；
2. 了解培养基的成分、类型及特点；
3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理
人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、
有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。培养基的主要成分的详细内容见课本
p26~29。为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时
稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可
以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二
是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。在配制母液时应
注意防止沉淀产生。绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要
时加入稀酸或稀碱等物质促溶。各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织
的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是
在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间
实验2培养基制备和灭菌技术_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物 生命科学)
实验二培养基制备和灭菌技术
一、实验目的
1．学习一般培养基的制备方法。
2．掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用的灭菌方法。
二、实验原理
（一）培养基
培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工的方法配制而成的一种基质。它是微生物的生活环境，各种微生物对养分和培养基的物理、化学要求条件不一样，为了分离、培养、鉴定、保藏和研究不同种类的微生物，就应当根据它们的需要，配制合适的培养基。微生物在培养基上生长发育，必须在一定的最适酸碱度范围才能表现出它们最好的生命活动力。不同的微生物对酸碱度的要求不同，因此，我们在配制培养基时，必须调节培养基的pH值。
培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
1．天然培养基:主要成分是复杂的天然有机物质配制而成，如马铃薯、玉米粉、豆芽汁、牛肉膏、蛋白胨、血清等，这些复杂天然有机物质的成分不完全了解，每次所用的原料，其中各成分的数量也不恒定的天然有机物质配制成的培养基，如牛肉膏蛋白胨、马铃薯、麦芽汁培养基。它适用于生产上大规模培养微生物。
2．合成培养基:合成培养基是用化学成分完全了解的纯化合物药品配制而成的培养基，也称化学成分明确的培养基，例如高氏一号培养基、查氏培养基等。一般适用于在实验室范围内研究微生物的形态、代谢、分类鉴定、生物测定、菌种选育和遗传分析等工作。
3．半合成培养基:在以天然有机物作为微生物营养来源的同时，适当补充一些成分已知的化学药品所配制的培养基叫半合成培养基。大多数微生物都能在此种培养基上生长，因此，应用广泛，如马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基，大多数霉菌都生长良好。
(整理)培养基母液的制备.
目录
实验一培养基母液的制备 (1)
实验二培养基的配制与灭菌 (6)
实验三无菌操作及种子无菌播种 (9)
实验四激素对器官分化及愈伤组织诱导的影响 (13)
实验五茎尖培养与脱毒 (16)
实验六有丝分裂制片技术和显微观察 (18)
实验七植物多倍体细胞的诱发与鉴定 (22)
实验八植物组织总DNA的提取与测定 (24)
实验九毛状根培养 (27)
附录 (32)
实验一培养基母液的制备
一、实验目的
学习和掌握培养基母液的配制方法和注意事项。
二、实验原理
培养基的主要成分包括无机营养物质、碳源、有机物质、植物生长物质等，由于每种培养基往往含有一二十种化合物，配制起来不仅繁琐，而且还很难达到准确和精确，尤其是生长调节物质和微量元素用量较少，难于准确称量，稍有偏差，就会影响试验结果及试验的重复性。为解决这一问题，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配制培养基时，只需要按预先计算好的量吸取母液即可。
三、实验药品和试剂
NH4NO3、KNO3、MgSO4·7H2O、（NH4）2SO4、NaH2PO4·H2O、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、Na2-EDTA·2H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(VB6)、盐酸硫胺素(VB1)、甘氨
酸、蔗糖、琼脂
四、实验仪器及用具
电子天平（感量为0.0001g）、扭力天平（感量为0.01g）、烧杯（1000ml、500ml、100ml、50ml）、量筒（500ml、25ml）、容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、试剂瓶（1000ml、500ml、100ml）、药勺、玻棒、电炉、石棉网。
培养基的配制 (2)
培养基的配制
简介
培养基是在实验室中广泛使用的一种生物学培养材料，它提供了生长微生物和其他细胞的所需营养物质和理想的环境条件。培养基的配制是制备培养基的过程，通过合理的配比和操作，可以获得高质量的培养基。
培养基的组成
培养基的组成是根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求来确定的。一般来说，培养基由以下几个组分组成：
1.碳源：提供微生物或细胞生长所需的碳质物质，常
见的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。
2.氮源：提供微生物或细胞生长所需的氮质物质，常
见的氮源有氨基酸、尿素、氯化铵等。
3.磷源：提供微生物或细胞生长所需的磷质物质，常
见的磷源有磷酸二氢盐、磷酸氢二钠等。
4.硫源：提供微生物或细胞生长所需的硫质物质，常
见的硫源有硫酸铵、硫酸钠等。
5.微量元素：为微生物或细胞提供必需的微量元素，
如铁、锰、锌等。
6.维生素：提供微生物或细胞生长所需的维生素，如
维生素B群。
7.pH调节剂：维持培养基的理想pH值，如磷酸盐缓
冲液。
8.凝胶剂：使液态培养基凝固成凝胶状，常用的凝胶
剂有琼脂和洋菜。
培养基的配制步骤
1. 准备所需实验器材和试剂
在开始培养基的配制之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。常见的实验器材包括量筒、烧杯、移液管、培养皿等；试剂包括碳源、氮源、磷源、硫源、微量元素、维生素等。
2. 确定培养基组成
根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求，确定培养基的组成，并计算各组分的配比。
3. 配制培养基
按照确定的配比，依次称取所需试剂并溶解于适量的去离子水中，然后使用量筒或烧杯调整总体积。
4. 调节pH值
实验二培养基的制备消毒与灭菌
6. 加塞 7. 包扎 8. 灭菌 9. 搁置斜面 10. 无菌检查
编辑课件
❖称量药品时，严防药品混杂。称完一种 药品后需要将牛角匙洗净、擦干，再称 取另一药品。瓶盖也不要盖错。
❖药品不要弄错。如：K2HPO4和KH2PO4、 水合形式和无水形式的化合物要注意分 辨。
编辑课件
❖ 培养基中多种无机盐可能相互作用而产生沉淀。 因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的 顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种 或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。
马铃薯去皮，切成块煮沸30分钟，然后用纱布过滤； 滤液中加入糖和琼脂，溶化后补足水至1000 mL。
编辑课件
高氏Ⅰ号培养基的制备
用来培养放线菌
❖ 可溶性淀粉：
❖ KNO3： ❖ NaCl：
❖ K2HPO4·3H2O： ❖ MgSO4·7H2O： ❖ FeSO4·7H2O： ❖ 琼脂：
❖ 水：
❖ pH：
❖ 实验报告
作业
❖ 思考题1：培养基配置好后，为什么必须立即 灭菌？如何检查灭菌后的培养基是否为无菌 的？
❖ 思考题2：如果需要配制一种含有某抗生素的 固体培养基，其中抗生素的终质量浓度（或 工作浓度）为50ug/mL，你将如何操作？（提 示：抗生素在高温下易失效）
❖ 下一次实验：细菌的简单染色 编辑课件
编辑课件
培养基的分类
实验教案 培养基的制备
实验一培养基的制备
一目的要求
1 明确培养基的配制原理
2 通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤
二基本原理
不同培养基中含有不同的微生物生长所需要的营养物质，其可供微生物生长繁殖用，为微生物提供C源、能源、N源和维生素。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96度溶化，实际应用时，一般在沸水中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免烧焦，琼脂在40度时凝固，通常不被微生物分解利用，固体培养基中琼脂含量根据琼脂的质量和气温的不同有所不同。
牛肉膏蛋白胨培养基：
牛肉膏：3.0g,蛋白胨10.0g,NACl5.0g,水1000ml,pH 7.2-7.4.
马铃薯培养基是霉菌的基本培养基，培养基配方如下：
马铃薯100g 蔗糖10g 琼脂10g 水500ml pH 自然
三器材：
1试剂或溶液：马铃薯、蔗糖、琼脂、蒸馏水。
2仪器或其它用具：试管、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、牛角勺，纱布、麻绳、牛皮纸、高压灭菌锅
四操作步骤
1称量：
依次称取马铃薯块、蔗糖、，切碎的琼脂放入三角瓶中并加入500ml蒸馏水
2 把三角瓶放入锅中，锅盖好后放在电热炉上加热，等琼脂溶解后取出三角瓶
3过滤：趁热用多层纱布过滤，去除里面的杂质
4分装：将配制好的培养基分装入试管。
5加塞：分装完后在试管口塞上塞子，以阻止外界微生物进入培养基造成污染，并保证有良好的勇气性能。
6包扎：用牛皮纸再包扎瓶口，以防灭菌时弄湿棉塞。
7灭菌：用高压蒸汽锅在0.1MP下灭菌20min
8搁置斜面：趁热将试管里的培养基斜面，注意斜面的长度大约为试管长度的1/2
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法
实验室中常用的培养基有很多种，包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。下面以常用的LB培养基和M9培养基为例，介绍它们的配制方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani agar）
LB培养基是一种通用培养基，适用于许多不同类型的细菌。它由三种主要成分组成：蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配方如下：
-蛋白胨：10克
-酵母提取物：5克
-NaCl：10克
-精制水：1000毫升
步骤如下：
1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。
2)加入适量的精制水，搅拌溶解。
3) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
4)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
2.M9培养基
M9培养基是一种无机盐培养基，常用于细菌的生长和培养。它的配方相对简单，由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。
配方如下：
-Na2HPO4：6克
-KH2PO4：3克
-NaCl：0.5克
-NH4Cl：1克
-葡萄糖：0.4克
-维生素B1：0.1克
-精制水：1000毫升
步骤如下：
1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。
2)加入一部分的精制水，搅拌溶解。
3)加入葡萄糖和维生素B1，搅拌均匀。
4) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
5)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
实验二、培养基的制备
实验二 培养基的制备
目的要求： 1、了解培养基配制的基本原则 2、熟悉常用培养基的制备 3、学会培养基酸碱度测定
培养基配制的原则： 培养基配制的原则：
1．培养基必须含有细菌生长所需要的营养，并且 ．培养基必须含有细菌生长所需要的营养， 根据比例准确称取，并在制备过程中， 根据比例准确称取 ， 并在制备过程中 ， 要保持原 有比例。 有比例。 2． 根据所培养微生物的需要较正好 值细菌为 ． 根据所培养微生物的需要较正好pH值细菌为 7.2-7.4，真菌为 ，真菌为6.0-6.5。 。 3．培养基所用的容器，一定要洗干净，不能含有 ．培养基所用的容器，一定要洗干净， 过酸或过碱的物质或抑制其他细菌生长的物质 如药物） （如药物）。
7． 指示剂 ： 培养基加入适当的指示 ． 指示剂： 可观察pH的变化式其他反应现 剂 ， 可观察 的变化式其他反应现 象，反而显示细菌在培养中对某些物 质的利用情况，常用的指示剂有酚红、 质的利用情况，常用的指示剂有酚红、 中性红、溴甲酚紫等。 中性红、溴甲酚紫等。
实验二 培养基的制备
分装量一般超过容器装盛量 的2/3。
⑩ 培养基的保存
4、培养基制备的基本方法
① 培养基配方的选定 ② 培养基的制备记录 ③ 培养基成分的称取 ④ 培养基各成份的混合和溶化 ⑤ 培养基pH的调正 ⑥ 培养基的过滤 一般采用高压蒸汽灭菌方法 （121℃，15min）。 某些畏热成分，如糖类、血 清等，一般以过滤方法除菌， 以后再用无菌操作技术、定量 加于培养基。
），pH值2.0（蓝）～3.0（紫）。
• 溴甲酚紫指示液变色范围 pH5.2～6.8（黄→紫） • 溴麝香草酚蓝指示液 变色范围 pH6.0～7.6（黄→蓝）
一些物质在培养基中的应用原理
6.其它 硫酸亚铁 色氨酸 脲酶
培养特性
（一）体外培养的要求 营养、温度、PH、气体、培养时间 （二）培养性状 1.液体培养基 需氧菌：菌膜 兼性厌氧菌：均匀浑浊 厌氧菌：沉淀 2.固体培养基 菌落特点:大小、颜色、边缘、湿润程度 3.色素 脂溶性：菌体有颜色（如金黄色葡萄球菌） 水溶性：菌体和培养基都有颜色（如绿脓杆菌）
今天实验内容/每组：
1.取水500mL，加热； 2.按照配方称取各物品加入水中，边加热边搅拌，快沸时注意不要溢出 ，沸腾后停止加热；冷却至室温； • 牛肉浸膏 • 蛋白胨 • 氯化钠 3.75g 7.5g 3.75g
• 磷酸氢二钾
0.375g
补足水量至750mL 3. 用pH试纸测定pH并调至7.2-7.6。
实验二 微生物培养基的配制和灭菌
溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O 等。 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀 菌灯。 其它：天平、牛角匙、电炉、2MHCl、2MNaOH、pH试纸、 刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角 瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、 各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等。
称为牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号合成培养基，麦芽汁 培养基，查氏合成培养基。
培养基的配制原则
能源 指能为微生物的生命活动提供最初能量来源的营 养物或辐射能。
微生物的能源谱：
有机物：化能异养微生物（同碳源） 化学物质 能源谱： 辐射能：光能自养和光能异养微生物 无机物：化能自养微生物（不同于碳源）
培养基的配制原则
微生物培养基的配制和灭菌
微生物培养基的配制和灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
目 的 要 求
了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌
法的原理及其使用方法。 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
实 验 材 料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可
培养基的配制原则
一、营养成分 二、PH值 三、渗透压 四、氧化还原电位
培养基的配制原则
实验二 培养基的配制和灭菌
实验二培养基的配制和灭菌
一'实验目的
微生物的生长发育都有一定的营养需要，培养基即人工培养微生物、为其生长发育提供所需营养的基质。培养基配好后必须经过灭菌方能用于分离培养微生物试验，因此培养基的配制和灭菌是植物病理实验室中最基本的工作，通过本次实验学习植病实验室中常用培养基的配制方法和高压灭菌锅的使用方法。
二'内容'材料和方法
（-）培养基的配制
培养基按组成成分及对这些成分了解的程度分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基三类，从物理性质上又分为液体培养基和固体培养基两类，培养基的种类不同，配制方法也有差异，限于时间，本次实验仅配制马铃薯琼脂培养基和牛肉膏蛋白月东培养基。
1马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）
这是植病实验室最常用的培养基（简称PSA）,主要用于植物病原真菌的分离和培养，有时也用于植物病原细菌。
成分：马铃薯200克
蔗糖10~20克
琼脂17~20克
加水至1000毫升
方法：将马铃薯洗净去皮切块，加水煮沸半小时，用双层纱布滤去薯块，补足水量，加入琼脂，加热熔化，再加糖，待完全化后，乘热用双层纱布过滤分装，塞好棉塞高压灭菌。
马铃薯蔗糖琼脂培养基略带酸性，培养真菌无需调节pH,培养细菌则调节pH至中性，此培养基留作下次实验分离培养病原真菌用，故不必调节pH。
5人分作一组，1、2组各作此培养基500毫升，其中200毫升分装试管，每管约10毫
升，灭菌后摆成斜面；其余300毫升，分装在3个250—300毫升的三角瓶中，每瓶装100毫升左右，灭菌后妥善保存，留待下次实验使用。
2肉汁胨培养基（BPA）
实验二培养基的制备
➢ 2、普通琼脂培养基
配方：
牛肉膏 0.3g
蛋白胨 1g
氯化钠 0.5g
蒸馏水 100ml
琼脂
2g
pH 7.4
➢ 配制方法：
➢ ①按配方称取各种试剂〔琼脂除外〕，置于搪瓷缸中。
➢ ②上述成分混合、加热溶解，补足蒸发的水分。
➢ ③以1mol／L氢氧化钠溶液调pH至7.4～7.6。
➢ ④称量琼脂并加到肉汤内，加热煮沸，补充蒸发的水分，
➢ [方法和步骤] ➢ 1、普通肉汤培养基
配方： 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml
pH 7.4
➢ 配制方法： ➢ ①按配方剂量称取各种试剂，置于搪瓷缸中。 ➢ ②上述成分混合、加热溶解，补足蒸发的水分。 ➢ ③以1mol／L氢氧化钠溶液调pH至7.4～7.6。 ➢ 〔 初配好的培养液是偏酸性的，需用NaOH
↙
↘
取10ml用滤纸过滤
剩余液体按2%比例参加琼脂
↓
↓
分装2支试管，每管约3ml
加热煮沸，补充蒸发的水分
↓
↙
↘
塞上棉塞，用包装纸包扎 分装试管,每管约3ml 剩余的分装三角瓶
↘
↘↙
↘
塞上硅胶塞，用包装纸包扎
↘↙
15磅15min高压灭菌
↙↓ ↘
普通肉汤培养基 摆斜面 倒平板
实验二 微生物培养基的配制和灭菌
（二）斜面培养基制作
1. 在空试管内倒入2～3mL上述已经溶解好的培养基，
【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞. 2.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌. 3.摆斜面,凝固后放冰箱备用.
用于活化菌种， 或培养菌种的斜面
用于保存菌种的斜面
搁置斜面
当培养基冷却至50℃左右时，将试管带棉塞的一
端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的 斜面的长度不超过试管总长的一半。
据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量
且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。 4.过滤 用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。
5.分装 将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶） 口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。 分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分 装量可分为下面几方面：
培养基简介
培养基 是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产 生代谢产物用的混合营养料。 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
营养物质的浓度要适宜 营养物质之间的配比要适宜 培养基的pH值、渗透压、 水活度和氧化还原电势等
物理化学条件要适宜。
通常培养条件：
细菌： pH 7.0~8.0 放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0
实 验 二
微生物培养基的配制和 灭菌
实验2、 LB培养基制备及大肠杆菌的接种
四、实验方法
平板划线分离法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、 斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等。 平板划线分离法主要用于菌种分纯，获得单菌落。
五、实验步骤 培养基灭菌 制作平板 扩大培养 划线分离
LB液体培养基、LB固体培养基、培养皿高压灭 菌。 超净工作台中，将灭菌后冷却到60℃左右的LB 固体培养基倒入灭菌培养皿中，敞盖冷却，备 用。 将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，于37℃摇 床中震荡培养12h。 以接种环取震荡培养后的菌液，在固体培养基 上划线，封口。培养皿倒置与37℃的恒温培养 箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情 况；用接种环挑取单菌落，用划线法接种于斜 面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h。
2、LB培养基
是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌 等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。加入 抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。 LB培养基的配方如下： 酵母提取物：5 g 蛋白胨： 10 g NaCl： 10 g 琼脂： 15～20 g 水： 1000 mL pH 7.0
三.、实验器材
菌种：大肠杆菌 DH5ɑ 培养基：LB固体培养基 仪器材料：超净工作台，接种针，酒精灯，封口 条， 记号笔，恒温培养箱。
1、大肠杆（Escherichia coli ）
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实验二培养基及其配制（理论）
一、培养基成分及作用
培养基（culture medium）是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一。
培养基成分对离体培养植物的生长发育起调控作用。
选择合适的培养基并掌握正确的制备方法是组织培
养成功的前提。
（一）植物必需的营养元素
植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：
1、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；
2、构成一些特殊的胜利活性物质，参与活跃的新陈代谢；
3、这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体
稳定、电荷平衡等点化学方面的作用；
4、在发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。
Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准：
A、缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成其生活史
B、缺乏该元素，就表现为专一的病症，且这种缺素症可以用补充改元素来预防和恢复
C、改元素在植物营养生理上表现直接的效果，而不是由于土壤的物理、化学、微生物条件的改进而产生的间接效果。
国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：
C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）
在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。
根据植物体内含量多少，可把这些元素分为：
大量营养元素：占干物质重量的0.1%以上；
C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种。微量营养元素：占干物质重量的0.1%以下
有的只含0.1mg/kg。
Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种。（二）培养基营养成分及作用
培养基是外植体生长的土壤，它所含有的不同营养元素直接影响着培养材料的生长发育。
培养基中的营养元素以有机物和无机物两类形式存在，绝大多数营养元素以无机物的形式存在。
按照国际植物生理协会的建议：
所需浓度> 0.5mmol/L的元素为大量元素
所需浓度< 0.5mmol/L的元素为微量元素
1、大量元素
N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置，
又称生命元素。在培养基中主要以NO3—-N和NH4—-N两种形式存在。
P是磷脂主要成分。培养基中常用KH2PO4NaH2PO4等。
K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有密切关系。培养基中常以KCl、KNO3等盐类提供。
Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；S是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。它们常以MgSO4·7H2O提供，用量为1—3mg/L 较为适宜；Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。常以CaCl·2H2O提供。
2、微量元素
在微量元素中，铁的使用最大，铁是一些氧化酶的组成成分。同时又是叶绿素形成的必要条件。由于培养基的pH较高，所以培养中几乎都使用不易分解的乙二胺四乙酸铁这种鳌合物来防止铁的沉淀。
硼与蛋白质合成、糖类运输有着密切的关系；铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长；锰参与植物的光合、呼吸代谢；钼参与氮素的代谢；氯是光合作用水光解的活化剂。
微量元素的主要作用是作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节。
缺铁症状：
叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。
缺铜症状：
新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。
枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。
缺锰典型症状：
叶脉间失绿褪色，但叶脉仍保持绿色，脉间出现坏死斑，缺素症状由幼叶开始。
缺钼典型症状：
叶较小，叶脉间失绿,有坏死斑点，且叶边缘焦枯，向内卷曲。
十字花科植物缺钼时叶片卷曲畸形，老叶变厚且枯焦缺硼典型症状：
受精不良,籽粒减少，“花而不实”，“蕾而不花”；根尖、茎尖的生长点停止生长，而形成簇生状；常引起各种腐烂病。
3、碳源
碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机酸，以糖类物质最重要。一般来说，蔗糖是最好的糖源，它具有热易变的性质，经高压灭菌后，大部分分解为D-葡萄糖、D-果糖，仅剩下部分的蔗糖，这更利于吸收和利用。蔗糖使用浓度一般在2%—5%。此外，糖还可以提供能源和调节渗
透压，调节培养基的渗透压一般在1.5—4.1 MPa。
4、维生素类
这类化合物在植物细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动，对生长，分化等有很好的促进作用。主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素。
5、肌醇
又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用，是细胞壁的构建材料。肌醇参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等生理活动，具有促进活性物质发挥作用的效果，在培养基中加入1.0mg/L的肌醇就足以影响V B1的效应。使用浓度一般在50—100mg/L。
6、氨基酸
氨基酸是蛋白质的组成成分，也是一种很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。培养基中常用的是甘氨酸，还有其他氨基酸，用量一般在10—1000mg/L之间。
7、天然复合物
为了促进某些愈伤组织和器官的生长，在培养基中还常加入多种化学成分不明的、复杂的天然营养混合物，如水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物等。
8、琼脂
为使培养材料在培养基上固定和生长，要外加一些支持物，构成固体培养基。琼脂是使用最普遍的凝固剂。用量一般在6—10g/L之间，以颜色浅、透明度高好，洁净为上品。
除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。
9、活性炭
培养基中加入活性炭主要是为了吸附培养基及培养
物分泌物中的抑制物质。加入适量的活性炭对抑制外植体褐变、防止玻璃苗的产生、促进培养物生长和分化、促进生根具有一定作用。
但活性炭也有副作用，它的吸附作用没有选择性，所以在吸附抑制物的同时，使一些营养成分也吸附了。